Name: Odak Radyolojik Geciktiricisinin Erişkin Hipotalamus nöron Fonksiyonel Sorgulama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-14T22:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 45 s
Description: Keşfedin, küçük hayvan modellerinde odak radyasyon ile yetişkin hipotalamus nörojenesini inhibe etme tekniğini. Bilgisayarlı tomografi rehberliğinde üç boyutlu görüntüleme kullanarak spesifik nöral progenitör popülasyonlarını hedefleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz teknik danışmanlık ve yardım C. Montojo, J. Reyes, ve M. Armour teşekkür ederim. Bu çalışma (DAL) Sağlık hibe F31 NS063550 ABD National Institutes, Basil O&#39;Connor Starter Scholar Ödülü ve (SB) Klingenstein Fonu ve NARSAD hibe tarafından desteklenmiştir. SB Tıp Araştırma WM Keck Seçkin Genç Bilim İnsanı.

Hayvan Kullanımı Standart bakım ve kullanım protokolleri için kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi onay alın. Önce (Şekil 2) tarif edildiği gibi 2 mevcut protokol, 5,5-10 haftalık yetişkin C57BL6 / J farelerinde fokal ışınlama çalışmaları için geliştirilmiştir. Ancak, diğer yaş ve küçük hayvan türlerinin (sıçan, hamster ve zemin sincap, vb) de kullanılabilir, etkili anestezi protokolleri ve (ROI) bölgenin tespitine imkan veren bir radyografik referans atlas kullanılabilir olması koşuluyla. 1.. BT eşliğinde Radyolojik Platformu Kalibrasyon Her kolimatör boyutu ve kullanılan X-ışını tüpü filtre türü için önceden radyolojik platformda radyasyon dozu için film tabanlı kalibrasyonları gerçekleştirin. Radyasyon dozu planlama yazılım 49 availabl kullanarak, arzu edilen hedef bölgeye ışınlama bir yay ışın hedeflemek amacıylaradyasyon dozu dayalı gerekli teslimat süresini hesaplamak için en ticari radyasyon platformlarda e, fare CT taramalarına dayanan faiz (ROI) bölgenin derinliği, ve robotik platformun dönme hızı; Bu konuda ayrıntılar dışında kalan Bu protokolün onlar radyasyon platformlar arasında farklılık gibi. CT görüntüleme ile ventrobazal hipotalamus 2 (Şekil 3) görüntülenmesi amaçları için, 1 mm Al filtrasyon ile bir 0.4 mm ve odak noktasının 100 kVp ışın enerjisi ile X-ışını tüpü yapmaktadır. HPZ fokal ışınlama için, tedavi üzerinde 0.6 cm&#39;lik bir doku derinlikte radyasyon 10 Gy sunmak için, 225 kVp, 13 mA de X-ışını tüpü ve 0.15 mm Cu filtrasyonu ile bir 1-mm odak spotu çalıştırabilir 4.6 dakika süresi. Farklı ROI arasındaki Hedefleme farklı parametrelerin hesaplanmasında gerektirir. <ol><li> Daha önce açıklandığı gibi 2 median eminence nöron yüksek yağlı diyetin etkilerini inceleyerek varsa, dört haftalık dişi C57B eldeJackson Fare laboratuvarların L6 / J fareler ve kafes başına evin dört fareler. Beş haftalık bir yüksek yağlı diyet normal yiyecekle gıda geçin. Fareler yeni konut ve gıda gelmesini bekleyin. 5.5 haftalıkken CFIR tedaviyi uygulayın. Ulaştırma radyolojik platformu içeren ameliyathaneye tabi. Aktarım sırasında stres düzeylerini en aza indirin. Izofluran gaz anestezi odasını hazırlayın. Daha sonra, odanın içine bir fare ekleyin. Buna paralel olarak, tedavi sonrası için ısıtma pedi (düşük ayar) hazırlamak. </li><li> Fare ayak pad sıkıştırmaya karşı yanıt altında ve artık sonra, radyolojik platforma konuyu getirmek ve robot aşamanın hareketsiz yatak yerleştirin. Isırık koruma (Şekil 1D) içine deneğin burun konisi anestezi fincan içine ağız ve diş yerleştirin. Immobilizasyon yatağa fare düz yatırın ve Yanıtsızlık korumak için devam edip etmediğini görmek için kontrol edin. Eğer öyleyse, gazlı bez bant ile yatağa fareyi aşağı bantlayın. Yatağa fareyi aşağı taping, Kafa yatay bir düzleme tesviye olduğundan emin olun. Bu kulakları yukarı çekerek ve tesviye eğer görerek tespit edilebilir. Fare doğru pozisyonda sonra, kurşun koruyucu kalkanı kapatın. </li><li> Fare konunun üç boyutlu anatomik yapı tarama sağlayacak olan, (bu platformlar arasında farklılık olacaktır) deneycinin radyolojik platformu on-board yazılımını kullanarak bilgisayar tomografi taraması edinin. Fare kafası yatay düzleme tesviye olup olmadığını görmek için kontrol edin. Kişinin kafası tesviye olana kadar 1.3 - Değilse, tekrar 1.2 adımları. </li><li> CT görüntüsünde yatırım getirisini belirlemek. Şekil 3E&#39;de gösterildiği gibi, bir 45 ° &#39;lik bir açı ile yatay düzleme ROI, kafatasının yüzeyine mesafeyi hesaplayabilir. </li><li> On-board yazılımı kullanarak, Şekil 