Name: Kültürleme ve bakımı Clostridium difficile Bir Anaerobik Çevre (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-14T21:25:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: Öğrenin Clostridium difficile izolasyonu ve kültürleme yöntemlerini anaerobik ortamda uygulayın. Gliserol stokları ve spor hazırlama teknikleriyle patojen bakteri araştırmaları için güvenilir sonuçlar elde edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz nazik anaerobik odasının fotoğraflarını sağlamak için Coy Laboratuvarları teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Sağlık hibe DK087763 (SMM) ve STEP / HHMI Müfredat Geliştirme Bursu (ANE) Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Hall, I. C., O'Toole, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+flora+in+new-borin+infants+-+With+a+description+of+a+new+pathogenic+anaerobe%2C+Bacillus+difficilis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Dis.+Child%22%5BJournal%5D)">Intestinal flora in new-borin infants - With a description of a new pathogenic anaerobe, Bacillus difficilis.</a> Am. J. Dis. Child. 49, 390-402 (1935).</li>
<li>Tedesco, F. J., Barton, R. W., Alpers, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clindamycin-Associated+Colitis+-+Prospective+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Intern.+Med%22%5BJournal%5D)">Clindamycin-Associated Colitis - Prospective Study.</a> Ann. Intern. Med. 81, 429-433 (1974).</li>
<li>Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+difficile+30+years+on%3A+what+has%2C+or+has+not%2C+changed+and+why%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Antimicrob.+Agents%22%5BJournal%5D)">Clostridium difficile 30 years on: what has, or has not, changed and why.</a> Int. J. Antimicrob. Agents. 33, 2-8 (2009).</li>
<li>Gerding, D. N., Muto, C. A., Owens, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+Clostridium+difficile+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Treatment of Clostridium difficile infection.</a> Clin. Infect. Dis. 46, Suppl 1. 32-42 (2008).</li>
<li>Dubberke, E. R., Olsen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+Clostridium+difficile+on+the+healthcare+system%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Burden of Clostridium difficile on the healthcare system.</a> Clin. Infect. Dis. 55, 88-92 (2012).</li>
<li>Bouza, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consequences+of+Clostridium+difficile+infection%3A+understanding+the+healthcare+burden%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Infect%22%5BJournal%5D)">Consequences of Clostridium difficile infection: understanding the healthcare burden.</a> Clin. Microbiol. Infect. 18, 5-12 (2012).</li>
<li>Peery, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+of+gastrointestinal+disease+in+the+United+States%3A+2012+update%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Burden of gastrointestinal disease in the United States: 2012 update.</a> Gastroenterology. 143, 1171-1173 (2012).</li>
<li>Deakin, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Clostridium+difficile+spo0A+gene+is+a+persistence+and+transmission+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">The Clostridium difficile spo0A gene is a persistence and transmission factor.</a> Infect. Immun. 80, 2704-2711 (2012).</li>
<li>Drasar, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+anaerobic+intestinal+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pathol.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Cultivation of anaerobic intestinal bacteria.</a> J. Pathol. Bacteriol. 94, 417-427 (1967).</li>
<li>Leach, P. A., Bullen, J. J., Grant, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaerobic+CO+2+cabinet+for+the+cultivation+of+strict+anerobes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Anaerobic CO 2 cabinet for the cultivation of strict anerobes.</a> Appl. Microbiol. 22, 824-827 (1971).</li>
<li>Killgore, G. E., Starr, S. E., Del Bene,, Whaley, V. E., N, D., Dowell, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+three+anaerobic+systems+for+the+isolation+of+anaerobic+bacteria+from+clinical+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Clin.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Comparison of three anaerobic systems for the isolation of anaerobic bacteria from clinical specimens.</a> Am. J. Clin. Pathol. 59, 552-559 (1973).</li>
<li>Bacic, M. K., Smith, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+maintenance+and+cultivation+of+bacteroides+species%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Laboratory maintenance and cultivation of bacteroides species.</a> Curr. Protoc. Microbiol. Chapter 13, Unit 13C 11(2008).</li>
<li>Doan, N., Contreras, A., Flynn, J., Morrison, J., Slots, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proficiencies+of+three+anaerobic+culture+systems+for+recovering+periodontal+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Proficiencies of three anaerobic culture systems for recovering periodontal pathogenic bacteria.</a> J. Clin. Microbiol. 37, 171-174 (1999).</li>
<li>Socransky, S., Macdonald, J. B., Sawyer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cultivation+of+Treponema+microdentium+as+surface+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Oral.+Biol%22%5BJournal%5D)">The cultivation of Treponema microdentium as surface colonies.</a> Arch. Oral. Biol. 1, 171-172 (1959).</li>
<li>George, W. L., Sutter, V. L., Citron, D., Finegold, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+differential+medium+for+isolation+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Selective and differential medium for isolation of Clostridium difficile.</a> J. Clin. Microbiol. 9, 214-219 (1979).</li>
<li>Wilson, K. H., Silva, J., Fekety, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+Clostridium+difficile+by+normal+hamster+cecal+flora+and+prevention+of+antibiotic-associated+cecitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Suppression of Clostridium difficile by normal hamster cecal flora and prevention of antibiotic-associated cecitis.</a> Infect. Immun. 34, 626-628 (1981).</li>
<li>Wilson, K. H., Kennedy, M. J., Fekety, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+sodium+taurocholate+to+enhance+spore+recovery+on+a+medium+selective+for+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Use of sodium taurocholate to enhance spore recovery on a medium selective for Clostridium difficile.</a> J. Clin. Microbiol. 15, 443-446 (1982).</li>
