Name: Metisiline diren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Öğrenin, MRSA izolatlarında SCCmec tiplerini belirlemek için çoklu PCR yöntemini. Bu hızlı ve basit yöntem, DNA izolasyonu ve jel elektroforezi ile laboratuvarlarda kolayca uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

T. Ito, K. Hiramatsu, R. Daum, H. de Lencastre ve D. Coleman'a bu çalışmada kullanılan bazı referans suşların nazik armağanı için teşekkür ederiz. Bu çalışma kısmen Antimikrobiyal Direnç Merkezi (CAR), Alberta Sağlık Hizmetleri-Calgary / Calgary Laboratuvar Hizmetleri / Calgary Üniversitesi tarafından finansal olarak desteklenmiştir.

Bu islemler sertifikali biyog

<ol><li>IWG-SCC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+%28SCCmec%29%3A+guidelines+for+reporting+novel+SCCmec+elements%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Classification of staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec): guidelines for reporting novel SCCmec elements.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (12), 4961-4967 (2009).</li>
<li>Ito, T., Hiramatsu, K., Tomasz, A., de Lencastre, H., Perreten, V., Holden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+Reporting+Novel+mecA+Gene+Homologues%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Guidelines for Reporting Novel mecA Gene Homologues.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 56 (10), 4997-4999 (2012).</li>
<li>Okuma, K., Iwakawa, K., Turnidge, J. D., Grubb, W. B., Bell, J. M., O'Brien, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+of+new+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+clones+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Dissemination of new methicillin-resistant Staphylococcus aureus clones in the community.</a> Journal of Clinical Microbiology. 40 (11), 4289-4294 (2002).</li>
<li>Kondo, Y., Ito, T., Ma, X. X., Watanabe, S., Kreiswirth, B. N., Etienne, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+multiplex+PCRs+for+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+type+assignment%3A+rapid+identification+system+for+mec%2C+ccr%2C+and+major+differences+in+junkyard+regions%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Combination of multiplex PCRs for staphylococcal cassette chromosome mec type assignment: rapid identification system for mec, ccr, and major differences in junkyard regions.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 51 (1), 264-274 (2007).</li>
<li>Oliveira, D. C., de Lencastre, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+PCR+strategy+for+rapid+identification+of+structural+types+and+variants+of+the+mec+element+in+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Multiplex PCR strategy for rapid identification of structural types and variants of the mec element in methicillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 46 (7), 2155-2161 (2002).</li>
<li>Milheirico, C., Oliveira, D. C., de Lencastre, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+to+the+multiplex+PCR+strategy+for+assignment+of+mec+element+types+in+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Update to the multiplex PCR strategy for assignment of mec element types in Staphylococcus aureus.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 51 (9), 3374-3377 (2007).</li>
<li>Milheirico, C., Oliveira, D. C., de Lencastre, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+PCR+strategy+for+subtyping+the+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+type+IV+in+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%3A+%27SCCmec+IV+multiplex%27%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Antimicrobial+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Multiplex PCR strategy for subtyping the staphylococcal cassette chromosome mec type IV in methicillin-resistant Staphylococcus aureus: 'SCCmec IV multiplex'.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 60 (1), 42-48 (2007).</li>
<li>Zhang, K., McClure, J. A., Elsayed, S., Louie, T., Conly, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+multiplex+PCR+assay+for+characterization+and+concomitant+subtyping+of+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+types+I+to+V+in+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Novel multiplex PCR assay for characterization and concomitant subtyping of staphylococcal cassette chromosome mec types I to V in methicillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Journal of Clinical Microbiology. 43 (10), 5026-5033 (2005).</li>
<li>Zhang, K., McClure, J. A., Conly, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+multiplex+PCR+assay+for+typing+of+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+types+I+to+V+in+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Probes%22%5BJournal%5D)">Enhanced multiplex PCR assay for typing of staphylococcal cassette chromosome mec types I to V in methicillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Molecular and Cellular Probes. 26 (5), 218-221 (2012).</li>
<li>de Lamballerie, X., Zandotti, C., Vignoli, C., Bollet, C., de Micco, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+one-step+microbial+DNA+extraction+method+using+%22Chelex+100%22+suitable+for+gene+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Research+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">A one-step microbial DNA extraction method using "Chelex 100" suitable for gene amplification.</a> Research in Microbiology. 143 (8), 785-790 (1992).</li>
<li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agarose+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+DNA+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.</a> J. Vis. Exp. (62), e3923(2012).</li>
<li>McClure, J. A., Conly, J. M., Elsayed, S., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+PCR+assay+to+facilitate+identification+of+the+recently+described+Staphylococcal+cassette+chromosome+mec+type+VIII%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Probes%22%5BJournal%5D)">Multiplex PCR assay to facilitate identification of the recently described Staphylococcal cassette chromosome mec type VIII.</a> Molecular and Cellular Probes. 24 (4), 229-232 (2010).</li>
<li>Zhang, K., McClure, J. A., Elsayed, S., Conly, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+staphylococcal+cassette+chromosome+mec+type%2C+tentatively+designated+type+VIII%2C+harboring+class+A+mec+and+type+4+ccr+gene+complexes+in+a+Canadian+epidemic+strain+of+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Novel staphylococcal cassette chromosome mec type, tentatively designated type VIII, harboring class A mec and type 4 ccr gene complexes in a Canadian epidemic strain of methicillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (2), 531-540 (2009).</li>
</ol>

