Name: Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-04T21:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Öğrenin, Drosophila melanogaster yetişkin sineklerde açlığın koku arama davranışlarına etkisini otomatik izleme sistemiyle nasıl ölçülür. Bu yöntem davranışsal nörobilim araştırmaları için güvenilir bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü (R01DK092640) ve Ulusal Bilim Vakfı (0920668) den JWW araştırma hibe tarafından desteklenmiştir.

1.. Fly Toplama ve Açlık <ol><li> Arka 12 saat ışık / karanlık döngüsü kontrollü sıcaklık ve nem koşulları (örn. 21 ° C,% 50-60 bağıl nem) altında deneysel sinekler. </li><li> Kadın eclosion gününde uçar toplayın ve (maksimum 30 şişe başına) yeni gıda şişeleri içine, 4-5 erkek ile birlikte koyun. Yaş 2-5 gün uçuyor. </li><li> Sinek açlık için odaları hazırlayın. <ol><li> Boş bir plastik şişenin dibine bir tek doku (4.8 x 8.4 inç) itin. Tamamen saf su ile doku ıslatın. Doku üzerinde bastırın ve yavaşça fazla suyunu sıkın bir nesne kullanın. </li><li> Ilave su atmak için şişeyi ters çevirin. Orada nemli nemli sinekler ve açlık odasını tutmak için yeterli su olabilir, ama sinekler boğmak için yeterli olmamalıdır. </li></ol></li><li> Bir açlık odasına gıda şişesinden sinek aktarın ve deney başlamadan önce şişenin yaklaşık 18-24 saat takın. Mağazagece boyunca kontrol edilen sıcaklık ve nem koşulları altında şişeler, deney ertesi gün başlayana kadar. </li></ol> 2. Gıda Koku hazırlanması <ol><li> Agaroz, bir cam şişe içinde damıtılmış su, 10 ml düşük erime sıcaklığının 0.1 g eklenmesi ile bir% 1 agaroz çözeltisi hazırlayın. Kaynamaya başlayınca kadar sadece bir mikrodalga agaroz çözüm Isı ama kaynar çok önce. <ol><li> Mikrodalga durdurmak ve bir kez şişeyi girdap. Agaroz tamamen çözülene kadar iki kez daha bu adımı tekrarlayın. 50 ° C&#39;de ayarlanmış bir sıcak plaka üzerindeki bir şişe sıcak tutarak sıvı halde agaroz çözüm tutun </li></ol></li><li> % 1 elma sirkesi çözüm yapmak için 1.5 ml Eppendorf tüpüne% 1 agaroz çözüm 990 ul ve elma sirkesi 10 ul ekleyin. Vortex kadar solüsyon 50 ° C&#39;ye ayarlanmış bir banyo kuru inkübatör içinde karıştırılmış ve bir yer </li></ol> 3. Test Odası ve Davranış Odası Kurulumu <ol><li&gt; İstenen koşullar (örneğin sıcaklık ve nem) için test odası ayarlayın. </li><li> LED panel (660 nm) açın. </li><li> Sıcak su ile elekler ve test plakaları durulayın ve nem buharlaşana kadar bir kurutucu fırında ısı. Deney başlamadan önce, test, oda sıcaklığına kadar elekler ve plakalar soğutun. </li><li> Dağıtıcı plaka üstüne basit bir çanak yerleştirin ve yerel nemi arttırmak için ve agaroz damlacık içindeki suyu maske için su ile doldurun. </li><li> Su kabının üzerinde elekler yerleştirin. </li></ol> 4. Test Plakalar içine yükleniyor sinek Test plakaları için özellikleri ile şemaları Ek Dosyalar bölümünde bulunabilir. Test plakası berrak akrilik yapılmış ve 6 test alanları oluşur. Basit kaydırıcı de kendi odalarına sinek yükleme, geçici çevreleme ve 6 sinek eşzamanlı salınımına imkan tutarak odalarını içeriyorDeneyin bir başlangıç. Katkılar pipetle gerektiği yerde plaka her arena merkezinde kazınmış çapraz kıllar göstermektedir. <ol><li> Akrilik test plakasına sürgü takın. </li><li> Yavaşça pamuk tıkaç geçmiş şişenin içine trombu kaydırın ve yaklaşık 6 sinekler aspirator.it yürümek izin ellemeden mümkün olduğunca nazik olmak önemlidir. Bir loş bir ışık kaynağına doğru şişe açılış işaret ederek aspiratörün doğru tarama sinekler ikna etmek phototactic sinek davranış yararlanabilir. Gerekirse, bir de yaklaşık 6 erkek sineklerin aspire nazik vakum uygulanabilir. </li><li> Test plakanın birinci deliğe aspiratör ucu yerleştirin. Tek bir sinek tutma hücreye geçmek ve yavaşça bir sonraki deliğe bir sinek yüklemek için ileri sürgüsünü ilerlemek için izin verin. Sinekler plaka 6 tutarak hücreleri işgal kadar devam edin. </li><li> Doğrudan cr merkezinde üzerine% 1 elma sirkesi agaroz çözeltisi Pipet 5 ultest plakasının iç yüzünde OSS kıllar. </li></ol> 5. Test Plakası konumlandırılması <ol><li> Test plakasını ortalamak için, &quot;Konumlandırma Tool.vi.&quot; adlı dosyayı açın Konumlandırma Aracı &quot;LabVIEW VI. vi Ek Dosyalar bölümünde bulunabilir. Ekranın sol üst köşesindeki beyaz oka tıklayarak dosyayı çalıştırın. </li><li> Arena açma elek taban yüzleri ve koku hedef plaka tavanına olduğu şekilde eleğin üzerine test plakası yerleştirin. Monitör ekranında çapraz kıllar ile test plakasının arkasına kazınmış gözlemeye hizalayın. </li><li> Hizalama tamamlandığında, monitörün sol üst köşesine yakın bulunan kırmızı nokta tıklayarak yürütme iptal. </li></ol> 6. Deney sırasında Fly Konumunu kaydedin <ol><li> Her yiyecek arama duruşma sırasında sineğin koordinatlarını izlemek ve kaydetmek için, kazanım yazılım dosyasını açın &quot;Fly Takip -. Altı Zones.vi &quot;LabVIEW VI&#39;ları için&quot; Fly Takip - Altı Zones.vi &quot;Ek Dosyalar bölümünde bulunabilir monitörün sol üst köşesinde beyaz oka tıklayarak dosyayı çalıştırın. . </li><li> Dosyaya bir ad atamak ve üzerine tıklayın &quot;Tamam.