<li>Bliss, D. Z., Johnson, S., Clabots, C. R., Savik, K., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+cycloserine-cefoxitin-fructose+agar+%28CCFA%29+and+taurocholate-CCFA+for+recovery+of+Clostridium+difficile+during+surveillance+of+hospitalized+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn.+Microbiol.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparison of cycloserine-cefoxitin-fructose agar (CCFA) and taurocholate-CCFA for recovery of Clostridium difficile during surveillance of hospitalized patients.</a> Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 29, 1-4 (1997).</li>
<li>Marler, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+five+cultural+procedures+for+isolation+of+Clostridium+difficile+from+stools%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of five cultural procedures for isolation of Clostridium difficile from stools.</a> J. Clin. Microbiol. 30, 514-516 (1992).</li>
<li>Sorg, J. A., Dineen, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+maintenance+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Laboratory maintenance of Clostridium difficile.</a> Curr. Protoc. Microbiol. Chapter 9, Unit 9A 1(2009).</li>
<li>Bouillaut, L., McBride, S. M., Sorg, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of Clostridium difficile.</a> Curr. Protoc. Microbiol. Chapter 9, Unit 9A 2(2011).</li>
<li>Lemee, L., Pons, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilocus+sequence+typing+for+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Multilocus sequence typing for Clostridium difficile.</a> Methods. Mol. Biol. 646, 77-90 (2010).</li>
<li>Shanholtzer, C. J., Peterson, L. R., Olson, M. N., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+study+of+gram-stained+stool+smears+in+diagnosis+of+Clostridium+difficile+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Prospective study of gram-stained stool smears in diagnosis of Clostridium difficile colitis.</a> J. Clin. Microbiol. 17, 906-908 (1983).</li>
<li>Smith, C. J., Markowitz, S. M., Macrina, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transferable+tetracycline+resistance+in+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Transferable tetracycline resistance in Clostridium difficile.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 19, 997-1003 (1981).</li>
<li>Permpoonpattana, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+layers+of+Clostridium+difficile+endospores%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Surface layers of Clostridium difficile endospores.</a> J. Bacteriol. 193, 6461-6470 (2011).</li>
<li>Putnam, E. E., Nock, A. M., Lawley, T. D., Shen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SpoIVA+and+SipL+are+Clostridium+difficile+spore+morphogenetic+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">SpoIVA and SipL are Clostridium difficile spore morphogenetic proteins.</a> J. Bacteriol. , (2013).</li>
<li>Burns, D. A., Minton, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sporulation+studies+in+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Sporulation studies in Clostridium difficile.</a> J. Microbiol. Methods. 87, 133-138 (2011).</li>
<li>Perez, J., Springthorpe, V. S., Sattar, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clospore%3A+a+liquid+medium+for+producing+high+titers+of+semi-purified+spores+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J.+AOAC+Int%22%5BJournal%5D)">Clospore: a liquid medium for producing high titers of semi-purified spores of Clostridium difficile.</a> J. AOAC Int. 94, 618-626 (2011).</li>
<li>Sorg, J. A., Sonenshein, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibiting+the+initiation+of+Clostridium+difficile+spore+germination+using+analogs+of+chenodeoxycholic+acid%2C+a+bile+acid%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Inhibiting the initiation of Clostridium difficile spore germination using analogs of chenodeoxycholic acid, a bile acid.</a> J. Bacteriol. 192, 4983-4990 (2010).</li>
<li>O'Connor, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+analysis+of+chromosomal+Clostridium+difficile+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Construction and analysis of chromosomal Clostridium difficile mutants.</a> Mol. Microbiol. 61, 1335-1351 (2006).</li>
<li>Buggy, B. P., Wilson, K. H., Fekety, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+methods+for+recovery+of+Clostridium+difficile+from+an+environmental+surface%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of methods for recovery of Clostridium difficile from an environmental surface.</a> J. Clin. Microbiol. 18, 348-352 (1983).</li>
<li>Koch, C. J., Kruuv, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+release+of+oxygen+from+polystyrene+Petri+dishes%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Radiol%22%5BJournal%5D)">The release of oxygen from polystyrene Petri dishes.</a> Br. J. Radiol. 45, 787-788 (1972).</li>
<li>Ethapa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+factors+modulate+biofilm+formation+by+the+anaerobic+pathogen+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Multiple factors modulate biofilm formation by the anaerobic pathogen Clostridium difficile.</a> J. Bacteriol. , (2012).</li>
<li>Speers, A. M., Cologgi, D. L., Reguera, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anaerobic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Anaerobic cell culture.</a> Curr. Protoc. Microbiol. Appendix 4, Appendix 4F(2009).</li>
<li>Lyras, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxin+B+is+essential+for+virulence+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Toxin B is essential for virulence of Clostridium difficile.</a> Nature. 458, 1176-1179 (2009).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada açıklanan yöntemler, C, basit ve hızlı bir iyileşme sağlar insan, fare ve hamster, hem de C, uzun süreli depolama içeren dışkı örnekleri, çeşitli difficile gliserol veya spor hisse senetleri gibi difficile. C. difficile yetiştirmek için zor bir organizma olabilir, ancak dikkatli bir anaerobik ortam bakım ve aseptik tekniklerin uygulanması güçlü büyüme ve kirlenme bir azalma sağlayabilir. Anaerobik odaları: Hususlar ve Bakım ...