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmemiştir.

Burada açıklanan multipleks PCR testi, MRSA'nın MSSA'dan eşzamanlı ayrımı ile Stafilokoklarda SCCmec IV'nin tiplerini ve ana alt tiplerini sınıflandırmak için basit, güvenilir bir yöntem sağlar. Test sağlamdır, tek bir PCR reaksiyonunda rahatlıkla yapılır ve sonuçların yorumlanması kolaydır. Testin, her SCCmec tipi içindeki bireysel lokusları hedeflemesi nedeniyle sınırlamaları vardır, ancak kapsamlı ccr ve mec kompleks tiplemesi sunmaz ve bu nedenle altın standart olarak kabul edileme...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/50779/multiplex-pcr-assay-for-typing-staphylococcal-cassette-chromosome-mec">Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus</a>.&#160; There was a&#160;typo&#160;in Table 1.
In Table 1, the Oligonucleotide sequence for Type III-F5 was updated from:
TTCTCATTGATGCTGAAGCC
To:
GAAACTAGTTATTTCCAACGG

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/video/50779/multiplex-pcr-assay-for-typing-staphylococcal-cassette-chromosome-mec">Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus</a>.&#160; There was a&#160;typo&#160;in Table 1.

Erratum: Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Metisiline diren

<table><tbody><tr><td>Triptik Soya Agar</td><td>Fisher (BD)</td><td>CA90002-700 (236920)</td><td></td></tr><tr><td>Steril damıtılmış su</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>Platin Tak: 10x PCR tamponu ve 50 mM MgCl dahil 2</td><td>Life Technologies</td><td>10966-034</td><td></td></tr><tr><td>100 mM dNTP</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10297-018</td><td></td></tr><tr><td>Tris tabanı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6066</td><td></td></tr><tr><td>Borik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7901</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15576-028</td><td></td></tr><tr><td>Agaroz</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>16500-500</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15514-011</td><td></td></tr><tr><td>Bromofenol mavisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B8026</td><td></td></tr><tr><td>1Kb+ DNA merdiven</td><td>Ömrü Teknolojiler</td><td>10787-026</td><td></td></tr><tr><td>Etidyum bromür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E7637</td><td></td></tr><tr><td>1.5ml Mikrosantrifüj tüpleri </td><td>VWR (Axygen Scientific)</td><td>10011-700</td><td></td></tr><tr><td>Kültür çubukları</td><td>VWR</td><td>CA10805-018</td><td></td></tr><tr><td>PCR tüpleri</td><td>Diamed</td><td>AD0210-FCN (yeni #: DIATEC420-1250)</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5417c</td><td></td></tr><tr><td>Isı bloğu</td><td>VWR</td><td>13259-030 / 13259-286</td><td></td></tr><tr><td>Thermalcycler</td><td>Uygulamalı Biyosistemler (2720)</td><td>4359659</td><td></td></tr><tr><td>Jel kalıplı yatay, dalgıç jel elektroforez odası</td><td>BioRad</td><td>170-4469</td><td></td></tr><tr><td>Güç kaynağı</td><td>BioRad</td><td>164-5050</td><td></td></tr><tr><td>Rocker çalkalayıcı</td><td>VWR</td><td>40000-300</td><td></td></tr><tr><td>Moleküler Görüntüleyici Jel Doc Sistemi</td><td>BioRad</td><td>1708170</td><td></td></tr></tbody></table>

