Eroin kanaatkâr Sıçanlarda Aradığınız üzerinde uzun süreli Gıda Kısıtlanması Etkisi Eğitim Bir Prosedürü

Bu prosedürün genel amacı, kronik gıda kısıtlaması gibi çevresel manipülasyonların, yoksunluk koşulları altındaki laboratuvar sıçanlarında eroin arama davranışına geri dönüş üzerindeki etkilerini incelemektir. Bu, öncelikle bir iyileşme döneminin ardından eroin kendi kendine uygulamasını sağlamak amacıyla sıçanın juguler venine cerrahi olarak bir intravenöz kateter yerleştirilerek gerçekleştirilir. Sıçanlar, 10 günlük bir süre boyunca operant koşullanma odalarında kendi kendilerine eroin uygulamaları için eğitilirler.

Prosedürün bir sonraki adımı, sıçanların hayvan tesisine nakledildiği ve kısıtlı veya kısıtlanmamış gıdaya erişim dönemine tabi tutulduğu yoksunluk evresidir. Son olarak sıçanlar, eroin verilmediği durumda eroinle bozulmuş kola verilen yanıtların bir ipucunun (ışık ve ses) aktivasyonuyla sonuçlandığı eroin arama testine girmek üzere operant koşullanma odalarına geri döndürülür. Nihayetinde, eroin kendi kendine uygulama geçmişi olan kronik olarak gıdası kısıtlanmış sıçanlar, ilaç kullanım ortamına ve ilaçla ilişkili ipuçlarına yeniden maruz kalmanın bir sonucu olarak, yoksunluk koşulları altında eroin aramada güçlü bir artış sergileyecektir.

Bu tekniğin, yeniden tesis etme prosedürü gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, insan durumunda gözlemlenmeyen açık operant sönmenin bulunmamasıdır. Ayrıca, akut manipülasyonlara karşı kronik manipülasyonların kullanılması, insan durumuyla ilgili olarak daha yüksek bir yapı geçerliliği sağlar. Bu yöntem, ilaç ve gıda arama davranışlarının altında yatan ortak nörolojik mekanizmalar gibi ilaç bağımlılığı alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.

Kateterler toplu olarak hazırlanır ve uzun süre kullanılabilmeleri için otoklavda sterilize edilir. Kateter oluşturmak için, öncelikle elastik tüpler 12 santimetre uzunluğunda parçalar halinde kesilir. Kateterin ucundan üç santimetre uzağa, çevresine küçük bir damla silikon yerleştirmek için bir kürdan veya 18 gauge iğne kullanın.

Otoklavlama işleminden önce silikonun 24 saat boyunca kurumasına izin verin; otoklavlamadan önce, plastik kaideye dik açı yapacak bir konektör görevi görecek olan five-up kanülünün uzun tüpünü bükün. Cerrahi gününde kateterleri monte etmek için, scholastic tüpünün uzun tarafını, five-up kanülünün bükülmüş metal tüpü üzerinden plastik kaideye doğru yaklaşık yarıya kadar itin. Five-up tüpünü, tigon borular ve 22 gauge'lik küt uçlu bir iğne aracılığıyla steril salinle doldurulmuş bir mililitrelik şırıngaya bağlayın.

Akışın engelsiz olduğundan emin olmak için kateterden salin geçirin. Başlamadan önce, sağ omuz ve baş bölgesini alkol ve cerrahi bir scrub ile temizleyip tıraş etmeden önce hayvanı anestezi altına alın. Kurumayı önlemek için gözlere jel uyguladıktan sonra, enfeksiyona vele dehidrasyona karşı koruma sağlamak amacıyla penisilin ve salin enjekte edilir.

Çevredeki dokulardan izole edilen eksternal juguler veni açığa çıkarmak için standart teknikleri kullanın. Veni yukarıda ve hafifçe gergin tutmak için altına kavisli pens yerleştirin. Ven üzerinde küçük, V şeklinde bir kesi yapın ve kesiyi açık tutun.

Bir damar dilatörü kullanarak kateterin üç santimetrelik kısa ucunu, silikon damla insizyon noktasına gelene kadar kalbe doğru venin içine ilerletin. Kateteri vene üç dikişle bağlayın; bunlardan birini mümkün olduğunca kaudale, birini silikon damlanın hemen rostraline ve üçüncüsünü ise mümkün olduğunca rostrale yerleştirin.

Kateterin tıkalı kalmadığından ve sütürlerin çok sıkı olmadığından emin olmak için kateterden salin geçirin. Ardından sıçanı ventral tarafı aşağı gelecek şekilde yerleştirin. Baş bölgesini insize edin ve deriyi alttaki dokudan ayırmak ve bir subkütan cep oluşturmak için bir hemostat yerleştirin.

Hemostatı cilt altından, kateterin yerleştirildiği omuzlardaki açıklığa doğru yönlendirin. Bağ dokusunu geçerek kateteri, "five up" tabanının altındaki en rostral noktadan sıkıca klempleyin. "Five up"ı ayırın ve kateterin uzun ucunu cilt altından geçirerek başın tepe kısmındaki insizyondan dışarı çıkarın.