Clostridium difficile bir zorunlu anaerob ve insanlarda ve hayvanlarda bir potansiyel olarak ölümcül bir gastrointestinal patojen olan bir Gram-pozitif, spor oluşturucu bakteridir. Başlangıçta yenidoğanlarda 1, C. dışkısında bulunan bir ortakçı organizma olarak 1935 yılında açıklanan difficile daha sonra antibiyotik tedavisi ile ilişkili 2 psödomembranöz kolit neden olan ajan olduğu gösterilmiştir. C&#39;yi difficile enfeksiyonları (CDI), genellikle C için bir niş oluşturmak, normal kolonik floranın bozulmasına sonuçları antibiyotik tedavisi ile takip edilir difficile 2 gelişmek için. C. difficile fekal-oral yolla bir atıl sporun olarak iletilir ve daha sonra çeşitli toksinleri üreten ve ciddi hastalık ve kolit 3 neden yeteneğine vejetatif hücreleri üreten, gastrointestinal sistem içinde filizlenir edilir. CDI, genellikle geleneksel tedavilere ve bu &#39;de refrakterFections sık sık 4. tekrarlamış edilir. Sonuç olarak, CDI Amerika Birleşik Devletleri 5-7 sağlık maliyetlerinde kadar 4800000000 $ sorumludur. C. difficile ortamında oksijen düşük seviyelerde bile çok hassastır. C. için difficile ortamda hayatta kalmaya ve verimli bir konağa ana bulaşabilir, metabolik olarak aktif olmayan sporun oluşumu kritik 8&#39;dir. Çünkü C laboratuvar bakım ve manipülasyon difficile Bu teknikler, bir anaerobik odanın kullanımını gerektiren, kontrollü, oksijensiz bir ortam gerektirir. Anaerobik bölmelerin kullanılması artan geri kazanım ve zorunlu anaeroblar 9-11 izolasyonu ile sonuçlandı ve anaerobik atmosferde gerçekleştirilebilir moleküler teknikler sağladı. C ek olarak, difficile, burada açıklanan anaerobik odası kullanımı ve bakımı uygulanabilirBu diğer Clostridial türleri (örneğin, C. perfringens), diğer mide-bağırsak türler (örneğin, Bacteroides türleri, 12) ve periodontal patojenlere (örneğin, Peptostreptococcus türlerinin 13) gibi diğer zorunlu anaeroblar için.