4A&#39;da gösterildiği gibi, yukarıda fare konunun bir X-ışını alır. Ardından, radyolojik platformdan fareyi kaldırmak ısıtma yastığı koymak, ve aktif kadar izlemeye. </li><li> Koronal BT görüntüleri, teslimat dozunu belirlemek amacıyla en az üç farelerin ortalama ROI anatomik derinliğini hesaplamak. Işınlama 10 Gy ventrobazal hipotalamus uygulanmıştır bir çalışmada 2 ikinci bir örnek olarak, (45 ° açı) kafatası ROI derinliği 0.66 cm (Şekil 3E bakınız) &#39;dir. Bilerek, araştırmacılar ROI için istenen dozaja ulaşmak için tedavinin uygun dönme hızını ve uzunluğunu hesaplamak için kendi radyolojik platformunda kurulu doz planlama yazılımı (DPS) kullanılır. </li><li> Doz-planlama yazılım ile tedavi süresi ve robot aşamasının dönme hızı saptanmasından sonra, bir su eşdeğer plastik mock-fare modelinde gömülü GAFchromic radyasyona duyarlı filmler ile hesaplanan parametreler doz dağılımı ölçer. Bunu yapmak için, dört dikey yığılmış su eşdeğer plastik bloklar 29 sıra arasında üç GAFchromic radyasyona duyarlı filmler embedŞekil 4B&#39;de gösterilmektedir. </li><li> Robotik sahnede GAFchromic filmleri içeren sahte fare modeli yerleştirin ve yeni hesaplanan parametreleri ile fokal ışınlama ışınını çalıştırın. Örneğin, ventrobazal hipotalamus, giriş hedef 0,15 mm Cu filtre, 225 kvp parametreleri, bir yatırım getirisi elde etmek için 13 mA, 1 mm çaplı radyasyon ışın ayarı, 45 ° gantry açısı, 1.3 ° / sn dönme ve 4.6 dakika 10 Gy radyolojik dozu. </li><li> Işınlama ardından, desen ve radyasyon doz yoğunluğu için filmler edin. Ventrobazal hipotalamus, karşılık İzomerkez yukarıdaki film, İzomerkez filmde küçük bir net nokta, ve İzomerkez aşağıda filmde hafif bir halkada bir koyu halka koni hedef listelenen parametreleri ile 360 ​​° açılı dönüş için Işınlama ışın uygulanması (Şekil 4B) gözlemlenecektir. </li><li> Parametreler cal vardı hangi fare konuların X-ışınları üzerinde İzomerkez GAFchromic filmi üst üsteparametrelerde kayıtlı. Şekil 4C&#39;de gösterildiği gibi İzomerkez de ışınlanmış odak noktası istenen ROI bölge ile üst üste gerekir. </li></ol> Alternatif yöntem: Beyin ROI hedefleme güçlüğü devam ederse, iyotlu kontrast CT görüntülerinin altında ventrikül görselleştirme geliştirmek için intratekal enjekte kullanın. Kısalık aşkına, bu prosedür bu protokolün dışında kalan, ancak daha önce 35, 50 tarif edilir. İyot kontrast ek ventriküler işaretlerini (Şekil 5A) sağlayacaktır. 2. Işınlama Işın doğrulanmadı Belirlenmesi Bundan başka doku 2, 35, 51 içindeki radyasyon ışınının doğrudan görselleme yoluyla CFIR kiriş doğruluğu teyit etmektedir. Bunu yapmak için, γH2AX 51, bir histon proteini ve DNA çift iplik sonlarının erken bir işaretleyici tespit etmek için immünohistokimya gerçekleştirin. Fare konular transcardially perfüze ve ışınlama bir saat içinde sabit olmalıdır. Aşağıdaki ışınlanmışΥH2Ax fez, DNA onarımı hızla gelişir ve düzeyleri 35 önemli ölçüde azalır. <ol><li> 1.3 - 1.1 adımları tekrarlayın. </li><li> Hedef BT ile belirlendikten sonra, fare konusu radyasyon iletim demeti ile aynı hizaya bu hedefe robotlu kontrol altına taşınır. Giriş hesaplanan parametreler (dönme hızı ve tedavi süresi arzu edilen dozaja ulaşmak için) doz-planlama yazılım içine aşama 1.6 &#39;dan ve tedavi başlar. Fare dikey yönelimli ekseni etrafında dönerken, gezer dikeyden 45 ° &#39;ye işaret ile tedavi teslim edilir. </li><li> Işınlama ardından, fare konularda transcardial perfüzyon gerçekleştirin. Bir saat içinde 52 perfüzyon yapın. % 4 PFA / PBS olarak perfüzyon, daldırma düzeltme beyinleri izlenerek ve hafifçe 4 ° C de bir gece kaya </li><li> Sonraki sabah, paraformaldehit fiksatif çıkarmak için PBS içinde 3 x 5 dk yıkayın. Daha sonra, 4 ° C&#39;de bir sallama düzeneği üzerinde 1 x PBS içinde% 30 sukroz içinde bırakın </li><li> Yavaşça 4 ° C (bize de kayamanuel bir 12-16 saat), beyin tüpün dibine battı kadar. Bu, donmaya karşı koruma sağlamak adım olarak hizmet vermektedir. Beyinleri lavabo sonra fazla% 30 sucrose/1x PBS transferini engellemek için delikli bir kaşık ile beyin kaldırmak. Çabuk kuru buz üzerinde orta dondurma embed. Pipet ile donma orta girdap ve plastik kalıp beyin hizalayın. </li><li> Kez tamamen dondurulmuş, depolama için -20 ° C derin dondurucuda beyin blokları transfer. </li><li> Immünohistokimya yapılacağı gün, koronal kesit 40 um kalınlıkta ve ince bir fırça ile PBS ihtiva eden bir 24-yuvalı plaka içine yüzer. Bölümler hedef bölgenin ışınlama kapsama belirlemek için immünboyama için doğru seri sırayla tutulmalıdır. </li><li> Antijen geri alma aşaması için hazırlık olarak bir su banyosunda 80 ° C&#39;ye kadar ön ısıtılması, 0.01 M sodyum sitrat çözeltisi. Aynı zamanda, sodyum sitrat ısınırken, 5 dakika yıkama 0.01 M PBS içinde 3 kat gerçekleştirin. </li><li> Sodyum sitrat çözeltisi, 80 ° C&#39;de sonra, beyin bölümleri daldırın in sodyum sitrat tampon çözeltisi. 