Name: Eksplantasyon Kültüründe Diş mikropların Geliştirme takiben için Dilim Kültür Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-13T20:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 47 s
Description: Öğrenin, fetal fare mandibulasını canlı dilimlere ayırarak diş mikroplarının gelişimini izleme yöntemini. Bu teknik, hücre hareketlerini takip ederek diş dokularının dinamik yapısını anlamanıza yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Sarah A. Alfaqeeh Diş Hekimliği, Yüksek Eğitim Bakanlığı, Suudi Arabistan Krallığı Kind of Saud University College tarafından finanse edilmektedir.

1.. Kurma <ol><li> (Mineral yağ ile yağlanmış bir bileme taşı kullanarak) diseksiyon aletleri keskinleştirmek ve% 70 etanol sprey ve kuru ısı sterilizasyonu organ kültürü kullanmadan önce sterilize edin. 12 V kaynağı kullanarak 2 M sodyum hidroksit elektroliz kullanarak diseksiyon iğneler keskinleştirmek. </li><li> Glutamax,% 1 ve% 1 penisilin-streptomisin ile takviye edilmiş Dulbecco Advanced Modified Eagle Medium F12 (F12 DMEM) &#39;den oluşan, embriyonik organların diseksiyon ve kültür için kullanılan kültür ortamı hazırlayın. </li></ol> 2. Embriyo Diseksiyon <ol><li> Home Office ya da diğer yönetim kurulu tarafından onaylanan bir program bir yöntem kullanarak bir zamanlanmış evlendirdi hamile kadın itlaf. Alt karın çevresinde cilt uzak teşrih ve makas kullanılarak karın açmak kesti. Alt orta hatta birbirine bağlamak, iki rahim boynuzları, bulun. </li><li> Buz üzerinde orta ile dolu bir tüp içinde rahim ve yerde parçalara ayır. When, buz üzerinde, doku birkaç saat bırakılabilir. </li><li> Mikroskop altında ortam içinde bir Petri tabağına rahim ve yer çıkarın. Mümkün embriyo kontaminasyonu en aza indirmek için diseksiyon bir laminar akış başlığı içinde yapılmalıdır yerde. </li><li> Rahim embriyolar inceleyin ve onların Extraembryonic dokulardan onları serbest. </li><li> Bir tungsten iğne kullanılarak embriyolar başını kesmek ve ortam taze bir çanak içine kafaları aktarın. </li><li> Ağız boşluğu içine bir iğne koyarak kafaları çenenin izole ve başın arkasında (Şekil 1A ve 1B) doğru kesilmiştir. Doğrama için beklerken İzole çeneler geçici olarak buz üzerinde ortamda saklanabilir. </li><li> Bütün mandibula dilimleri için E11.5-E15.5 diş mikrop kültürü için idealdir aşamaları. E15.5 sonra mandibulada gelişen kemik doğrama için çok zor. Diş dilimleri hala yapılabilir, ancak kemik (dentary ve şekillendirme alveol kemiği) ilk olarak çıkarılması gerekir9 doğrama önce diseksiyonu. Tungsten iğneler ve forseps kullanılarak dikkatlice kemiği kaldırmak. </li></ol> 3. Embriyo Dilimleme <ol><li> Standart bir tablo doku kıyıcı (Şekil 1C) kullanarak mandibul doku dilimleri hazırlayın. Yaklaşık 200 mandibulalarındaki sonra taze bir bıçak kullanın ve düştüğünde o montaj diski ile aynı hizada emin olun. </li><li> Montaj Diski temizleyin ve kullanımdan önce% 70 etanol ile bıçak. Makineyi kullanırken bıçak çok keskin olduğu gibi bakım, alınmalıdır. </li><li> Numunenin yaşına göre um 200-400 arasında bir kesme mesafede helikopteri ayarlayın ve bütün diş mikrop gerekli olup olmadığına bağlı. Maksimumda bıçak kuvvet ayarlayın. </li><li> Bir pipet veya forseps kullanarak plastik montaj diske bir çene aktarın. Yönelim hala net olduğundan emin diskin yapımı üzerine mandibulayı düzenleyin. Gelişmekte olan dil yönünü belirlemek için yararlı bir dönüm noktası olarak kullanılabilir. Molarlar kullanım af içinkesici dişler için bunlar (Şekil 2A&#39;da doğrama uçak bakınız) büyüdükçe, bu dişlerin farklı yönüne göre çenenin üzerinden bir sajital dilim kullanırken Rontal / enine yönlendirme, (Şekil 