<table><tbody><tr><td>Proteoz Pepton no. 2</td><td>BD</td><td>212120</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Fisher</td><td>S373</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher</td><td>BP362</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S27</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4 (susuz)</td><td>Fisher</td><td>M65</td><td></td></tr><tr><td>á'...-Fruktoz</td><td>Fisher</td><td>L96</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum taurokolat</td><td>Sigma</td><td>T4009</td><td></td></tr><tr><td>á'...-sikloserin</td><td>Sigma</td><td>C6880</td><td></td></tr><tr><td>Sefoksitin</td><td>Fluka</td><td>C4786</td><td></td></tr><tr><td>Beyin kalp infüzyon ortamı</td><td>BD</td><td>237300</td><td></td></tr><tr><td>Proteoz Pepton</td><td>BD</td><td>211684</td><td></td></tr><tr><td>(NH4)2SO4</td><td>Sigma</td><td>A5132</td><td></td></tr><tr><td>Tris tabanı</td><td>Fisher</td><td>BP152</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>L-sistein</td><td>Sigma</td><td>C7755</td><td></td></tr><tr><td>BactoPeptone</td><td>BD</td><td>211684</td><td></td></tr><tr><td>Kolombiya koyun kanı agar</td><td>Fisher</td><td>L21928</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>S27</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher</td><td>P217</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Fisher</td><td>BP2291</td><td></td></tr><tr><td>Steril aşılama halkaları</td><td>Fisher</td><td>22363596</td><td></td></tr><tr><td>Steril swablar</td><td>Fisher</td><td>1495990</td><td></td></tr><tr><td>Coy Vinil Anaerobik Oda ve Aksesuarları</td><td>Coy Laboratuvar Ürünleri, Inc</td><td>Müşteri Tarafından Belirtilen</td><td>Bu ürünler laboratuvar ihtiyaçlarına</td></tr><tr> göre özel olarak sipariş edilir<td colspan="4">Materials</td></tr><tr><td colspan="4">TCCFA agar Proteoz pepton no. 2 (Difco) 40 g Na2HPO4 5 g KH2PO4 1 g NaCl 2 g MgSO4 (susuz) 0.1 g Fruktoz 6 g Agar 20 g Deiyonize su ve otoklav ile 121 &°C'de 1 L'ye getirin; Sterilize etmek için 20 dakika C. Otoklavlamadan sonra ekleyin: 10 ml %10 (a/h) sodyum taurokolat, filtreyle sterilize edilmiş (suda çözülür; nihai konsantrasyon, %0.1) 25 ml 10 mg/ml á'...-sikloserin, filtreyle sterilize edilmiş (suda çözülür; nihai konsantrasyon, 250 &mu; g / ml) 1.6 ml 10 mg / ml sefoksitin, filtreyle sterilize edilmiş (suda çözülür; nihai konsantrasyon, 16 & mu; g/ml) <güçlü>BHIS Orta</güçlü> Beyin kalp infüzyonu 37 g Maya özütü 5 g Plakalar için 15 g agar ekleyin. Deiyonize su ve 121 ° C'de otoklav ile 1 L'ye getirin; Sterilize etmek için 20 dakika C. İsteğe bağlı (otoklavlamadan sonra ekleyin): 3 ml %10 (a/h) L-sistein (suda çözünür; son konsantrasyon, %0.03) 10 ml %10 (a/h) sodyum taurokolat (suda çözünür; nihai konsantrasyon, %0.1) <güçlü>SMC Sporülasyon Ortamı</güçlü><brbr/> BactoPeptone 90 g Proteaz pepton 5 g (NH<alt>4</alt>)<alt>2</alt>SO<alt>4</alt><alt> </alt> 1 g Tris tabanı 1.5 g Agar 15 g Deiyonize su ve otoklav ile 121 &°C'de 1 L'ye getirin; Sterilize etmek için 20 dakika C. İsteğe bağlı (otoklavlamadan sonra ekleyin): 3 ml %10 (a/h) L-sistein (suda çözülür; son konsantrasyon, %0.03) <güçlü>70:30 Orta</güçlü> BactoPeptone 63 g Proteaz pepton 3.5 g Beyin kalp infüzyonu 11.1 g Maya özü 1,5 g (NH<alt>4</alt>)<alt>2</alt>SO<alt>4</alt> 0,7 g Tris tabanı 1,06 g Plakalar için 15 g agar ekleyin. Deiyonize su ve 121 ° C'de otoklav ile 1 L'ye getirin; Sterilize etmek için 20 dakika C. Otoklavlamadan sonra 3 ml %10 (a/h) L-sistein (nihai konsantrasyon, %0.03) ekleyin. <güçlü>Kan agar Hazır Columbia anaerobik koyun kanlı agar plakalarının (Fisher Scientific, L21928) kullanılması 35 kullanılması önerilir. 1X Fosfat tamponlu salin (PBS) NaCl 8,01 g KCl 0,2 g Na2HPO4 1,44 g KH2PO4 0,27 g Deiyonize su ile 1 L'ye getirin ve HCl ile pH'ı 7,4'e ayarlayın. Filtreleme Kullanmadan önce sterilize edin.</td></tr></tbody></table>