&quot; </li><li> Test arenalarda içine sinekleri serbest bırakmak için test odalarına sürgüleri Advance. Bu analiz yazılımı koordinatları ile yanlış uyuma yol açacak gibi test odalarına taşımak için dikkatli olun. </li><li> &quot;Start&quot; (kayıt başlar) tıklayın ve test odasındaki ışığın tek kaynağı 660 nm LED panel olduğundan emin olun. </li><li> Deneme bittiğinde, elek ve davranış odasına çıkarın. Elekten gelen test levhası kaldırın ve buz içinde plaka daldırarak sinekler çıkarın. Yavaşça sıcak su ile plaka temizlemek ve herhangi bir agaroz enkaz kaldırmak. Nemin ayrılması için bir kurutma fırınında test plakaları yerleştirin. </li><li> Bir küçük açarak test alanı havalandırın, yaklaşık 2 dakika boyunca l fan. Fanı kapatın ve bir sonraki test plaka içine sinek sonraki grubu yükleyin. </li></ol> 7. Özel Yazılım kullanma Veri Analizi &quot;Fly İzleme-Altı Bölgeleri için Veri Analizi&quot; Ek Dosyalar bölümünde bulunabilir. Veri toplama sırasında, toplama yazılım kayıtları tek tek sinek pozisyonu bir metin dosyasında her zaman noktası koordinatları. Test plakaları üzerinde konumlandırılmış tek bir dijital fotoğraf makinesi 0.5 Hz&#39;lik bir kare hızında görüntü kazanır. &quot;Fly İzleme-Altı Bölgeleri için Veri Analizi&quot; a bu metin dosyasından bilgileri ayıklar analiz yazılım programı) ortalama hızınızı hesaplamak, b) başarıyla koku kaynağı bulunan ve bir sinek c) grafik pencereleri oluşturmak hangi zaman noktasını belirlemek görünümüne kullanıcıya izin: zamanla zaman ve ortalama bir sinek hızı üzerinde koku kaynağından konumu, sinek mesafe uçmak. Ayrıca Spre içine kolayca ihracat verileri biçimlendiriradsheet programı. Bu makro, yiyecek arama gecikme arena merkezine 5 mm yarıçap içinde en az 5 saniye harcamak uçar hangi zaman noktası olarak tanımlanır. <ol><li> Analiz yazılımı dosya &quot;- Altı Bölgeleri Fly Takip için Veri Analizi&quot; açın. &quot;Windows&quot; sekmesi altında &quot;Yeni Tablo oluşturma.&quot; Üzerine tıklayın Altı tablo oluşturuluncaya kadar bu adımı tekrarlayın. </li><li> &quot;Makro&quot; sekmesi altında &quot;tıklayın Foodfinding.&quot; A Ana Panel aşağıdaki seçeneklerden görünmelidir: Açık Ham Veri Düzeni için Dosya; Açık Ham Veriler Dosya için Dosya, Fly Konumu; Mesafe, Hız, Düzen; FormatDataFile. </li><li> , Bir metin dosyasına değerlerini ekleme olmadan ham verilerini görüntülemek için tıklayın &quot;Düzeni için Açık Ham veri dosyası.&quot; Bulup görünen tarayıcı penceresinde deneysel veri dosyasını seçin. Tıklayın &quot;Aç.&quot; </li><li> Altı arenalarda (her sinek gösteren altı XY araziler &#39;her birinde, her sineğin yerini görmek için &quot;Fly Location&quot; üzerine tıklayınzamanla pozisyonu) ekranda görünmesi gerekir. </li><li> Koku kaynağı (zamanla koku kaynağından sineğin mesafeyi gösteren altı araziler ekranda görünmesi gerekir) her sineğin mesafeyi görebilmek için &quot;Mesafe&quot; tıklayın. Y = 5 mm yatay çizgi sinek gıda kaynağında yer olarak kabul edildiği eşiğini gösterir. </li><li> Deneme (zamanla sineğin hızını gösteren altı araziler ekranda görünmesi gerekir) sırasında her sineğin ortalama hızını görüntülemek için &quot;Speed&quot; e tıklayın. </li><li> Ortalama (ilk 50 sn boyunca) hız ve her sinek için koku kaynağı (Şekil 1) bulma gecikme ek olarak tüm sinek yer, mesafe ve hız grafikleri ile bir düzen görüntülemek için &quot;Düzen&quot; e tıklayın. Düzgün düzenini görüntülemek için, kenar boşluklarını ayarlamak için gerekli olabilir. Bunu yapmak için, önce mizanpaj penceresinde tıklatın. &quot;Dosya&quot; sekmesi altında, tıklayın &quot;Düzeni için Sayfa Yapısı.&quot; Için kenar boşluklarını sıfırlamak0.2 inç ve üzerine tıklayın &quot;Tamam.&quot; Hemen her yeri arsa sol başlıkları &quot;Hız&quot; ve küçük bir tablodur &quot;Gecikme.&quot; Her başlık altında girilen değerler mm / sn ve saniyeler içinde yiyecek arama gecikme ortalama hızı gösterir. Gecikme altında boş girdiler sinek koku kaynağını bulmak için başarısız olduğunu gösteriyor. Gıda ara gecikme sinekler odasının merkezine 5 mm yarıçapında, en az 5 saniye geçirdiği de zaman noktası olarak tanımlanmaktadır. </li><li> Bir düzen yazdırmak için, düzen alanında (Geçerli dosya güncellemeleri düzen) tıklayın. &quot;Dosya&quot; seçeneğine tıklayın ve sonra tıklayın &quot;Yazdırma Düzeni.&quot; </li><li> Sonraki dosyayı görüntülemek için, tıklamanız yeterlidir &quot;Düzeni için Açık Ham veri dosyası.&quot; Eğer görüntülemek ve tıklatın istediğiniz sonraki ham veri dosyası üzerine tıklayın &quot;Tamam.&quot; Yeni bir veri dosyası ile pencereyi güncellemek için Düzen penceresinde tıklayın. </li><li> Ayarları daha sonra kullanmak için bir deney dosyasına kaydedilmiş olabilir. </li></ol> 8. İhracat VerileriElektronik Tablo Programına Veri Analizi Yazılımı <ol><li> Her dosya için hız ve gecikme veri aktarmak için, tıklayın &quot;Açık Ham Veriler Dosya için dosya.&quot; Deneysel bir veri dosyasını seçin ve üzerine tıklayın &quot;Aç.&quot; Yeni bir tarayıcı penceresi açılacaktır. </li><li> Yeni tarayıcı penceresinde, &quot;Yeni&quot; sağ-tıklatın ve sonra tıklayın &quot;Metin Belgesi.&quot; Yeni bir metin belgesi adlandırın. Yeni adlandırılan metin dosyasını seçin ve üzerine tıklayın &quot;Aç.&quot; Bu depolar metin dosyasına ham veri dosyasından veri. </li><li> Başka bir dosyadan veri aktarmak için &quot;Veri Dosyası için Açık Ham veri dosyası.&quot; Üzerine tıklayın Başka bir dosya üzerine tıklayın ve üzerine tıklayın &quot;Aç.&quot; ) Aşama 8.2 metin dosyasını seçin. Vermek istediğiniz kalan veri dosyaları için bu işleme devam edin. </li><li> Istenen tüm veri dosyalarını metin dosyasına eklendikten sonra, üzerine tıklayın &quot;Format Veri Dosyası.&quot; Önceki adımları verileri depolamak ve bir yeni vitrinler (&quot;Aç&quot; üzerine tıklayın kullanılan Metin Belgesi&#39;ni seçinw otomatik) açılacaktır. </li><li> Penceresinde yeni bir Metin Belgesi oluşturun, dosyayı bir isim atamak, ve üzerine tıklayın &quot;Kaydet.&quot; Bu, her sinek ve bir elektronik tablo programı içine alınabilir için dosya adı, ortalama hız ve gecikme içeren bir metin dosyası oluşturur. </li><li> Kümülatif araziler, zamanın bir fonksiyonu (Şekil 3) gibi bir gıda koku hedefe ulaşma sinekler toplam sayısı ile ilgili verileri inşa edilir. </li><li> Deneysel veriler oranlarda bebekler için bir z-testi kullanılarak istatistiksel olarak analiz edilir. </li></ol>