1B doğrama uçak bakınız). </li><li> Biraz montaj diskte mandibulayı kurutmak için filtre kağıdı kullanılarak doku etrafında aşırı ortamı çıkarın. </li><li> Hemen kurutulduktan sonra, helikoptere dairesel paslanmaz çelik bir levha üzerine disk yerleştirin. Makineyi açın ve basın başlangıç. Bu tablo, aynı zamanda bıçak taşıyan kol doğrama yükseltilir ve / dk kadar 200 vuruş da düşmüştür soldan sağa doğru otomatik olarak geçmektedir. </li><li> Doku tamamen dilimlenmiş edildikten sonra makineyi kapatın. Bıçak kolu yükseltilmiş konumda olduğundan emin olun ve diski çıkarın. Bıçak kolunun altında parmaklarınızı yerleştirin veya doğrama zaman gözetimsiz makineyi bırakmayın. </li><li> Montaj diskini alın ve hemen orta t eklemeko sırayla disk üzerinde dilimler aşırı kurumasını önlemek için. Dikkatlice orta küçük bir Petri kabı (Şekil 2A) bir tungsten iğne ve daha sonra bir pipet kullanarak diskin altındaki doku dilimlenmiş çıkarmak. </li><li> Bir iğne kullanılarak dilim ayrı ve daha sonra bir stereo (Şekil 1D, 1E ve 2B) altında, ilgi konusu doku içeren doku dilimleri seçin. Ortam ile taze kültür tabaklarında seçilen dilimleri yerleştirin. </li></ol> 4. Dilim Kültür <ol><li> , Su kaybını önlemek için, dış oyuğuna otoklavlanmış suyun yaklaşık 2 ml ilave etmek suretiyle ve çanak merkezinin bir metal ızgara konumlandırılmasıyla kültürü için hazır orta-gözenekli organ kültür kapları hazırlayın (Şekil 3A ve 3B). </li><li> Yaklaşık 4 cm paslanmaz çelik hasır levhalar 1,5 cm x şeritler keserek metal ızgaralar hazırlayın. Merkezinde bir delik yapmak ve bükmek için bir delik yumruk kullanınzikzaklı uç oluşturmak için taraf. Izgara çanak (Şekil 3A ve 3B) dibine paralel olarak uzanan merkezi oyuk boyunca düz oturmalıdır. Kullanmadan önce sterilize etmek ızgaraları otoklavlayın. </li><li> Saydam polietilen tereftalat bir parça ızgara deliği kaplayacak kadar geniş (PET) zan (gözenek boyutu 0.4 um) kesin. Seçilen dilim ile çanak içine kesilmiş membran yerleştirin. </li><li> Zarın üzerine dilim yerleştirin ve daha sonra dikkatli bir şekilde merkezinde yassı dilim ile ortam dışında membran kaldırın. </li><li> Merkezindeki dairesel delik boyunca ızgara üzerinde filtre yerleştirin ve zarın seviyesine kadar, iyi kültür ortamı, yaklaşık 1 ml. </li><li> Manipülasyonlar (örneğin, 8) orta proteinler ya da küçük molekül inhibitörleri eklemek için. </li><li> Kültür 0. günde morfolojisinin bir rekor için dilim fotoğrafını. </li><li> % 5 CO nemli bir atmosferde bulaşıkları yerleştirin <sBir inkübatör içerisinde 37 ° C &#39;de&gt; 2 ub. </li><li> Ortalama 7 gün boyunca düzenli aralıklarla kültürleri Fotoğraf. Kültür ortamı, her 48-72 saat değiştirin. Fotoğrafçılık için altında (Şekil 2C-E) bir ışık kaynağı ile dilimleri görmek. </li></ol> 5. Lineage İzleme Soy izleme gerekli ise, bu tür DII veya dio gibi lipofilik boyalar aşama 4, dilim kültür önce diş mikrop içine enjekte edilebilir. <ol><li> Bir iğne çektirmenin kullanarak cam kılcal iğneler çekin. </li><li> Forseps kullanılarak iğne ucu kırmak ve aşağı boya çözeltisi içine ucu ile. Boya kılcal hareket ile ucuna doldurur süre birkaç dakika bekletin. </li><li> Bir tutucu içine doldurulur iğne yerleştirin ve bir enjektör ya da ağız aspiratörüne boru yoluyla eklemek. </li><li> Etiketlenecek nedeniyle dilimin dokunmaktan kültür ortamı içinde iğne ucu yerleştirin. Iğne, bir dışarı boya küçük bir miktar yerinden hava basıncı uygulayındoku üzerine d. </li><li> İğneyi çıkarın ve floresan altında etiketleme için kontrol edin. </li><li> Başarıyla etiketli dilimleri filtrelerine aktarılmış ve aşama 4&#39;te tarif edildiği gibi kültüre edilebilir. </li></ol>