Hemostatın klemplendiği yerin altından kateteri makasla kesin ve kateterin uzun ucunu five up'a tekrar bağlayın. Kateteri, five up'ın metal şaftı boyunca plastik kaideye kadar çekin ve serbest akışı sağlamak için içinden salin geçirin. Yaraları sütürle kapattıktan sonra, sıçanı bir stereotaksik cihaza yerleştirin.

Açığa çıkarılan kafatası temiz ve kuru olduğunda, yüzeye dört ila beş delik açmak için manuel bir matkap ucu kullanın. Ardından, kafa kapağına destek oluşturması için deliklere makine vidaları yerleştirin. Beşli üst konnektörü vidaların arasına yerleştirin ve kateterin fazla uzunluğunu daha önce oluşturulan deri altı cebine itin.

Son olarak, beş adet vidayı kafatasının üst kısmına sabitlemek için diş hekimi simanı kullanın. Siman tamamen kuruduktan sonra sıçanı stereotaksik cihazdan çıkarın ve tamamen iyileşene kadar takip edin. Sıçanlar, operant koşullandırma odalarında tek başına barındırılır.

Fan ile donatılmış ses yalıtımlı bölmelerin içine yerleştirilmiştir. Sağ yan duvarın zemininden dokuz santimetre yukarıda, her birinin üzerinde bir işaret ışığı bulunan iki adet geri çekilebilir kol monte edilmiştir. Aktif kolun üzerine bir ton modülü yerleştirilmiş ve sol yan duvarın üst orta kısmına kırmızı bir genel aydınlatma lambası konumlandırılmıştır.

Yiyecek ve su ad libitum olarak sağlanır. İlaç pompası, bir sıvı döner eklem ve metal yayla korunan tigon tüp aracılığıyla katetere bağlanır. Eroin kendi kendine uygulama işlemi, cerrahi sonrası iyileşme ve 24 saatlik bir alışma döneminin ardından başlatılır.

Başlangıç olarak, kateteri bir heparin gentamisin solüsyonu ile yıkayın. Ardından, beşli konnektörü Tigon tüpüne bağlayın ve metal yayı takın. Her oturuma, karanlık fazın başlangıcında, aktif ve pasif kolların açılmasıyla, ayrıca ortam ışığının aydınlatılması ve Q ışığı ton kompleksinin aktive edilmesiyle başlayın.

Sıçanların, üçer saatlik aralıklarla ayrılmış üç adet üç saatlik seans boyunca 10 gün boyunca 30 saniye süreyle kendilerine eroin uygulamalarına izin verilir. Aktif manivela üzerindeki tepkiler, ilaç pompasının aktivasyonuyla ve ev ışığının kapatıldığı, aktif manivelanın üzerindeki Q ışığı ton kompleksinin ise etkinleştirildiği 22 saniyelik bir zaman aşımı süresinin başlatılmasıyla sonuçlanır. İnaktif manivela tepkileri kaydedilir ancak programlanabilir bir sonucu yoktur.

Kendi kendine uygulama eğitimi tamamlandıktan sonra, sıçanları operant koşullandırma odalarından çıkarın ve hayvan tesisinde yiyecek ve suya sınırsız erişim sağlayacak şekilde bireysel olarak barındırın. Ertesi gün, bir günlük ilaç temizleme (washout) süreci için, doygun gruptaki yiyecek erişimini sınırsız tutarken, yoksunluk dönemini başlatmak amacıyla yiyecek kısıtlı grubun yiyecek miktarını azaltın. İlaç arama testini, yoksunluğun başladığı sabah gerçekleştirin.

14. günde, fareleri operant koşullanma kamaralarına geri getirin ve metal yaya bağlayın; aktif ve inaktif kol yanıtlarının, ilacın sağlanması hariç, kendi kendine uygulama eğitimiyle aynı sonuçlara sahip olduğu bir veya üç saatlik bir seansa izin verin. Bu sonuçlar, eroin kullanımı boyunca vücut ağırlıklarının stabil kaldığını göstermektedir.

Kendi kendine uygulama eğitimi Abstinense dönemi boyunca, sınırsız yem erişimi olan sıçanların vücut ağırlıkları artarken, gıda kısıtlaması uygulananların vücut ağırlıkları yaklaşık %10 ile %15 oranında azalır. Burada görüldüğü üzere, eğitim günleri boyunca infüzyonlar ve aktif kol tepkileri artmış, ancak inaktif kol tepkileri artmamıştır. Abstinense döneminin ardından, gıda kısıtlaması uygulanan sıçanların aktif kol tepkileri, doygun sıçanlara kıyasla önemli ölçüde artmıştır. Bu prosedürün ardından, inaktif kol tepkileri ise minimal düzeyde kalmış ve gruplar arasında benzerlik göstermiştir.

Belirli nörokimyasal ve farmakolojik sistemleri hedeflemek için intrakraniyal enjeksiyonlar, mikrodiyaliz, western blotting ve immünohistokimyasal teknikler gibi diğer yöntemler kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, bir sıçanın jugular venine intravenöz kateterin cerrahi olarak nasıl implante edileceği ve standart operant koşullanma odalarında eroin kendi kendine uygulama prosedürünün nasıl yürütüleceği konusunda net bir anlayışa sahip olmalısınız.