metisiline diren

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Stafilokok Kaset Kromozom mec (SCC mec) yazarak

Güncellenmiş olan bu M-PCR, SCCmec tip I-V'yi ve SCCmec IV'ün ana alt tiplerini belirleyebilmekte (sınıflandırabilmekte)dir. Analiz, mecA geni saptamasıyla eş zamanlı olarak SCCmec I, II, III, IVa, IVb, IVc, IVd, IVE ve V'in benzersiz ve spesifik lokuslarını hedeflemektedir. SCCmec VI ve VIII'in geçici olarak tanımlanması da mümkündür, ancak bu durum onay için ek testler gerektirecektir. Şekil 3, temsili SCCmec I-VI ve VIII'i ve her bir hedefin elemen...

Metisiline dirençli Staphylococcus aureus için Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) tip I-V'nin hızlı taraması ve tiplendirilmesi için basit bir multipleks PCR testi gösteriyoruz ve bu testi bireysel laboratuvarlara uyarlamak için başarılı kılan bazı hayati adımları ve prosedürel nüansları sağlıyoruz.

Metisiline diren

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

Bu prosedürün genel amacı, multiplex PCR analizi kullanarak metisilin dirençli staphylococcus aureus veya MRSA izolatlarının SCC MEC tipini belirlemektir. Bu işlem, öncelikle bakteriyel hücrelerin suda ısıtılmasını içeren hızlı ve basit bir ekstraksiyon tekniği kullanılarak suşlardan DNA izole edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, her bir SEC ME tipine özgü hedefleri çoğaltmak amacıyla bir multiplex PCR analizi gerçekleştirmektir.Ardından, PCR ürünleri AROS jel elektroforezi ile ayrıştırılır. Son adım, DNA'nın görselleştirilmesi ve veri analizi için jelin boyanmasıdır. Nihayetinde, bu multipleks PCR analizi ile elde edilen spesifik PCR ürünlerinin benzersiz kombinasyonu, MRS A izolatlarının SE cmec tiplerini belirlemek için kullanılır. Bireysel CCR ve MEC gen komplekslerini hedefleyen ve çok sayıda ayrı PCR tüpü gerektiren geleneksel S CEC tiplendirme şemaları gibi mevcut yöntemlere göre bu tekniğin temel avantajı, bu sürecin iş yükünü büyük ölçüde kolaylaştırması ve tek bir PCR tüpünde gerçekleştirilebilmesidir.Bu prosedürler, sertifikalı bir biyogüvenlik düzeyi iki laboratuvarında yürütülmelidir. PCR işleminin yapılacağı günden bir gün önce, her zaman uygun kişisel koruyucu ekipman kullanılmalıdır. Steril bir kültür çubuğu ile taze gecelik plakadan tek bir MRSA kolonisi seçin ve triptik soya agar plakası üzerine bakterilerin yoğun bir ekimini hazırlayın.Birden fazla örnek tek bir plak üzerine ekilerek 37 °C'de gece boyunca inkübe edilebilir. 