1 saat boyunca 80 ° C&#39;de su banyosu içinde bırakın. </li><li> Bölümünü çıkarmak ve sodyum sitrat solüsyonu oda sıcaklığına ulaşmasına izin verir, daha sonra 0.01 M PBS içinde 5 dakikalık üç yıkama yapar. </li><li> % 5 normal keçi serumu içeren PBS-Triton 1 saat boyunca bloke beyin bölümleri. </li><li> 4 ° C&#39;de fare anti-fosfo-H2AX birincil antikor konsantrasyonu ile 1:700,% 5 normal keçi serumu içeren PBS-Triton beyin bölümleri gece boyunca inkübe </li><li> Ertesi gün, 15 dakika yıkama 0.01 M PBS içinde 3 kat Triton-gerçekleştirin. </li><li> PBS-Triton 2 saat boyunca 1:500 yoğunlukta 488 nm fluorphore ile konjuge edilmiş keçi anti-fare ikincil antikoru ile,% 5 normal keçi serumu ihtiva eden beyin bölümleri inkübe edin. </li><li> 15 dk yıkar 0.01 M PBS-Triton 3x gerçekleştirin. </li><li> Çekirdeği görselleştirmek için 10 dakika boyunca 4 &#39;,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) lekesi (PBS içinde 1:5,000) yapın. Daha sonra PBS ile 5 dakika boyunca beyin bölümleri yıkayın. </li><li> Elektrostatik ch montearged mikroskop PBS içinde yüzen bölüm kayar. Aşırı PBS silin ve slaytlar kurumasını bekleyin. Montaj orta kullanarak slaytlar lamel ve slaytlar bir gece boyunca oda sıcaklığında karanlıkta kurumaya bırakın. </li><li> Floresan mikroskop ile seri koronal kesitlerin fotoğraf çekmek. ΥH2Ax İmmünbüyanmanın (yeşil) ışınlama siteyi gösterir. DAPI (mavi) bir nükleer boya (Şekil 5B) &#39;dir. </li></ol> 3. Fare hazırlanması Odak Işınlaması için Konular ΥH2Ax İmmünbüyanmanın sonuçları inceleyin. Bir kez kalibrasyon memnun ve ışınlama kiriş hedefleyen, denemeye devam. Bu noktada (kiriş teslimat tamamlanması için hayvan kurulum itibaren) bir fare tedavi etmek için gereken toplam süre, bir 1-mm koluna sahip olan bir 10-Gy tedavisi için yaklaşık olarak 10-15 dk. <ol><li> Jackson Fare laboratuvarların dört haftalık C57BL6 / J dişi fareler sipariş. Evin dört kafes başına fareler ve normal yiyecekle gıda geçişBeş haftalık bir yüksek yağlı diyet. Kulak delme fareler onlara benzersiz bir tanımlayıcı işaretleri vermek. Günlük farelerin sağlığını izlemek. Not: BT eserler çizgiler neden olur gibi metalik belirteçleri kullanılamaz. </li><li> Farelere radyasyon veya plasebo tedavisi öncesi gün tartılır. Bölünmüş radyasyon veya plasebo tedavisi için iki kohort içine fareler ve kohort arasındaki ağırlık açısından anlamlı bir fark yoktur emin olun. Farenin altı haftalık zaman tedavi gününde, tüm fareler tartılır ve kütle kayıt. Yavaşça radyolojik platformuna iki tabur taşıyacak. Stres düzeylerini en aza indirmeye özen gösterin. </li><li> Izofluran gaz anestezi odasını hazırlayın. Iki fare, sham kontrol grubu önceden belirlenmiş bir ışınlama grubunda ve başka anestezisi. Ameliyat sonrası tedavi için düşük ayarında ayarlanan ısıtma yastığı hazırlayın. </li><li> Radyasyon almak için fare için 1.4 - 1.2 adımları izleyin. Tedavisi devam ederken sahte fare için, anestezi odasına fare tutmak. Sur olunHedef BT&#39;de tespit edildikten sonra ortam radyasyon üzerinde herhangi bir etkisi radyasyon teslim ışını ile bu hedefe uyum için robotik kontrol altında fare konusu hareket, in çarpanlarına böylece e O anestezi odası CFIR platformu yakındır. Girdi doz planlama yazılımı içine parametrelerini (dönme hızı ve tedavinin süresi) hesaplandı. </li><li> Işınlama tedavisi tamamlandıktan sonra, ısıtma yastığı sham ve ışınlanmış fareler hem dönmek, onlar uyanmak kadar izlemek. </li><li> Hayvan tesis sham ve ışınlanmış fareler hem dönün. Her gün izliyoruz. Her yarım hafta fareler tartılır. Ilk BrdU maruz kaldıktan sonra BrdU ve nöronal bir işaretleyici bir ay için immünohistokimya colabeling gruplar arasında hedef hipotalamik çoğalma bölgesi ışınlama doğrulamak için, BrdU intraperitonal enjeksiyonları yönetmek (50 mg / kg) üç gün sonrası işleme ve incelemek nöron (Şekil 6) 2. </li></ol>