<ol><li>Dethier, V. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDethier%2C+VG+%22The+hungry+fly+%3A+a+physiological+study+of+the+behavior+associated+with+feeding%22">The hungry fly : a physiological study of the behavior associated with feeding</a>. , Harvard University Press. (1976).</li>
<li>Root, C. M., Ko, K. I., Jafari, A., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+facilitation+by+neuropeptide+signaling+mediates+odor-driven+food+search%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Presynaptic facilitation by neuropeptide signaling mediates odor-driven food search.</a> Cell. 145, 133-144 (2011).</li>
<li>Root, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+presynaptic+gain+control+mechanism+fine-tunes+olfactory+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A presynaptic gain control mechanism fine-tunes olfactory behavior.</a> Neuron. 59, 311-321 (2008).</li>
<li>Semmelhack, J. L., Wang, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Select+Drosophila+glomeruli+mediate+innate+olfactory+attraction+and+aversion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Select Drosophila glomeruli mediate innate olfactory attraction and aversion.</a> Nature. 459, 218-223 (2009).</li>
<li>Faucher, C., Forstreuter, M., Hilker, M., de Bruyne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+responses+of+Drosophila+to+biogenic+levels+of+carbon+dioxide+depend+on+life-stage%2C+sex+and+olfactory+context%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral responses of Drosophila to biogenic levels of carbon dioxide depend on life-stage, sex and olfactory context.</a> J. Exp. Biol. 209, 2739-2748 (2006).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophila melanogaster.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 71, 708-712 (1974).</li>
<li>Fishilevich, E., Domingos, A. I., Asahina, K., Naef, F., Vosshall, L. B., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+behavior+mediated+by+single+larval+olfactory+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis behavior mediated by single larval olfactory neurons in Drosophila.</a> Curr. Biol. 15, 2086-2096 (2005).</li>
<li>Venken, K. J., Simpson, J. H., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+manipulation+of+genes+and+cells+in+the+nervous+system+of+the+fruit+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic manipulation of genes and cells in the nervous system of the fruit fly.</a> Neuron. 72, 202-230 (2011).</li>
<li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454, 217-220 (2008).</li>
<li>Kitamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+modification+of+behavior+in+Drosophila+by+targeted+expression+of+a+temperature-sensitive+shibire+allele+in+defined+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Conditional modification of behavior in Drosophila by targeted expression of a temperature-sensitive shibire allele in defined neurons.</a> J. Neurobiol. 47, 81-92 (2001).</li>
<li>Sweeney, S. T., Broadie, K., Keane, J., Niemann, H., O'Kane, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+expression+of+tetanus+toxin+light+chain+in+Drosophila+specifically+eliminates+synaptic+transmission+and+causes+behavioral+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeted expression of tetanus toxin light chain in Drosophila specifically eliminates synaptic transmission and causes behavioral defects.</a> Neuron. 14, 341-351 (1995).</li>
<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkarı beyan.