1,5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne 75 µL steril distile su ekleyin. Steril bir kültür çubuğu kullanarak.Yoğun gece boyu ekim alanından az miktarda bakteri alın. Bulanık bir çözelti hazırlamak için bakterileri steril su içinde döndürerek karıştırın. Bu işlemi tüm örnekler için tekrarlayın.Bakterileri liz etmek ve DNA'yı serbest bırakmak için tüpleri 95 °C'ye ayarlanmış bir kuru ısı bloğunda 10 dakika boyunca inkübe edin. Numuneleri ısı bloğundan çıkarın ve oda sıcaklığında beş dakika bekletin. Numuneleri 13.000 RPM'de bir dakika boyunca santrifüj edin.Elde edilen örnek, hücresel debris peleti ve DNA içeren berrak bir süpernatanttan oluşur. PCR hazırlığı için; 10 XPCR tamponu, 50 millimolar magnezyum klorür, DTP'ler ve primerler dahil olmak üzere PCR reaktiflerini -20 °C dondurucudan çıkarın ve bakteri veya DNA'ya izin verilmeyen temiz bir PCR tezgahında oda sıcaklığında çözülmeye bırakın. Bu sırada 0,2 milliliter PCR tüpleri hazırlanabilir ve etiketlenebilir.Çözündükten sonra, tüm reaktifleri karıştırmak için kısa süreliğine vorteksleyin, ardından metin protokolündeki tabloda belirtildiği gibi birleştirin. Reaksiyonun başarısını etkilediği tespit edildiği için platinum tech DNA polimeraz kullanılması önemlidir. Master mix'i münferit PCR tüplerine eşit olarak paylaştırıp vorteksledikten sonra, tüm PCR tüplerini kapatın ve genel çalışma tezgahına aktarın.Önceden hazırlanmış bakteri örneklerinden iki mikrolitre berrak süpernatant pipetleyerek şablonu PCR tüplerine ekleyin. Tüpleri termal döngüleyiciye yerleştirmeden ve metin protokolünde listelendiği şekilde reaksiyonu başlatmadan önce belirlenmiş amplifikasyon alanına geçin. Cam erlenmeyer flask içerisinde 100 mililitre 0.5 XTBE tamponuna 2.5 gram agaroz ekleyerek belirlenmiş jel elektroforez alanında çalışın.Balonu streç filmle kapatın ve çözelti tamamen çözünene kadar mikrodalga fırında kaynatın. %2,5'lik bir jel hızla taşacaktır. Bu nedenle mikrodalgayı durdurun ve çözeltiyi düzenli olarak çalkalayın.Agroları, soğuk su altında döndürerek veya beş dakika boyunca tezgahta bekleterek dokunulabilecek sıcaklığa gelene kadar soğutun. Tüpleri PCR termal döngüleyici cihazdan çıkardıktan sonra agroları döküm tepsisine boşaltın. Her örneğe iki µL altı XDNA yükleme boyası ekleyerek örnekleri hazırlayın.Jeldeki her bir kuyuya 5 ila 10 µL örnek yükleyin. Beklenen bant boyutları için 1 KB plus veya 100 bp DNA merdiveni uygundur. Jel dökülmeden önce jele etidyum bromür eklenebilir veya alternatif olarak, jel görüntülenmeden önce bir etidyum bromür banyosunda boyanabilir.Tamamlanmış jeli 0.5 µg/mL atherium bromide ve distile su içeren bir çözeltiye yerleştirin ve bir çalkalayıcıda 10 dakika boyunca nazikçe karıştırın. Jeli temiz bir kaba aktarın ve 10 dakika daha distile su içinde bekletin. Burada, SEC MEC tip bir ila altı ve sekiz ile SEC MEK dört alt tipi A'dan F'ye kadar olan tüm temsilci suşlar için beklenen PCR ürünlerini gösteren temsili bir jel görülmektedir. Tipik bir SEC MEK bir suşu için iki bant beklenir.613 baz çiftindeki tip bir