kültürleme ve bakımı<em&gt; clostridium difficile</em&gt; bir anaerobik Çevre

Culturing and Maintaining Clostridium difficile in an Anaerobic Environment

Clostridium difficile antibiyotik ilişkili ishal (AAD) için öncelikle sorumlu ve önemli bir nozokomiyal patojen olan bir Gram-pozitif, anaerobik, sporogenic bakteridir. C. difficile izole etmek ve geliştirmek için çok zordur ve çevre oksijen düşük seviyelerde bile son derece duyarlıdır. Burada, C izole edilmesi için yöntemler dışkı örnekleri difficile ve daha sonra kültür C. , uzun süreli depolama için gliserol stoklarının hazırlanması için difficile sunulmaktadır. Mikroskopi ve hayvan çalışmaları dahil olmak üzere alt çeşitli uygulamalar için laboratuarda spor stoklarının hazırlanması ve numaralandırma için teknikler de tarif edilmiştir. Bu teknikler en iyi C için uygun koşulları temin etmek üzere tutarlı oksijensiz bir ortamın oksijensiz odası, gerektirecek difficile büyüme. Biz ca olmadan odasının içinde ve dışında malzeme aktarımı için protokolleri sağlamakverimli ve tutarlı C için uygun anaerobik ortam sürdürmek için gerekli düzenli bakım önerileriyle birlikte önemli oksijen kirlenmeyi kullanarak difficile ekimi.

C. bir örneği BHIS ve Columbia anaerobik koyun kan agar ortamı üzerinde büyütülmüş difficile, Şekil 2&#39;de görülebilir. C. difficile düz ve hem de medya üzerinde belirgin bir buzlu cam görünümü sahip düzensiz koloniler oluşturur. Burada, C&#39;lik bir eritromisin duyarlı klinik izolat difficile, 630E 30, 37 ° C &#39;(Şekil 2A), 24 saat boyunca, BHIS ağar, bir zenginleştirilmiş ve seçici olmayan ortam üzerinde yetiştirilir. Columb...