<ol><li>Rothova, M., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+map+of+the+dental+mesenchyme%3A+dynamic+development+of+the+dental+papilla+and+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Fate map of the dental mesenchyme: dynamic development of the dental papilla and follicle.</a> Developmental biology. 366, 244-254 (2012).</li>
<li>Ferguson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activin+is+an+essential+early+mesenchymal+signal+in+tooth+development+that+is+required+for+patterning+of+the+murine+dentition%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+development%22%5BJournal%5D)">Activin is an essential early mesenchymal signal in tooth development that is required for patterning of the murine dentition.</a> Genes & development. 12, 2636-2649 (1998).</li>
<li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+culture+of+mature+organs+in+a+synthetic+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">The culture of mature organs in a synthetic medium.</a> Experimental cell research. 16, 118-147 (1959).</li>
<li>Matalova, E., Antonarakis, G. S., Sharpe, P. T., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+of+primary+and+secondary+enamel+knots%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+%3A+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Cell lineage of primary and secondary enamel knots.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 233, 754-759 (2005).</li>
<li>Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S., De Bari, C., Cobourne, M. T., Rice, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+regulatory+relationship+between+Tbx1+and+FGF+signaling+during+tooth+morphogenesis+and+ameloblast+lineage+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">A regulatory relationship between Tbx1 and FGF signaling during tooth morphogenesis and ameloblast lineage determination.</a> Developmental biology. 320, 39-48 (2008).</li>
<li>Diep, L., Matalova, E., Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+the+tooth+bud+mesenchyme+to+alveolar+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+experimental+zoology.+Part+B%2C+Molecular%22%5BJournal%5D)">Contribution of the tooth bud mesenchyme to alveolar bone.</a> Journal of experimental zoology. Part B, Molecular. 312B, 510-517 (2009).</li>
<li>Rothova, M., Feng, J., Sharpe, P. T., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+mesoderm+to+the+developing+dental+papilla%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Contribution of mesoderm to the developing dental papilla.</a> The International journal of developmental biology. 55, 59-64 (2011).</li>
<li>Buchtova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+and+patterning+of+the+snake+dentition+are+dependent+on+Sonic+hedgehog+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Initiation and patterning of the snake dentition are dependent on Sonic hedgehog signaling.</a> Developmental biology. 319, 132-145 (2008).</li>
<li>Buchtova, M., Stembirek, J., Glocova, K., Matalova, E., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+regression+of+the+dental+lamina+underlies+the+development+of+diphyodont+dentitions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dental+research%22%5BJournal%5D)">Early regression of the dental lamina underlies the development of diphyodont dentitions.</a> Journal of dental research. 91, 491-498 (2012).</li>
<li>Cho, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+primary+enamel+knot+determines+the+position+of+the+first+buccal+cusp+in+developing+mice+molars%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%3B+research+in+biological+diversity%22%5BJournal%5D)">The primary enamel knot determines the position of the first buccal cusp in developing mice molars.</a> Differentiation; research in biological diversity. 75, 441-451 (2007).</li>
<li>Sakano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+dynamics+in+cervical+loop+epithelium+during+transition+from+crown+to+root%3A+implications+for+Hertwig%27s+epithelial+root+sheath+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+periodontal+research%22%5BJournal%5D)">Cell dynamics in cervical loop epithelium during transition from crown to root: implications for Hertwig's epithelial root sheath formation.</a> Journal of periodontal research. , (2012).</li>
<li>Fisher, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+development+in+vitro+of+the+whole+and+halved+lower+molar+tooth+germ+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+oral+biology%22%5BJournal%5D)">Morphological development in vitro of the whole and halved lower molar tooth germ of the mouse.</a> Archives of oral biology. 16, 1481-1496 (1971).</li>
<li>Coin, R., Schmitt, R., Lesot, H., Vonesch, J. L., Ruch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+halved+embryonic+lower+first+mouse+molars%3A+correlation+with+the+distribution+pattern+of+non+dividing+IDE+cells%2C+the+putative+organizers+of+morphogenetic+units%2C+the+cusps%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Regeneration of halved embryonic lower first mouse molars: correlation with the distribution pattern of non dividing IDE cells, the putative organizers of morphogenetic units, the cusps.</a> The International journal of developmental biology. 44, 289-295 (2000).</li>
<li>Kavanagh, K. D., Evans, A. R., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicting+evolutionary+patterns+of+mammalian+teeth+from+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Predicting evolutionary patterns of mammalian teeth from development.</a> Nature. 449, 427-432 (2007).</li>
<li>Munne, P. M., Tummers, M., Jarvinen, E., Thesleff, I., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tinkering+with+the+inductive+mesenchyme%3A+Sostdc1+uncovers+the+role+of+dental+mesenchyme+in+limiting+tooth+induction%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Tinkering with the inductive mesenchyme: Sostdc1 uncovers the role of dental mesenchyme in limiting tooth induction.</a> Development. 136, 393-402 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Diş kültürün Bu yöntem diş mikrop erişim avantajı doğru soy epiteli veya mezenşimin içinde izleme ve boncuk yerleştirme sağlayan, mükemmel vardır. Gelişmekte diş mikrop Tanımlı bölgeler dolayısıyla özellikle hedef alınabilir. Kültür sırasında diş mikrop değişen morfoloji takip edilebilir, ve manipülasyonlar etkisi hızlı bir şekilde değerlendirilmiştir. Bu doğru kıyılmış olamaz gibi bir yöntem olup, bununla birlikte, bu tür dentin ve emaye gibi sert dokular, oluşmadan önce genç dişi mikroplar...

