9 Ekim 2013
Zebra balığı birçok araştırma alanları için değerli bir araç olmuştur. Burada görsel bir yanıt ortaya çıkarmak ve yetişkin Zebrafish fonksiyonel görme keskinliği hesaplamak için bir yöntem ortaya koymaktadır.
Bu prosedürün genel amacı, optokinetik yanıt veya OKR kullanarak yetişkin zebra balıklarında görme keskinliğini ölçmektir. Bu, önce dönen bir tambur ve veri yakalama aparatından oluşan OKR cihazının oluşturulmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra, balık cihaz içinde hareketsiz hale getirilir ve bir OKR ortaya çıkar.
Daha sonra binoküler ve monoküler uzamsal keskinlik eşikleri, farklı büyüklükteki derecelendirmeler ve modifiye edilmiş bir merdiven yaklaşımı kullanılarak belirlenir. Son olarak, balık için görme keskinliği hesaplanır. Sonuç olarak, bir balık popülasyonunda yaşlandıkça veya hastalıklı tedavi görmüş balıklarda optokinetik tepki yoluyla görme keskinliği değişikliklerini gösteren sonuçlar elde edilebilir.
Bu tekniğin otomotiv yanıtı veya OMR gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, OKR kullanılarak görme keskinliğinin ölçülmesinin klinik olarak daha anlamlı ve güvenilir olmasıdır. Optokinetik çalışmalar, 14,5 santimetre çapında döner tambur, ışık şiddeti ayarları ayarlanabilen stereo mikroskop, görüntü yakalamak ve kayıt yapmak için bilgisayar ve kamera kullanılarak özel yapım bir kayıt cihazı ile gerçekleştirilir. Bilgisayarla çalışan bir mikrodenetleyici, standart koşullar altında bakımı yapılan balıkları kullanarak dönen tambur hızını ve eğirme yönlerini ayarlamak için kullanılır.
Bir balığı %0.016 trika'da iki ila üç dakika boyunca uyuşturarak ve ardından yaralanmayı önlerken balığı hareketsiz tutmak için gözleri ve solungaçları kenarda asılı olacak şekilde küçük bir platforma yerleştirerek bir analize başlayın. Balığın vücudunun üzerine ince bir sünger veya havlu yerleştirin ve kuyruk hareketinin sınırlı olduğundan emin olarak balığın üzerine iki ila üç parça köpük sabitleyin. Balıkları, OKR kayıt cihazının dönen tamburunun içine sığan silindirik su dolu bir tankın içine yerleştirin.
Balıkları, tamburun kenarından yaklaşık 7,3 santimetre uzakta gözlerle dik olarak konumlandırmak için platformda mıknatıslar kullanın. Balık anesteziden canlandıktan ve normal solunum ve rastgele göz hareketleri gözlendikten sonra, dönen tambura derece başına 0.07 döngü veya CPD'lik bir temel derecelendirme yerleştirin ve döndürmeye ve video yakalamaya başlamak için bilgisayar kontrollerini devreye sokun. Temel derecelendirme tarafından ilk OKR ortaya çıktıktan sonra, döndürmeyi kısa bir süre duraklatın ve derecelendirmeyi daha yüksek bir uzamsal frekansa sahip daha küçük bir derecelendirme ile değiştirin.
Bu işlemi, bir OKR artık ortaya çıkamayana kadar sıralı olarak daha küçük derecelendirmelerle tekrarlayın. Değiştirilmiş bir merdiven yaklaşımını takiben OKR kaybını doğrulamak için, OKR'ye neden olan en küçük derecelendirme ile ve ardından yanıt alamayan derecelendirme ile yeniden test edin. Monoküler keskinlik ölçümleri elde etmek için OKR kaybını doğrulamak.
Karşı göze bitişik şeritlerin üzerine siyah plastik bir oklüt yerleştirin ve veri toplama işlemini tekrarlayın. Daha sonra memeyi yeniden konumlandırarak ve ölçüm yaparak diğer göze geçin. Görme keskinliğini belirlemek için doğru keskinlik ölçümleri yapmak için her bir gözün şeritten uzaklığına dikkat etmek için akvaryumun altındaki referans ölçüm şeridini kullanın.
Aşağıdaki formülü kullanarak CPD'yi hesaplayın, burada A, merceğin merkezinden derecelendirmeye olan mesafe ve H, OKR'nin gözlemlendiği en küçük derecelendirmenin bir döngüsünün uzunluğudur. Kombine görme keskinliği ölçümleri için, hem sol hem de sağ gözden hesaplanan ortalama bir değer kullanın. Bu videoda gösterilen prosedür, birçok yaştaki zebra balığı için görme keskinliğini belirleyebilir.
Kaydedilen en iyi binoküler uzaysal keskinlik, burada gösterildiği gibi 0.74 CPD idi. Binoküler keskinlik genellikle yaşla birlikte artar, ancak beş aylık yabani tip balıklarda görme keskinliği ölçüldüğünde yaklaşık 12 aylıktan sonra yaşa uygun lrp'ye kıyasla dengelenir. Asimetrik göz gelişimine sahip iki böcek balığı.
LRP iki böcek gözü balığının binoküler keskinliğe kıyasla keskinliği önemli ölçüde azalttığını bulduk. Binoküler toplama, bu grafikte gösterildiği gibi insan görüşüne benzer şekilde gözlemlenir. Binoküler keskinlik genellikle, bazı balıklar için bağımsız olarak ölçülen sağ veya sol keskinliklerden %5 ila %10 daha iyiydi.
Aradaki fark %25'lik bir iyileşme oldu. Bu videoyu izledikten sonra, OKR kullanarak yetişkin zebra balıklarında görme keskinliğini nasıl belirleyeceğinizi iyi anlamış olmalısınız.
Bu çalışma, optokinetik yanıt (OKR) kullanarak yetişkin zebra balıklarında görme keskinliğini ölçmek için bir yöntem sunmaktadır. Bu teknik, araştırmacıların zebra balığı popülasyonlarındaki görme keskinliği değişimlerini zaman içinde veya uygulanan tedaviler sonucunda değerlendirmelerine olanak tanır.
Yetişkin zebrafishlerde optokinetik yanıt (OKR) kullanılarak görme keskinliğinin nicel ölçümü, hastalık modellerinde ve müdahale çalışmalarında görsel fonksiyonun yüksek verimli ve invaziv olmayan değerlendirmesine olanak tanır. Bu yaklaşım, görme ile ilgili ilaç keşfi için fenotipik tarama ve hedef doğrulamada öngörü güvenilirliğini destekler. Yöntemin tekrarlanabilirliği ve ölçeklenebilirliği, onu oftalmik ve nöro-davranışsal pipeline'larda translasyonel araştırmalar ve portföy seçimi için değerli bir araç konumuna getirir.
OKR tabanlı görme keskinliği testi, erken hedef doğrulamadan başlayarak öncü bileşik tanımlama ve görme bilimindeki preklinik araştırmalara kadar olan keşif sürecine entegre edilmektedir.