spesifik bandının yanı sıra 147 baz çiftindeki bir kontrol bandı olan mec görülmektedir. Prototipik tip iki N315 suşu ile daha az yaygın olan tip iki A ve tip iki B dahil olmak üzere üç temsilci SEC MEK2 suşu gösterilmiştir. Bir suşu SEC MEK2 olarak sınıflandırmak için, 128 baz çiftindeki tip iki lokus hedefi ve Meca kontrolü dahil olmak üzere iki bandın mevcut olması gerekir. Jel üzerinde, prototipik SEC MEK3 suşu 852082 ve daha az yaygın olan tip üç A JCSC290 suşu dahil olmak üzere iki temsilci SEC MEK3 suşu gösterilmiştir. SEC MEK3, 257 baz çiftindeki tip üç spesifik hedefi ve Meca kontrol hedefi dahil olmak üzere iki PCR ürününün varlığına göre tanımlanır.Baskın SEC MEC üç, bitişik bir SEC elementi üzerinde taşınan ve onu daha az yaygın olan SEC MEC üç A beşten ayırt etmeye yarayan 280 baz çiftindeki cıva hedefi için de pozitif olacaktır. Tip dört A, dört B, dört C, dört D, dört E ve dört F dahil olmak üzere temsili SEC MEC dört elementleri gösterilmiştir. SC MEK bir ile üçten farklı olarak, meck A dışında tüm SCC MEK dört alt tiplerinde bulunan tek bir hedef yoktur. Temsili SCC MEK dört E suşu, Tip dört E bandının yanı sıra bitişik bir aksesuar element üzerinde bulunan CCR AB dört ürününe ve SEC MEK dört E'nin SEC mk dört C ile aynı J 1 bölgesini paylaşması nedeniyle mevcut olan tip dört C ürününe dayanarak tanımlanır. SCC MEK dört F, aynı J 3 bölgesini paylaşması bakımından SEC MEK dört E'ye benzer ve sonuç olarak dört E hedefi için pozitif olmasının yanı sıra bitişik bir aksesuar element nedeniyle CCR AB dört hedefi için de pozitiftir. Bununla birlikte, S Cmk dört F, tip dört C hedefinden yoksun olmasıyla S CMK dört E'den ayırt edilebilir.Tipik bir SE CMK 5 örneğinde jelde iki PCR ürünü bulunur; 325 baz çiftindeki tip 5'e özgü bant ve 147 baz çiftindeki ME kontrolü. Son olarak, bu deneyin amacı SE CMK 6 veya 8'in kesin tanımlamasını yapmak olmasa da, spesifik bir PCR paterni bu tiplerin varlığına dair kanıt sağladığından her ikisi için de temsili suşlar dahil edilmiştir.Meck A hedefinin yanı sıra, temsili SEC MEK altı'nın, ana CCR kompleks tipi olduğu için 106 baz çiftinde pozitif bir CR AB dört ürünü üretmesi beklenir. Temsili SEC MEC sekiz de 147 baz çiftinde MEC A ve 106 baz çiftinde C-C-R-A-B dört için pozitif olacaktır ve SEC MEK iki ile aynı J iki bölgesine sahip olmasından kaynaklanan pozitif bir tip iki spesifik ürünü temelinde SEC MEK altı'ndan ayırt edilecektir. Bu prosedür uygulanırken, analizin karmaşık doğası ve reaksiyonda bulunan çok sayıdaki primer nedeniyle zorlukların ortaya çıkabileceğini unutmamak önemlidir.Bunu bireysel laboratuvarlara uyarlarken, DNA kalıp hazırlama ve PCR reaktif markası gibi belirli temel hususlara yakın dikkat göstermek bu hedefi büyük ölçüde kolaylaştıracaktır.