JW Xstrahl, Inc ile bir araştırma finansman ve danışmanlık anlaşmaları vardır

BT eşliğinde odak ışınlama (CFIR) CT-rehberlik 32 kullanılarak robot kontrolünde küçük hayvanlar hedeflere radyasyon alanları sunma yeteneğine sahip bir roman ve tam bir sistem yaklaşımıdır. Küçük hayvan modelleri yüksek odaklı kirişler teslim CFIR bir yeteneği laboratuar araştırmaları ve klinik çeviri köprü yeni araştırma fırsatları sunar. Bu kağıt özellikle hipotalamik nöral progenitör nüfusunu hedeflemek için hassas radyasyon teslimat için CFIR yaklaşım anlatılmaktadır. Biz immünohistokimya ile X-ışını fil...

Yeni keşifler yetişkin memeli beyin plastisitesindeki olağanüstü derecede tabi olduğunu göstermiştir. Yetişkin doğmuş nöronlar memeli beyninde 1 uzman nişler yetişkinlik boyunca oluşturulur. Bu yetişkin doğumlu nöronların işlevi nedir? Ve daha çok, onlar fizyoloji ve davranış bir rol oynarlar? Bu konuyla ilgili çalışmalar geleneksel lateral ventriküller ve hipokampus subgranular bölgenin subventricular odaklanmıştır, ancak son çalışmalar bu tür memeli hipotalamus 2 gibi diğer beyin bölgelerinde nörogenezi karakterize var. Nöron postnatal ve erişkin hipotalamus 2-10 rapor edilmiştir, ve bu yeni doğmuş hipotalamik nöronların işlevi soruşturmanın etkin bir alan kalır. Yetişkin doğumlu nöronların fonksiyonel karakterizasyonu genel nöroloji alan için önemli bir sorun olmaya devam etmektedir. Spec selektif inhibisyonuIFIC nöral progenitör topluluklar tek nöral progenitör popülasyonları 11 özgü mevcut moleküler belirteçlerin eksikliği sınırlı kalmaktadır. Böylece, genetik hedefleme yoluyla bu nöral progenitörlerinden yetişkin doğumlu nöronların seçici silinmesi zor kalır. Aynı şekilde, yetişkin doğumlu nöronlar hedef viral dağıtım gibi çevreye 12 içine yaralanma ve inflamasyon tanıtan gibi potansiyel karıştırıcı değişkenler muzdarip. Yeni radyolojik araçlar biri bu boşa aşmak ve küçük hayvanlarda doğru ve hassas anatomik hedefleme yoluyla bu soruları araştırmak için izin olduğunu, ancak, ortaya çıkmaktadır. İyonize radyasyon yeni nöron doğum ve farklılaşmasını inhibe, ve noninvaziv bir yöntemdir nöral progenitör popülasyonları 13-15 hedef sağlar. Son zamanlarda, biz (HPZ) 2 hipotalamik proliferatif bölgeyi adlandırılan memeli hipotalamik median eminens (ME) bir germinal bölgesini tarif </sup&gt;. Biz genç erişkin dişi fareler yüksek yağlı diyet (HFD) verildiğinde, HFD beslenen farelerde nöron düzeyleri bu ME bölgede 2 beslenen denetimleri normal yiyecekle (NC) önemli ölçüde daha yüksek olduğu bulundu. Hipotalamik ME içinde yetişkin nöron metabolizmasını düzenler ve kilo olup olmadığını test etmek için, biz bu süreci bozmaya çalıştı. Ortanca eminence düzenleyici hormonlar salındığı üçüncü ventrikül tabanında küçük tek taraflı bir yapıdır. Bu beyin bölgesinde diğer fizyolojik fonksiyonlarını değiştirmeden çoğalma ve daha sonra nöron inhibe etmek amacıyla, seçici hipotalamik median eminens 2&#39;de yeni doğan yetişkin nöronların doğum inhibe etmek için bir odak ışınlama invaziv olmayan bir teknik geliştirdi. Grupları bir dizi bölgeleri kanonik 14-28 nörogenezi bastırmak için radyasyon kullanmışlardır. Ancak, önceki radyolojik yaklaşımlar genellikle ofte geniş alanları hedef, ya da varn istemeden de zor açıkça belirli nöral progenitör nüfus hatalarına gözlemlenen herhangi bir davranış kusurları ilişkilendirmek için yapım, nörogenezis bildirilmiştir çoklu beyin alanlarını hedef. Daha hedefli ışınlama için yeteneği 29-36 hedefleyen kesin anatomik etkinleştirmek için f Öçal ışın ir radyasyon (CFIR) teslim c omputer tomografi eşliğinde görüntüleme birleştirmek radyolojik platformları tarafından sağlanmaktadır. Çapı 0.5 mm kadar küçük radyasyon ışınları özel nöral projenitör popülasyonları 35 hedeflemek için kullanılabilir. Bu metodoloji bize hipotalamik ME hedef ve çoğalmasını tutuklama ve küçük hayvanlar nörogenezi engellemek için izin verir. Bu hücrelerin popülasyonları üzerinde radyolojik işleminin ardından, fizyolojik ve davranış testleri yetişkin doğumlu hücrelerin potansiyel fonksiyonu aydınlatmak için gerçekleştirilebilir. Odak hedefleme beri bizim uygulama için özellikle önemlidirHipofiz bezi hipotalamik medyan eminense yakın yer, hipofiz ışınlama hormonal fonksiyonlarını etkiler ve sonradan sonuçları yanıltabilecek. Nöron aşağıdaki ışınlama bastırılması için biyolojik temeli hala belirsizliğini koruyor. Önceki radyasyon çalışmalar büyük bir alan kirişler dayanmıştır, ve nöron bastırılması bir inflamatuvar yanıt 14, 37 aracılı olduğu sonucuna varmışlardır. Gibi bunun önemli bir inflamatuar tepki uyandırmak olmadığından yüksek odak ışınlama, nörogenezi bastırmak olabilir belirsizdir. Bununla birlikte, hipokampusta klasik nörojenik bölgenin grubumuzca son çalışmalar 10 Gy ile son derece odak radyasyon ışınlama 35 sonra en az 4 hafta için nöron bastırmak olduğunu göstermiştir. Median eminence yetişkin doğumlu hipotalamik nöronların işlevini sorgulamak için, biz hassas bir radyasyon d kullanınME nöron inhibe küçük çaplı radyasyon ışınları ile birlikte BT görüntüleme sunma yeteneğine evice. 