Deneyler bir dizi için bu kültür dokusu ex vivo gelişimini takip edebilmek için önemlidir. Doku geliştirme Kültür gelişiminin tanımlanmış dönemlerinde erişim sağlayan ve kültür ortamına faktörlerin eklenmesiyle genlerin manipülasyon ya da yüklü boncuklar üzerine ve transfeksiyon ve elektroporasyon 1 kullanılmasıyla sağlar. Birçok deneyleri için o büyüdükçe doku morfolojilerinden maruz soy olarak etiketlenmiş hücrelerin kaderini takip etmek, örneğin, doku görselleştirmek edebilmek için önemlidir. Bu embriyo bir doku bloğu kültürlenir zaman açık değildir derin embriyo içinde geliştirmek dokular, özellikle sorunlu olabilir. Onlar mandibula, maksilla ve frontal burun süreç içinde geliştirmek gibi Dişler, bu iyi örneklerdir. Bütün çene kültive edildiğinde sabit doku kesit sonra dişin yüzeysel yapıları izlenebilir ancak morfolojisindeki değişiklikler sadece analiz edilebilir <skadar&gt; 2. Biz, bize diş mikrop gelişimini takip etmesine ve geliştirme sırasında dişin farklı bölgelerine erişim sağlayan canlı bir dilim kültür tekniği adapte var. Değiştirilmiş Trowell Yöntem 3 kullanılarak, gaz-sıvı arayüzünde teknik kültürler diş mikrop dilimleri,. Bu dilim kültürler doğrudan dişin morfolojilerinden ardından ve bu emaye düğüm ve diş papilla ve folikül 1,4-7 gibi farklı bileşenleri, soy izleme sağlayan çok yararlı olmuştur. Bu teknik, fare embriyoları ile sınırlı değildir ve başarılı bir domuz kültür canlı dilimleri ve yılan dental doku 8,9 etmek için kullanılmıştır. Diş gelişimi görselleştirmek olmanın yararına ilave olarak, dilim yöntemi de doku ince dilim inkübatörden orta ve havadan besin erişim artmıştır avantajına sahiptir. Bu in vivo gelişme neticesinde diş mikrop, ve gösteri invas geliştirilmiş büyümesiyle sonuçlanırpapilla 7 içine endotel hücre iyon. Buna karşılık, bütün alt çene kültürlerde diş mikrop vivo olarak daha yavaş geliştirmek ve kültürün orta uzun süreli kültürlerde nekrotik genellikle. Dilim kültüründe, diş çene bir dilim içinde gelişir ve çevresindeki gelişen kemik ve diğer dokuları ile etkileşimi izlenebilir. Bizim yöntemde doku düz bir destek ortamında 10,11 gömmek için gerek ve kesme blok için doku eklemek için herhangi bir sistem için gerek diseksiyon sonra doğranır. Yöntem birçok altçeneler tek oturumda kesitli izin veren, bu nedenle noninvaziv ve hızlıdır.