Clostridium difficile sıkı anaerob ve antibiyotik ilişkili ishal (AAD) neden olan bir patojen bakteridir. Burada, izole edilmesi ve kültür C muhafaza edilmesi için yöntemler difficile bitkisel hücreleri ve sporlar açıklanmıştır. Bu teknikler optimum C için uygun koşulları sağlamak için düzenli bakım gerektirir, bir anaerobik odasını gerektiren difficile ekimi.

Kültürleme ve bakımı<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Bir Anaerobik Çevre

Clostridium  difficile is a Gram-positive, anaerobic, sporogenic bacterium  that is primarily responsible for antibiotic associated diarrhea (AAD) and is ...

Bu prosedürün genel amacı, uzun süreli saklama için gliserol stokları hazırlamak amacıyla dışkı örneklerinden C. difficile izole etmek ve çeşitli alt uygulamalar için spor stokları hazırlamak ve bunları saymaktır. Bu işlem, öncelikle seçici besiyerine ekim yaparak dışkı örneklerinden C. difficile izole edilerek gerçekleştirilir. İkinci adım ise C. difficile'in sıvı besiyerinde büyütülmesi ve C. difficile stoklarının gliserol içerisinde uzun süreli olarak muhafaza edilmesidir.Ardından, dondurulmuş gliserol stoklarından C difficile alınır ve agar plaklarına ekilir. Son adımda, bu protokoller takip edilerek C difficile spor stokları hazırlanır ve sayılarak belirlenir. C difficile, kimliğini doğrulamak ve onaylamak amacıyla çeşitli besiyerlerinde büyütülebilir, başarıyla kültüre edilebilir ve muhafaza edilebilir.Bu gliserol stokları ve kültürler, hayvan çalışmaları ve ek moleküler biyoloji çalışmaları da dahil olmak üzere birçok sonraki uygulama aşamasında kullanılabilir. c difficile kültürü oluşturmak için mum kavanozları gibi diğer yöntemler yerine vinil bir anaerobik oda kullanmanın temel avantajı, katı bir anaerobik ortamın sürdürülebilmesi ve böylece c difficile'in tutarlı ve güve

culturing-maintaining-clostridium-difficile-an-anaerobic

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Li, J., vd. al., Clostridioides difficile için Larva Zebra Balığı Enfeksiyon Modelinin Geliştirilmesi. J. Vis. Uzm. (2020)Bu video, Clostridioides difficile bakterilerinin larva zebra balığının bağırsağından izolasyonunu ve kültürlenmesini göstermektedir. Enfekte bağırsak diseke edilir, homojenize edilir ve antibiyotik içeren seçici anaerobik ortamda inkübe edilir. Bu koşullar rakip mikropları baskılar ve canlı hücrelerin büyümesini destekler.

Larva Zebra Balığı Bağırsağından Clostridioides difficile Bakterilerinin İzolasyonu ve Kültürü

Kaynak: Anwar, Z., ve diğerleri. Perakende Gıda Örneklerinde Clostridium perfringens Toksinotiplerinin Zenginleştirilmesi ve Tespiti. J. Vis. Uzm. (2019).Bu videoda, sülfit indirgeyen bakteriler, sülfit içeren bir agar ortamında kültürlenir, burada anaerobik olarak büyürler ve sülfiti hidrojen sülfüre indirgeyerek demir iyonları ile siyah çökeltiler oluştururlar. Siyah koloniler, aseptik teknikler kullanılarak agar derinliğinden izole edilir ve sürekli anaerobik inkübasyon için taze ortama...

Bir Agar Kültüründen Sülfit İndirgeyen Anaerobik Bakterilerin Alt Kültürlenmesi

Bu protokol klinik olarak ilgili ve genetik uysal gerginlik, R20291 kullanarak Clostridium difficile enfeksiyonu (CDI) sefoperazon fare modeli özetliyor. Klinik hastalık izleme, C. difficile bakteriyel numaralandırma, toksin sitotoksisite ve bir fare modelinde CDI genelinde histopatolojik değişikliklere vurgu protokolde ayrıntılı olarak verilmiştir.

ve Cefoperazone-tedavi edilmiş fare modeli klinik olarak ilgili<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Gerilme R20291

Antibiyotik etkinliği en yaygın olarak öldürme kinetik çalışmaları yapılarak ve koloni oluşturma birimleri (CFU'lar) ölçülerek belirlenir. Taramalı elektron mikroskobunu (SEM) bu standart yöntemlerle entegre ederek, tedavinin farmakolojik etkilerini farklı antibiyotikler arasında ayırt edebiliriz.