360 ° &#39;lik bir aralığı üzerinde dönen, bir yapıya eklenmiş bir X-ışını tüpü kullanarak, ışın tedavisi sırasında bir hayvan öznenin dönüş (Şekil 1) sağlayan bir robot kontrollü bir numune aşamasının kullanımı ile yay ışınlı ışınlama mikro ışın teslim . Yüksek çözünürlüklü X-ışını detektörü gantry yatay konumda 33 olduğunda görüntüler elde etmek için kullanılır. Bu çalışma için, BT görüntüleri 0.20 mm&#39;lik bir izotropik voksel boyutu ile yeniden inşa edildi. Hayvan tedavi konumunda iken on-board BT görüntüleme bir hedefin tespitine olanak tanıdı. Hedef bizim piyasada mevcut radyolojik platformu ile dahil oldu CT navigasyon doz planlama yazılımı kullanılarak lokalize edildi. BT görüntüleme ile ROI&#39;mız yerelleştirilmesi sonra, hayvan dört ° sahip robotik numune aşamasına göre uygun tedavi konuma taşındıserbestlik Rees (X, Y, Z, θ). Portal ve robot sahne açıları bir kombinasyonu sayesinde, kirişler hayvana neredeyse her yönde teslim edilebilir ve stereotaktik yay gibi tedaviler 29 mümkündür. Bu ve diğer tüm görüntüleme çalışmaları için, fareler hareketi sınırlandırırken izofluran anestezi gazı verilmesini sağlayan bir hareketsiz hale getirme cihazında yerleştirilmiştir. Hareketsizleştirme yatak CT uyumludur ve robotik numune aşamasına 34 bağlanır. Biz CFIR araştırma alanlarında bir dizi kavramsal gelişmeler sağlayacağını bekliyoruz. Bu tekniğin ilke kanıtı olarak hipotalamik medyan eminens radyolojik hedefleme kullanımı olsa da, prensipte herhangi bir CFIR küçük model organizmanın vücudun herhangi bir bölgesini hedef için kullanılabilir. Sinirbilimlerin, örneğin, biz bu tekniği exis ileri sürülmüştür aktif çoğalma progenitör popülasyonlarının fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılan olabilir öngörülüyorBu tür postrema 38, 39, subfornical organı 40 ve 41 gibi diğer hipofiz circumventricular organlarda, t. Yetişkin nöron işlevsel rolüne ilişkin ve davranış nedensel bir rol tanımlayan uzun süredir devam eden tartışmalar da artık daha iyi ele alınabilir. Ötücü kuş, bu teknik seçici belirli beyin bölgelerinde nöron inhibe yeteneği ile engel olmuştur birdsong 42 arasında sağlam ve mevsimsel davranışını sürdürmek yetişkin nöron rolünü ele olabilir. Bu sağlam bir davranış modelini anlama diğer dimorfik davranışlarını düzenleyen yetişkin nöron rolüne yeni anlayış döken olabilir. Alternatif olarak, metabolik alanına CFIR hepatosit çoğalmasının rol ve metabolizma ve enerji dengesinde rolü yönleriyle keşfetmek için kullanılabilir. Çoklu araştırma disiplinlerdeki kavramsal peşin için olasılığı bu tekniğin tanıtımı tarafından geliştirilmiştir. <p classBu yazıda = &quot;jove_content&quot;&gt; Biz bir odak ışınlama kirişin hedefleme duyarlılığı Anatomik için CFIR yeteneklerini göstermek. Biz başlangıçta bizim çalışmalar için bu küçük hayvan radyasyon araştırma platformu (SARRP) geliştirilmiş olmasına rağmen, benzeri diğer cihazlar artık benzer CT rehberliğinde fokal radyoterapi 43, 44 başarabilirsiniz piyasada mevcuttur. Bu nedenle, biz oldukça SARRP özgü dışındaki tüm araştırma platformları için gerekli adımlar bu CFIR protokolü genelleme. Nöron inhibe etmek için önceki radyolojik yaklaşımlara CFIR avantajları, bu teknik, lokalizasyonu için üç boyutlu hacimsel görüntü yol sağlar ve dozun hedef konformal doz nontargeted beyin bölgelerine teması en aza indirgeyen, ve yüksek hassasiyetli ışın geometrisi ile konformal doz dağılımı için izin vardır keskin ışın sınırları. Biz belirli bir anatomik bölgeye hedef doz CT eşliğinde görüntüleme nasıl kullanılacağını anahat, ve bunu yaparken üzerine, nasıl radyasyon görselleştirmekγ-H2AX, DNA çift sarmallı tatili 35, 45-48 bir marker için immunohistokimyasal kullanarak doğrudan doku dağılımını doz. Nörojenik nişler seçici ışınlanması için bu yaklaşımın kullanılması fizyolojisi ve hastalığın yeni yetişkin doğumlu nöronların fonksiyonel rolünü açığa çıkaran önemli etkileri olabilir.