<table><tbody><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>101077Y</td><td>%100 etanol, damıtılmış H2O içinde %70'e seyreltildi.</td></tr><tr><td>DMEM F12</td><td>Gibco</td><td>12634-010</td><td>Gelişmiş Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta F12</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin</td><td>Sigma</td><td>P0781</td><td></td></tr><tr><td>DiI (Moleküler problar)</td> <td>Vybrant</td><td>V-22885</td><td>Hücre etiketleme çözümü</td></tr><tr><td></td><td>Invitrojen</td><td></td><td>Hücre izleyici CM-DiI, C-7000</td></tr><tr><td>DiO ( Moleküler problar)</td><td>Vybrant</td><td>V22886</td><td></td></tr><tr><td>Geminator 500</td><td>Thomas</td><td>Thomas No. 3885A20</td><td>Kuru ısı sterilizasyonu</td></tr><tr><td>McIlwain doku kıyıcı</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>10180</td><td>Standart tablo</td></tr><tr><td>Organ kültürü kabı (Merkez-Kuyu Organ Kültürü Çanağı)</td><td>Falcon</td><td>353037</td><td></td></tr><tr><td>Membranları (Hücre Kültürü Ekleri, 0.4 & mu; m gözenek boyutu)</td><td>BD Falcon</td><td>353090</td><td>PET rayla oyulmuş membran, 6 kuyucuklu format</td></tr><tr><td>Metal ızgaralar (Paslanmaz Çelik - AISI 304 - Mesh)</td><td>Goodfellow</td><td>FE228710</td><td>(Fe/Cr18/Ni10)</td></tr><tr><td>AutoFlow Doğrudan Isı CO<alt>2</alt> İnkübatör</td><td>Nuaire</td><td>NU-5500</td><td></td></tr><tr><td>Picospritzer III</td><td>Intracel Ltd</td><td>051-0500-900 0-100 psi</td><td>Tek kanallı picospritzer III</td></tr><tr><td>Filamentli cam kılcal damar 1 mm</td><td>WPI</td><td>TW100F-4</td><td></td></tr><tr><td>Tungsten tel 0,1 mm</td><td>Goodfellow</td><td>W005138</td><td></td></tr><tr><td>Tungsten tel 0,38 mm</td><td>Goodfellow</td><td>W005155</td><td></td></tr><tr><td>Aspiratör tüpleri</td><td>Sigma</td><td>A5177</td><td>Ağız aspirasyonu soy izleyicileri için kullanılır</td></tr></tbody></table>

eksplantasyon kültüründe diş mikropların geliştirme takiben için dilim kültür yöntemi

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

Eksplant kültür belirli zaman noktalarında organ geliştirmeyi ve manipülasyon, bu nedenle gelişimsel biyolog için önemli bir yöntemdir sağlar. Birçok organ için bu ex vivo kültür sırasında izleme sağlamak için gelişmekte olan doku ulaşmak zordur. Dilim kültür yöntemi sağlar dokusu erişim böylece morfogenetik hareketleri takip edilebilir ve belirli bir hücre popülasyonları manipülasyon veya soy izleme için hedef olabilir. Bu yazıda tür bir dizi diş mikrop kültürü için çok başarılı olmuştur dilim kültürü için bir yöntem tarif eder. Bu yöntem, diğer çene dokular tarafından çevrili in vivo gözlenene benzer bir oranda, en geliştirmek diş mikrop, mükemmel erişim sağlar. Bu, diş ve çevreleyen doku arasında doku etkileşimleri takip edilmesine olanak sağlamaktadır. Bu kağıt mikropların diş üzerinde yoğunlaşmaktadır de, aynı protokolü bir dizi gelişme takip uygulanabilirBöyle tükürük bezleri, Meckel kıkırdağı, burun bezleri, dil ve kulak gibi diğer organlara,.