Bu protokol, biz gıda arama davranışı deneyi için bir adım-adım prosedürü açıklar. Gıda kokuları ile ilgili ek olarak, aynı zamanda, diğer koku nesneleri bulmak için sineğin yeteneğinin incelenmesi için adapte edilebilir. Örneğin, erkek sinekler 3 arkadaşı yerelleştirme davranış çalışmanın doğru uygulanabilir çeşitli ek noktalar biz bu prosedüre ilişkin burada değineceğim bu protokol için vardır.: İlk olarak, yetiştirme sıcaklık deneysel sinekler test önce yaşlı ne kadar olmalıdır...

Yiyecek aramak ve gıda tüketimi 1: açlık Devletleri iştahlı davranışları iki tür teşvik. Bu basit davranışsal deney 2,3 yem ile bağlantılı kemotaktik davranışlarının çalışma için yararlıdır. Özellikle, bir gıda koku hedef bulma sinek pozisyon, yürüme hızı ve gecikme izler. Gıda bulgunun Gecikme iç iştahlı durumundaki değişikliklerin aşağı sineğin koku algılama sistemi duyarlılık değişiklikleri ölçmek için metrik olarak hizmet vermektedir. Bu deneyde, bir el sürümü daha önce GABA-B reseptör sinyal 3 uçan yetişkinde koku lokalizasyon davranışı için çok önemlidir göstermek için kullanılmıştır. Testin geçerli otomatik versiyon nöropeptid-F (SNPF) sinyal Drosophila koku haritayı yeniden şekillendirir ve etkileri davranışlarını 2 iştahlı nasıl kısa çalışmada etkili oldu. Test karanlık, sıcaklık ve nem kontrollü odada yapılır. Dijitalşeffaf akrilik test plakaları yukarıda belirtilen video kameralar 660-nm LED aydınlatma ile aydınlatmalı sinekler izleyebilirsiniz. Kameradan gelen bilgiler bir sonraki test alanına konuşlanmış bir bilgisayar tarafından gerçek zamanlı olarak işlenir. Biz test döneminde sinek pozisyonların koordinatlarını kaydetmek ve kaydetmek için veri toplama yazılımı kullanın. Bu paradigmada, konu merkezinde bir gıda koku içeren bir arenaya salınır, koku nesne sinek yiyecek arama davranışı neden arenada bir gıda koku degrade oluşturur. Benzer bir koku ara protokol tek bir Drosophila larvalarının 7 chemosensation çalışma doğru uygulanmıştır. Böyle dört-alan olfactometer 4,5 &#39;ya da t-labirent 6 gibi diğer davranışsal deneyler koku kaçınma veya cazibe davranışlarını değerlendirmek iken, bu paradigma iyi koku hassasiyeti ve kemotaksis davranışlarını değerlendirmek için uygundur. Birkaç anahtar avantajları bu assa eşliky. Veri toplama ve analiz çoğunlukla otomatik çünkü Birincisi, bu, büyük veri kümelerinin hızlı edinimine izin. İkincisi, bu testte izole ederek onların davranışlarını etkileyebilecek sosyal koku ipuçlarını ortadan kaldırarak, tek bir sinek davranışını ölçer. Üçüncü olarak, protokol ve basit deneysel tasarım basitliği tahlil verimli ve başkalarına öğretmek için kolaylaştırır. Buna ek olarak, bu deney daha Drosophila melanogaster 8&#39;e uygun geniş genetik araç ile birleştirerek gıda arama davranışı altında yatan sinir devreleri araştırmak için kullanılabilir. Sessizlik veya heyecan nöronlar örneğin GAL4-UAS sistemi hem de UAS-shibire TS1 UAS-tetanoz-toksini ve UAS-TRPA1 (B) gibi araçlar ile elde edilebileceğini transgenlerin ifadesi hedeflenmiş 9-12 transgenlerin.