<table><tbody><tr><td>SARRP araştırma platformu</td><td>Xstrahl</td><td>RS225A</td><td><a href="http://www.xstrahl.com/xstrahlrs225.htm" target="_blank">http://www.xstrahl.com/xstrahlrs225.htm</a></td></tr><tr><td>SARRP ışınlama sığınağı</td><td>Xstrahl</td><td></td><td>İsteğe bağlı, ancak radyasyona maruz kalma alternatif kurşun koruyucu</td></tr><tr><td>GAF kromik film</td><td>IPS</td><td>GAFchromic ETB2</td> <td>ile kontrol altına alınmalıdır</td></tr><tr><td>Fare fantom</td><td>Gammex</td><td>457</td><td>Gammex'ten 0,5 cm x 30 cm x 30 cm katı su plakaları satın alın ve istediğiniz boyutta kesin.</td></tr><tr><td>Fare anti-fosfo-histon H2AX Ser139 antikoru</td><td>Millipore, Inc.</td><td>05-636</td><td>klon JBW301</td></tr><tr><td>Yüksek yağlı kemirgen diyeti</td><td>Araştırma Diyetleri</td><td>D12492i</td><td>Kalorilerin %60'ı yağ olarak, yiyecekler ışınlanmalıdır</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Baxter Healthcare Corporation</td><td>10019-360-40</td><td></td></tr><tr><td>0.01 M Sodyum sitrat</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>500 ml deiyonize suda çözülmüş 1.471 g sodyum sitrat</td></tr><tr><td>Superfrost Plus slaytlar</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>nükleer karşı leke</td></tr><tr><td>Montaj ortamı</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>Vectashield veya Gelvatol tercih edilir</td></tr></tbody></table>

odak radyolojik geciktiricisinin erişkin hipotalamus nöron fonksiyonel sorgulama

Functional Interrogation of Adult Hypothalamic Neurogenesis with Focal Radiological Inhibition