İlk molar diş kökü hareketini takip etmek amacıyla, 250 um frontal kesitler, yukarıda tarif edilen yöntemi kullanılarak alt çeneye ile alınmıştır. Diş kökü, gelişmekte olan dişin dış emaye epitel (OEE) çevreleyen mezenşimin tabakası olan ve daha önce periodonsiyum 6 dokusu oluşumuna katılmak için gösterilmiştir. Altçeneler E14.5, diş gelişimi kapak aşamasında disseke edildi. Dilim ise diş epitelyumun anahat açıktı ve yoğuşmalı dental mezenşimin diş epitel (Şekil 4A) etrafında bir halka koyu o...

Burada detay doku helikopter kullanarak mandibul dilimler kültür diş mikroplar için bir yöntemi biz. Bu yöntem, daha geleneksel kültürü yöntemleri kullanılarak mevcut manipülasyon ve soy izleme, değil mükemmel bir fırsat sağlayarak, gelişimi sırasında dişe eşsiz erişim sağlar.

Eksplantasyon Kültüründe Diş mikropların Geliştirme takiben için Dilim Kültür Yöntemi

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Bir sonraki deneyin genel amacı, birkaç gün boyunca diş gelişimini takip etmektir. İn vitro explan kültür, bu, ikinci bir adım olarak gelişmekte olan diş mikroplarını ortaya çıkarmak için fetal farelerin gelişmekte olan mandibulasının canlı dilimler halinde diseke edilmesiyle elde edilir. Dilimler seçilir, bir kültür ortamı üzerinde filtrelere yerleştirilir ve gelişime izin vermek için inkübe edilir.Daha sonraki dilimler, kültür periyodu boyunca hücresel hareketi izlemek için bir soy izleyici ile etiketlenir, diş dokularının eksplan kültür sırasında geliştikçe dinamik doğasını gösteren sonuçlar elde edilir. Bu tekniğin konvansiyonel eksplant kültürüne göre en büyük avantajı, diş taşları gibi içsel olarak gelişen organların, çevredeki doku bağlamında gelişimleri boyunca gözlemlenebilmesidir. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik öneme sahiptir, çünkü makinenin kurulumu veya dokunun oryantasyonu yanlış olduğunda doğrama ve seçim adımları zor olabilir.İlk olarak, 500 mililitre ileri ECCO'lar modifiye kartal ortamı F 12'ye %1 glutamat ve %1 penisilin streptomisin ekleyerek embriyonik organlar için diseksiyon ve kültür ortamını hazırlayın. Daha sonra, Takahashi Sumi'nin video ma

the-slice-culture-method-for-following-development-tooth-germs

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

E18 Rat Brain Organotipik Dilim Kültür

Hassas kesilmiş dilimler içeren organotipik primer doku eksplant kültürleri, üç boyutlu (3 boyutlu) doku mimarisinin yanı sıra doğal dokunun çok hücreli etkileşimlerini temsil eder. Bu video, dokuların oksijen ve besin maddelerine aralıklı olarak maruz kalmasını sağlayan bir sistem olan dönen bir inkübasyon ünitesi kullanılarak murin akciğer tümöründen türetilmiş doku dilimlerinin kültürlenmesini açıklamaktadır. Protokol, ilaç yanıt çalışmaları için hassas kesilmiş akciğer tümörü dilimleri...

Akciğer Tümörü Dokusu Eksplant Kültürü: Hassas Kesilmiş Akciğer Tümörü Dilimleri Oluşturma ve Kültür Prosedürü

Video, glioblastoma dokusundan organotipik dilim kültürlerinin oluşturulmasını ve sürdürülmesini göstermektedir. İzole edilen doku bir agaroz matrisine gömülür ve bir vibratom kullanılarak ince kesitler elde edilir. Bu bölümler daha sonra bir mikroplaka içindeki geçirgen membran eklerine yerleştirilir ve uzun süreli bakım için bir dilim kültür bakım ortamında kültürlenir.