Morfolojik Değişiklikleri Karakterize Eden Bir Protokol<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Antibiyotik Tedavisine Yanıt Vermek

Zorunlu anaerobik organizmalar oksijene maruz kaldıktan sonra büyüyemedikleri için anaerobik kültür tekniklerinin kullanımı vazgeçilmezdir. Burada, medya hazırlığından gaz ve uçucu yağ asidi nicelleştirmesine kadar bir biyogaz bitkisinden elde edilen karışık bir kültürü yetiştirmek için basit ve etkili bir yöntem gösteriyoruz.

Kesinlikle Anaerobik/Anoksik Koşullarda Mikroorganizmaların Yetiştirilmesi için Orta Hazırlık

Bu makalenin odak noktası, bir ortamdan elde edilen titiz anaerobik mikroorganizmalar için ortam yapmak için en iyi uygulamaları detaylandırmaktır. Bu yöntemler anaerobik kültürlerin yönetilmesine yardımcı olur ve "mikrobiyal karanlık madde" olarak adlandırılan, kültürlenmemiş mikroorganizmaların büyümesini desteklemek için uygulanabilir.

Çevresel Olarak Edinilmiş Anaerobik Mikroorganizmaların Kültürlenmesi için Bir Dizi Yerinde Bilgilendirilmiş Simüle Edilmiş Ortam Formatı

Protokol, anaerobik bağırsak bakterilerinin izolasyonunu iyileştirmek için iki metodoloji sunar. Birincisi, farklı kültür ortamları kullanılarak çok çeşitli bakterilerin izolasyonuna odaklanır. İkincisi, ekolojik önemini tam olarak anlamak için muhtemelen miyo-inositol'ü asimile eden belirli bir mikrobiyal grubun yetiştirme adımlarına odaklanır.

Tavuğun Gastrointestinal Sisteminden Anaerobik Bakteri Yetiştiriciliğini Geliştirme Stratejileri

Biz neonatal serebral korteks ve yetişkin omurilik canlı mikroglia verimli ve hızlı izolasyon / kültür yöntemleri özetlemektedir. Kortikal mikrogliya diseksiyonu ve kaplama ilk diseksiyonu sonrasında yer ~ 10 gün alarak sonraki mikrogliyal hasat ile, 90 dakika içinde yapılabilir.

Yenidoğan ve Erişkin Merkezi sinir sisteminin Kültüre Mikroglia

Biz, böcek ve bitki dokularında virüs ve bakterilerin lokalizasyonu için burada in situ hibridizasyon, basit bir floresan (FISH) yöntemi tarif eder. Bu protokol bütün montaj mRNA görselleştirme ve mikroskopik bölümleri için uzatılabilir.

Floresan<em&gt; In situ</emVirüsler ve Bitki ve Böcek Dokularda Endosimbiyotik Bakterilerin lokalizasyonu&gt; Hibritlemeler (FISH)

Bu protokolde, Amaxa Nucleofector 96 kuyulu Mekik Sistemini kullanarak murin makrofaj hücre hatlarını siRNA'larla verimli bir şekilde transfekte etmek, makrofajları lipopolisakkarit ile uyarmak ve inflamatuar sitokin üretimi üzerindeki etkileri izlemek için yöntemler açıklanmaktadır.

Fare Makrofagların yılında Doğuştan Bağışıklık Tepkisi Soruşturma RNA girişimi kullanma

Öğrenin Clostridium difficile izolasyonu ve kültürleme yöntemlerini anaerobik ortamda uygulayın. Gliserol stokları ve spor hazırlama teknikleriyle patojen bakteri araştırmaları için güvenilir sonuçlar elde edin.

Kültürleme ve bakımı

Daha fazla video keşfet