<table><tbody><tr><td>Elma Sirkesi Spektrumu</td><td></td><td></td><td>ticari olarak temin edilebilen</td></tr><tr><td>Agaroz, Tip VII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0701</td><td>düşük jelleşme sıcaklığı agaroz</td></tr><tr><td>Akrilik Test Plakası</td><td></td><td>özel</td><td>Plaka 6 arena içerir. Her arena 60 mm çapında ve 6 mm yüksekliğindedir. Belirli ölçümler için test plakası diyagramlarına bakın.</td></tr><tr><td>LabVIEW V.8.5</td><td>Ulusal Araçlar</td><td>776670-09</td><td>programlar için platform: PositioningTool.vi, FlyTracking - Altı Zones.vi NOT: "geçen time.vi", "file.vi kadar geçen süre" ve "iki nesne detect.vi", ana veri toplama programı "FlyTracking--Six zones.vi"un çalışması için mevcut olması gereken alt programlardır.</td></tr><tr><td>LabVIEW Vizyon 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vizyon Edinme Yazılımı 8.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabVIEW Vision Builder AI 3.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Igor Pro V.6</td><td>Wavemetric, Inc.</td><td></td><td>Makro için Platform: Sinek İzleme için Veri Analizi - Altı Bölge</td></tr><tr><td>Basler scA1390-17fm</td><td>Ulusal Enstrümanlar</td><td>779980-01</td><td>Dijital Fotoğraf Makinesi NOT: kamera sürücüsü Baslerweb.com</td></tr><tr><td>8 mm lenste</td> mevcuttur <td>Ulusal Aletler</td><td>780024-01</td><td>Basler Dijital Fotoğraf Makinesi için</td></tr><tr><td>Lens Buzlu Cam Difüzör Plakası</td><td>Edmund Optics</td><td>özel</td><td>Işığı dağıtır, 25 cm x 30 cm</td></tr><tr><td>US Std. No. 100</td><td>Fischer Scientific</td><td>04-881X</td><td>Elek, nominal açıklığı 150 & mu; m</td></tr><tr><td colspan="4">Aydınlatma Seçeneği 1</strong</td></tr><tr><td>>LED arka ışık 660 nm (20 cm x 20 cm)</td><td>Spectra West</td><td>BL47192</td><td>daha basit ama daha pahalı bir aydınlatma seçeneğidir.</td></tr><tr><td>LED Arka Işık Spektrumları için Güç Kaynağı</td><td>West</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Aydınlatma Seçeneği 2</güçlü></td></tr><tr><td>660 nm LED'ler</td><td>Süper parlak ledler</td><td>RL5R1330</td><td>Dalga Boyu 660 nm (14,7 inç x 9,75 inç panel için yaklaşık 7 x 7 LED dizisi)</td></tr><tr><td>Doğrusal DC Güç Kaynağı</td><td>GW Instek</td><td>GPS-1830D</td> LED Panel Lehimsiz Breadboard Digikey <td>için güç kaynağı</td></tr><tr><td></td><td></td><td>LED'ler için 922354-ND</td><td>Breadboard</td></tr></tbody></table>

toplayıcılık davranış için tek-sinek deneyi drosophila

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

Çok hayvan için, açlık uygun gıda kaynakları için arama kolaylaştıran bir şekilde koku alma sistemindeki değişiklikleri teşvik etmektedir. Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar. Meyve sinekleri üzerinde görünmez kırmızı ışıkla aydınlatılmış bir ışık geçirmez kutu, özel veri toplama yazılımı ile bağlantılı bir kamera aynı anda altı sineklerin konumunu izler. Her sinek merkezinde bir yemek kokusu içeren bireysel arenalarda yürümek sınırlıdır. Test arenalar fonksiyonları koku birikmesini önlemek için bir gözenekli katta dinlenme. Koku kaynağı, farklı fizyolojik durumlarda altında koku hassasiyeti yansıtan bir metrik bulmak için Gecikme, yazılım analizi ile belirlenir. İşte, bu davranış paradigma çalışan kritik mekaniği tartışmak ve sinek loadi ilgili özel konuları kapsamaktadırng, koku kirliliği, tahlil sıcaklık, veri kalitesi ve istatistiksel analizi.

Veri analiz yazılımı ve düzeni, Şekil 1 'de görülebilir bir örneği, analiz, bir dizi kritere uygun olarak 10 dakika boyunca her bir deneme sineğin performansını değerlendirmek için kullanılır. Aşağıdaki kriterler her anında veri veri analizi için kullanılacak ve sakatlığı nedeniyle, hastalık, stres, ya da motivasyon eksikliği yiyecek arama görevi gerçekleştirmek için mümkün olan bu sinekler ortadan kaldırmak için tasarlanmış olup olmadığını belirlemek için kullanılır. 300'de...

Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Bu prosedürün genel amacı, yetişkin sinek Salala Melanogaster'de gıda yoksunluğunun tetiklediği davranış değişikliklerini ölçmektir. Bu, 18 ila 24 saat boyunca açlıktan ölen ilk sinekler tarafından gerçekleştirilir. İkinci adım, her biri merkezinde çekici bir koku kaynağı içeren davranış odalarına tek tek sinekleri yüklemektir.Daha sonra, dijital kameralı bir bilgisayar sistemi, her bir sineğin zaman içindeki konumunu izler ve kaydeder. Daha sonra veri analizi için koordinatları. Son adım, özel yazılım kullanarak koku kaynağına ulaşmak için her sineğin gecikme süresini belirlemektir.Sonuç olarak, bu yüksek verimli gıda arama davranışı testi, nöral devre işlevi ve davranışsal tepkiler arasındaki ilişkiyi incelemek için kullanılabilir. Bu testin takım arkadaşları gibi mevcut yönteme göre en büyük avantajı, tek sineklerde kemotaktik davranışı ölçmesidir. Bu yöntem, nörobiyolojide hangi nöro devrelerin kemotaktik davranış için önemli olduğu ve bu nöro devrelerin hayvanın iç fizyolojik durumu tarafından nasıl yönetildiği gibi soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir.Bu yöntemin amacı, kısa sürede büyük davranış veri setleri elde etmektir. Bu yöntem bize yiyecek arama davranışı hakkında fikir vermiş olsa da, lokalizasyon yapmak gibi diğer davranışları incelemek için de kullanılabilir. Bu yöntemin görsel gösterimi çok önemlidir.Sineklerin uygun şekilde ele alınması ve bilgisayar yazılımının yürütülmesi, bu deneyin başarısı için çok önemlidir. Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan bir kişi, başlangıçta biraz mücadele edebilir, çünkü sineklerin nazikçe nasıl ele alınacağını öğrenmek biraz zaman ve sabır gerektirir, bu da prosedürün iğne olacağını gösterir. Laboratuvarım için bir teknisyene ulaşın Uçmadan önce toplama.Deney sineklerini 12 saatlik aydınlık karanlık döngüde kontrollü sıcaklık ve nem koşulları altında geri çekin. EEC patlamasının olduğu gün, sinekleri mikroskop altında cinsiyetlendirmeden önce karbondioksit altında uyuşturun. Erkekler ve kadınlar arasında ayrım yapmak için birkaç temel kriter kullanılabilir.Erkeklerin dört bacağında, dişilerin sahip olmadığı seks tarağı adı verilen bir siyah kıl yaması vardır. Ayrıca, erkek karnının ucu koyu bir kütikül ile kaplıdır ve dişilerde görülmeyen genital organlar görüntülenir, dişi sinekleri toplayın ve onları dört ila beş beyaz gözlü erkekle birlikte flakon yaşı başına en fazla 30 sinek olacak şekilde yeni yiyecek dosyalarına yerleştirin. İki ila beş gün boyunca sinekler, önce tek bir dokuyu boş bir plastik şişenin dibine iterek odaları sinek açlığına hazırlar, dokuyu tamamen damıtılmış suyla ıslatılır.Ardından dokuyu aşağı doğru itmek için bir nesne kullanın ve fazla suyu nazikçe sıkın. Fazla suyu atmak için şişeyi ters çevirin. Sinekleri nemli tutmak için yeterli su olmalı ve açlık odasını nemli tutmalı, ancak sinekleri boğmak için yeterli olmamalıdır.Deney başlamadan yaklaşık 18 ila 24 saat önce, sinekleri gıda şişesinden bir açlık odasına aktarın ve şişeyi tıkayın. Şişeleri deney başlayana kadar gece boyunca kontrollü sıcaklık ve nem koşullarında saklayın. 10 mililitre damıtılmış suya 100 miligram düşük erime sıcaklığı aros ekleyerek% 1'lik bir tarımsal çözelti hazırlayın.Bir cam şişede. Agro çözeltiyi kaynamaya başlayana kadar bir mikrodalgada ısıtın, ancak kaynamadan önce mikrodalgayı durdurun ve şişeyi bir kez döndürün. Aros tamamen eriyene kadar bu adımı iki kez daha tekrarlayın.Şişeyi sıcak bir plaka üzerinde sıcak tutarak Aros çözeltisini sıvı halde tutun. 50 santigrat dereceye ayarlayın, 1,5 mililitrelik bir DF tüpüne 990 mikrolitre% 1 aro çözeltisi ve 10 mikrolitre elma sirkesi ekleyin. % 1'lik bir elma sirkesi çözeltisi yapmak için, 50 santigrat dereceye ayarlanmış kuru bir banyo inkübatörüne yerleştirmeden önce çözeltiyi karışana kadar girdaplayın, test odasını sıcaklık ve nem gibi istenen koşullara ayarlayın.660 nanometre LED panelini açın. Elekleri ve test plakalarını sıcak suyla durulayın ve tüm nem buharlaşana kadar bir kurutma fırınında ısıtın. Serin. Elekler ve plakalar test odası sıcaklığına kadar iner.Deneylere başlamadan önce, difüzör plakasının üzerine sığ bir tabak yerleştirin ve yerel nemi artırmak ve aros damlacıkındaki suyu maskelemek için suyla doldurun. Son olarak, elekleri su kabının üzerine yerleştirin. Test plakası şeffaf akrilikten yapılmıştır ve altı test alanından oluşur.Bir kaydırıcı, sinek yüklemesine, geçici olarak muhafaza edilmesine ve altı sineğin aynı anda kendi odalarına bırakılmasına izin veren tutma odaları içerir. Deneyin başlangıcında, plakadaki her arenanın ortasına kazınmış artı işaretleri, koku maddelerinin pipetlenmesi gerektiğini gösterir. Kaydırıcıları akrilik test plakasına yerleştirin.Aspiratörü yavaşça flakonun içine kaydırın, pamuk tapasını geçin ve yaklaşık altı sineğin aspiratöre girmesine izin verin. Onları kullanırken mümkün olduğunca nazik olmak çok önemlidir. Fotoğraf taktiğinden, sinekleri teşvik etmek için sinek davranışından, flakon açıklığını loş bir ışık kaynağına doğru işaret ederek aspiratöre doğru yürümekten yararlanılabilir.Gerekirse, yaklaşık altı dişi sineği aspire etmek için hafif emme uygulanabilir. Beyaz gözlü erkek sinekleri seçmekten kaçının. Aspiratörün ucunu test plakasının ilk deliğine yerleştirin.Tek bir sineğin tutma hücresine geçmesine izin verin ve bir sonraki deliğe başka bir sinek yüklemek için kaydırıcıyı yavaşça ileri doğru ilerletin. Sinekler kadar devam