İnsan Glioblastoma Dokusundan Dilim Kültürlerinin Oluşturulması ve Sürdürülmesi

Bu video, diş germ pulpası ve trigeminal gangliyonlar arasındaki etkileşimleri incelemek için mikroakışkan bir cihazın kullanımını göstermektedir. Dokuların mikroakışkan cihazın içine yerleştirilmesini gösterir ve cihazın mikro olukları aracılığıyla diş germine doğru trigeminal nörit büyümesinin ayrıntılı bir görselleştirmesini sağlar. Ek olarak, dişten türetilen moleküler faktörlerin, doğum sonrası diş innervasyonunu verimli bir şekilde sağlamak için çok önemli olan diş germ pulpasına nörit...

Diş Germi ve Trigeminal Gangliyon Etkileşimlerinin Mikroakışkan Ko-Kültür Sistemi Kullanılarak Analiz Edilmesi

Ko-kültürler, sinirler ile hedef doku ve organlar arasındaki etkileşimleri incelemek için değerli bir yöntemi temsil eder. Mikroakışkan sistemler, gangliyonların ve tüm gelişmekte olan organların veya dokuların farklı kültür ortamlarında birlikte kültürlenmesine izin verir, böylece nöronlar ve hedefleri arasındaki karışmanın in vitro çalışması için değerli bir araçtır.

Mikroakışkan Co-kültür Aygıtları Kullanma Diş Germ innervasyon Geliştirme Analizi

Günümüzde glioblastoma (GBM) 'nin ex vivo modelleri, insan tümörü invazyonunun fizyolojik olarak ilgili çalışması için optimize edilmemiştir. Burada, taze insan GBM dokusundan alınan organotipik dilim kültürlerinin üretimi ve bakımı için bir protokol sunuyoruz. Zaman atlamalı mikroskopi ve kantitatif hücre göç analiz tekniklerinin bir açıklaması sağlanmıştır.

Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli

Biz üretimi, yetiştirme ve fare akciğer tümörleri türetilmiş organotypic dilimleri sistematik analizi için bir yöntem sağlar. Biz de dilim kalınlığı için en iyi duruma getirme ve tümör dilimleri tedavisi için ilaç konsantrasyonları seçin anlatan.

Kuruluş ve tümör dilim analizini Explants tanı testleri için bir önkoşul olarak

Yetişkin insan beyninden serbest yüzen dilim kültürleri hazırlamak için bir protokol sunulmaktadır. Protokol membran ekler kullanarak yaygın olarak kullanılan dilim kültür yönteminin bir varyasyonudur. Bu basit, maliyet-etkin, ve yaşilişkili beyin hastalıkları arkasında nörodejenerasyon mekanizmaları çözmek için amaçlayan kısa vadeli tahliller çalıştırmak için önerilir.

Yetişkin İnsan Beyninden Kısa Süreli Serbest Kayan Dilim Kültürleri

Trowell tipi organ kültürü yöntemi, diş gelişimini yöneten karmaşık sinyal ağlarını çözmek ve daha yakın zamanlarda, sürekli büyüyen fare kesici dişinin kök hücrelerinde yer alan düzenlemeleri incelemek için kullanılmıştır. Floresan muhabir hayvan modelleri ve canlı görüntüleme yöntemleri, dental kök hücrelerin ve bunların spesifik niş mikro çevrelerinin derinlemesine analizini kolaylaştırır.

Trowell Tipi Organ Kültürünün Diş Kök Hücrelerinin Düzenlenmesini Incelemek İçin Kullanılması

Ex vivo canlı görüntüleme, canlı dokulardaki hücresel hareketlerin ve etkileşimlerin dinamik süreçlerini incelemek için güçlü bir tekniktir. Burada, kültürlenmiş tüm yetişkin fare kesici dişlerinde diş epitel hücrelerini canlı izlemek için iki foton mikroskobu uygulayan bir protokol sunuyoruz.

Fare Diş Yenileme Sırasında Hücre Bölünmelerini ve Hareketlerini Araştırmak için Ex Vivo Canlı Görüntülemeyi Kullanma

Öğrenin, fetal fare mandibulasını canlı dilimlere ayırarak diş mikroplarının gelişimini izleme yöntemini. Bu teknik, hücre hareketlerini takip ederek diş dokularının dinamik yapısını anlamanıza yardımcı olur.

Eksplantasyon Kültüründe Diş mikropların Geliştirme takiben için Dilim Kültür Yöntemi

Daha fazla video keşfet