Yetişkin doğumlu nöronların fonksiyonel karakterizasyonu önemli bir sorun olmaya devam etmektedir. Invaziv viral teslimi veya transgenik hayvanların yoluyla yetişkin nöron inhibe yaklaşımları bu çalışmalardan zor sonuçların yorumlanmasını yapmak potansiyel boşa var. Yeni radyolojik araçlar tek noninvaziv küçük hayvanlarda doğru ve hassas anatomik hedefleme yoluyla yetişkin doğumlu nöronların seçin gruplarının işlevini araştırmak için izin olduğunu, ancak, ortaya çıkmaktadır. Odak iyonlaştırıcı radyasyon yeni nöronların doğuşunu ve farklılaşmasını inhibe, ve spesifik nöral progenitör bölgelerin hedef sağlar. Yetişkin hipotalamik nöron fizyolojik süreçlerin düzenlenmesinde oynadığı potansiyel fonksiyonel rolünü aydınlatmak için, biz seçici hipotalamik median eminence yetişkin doğumlu nöronların doğuşunu engellemek için invaziv olmayan bir odak ışınlama tekniği geliştirdi. Biz C omputer için bir yöntem tarif tomografi kılavuzluğundaKüçük hayvanlarda hedef kesin ve doğru anatomik etkinleştirmek için f Öçal ir radyasyon (CFIR) teslim. CFIR lokalizasyonu için üç boyutlu hacimsel görüntü kılavuzluğunda kullanır ve radyasyon dozunun hedef, nontargeted beyin bölgelerine radyasyon maruziyeti en aza indirir ve keskin ışın sınırları ile konformal doz dağılımı sağlar. Bu protokol bir yetişkin doğumlu nöronların fonksiyonu ile ilgili soru sormak için izin verir, ama aynı zamanda radyobiyolojide, tümör biyolojisi ve immünoloji alanlarında soruların alanları açılır. Bu radyolojik araçlar başucunda için tezgah keşifler çeviri kolaylaştıracaktır.

Değerlendirilmesi BT eşliğinde Hedefleme ve Doğruluk Bu sistemin, mekanik kalibrasyon çeşitli açılardan tek bir profil noktada kesişir sağlamak için çok önemlidir. Kalibrasyon uçtan uca hizalama doğruluğu 0.2 mm 29 olarak ölçülmüştür bir yarı-otomatik bir görüntü-bazlı yöntem ile gerçekleştirilmiştir. Hipotalamik orta tepe yapının hacmi 2 küçük olduğu için bu doğruluk oldukça önemlidir. Bu kalibrasyon test etmek için, bir su eşdeğer plastik mock-35 fare modelind...

Yetişkin doğumlu memeli nöronların işlevi, soruşturma aktif bir alan kalır. İyonize radyasyon yeni nöron doğum engeller. Bilgisayar tomografi rehberliğinde fokal ışınlaması (CFIR) kullanılarak özel nöral progenitör popülasyonlarının üç boyutlu anatomik hedefleme şimdi yetişkin nöron işlevsel rolünü değerlendirmek için kullanılabilir.

Odak Radyolojik Geciktiricisinin Erişkin Hipotalamus nöron Fonksiyonel Sorgulama

The functional characterization of adult-born neurons remains a significant challenge. Approaches to inhibit adult neurogenesis via invasive viral ...

Bu prosedürün genel amacı, küçük hayvan modelleri üzerinde fokal ışınlama yapılmasına ve ardından anatomik spesifik çözünürlükle proliferasyonun inhibe edilmesine olanak tanıyan gelişmiş bir radyolojik tekniği tanımlamaktır. Bu işlem, öncelikle ilgi bölgesinin lokalizasyonu için bilgisayarlı tomografi kılavuzluğunda üç boyutlu volumetrik görüntüleme kullanılarak gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, ilgi bölgesine uygulanacak radyolojik tedavinin miktarının ve süresinin hesaplanmasıdır.Üçüncü adım, radyasyon dozu için film tabanlı kalibrasyon gerçekleştirmektir. Son adım ise, radyasyon demetinin doku içindeki doğrudan görselleştirilmesi yoluyla radyasyon demeti doğruluğunu belirlemektir. Nihayetinde, bu çalışmalardan elde edilen sonuçlar, tedavi sonrası fizyoloji ve davranış analizleri ile seçilmiş proliferatif nöroprogenitör popülasyonlarının potansiyel fonksiyonel rolünü ortaya koyabilir.Bu tekniğin, beynin geniş çaplı ışınlanması gibi nörojenezi baskılamaya yönelik mevcut yöntemlere göre temel avantajı, spesifik nörojeneratif popülasyonları hedeflemek için çapı 0.5 milimetre kadar küçük radyasyon demetleri kullanmasıdır. Bu durum, davranışsal veya fizyolojik kusurların, nör

functional-interrogation-adult-hypothalamic-neurogenesis-with-focal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Video, yetişkin hipokampusundaki nörojenezi incelemek için kullanılan bir immünofloresan boyama yöntemini göstermektedir. Başlangıçta, bir fare beyin bölümü, nöronal progenitör hücrelerde nörojenez ile ilişkili işaretleyici proteinlere yönelik birincil antikorlarla tedaviye tabi tutulur. Daha sonra, floroforlarla etiketlenmiş ikincil antikorlarla etiketlenir. Beyin bölümü daha sonra, işaretleyici proteinlerin farklı kombinasyonlarının ekspresyon modellerine dayalı olarak, progenitör hücrelerin...

Erişkin Hipokampal Nörojenezi Tespit Etmek için Bir İmmünofloresan Boyama Tekniği

Hipotalamusun fonksiyonel ve tıbbi önemine...