edin. Plakanın altı tutma hücresini de işgal edin.Ardından% 1'lik bir elma sirkesi agarro çözeltisinden beş mikrolitreyi doğrudan test plakasının iç yüzündeki artı işaretlerinin ortasına pipetleyin. Test plakasını ortalamak için Konumlandırma aracı vi adlı dosyayı açın. Ekranın sol üst köşesindeki beyaz oka tıklayarak dosyayı çalıştırın.Test plakasını, arena açıklığı SIV zemine bakacak ve koku hedefi plakanın tavanında olacak şekilde sibin üzerine yerleştirin. Hizalama tamamlandığında, test plakasının artı işaretlerini monitör ekranındaki çapraz hava koşullarıyla hizalayın. Sineğin koordinatlarını izlemek ve kaydetmek için monitörün sol üst köşesine yakın bir yerde bulunan kırmızı noktaya tıklayarak yürütmeyi durdurun.Her yiyecek arama denemesi sırasında, edinme yazılım dosyasını açın. Fly izleme altı vi. Monitörün sol üst köşesindeki beyaz oka tıklayarak dosyayı çalıştırın.Dosyaya bir ad atayın ve Tamam'ı tıklatın. Sinekleri test alanlarına salmak için test odalarındaki kaydırıcıları ilerletin. Koordinatların yanlış kaydedilmesine yol açacağından test odalarını hareket ettirmemeye dikkat edin.Başlat'a tıklayın ve test odasındaki tek ışık kaynağının LED panel olduğundan emin olun. Deneme bittiğinde süzgeci ve davranış haznesini çıkarın. Test plakasını elekten kaldırın ve plakayı buza batırarak sinekleri çıkarın.Plakayı sıcak suyla nazikçe temizleyin ve tarım kalıntılarını temizleyin. Nemi gidermek için test plakalarını bir kurutma fırınına yerleştirin. Küçük bir fanı yaklaşık iki dakika boyunca açarak test alanını havalandırın.Fanı kapatın ve bir sonraki sinek grubunu bir sonraki test plakasına yükleyin. Metin protokolünde açıklandığı gibi özel yazılım kullanarak veri analizi yapmaya devam edin. Veri analiz yazılımı ve düzeni, her bir sineğin 10 dakikalık deneme süresi boyunca performansını bir dizi analiz kriterine göre değerlendirmek için kullanılır.Bu kriterler, her bir sinekten elde edilen verilerin veri analizi için kullanılıp kullanılmayacağını belirlemek için kullanılır ve yaralanma, hastalık, stres veya motivasyon eksikliği nedeniyle yiyecek arama görevini yerine getiremeyen sinekleri ortadan kaldırmak için tasarlanmıştır, 300 saniyeden fazla hareketsiz kalan sinekler inaktif olarak kabul edilir ve gıda kaynağını veya sergisini bulmayı başaramadıkları sürece veri setinden reddedilir. Yalnızca aktif kokunun erken aşamalarında sağlıklı hızlar sergileyen sinekleri seçmek için aktif olmayan dönemi takip eden en az 100 saniye boyunca saniyede 10 milimetreden daha yüksek bir ortalama hız. Arama Yalnızca denemenin ilk 50 saniyesi boyunca belirli bir hız aralığında hareket eden sinekler, arenadaki dört kadranın tamamından geçmeyen ve deneme başladıktan sonra doğrudan besin kaynağına yönelen sinekler veri analizi için kabul edilir.En az 50 saniye boyunca 10 milimetrelik bir yarıçap içinde besin kaynağına doğru ve ondan uzaklaşan sineklerin besin kaynağını başarıyla bulduğu kabul edilir. Sineğin zaman içinde koku kaynağından uzaklığını gösteren çizim, bu nadir vakayı, sinek pozisyonunda görünür eserlerle değerlendirmek için kullanılabilir. İzleme de reddedilir.Eserler, veri toplama yazılımının sinek dışında bir nesne algıladığı herhangi bir olay tarafından oluşturulabilir. Genellikle arena boyunca uzanan veya merkezinden yayılan uzun düz çizgiler olarak görünürler. 18 ila 24 saat aç kalan yetişkin sinekler, gıda ile ilgili kokulara karşı beslenen muadillerine göre daha yüksek koku alma hassasiyeti sergiler.Bir yiyecek kokusu kaynağını başarılı bir şekilde bulan sineklerin kümülatif yüzdesinin grafiksel bir grafiği, aç bırakılan tüm sineklerin %30'unun 10 dakikalık bir süre içinde başarılı olduğunu göstermektedir. Buna karşılık, beslenen tüm sineklerin sadece% 7'si bunu yapar. Aç sinekler, sirkeye tek başına bir agros aracından çok daha fazla ilgi göstermelidir ve bu gözlem, test koşullarını gidermek için kullanılabilir.Örneğin, 32 santigrat derecede% 35'lik bir çevresel nem ile yabani tip sinekler kullanılarak gerçekleştirilen bu gıda arama deneyi, sirkeye sinek çekimi ile aros kontrolü arasında önemli bir fark tespit edilmedi, bu muhtemelen daha sıcak test sıcaklıkları altında agros damlacıkında bulunan suya artan bir çekimden kaynaklanmaktadır. Test nemini %50 ila %60 arasına çıkararak bu davranış değişikliği düzeltildi ve sirke ile agros aracına olan ilgi arasındaki önemli fark eski haline getirildi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, uygun şekilde gerçekleştirilirse 10 dakikalık deneysel deneme de dahil olmak üzere 12'de gerçekleştirilebilir.Bu prosedürü denerken, onları yaralamaktan veya rahatsız etmekten kaçınmak için sinekleri çok nazikçe tutmayı unutmamak önemlidir. Lütfen test plakalarının ve eleklerin kurutma fırınındayken aşırı sıcak olabileceğini ve bu nedenle geliştirildikten sonra fırın eldiveni giyilirken çıkarılmaları gerektiğini unutmayın. Bu teknik, nörobiyoloji alanındaki araştırmacıların kemotaktik davranışları keşfetmelerinin yolunu açtı.Bu teknik, sineğin diğer koku nesnelerini bulma yeteneğini incelemek için de uyarlanabilir. Örneğin, erkek sineklerde eş lokalizasyon davranışının incelenmesine uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, deneye nasıl hazırlanacağınız, deney koşullarını nasıl ayarlayacağınız, deneyi nasıl çalıştıracağınız ve her bir sineğin performansını nasıl analiz edeceğinizi iyi anlamış olmalısınız, bu da sonuçta size koku kaynağını başarıyla bulan sineklerin yüzdesini gösteren kümülatif bir çizim sağlayacaktır.