multiplex-pcr-assay-for-typing-staphylococcal-cassette-chromosome-mec

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

43 kadar moleküler hedeflere eş zamanlı olarak algılanması için düşük maliyetli, yüksek verim yöntemi açıklanmıştır. MPCR / RLB Uygulamaları mikrobiyal yazarak ve klinik örneklerde birden fazla patojenlerin tespiti içerir.

Multiplex PCR ve Reverse Line Blot Hibridizasyon Testi (mPCR / RLB)

Salmonella enterica serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg, ve Typhimurium hızlı tespiti için bir multipleks PCR açıklar. Belirli Salmonella serovars, belirli bir serovar O-antijen biyosentezi küme ve flagellin benzersiz genler ve dizileri bir multipleks PCR hedef tespit edilebilir. Serovar hedef allel ilgili özel, boyut amplikonlarının (PCR ürünü) görünümünü dayalı izole Salmonella sonra atanır.

Allelotyping belirlenmesi için bir PCR Salmonella enterica Serovars Enteritidis, Hadar, Heidelberg ve Typhimurium

Oligonükleotid çiftli florasan boncuklar kullanarak bir örnek içinde mikroorganizmaların tespiti için çoklama yöntemi açıklar. Bir örnek içindeki tüm organizmalar Amplikon bir panel prob-çiftli boncuk melezleşmiştir. LUMINEX veya Bio-Plex enstrüman, boncuk, boncuk türü ve hibridizasyon sinyali için her bir sorgu için kullanılır.

Oligonükleotid çiftli Floresan Mikroküreler kullanarak Kompleksi Klinik ve Çevre Örneklerinde Bakterilerin Multiplex Algılama

Litik faj biyosensörler ve antikor boncuk metisiline dirençli (MRSA) ve duyarlı stafilokok bakterileri ayırt edebiliyoruz. Faj bir kuvars kristal mikro sensörünün bir yüzey üzerine Langmuir-Blodgett yöntemi ile hareketsiz ve geniş stafilokok prob olarak çalışıyordu. Antikor boncuk MRSA tanır.

Antibiyotik Dirençli Stafilokok bakteri tespiti için biyosensör

Bir amplifikasyon mikrodizi önemli ölçüde son kullanıcı için mikro-dizi iş akışını tek bir oda içine asimetrik PCR amplifikasyonu ve mikrodizi hibridizasyon birleştirir. Mikrodizi iş akışı basitleştirilmesi rutin alt-kaynak ortamlarda kullanılabilir mikroarray tabanlı tanı oluşturmak için gerekli bir ilk adımdır.

Çok ilaca dirençli Demonstrating<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Amplifikasyon Microarray

Bu protokol, gıda maddelerinde sınıf 1 integronlarının ve bunlarla ilişkili gen kasetlerinin tespitini açıklar.

Sınıf 1 integronlar ve Gen Kasetleri için gıda maddelerinin taranması

Burada, ribozomal aralayıcı PCR (RS-PCR), S. aureus'un orta maliyetlerle genotiplendirilmesi için hızlı ve yüksek çözünürlüklü bir yöntem olarak minyatür bir elektroforez sistemi ile birlikte kullanılır ve yüksek verim sağlar.

bir Genotiplendirme<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; Tarafından Ribozomal Spacer PCR (RS-PCR)

Yaygın solunum yolu virüsleri için iki prob tabanlı kurum içi tek adımlı RT-qPCR kiti sunuyoruz. İlk test SARS-CoV-2 (N), İnfluenza A (H1N1 ve H3N2) ve İnfluenza B içindir. İkincisi SARS-Cov-2 (N) ve MERS (UpE ve ORF1a) içindir. Bu testler herhangi bir özel laboratuvarda başarıyla uygulanabilir.

SARS-CoV-2, Influenza A/B ve MERS-CoV'nin Tespiti için Multipleks Gerçek Zamanlı RT-qPCR Testlerinin Geliştirilmesi

Damla akış reaktörleri, açık sistem akış biyofilm kullanan ve diski reaktörler dönen için Protokoller ayrıntılı olarak sunulmuştur.

Damla Akış ve Döner Disk Reaktörler kullanın Staphylococcus aureus Biyofilm Analizi

Murin deri ve yumuşak doku enfeksiyonu modeli metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) ve ev sahibi immünolojik yanıtlar virülans fonksiyonu değerlendirmek için kullanılmaktadır. Burada, biz, deri ve yumuşak doku enfeksiyonu için bir deri altı enfeksiyon modeli sundu.

Subkutan Enfeksiyon Metisiline Dirençli Stafilokok Aureus (MRSA)

Öğrenin, MRSA izolatlarında SCCmec tiplerini belirlemek için çoklu PCR yöntemini. Bu hızlı ve basit yöntem, DNA izolasyonu ve jel elektroforezi ile laboratuvarlarda kolayca uygulanabilir.

Metisiline diren

Daha fazla video keşfet