Fare Genetik Manipülasyon yoluyla Hipotalamus geliştirilmesi<em&gt; Utero olarak</em&gt; Elektroporasyon

Yetişkin-yaşlı farelerin tek nöronların aktivitesi belirli beyin bölgelerinde nöronları dissociating ve floresan membran potansiyeli boya görüntüleme kullanılarak incelenebilir. Glikoz değişikliklere test yanıtlar olarak, bu teknik, yetişkin ventromedial hipotalamus nöronları glikoz duyarlılığını belirlemek için kullanılabilir.

Membran Yetişkin farelerin ventromedial Hipotalamus Nöronlar Potansiyel Boya Görüntüleme Glikoz Algılama Çalışması için

NF-KB-bağımlı yetişkin hipokampal nöron manipülasyonu ve analiz için yöntemler tarif edilmiştir. Ayrıntılı bir protokol farelerin bilişsel sonuçların araştırılması için bir dentat girus-bağımlı davranış testi (uzaysal desen ayrılık-Barnes labirent adlandırılır) için sunulmuştur. Bu teknik aynı zamanda, diğer deneysel ortamlarda araştırmaları sağlama yardımcı olmalıdır.

NF-KB-bağımlı yetişkin nöron Modülasyon ve Analiz Yöntemleri

Derin Beyin Stimülasyonu (DBS) cerrahisinin terapötik etkilerinin altında yatan mekanizmanın araştırılması gerekiyor. Bu yazıda sunulan yöntemler, DBS cerrahisi sonrası nörojenezi kolaylaştırabilecek aday genlerin gen ekspresyon profilini analiz ederek DBS tarafından tetiklenen hücresel olayları incelemek için deneysel bir yaklaşımı tanımlamaktadır.

Ön Talamusun Çekirdek Derin Beyin Stimülasyon sonra Sıçan Hippocampus Gen İfade Değişim Analizi

Bu iletişim kuralı, farelerde güvenilir bir HFS yöntemi ayarlamak gösterilmiştir. Hipokampal dentat gyrus boyunca nöronların elektriksel olarak HFS doğrudan ve dolaylı olarak içinde vivotarafından uyarılır. Nöronal aktivite ve moleküler sinyal c-fos ve Notch1 immünfloresan boyama, sırasıyla incelenir; neurogenesis tarafından bromodeoxyuridine tahlil etiketleme sayılabilir.

Yüksek frekanslı stimülasyon tarafından fare dentat Gyrus aktivasyonu için invaziv bir yöntem

Bu protokolün amacı, belirli bir lokal nöral devrenin kemogenetik manipülasyonuna yanıt olarak yetişkin nöral kök/progenitor hücrelerin davranışını analiz etmek için bir yaklaşım tanımlamakta.

Yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik Yönetmeliği

Burada açıklanan, açılı bir koronal yaklaşım kullanarak zorlu ve ulaşılması zor beyin bölgelerini (mekansal sınırlamalar nedeniyle) hedef alabilen stereotaktik bir prosedürdür. Bu protokol hem fare hem de sıçan modellerine uyarlanabilir ve kanül implantasyonu ve viral yapıların mikroenjectionları da dahil olmak üzere çeşitli nörobilimsel uygulamalara uygulanabilir.

Çok Yönlü Nörobilim Teknikleri için Uyarlanabilir Açılı Stereotaktik Yaklaşım

Bu makale, infüzyon kanülü ile desteklenmiş özel yapım bir görüntüleme penceresinin hazırlanmasını ve farelerde hipokampüsün CA1 bölgesine implantasyonunu göstermektedir.

Behaving Farelerinin Hipokampusunda Nöronal Aktiviteleri Görselleştirmek için Kraniyotomi Prosedürü

Burada, floresan ile aktive olmuş çekirdekler (FAN) sıralama yoluyla çoğu nöronu dışlayan fare dentat girusundan izole edilen tek çekirdekleri sıralamak için bir yöntem sunulmaktadır. Bu yaklaşım, yüksek kaliteli ekspresyon profilleri oluşturur ve nöral kök hücreler gibi kıt popülasyonlar da dahil olmak üzere niş içinde temsil edilen diğer hücre tiplerinin çoğunun incelenmesini kolaylaştırır.

Hipokampal Nörojenik Nişi İncelemek için Tek Çekirdekli RNA Dizilimi ile Birleştirilmiş Floresan Aktive Edilmiş Çekirdekler Negatif Nöronik Sıralama

Burada kültürde spesifik hipotalamik hücre alt tiplerini büyütmek için bir protokol sunuyoruz. Hücreler, uygun/benzersiz membran belirteçlerine göre seçilebilir ve immünofloresan, elektrofizyolojik ve biyokimyasal testler dahil olmak üzere birçok uygulamada kullanılabilir.

Hormonal, Metabolik ve Elektriksel Düzenleme Çalışmaları için Hedeflenen Hipotalamik Nöronların İzolasyonu

Keşfedin, küçük hayvan modellerinde odak radyasyon ile yetişkin hipotalamus nörojenesini inhibe etme tekniğini. Bilgisayarlı tomografi rehberliğinde üç boyutlu görüntüleme kullanarak spesifik nöral progenitör popülasyonlarını hedefleyin.

Odak Radyolojik Geciktiricisinin Erişkin Hipotalamus nöron Fonksiyonel Sorgulama

Daha fazla video keşfet