a-single-fly-assay-for-foraging-behavior-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Davranış testleri, lokomotor fonksiyonları ölçme öğrenme ve hafıza...

Assaying Lokomotor, Öğrenme ve Hafıza Açıkları. Drosophila Nörodejenerasyon, modeller

Drosophila melanogaster bir yüzyıl 1 aşkın süredir birçok önemli biyolojik işlemlerin moleküler ve hücresel temelini anlamak için kullanılan bir genetik ve davranışsal uysal modeli sistemidir. Drosophila iyi sinek davranışının genetik temeli içgörü kazanmak için istismar edilmiştir.

Test için Yöntemler Drosophila Davranış

Drosophila dişileri, alt tabakalar arasında seçim yapar ve yumurtlama için çekici olan bölgeleri seçer. Bu video, yumurtlama tercihi testi olarak adlandırılan, karar verme süreçlerini test eden davranışsal bir testi açıklamaktadır. Öne çıkan klip, araştırmacıların yalnızca aynı anda birçok dişinin davranışını test etmelerini sağlamakla kalmayıp aynı zamanda video kaydı ve optogenetik kurulumlarla da uyumlu olan özel olarak oluşturulmuş bir kurulumla prosedürü göstermektedir.

Drosophila Yumurtlama Tercihi Testi: Sineklerde Karar Vermeyi Test Etmek İçin Bir Yöntem

Burada, stresli bireylerin kaçınma durumunu ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Bu paradigma güçlü ancak kullanıcı dostudur ve Drosophila melanogaster'de genlerin ve çevrenin bir tür sosyal etkileşim üzerindeki etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.

Sosyal Kaçınma Niceleme için Basit Testi Drosophila melanogaster

Otomatik izleme sistemi Flywalk Drosophila melanogaster koku güdümlü davranış yüksek çözünürlüklü ölçümü için kullanılır.

Koku kılavuzluğunda Davranış Yüksek çözünürlüklü Niceleme<em&gt; Drosophila melanogaster</emKullanma&gt;<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigma

Drosophila melanogaster yiyecek arama yolu uzunluğu testi için ayrıntılı bir protokol sağlıyoruz. Test hayvanlarının hazırlanmasını ve işlenmesini, testin nasıl gerçekleştirileceğini ve verilerin nasıl analiz edileceğini tartışıyoruz.

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

Burada, 100'e kadar sirke sineğinin (Drosophila melanogaster) koku alma tepkilerini test etmek için bir davranış kurulumu ve veri analizi yöntemini açıklıyoruz. Bu sistem, tek veya çoklu koku uyaranlarıyla kullanılabilir ve nöronal alt kümelerin optogenetik aktivasyonu veya susturulması için uyarlanabilir.

Of Bilgisayar İzleme tarafından Analiz Edilmiş Olfaktor Davranışlar<em&gt; Drosophila</em&gt; Dört kadranda olfactometer içinde

Sinekler için iki seçenekli bir besleme tahlilleri için bir protokol sunuyoruz. Bu besleme testini çalıştırmak hızlı ve kolaydır ve sadece küçük ölçekli laboratuvar araştırmaları için değil, aynı zamanda sineklerdeki yüksek verimli davranışsal ekranlar için de uygundur.

Drosophila&apos;da Hızlı Bir Yemek Tercihi Tahlil

Mevcut protokol, Drosophila'nın lokomotor aktivitesini, hız, mesafe vb. parametreleri hesaplamak için yüksek tanımlı video kaydına dayalı olarak her karenin piksellerini segmentlere ayırmak için eklentilerle uyumlu açık kaynaklı yazılım Fiji'yi kullanarak el yapımı bir arenada sineklerin hareketini izleyerek ve analiz ederek değerlendirir.

Drosophila'da Lokomotor Aktiviteyi Test Etmek İçin Basit Bir Teknik

Bu protokol, Drosophila melanogaster kullanılarak şeker açığa çıkarılan arama davranışını kaydetmek için davranışsal bir testi açıklar. Test, beslenme ve yiyecek arama ile ilgili davranışların yanı sıra altta yatan nöronal mekanizmaları incelemek için kullanılabilir.

Drosophila'da Şeker Kaynaklı Yerel Arama Davranışının İzlenmesi

Otizm Spektrum Bozukluğu (OSB), bozulmuş sosyal ve iletişimsel davranış ve tekrarlayan davranışların ortaya çıkması ile ilişkilidir. Drosophila modelinde ASD genleri ve davranışsal eksiklikler arasındaki ilişkiyi incelemek için, bu yazıda sosyal boşluk, saldırganlık, kur yapma, tımar etme ve alışkanlık davranışını test etmek için beş davranışsal paradigma açıklanmaktadır.

Otizm Spektrum Bozukluğunun Drosophila Modelinde Davranışsal Değerlendirme Paradigmaları

Öğrenin, Drosophila melanogaster yetişkin sineklerde açlığın koku arama davranışlarına etkisini otomatik izleme sistemiyle nasıl ölçülür. Bu yöntem davranışsal nörobilim araştırmaları için güvenilir bir çerçeve sunar.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi Drosophila

Daha fazla video keşfet