3.5: Drosophila Bakım

Başarılı Drosophila melanogaster araştırması, bu değerli model organizmanın doğru bakımına ve yetiştirilmesine bağlıdır. Aşağıdaki video, sineğin uygun beslenmesini, barınmasını ve ele alınmasını sağlamak için gerekli adımları tartışacaktır.

Yaygın olarak meyve sineği olarak bilinmesine rağmen, Drosophila melanogaster aslında fermente meyvede büyüyen maya gibi mikroorganizmalar üzerinde yaşar. Laboratuvarda, sineğin diyeti pratik amaçlar için değiştirilir. Birkaç tarif mevcuttur ve hepsi temel bileşenleri içerir: şeker ve maya. Aşağıdaki tarif, çok çeşitli sinek stoklarıyla ünlü Bloomington'daki Indiana Üniversitesi'nden alınmıştır. Şunlardan oluşur: steril su, maya, soya unu, sarı mısır unu, doku için agar, mısır şurubu ve küf ve bakteri üremesini engellemek için propiyonik asit. Bu bileşenler birleştirilir, ısıtılır, karıştırılır ve daha sonra bir pompa kullanılarak plastik muhafaza şişelerine dağıtılır. Doldurulduktan sonra, şişeler pamuklu bir üst kısım ile tıkanır, sarılır ve 4 °C'de soğutulur. Katılaştıktan sonra, yiyecekler otoklavlama yoluyla sterilize edilir.

Artık sineklerin ne yediği hakkında biraz bilgi edindiğimize göre, nerede yaşadıklarına ve nasıl ele alındıklarına bir göz atalım.

Sinekleri barındırmak için çeşitli kaplar kullanılır. Şişeler sinek bakımı için kullanılır ve optimal olarak 50-100 yetişkin içerir. Şişeler daha büyük kültürler için kullanılır ve 300-600 yetişkin sineği barındırır. Kuluçka makineleri çevreyi kontrol eder ve yüzlerce şişe ve şişe tutabilir. Sinekler için normal saklama koşulları 25 ° C'dir. C ve% 60-65 bağıl nem.

Sineklerle çalışırken, uygun etiketleme ve dokümantasyon uygulamak ve sinek hatlarının ve deneylerin bütünlüğünü korumak için temiz bir ortam sağlamak önemlidir. Pupaların yaklaşık yarısı kapandığında veya pupa kılıfından ayrıldığında bir kap değiştirilmelidir. Muhafazalar net görünecektir.

Bilginize, pupa aşaması larva ve yetişkin aşamaları arasında gerçekleşir ve larvaların kuluçkaya yattığı ve bir yetişkine dönüştüğü zamandır. Pupa kılıflarının şeffaf olduğunu belirlemek için, kabı bir ışık kaynağına tutun ve pupayı inceleyin.

Sinekler taze besiyeri olan şişelere aktarılır mı? Sinek yemeği için süslü bir isim mi? "sinekleri çevirmek" olarak bilinen bir süreçle. Sinekleri çevirmeden önce, medyayı bütünlük açısından inceleyin. Sinekler, kuruluk ile çatlamış veya küf veya bakteri ile kontamine olmuş yiyeceklerde hayatta kalamazlar.

Sinekleri çevirmek için, önce şişenin kenarlarından sinekleri çıkarmak için sinek şişesini tezgahın üzerine hafifçe vurun. Ardından durdurucuyu hızlı bir şekilde çıkarın ve sinekleri eski kaptan hızla yenisine ters çevirin. Bu işlem, sineklerin tıpa tarafından kaçmasını veya ezilmesini önlemek ve çevirme sırasında gevşek sineklerin şişeye girmesini önlemek için hızlı bir şekilde yapılır.

Drosophila'nın toplu transferi için sinekleri çevirmek tercih edilen yöntem olsa da, sinekleri ayırmak için anestezitizasyon gereklidir. Burada iki anestezi yöntemi tartışılacaktır: soğutma ve karbondioksit kullanımı. Sinekleri soğutmak için kültürü -20 ° C'ye yerleştirin. C dondurucu 8-12 dakika. Ardından sinekleri seçim için soğutulmuş, düz bir çalışma alanına yerleştirin. Sinekler ayrıca doğrudan donmuş bir yüzey üzerinde soğutularak soğuk kullanılarak uyuşturulabilir.

Karbondioksit, sineklerde akut mortaliteye veya araştırmacı için tehlikeye neden olmadığı için anestezik için tercih edilen bir yöntemdir. CO2 dağıtım sistemi şunlardan oluşur: bir CO2 tankının; şişelerde ve şişelerde sinekleri uyuşturmak için bir iğneye bağlı bir tüp; ve mikroskop altında analiz için bir CO2 plakasına bağlı bir tüp.

Sinekleri uyuşturmak için, CO2 iğnesini tıpanın içinden geçirin. Alternatif olarak, kabı bir yüzeye vurun, durdurucuyu çıkarın ve sinekleri hızlı bir şekilde bir CO2 plakasına ters çevirin ve sinekler hareketsiz kalana kadar kapalı bir mühür tutun. Bir fırça veya forseps kullanarak, sinekleri yavaşça yeni kabın içine taşıyın.

İstenmeyen sinekleri atmak için, onları izopropanol veya etanol ile doldurulmuş büyük bir şişe ve bir huni ile doldurulmuş mineral yağdan oluşan bir sinek morguna atın.

Artık sineklerin laboratuvarda nasıl korunduğunu ve ele alındığını gördüğümüze göre, farklı deneyler için barınma ve beslenme koşullarının nasıl değiştirildiğine bir göz atalım.

Bazı deneyler, daha fazla miktarda sinek içermek için alternatif barınma gerektirir.

Bu deneyde, araştırmacı büyük miktarda embriyo toplamak için bir sinek popülasyonu kafesi kullanır. Bir sinek popülasyon kafesi, binlerce sineği tutabilen şeffaf, plastik bir kutudur. Araştırmacı, istenen sinekleri birkaç şişeden sinek popülasyon kafesine bırakır, daha sonra embriyoları toplamak için agar plakalarını kafese yerleştirir.

Bazı deneyler sinek diyetinin manipüle edilmesini gerektirir.

Bu deneyde araştırmacı, sinekleri düzenleyen nöronlarda ışıkla aktive olan bir iyon kanalını ifade eden transgenik sineklerin kaçış tepkisini gözlemlemek istiyor mu? kaçış yanıtı. Drosophila diyeti, bu kanal için bir kofaktör olan ve çalışmasına izin veren "all-trans-retinal" ile desteklenir. Bu, yiyeceğin eritilmesi ve reaktifin eklenmesiyle yapılır. Sinek daha sonra kanalı aktive eden ve kaçış tepkisini indükleyen mavi ışığa maruz bırakılır ve uçmak için geçen süre ölçülür.

Deney için çeşitli muhafaza ve kullanım koşulları manipüle edilebilir.

Bu deneyde, egzersizin Drosophila üzerindeki etkilerini incelemek için ayrıntılı bir "güç kulesi" oluşturulmuştur. Güç kulesi, "negatif jeotaksi" olarak bilinen yerçekimine karşı yukarı doğru hareket etmek için sineğin doğal tepkisinden yararlanarak sürekli olarak yükselen ve alçalan bir makinedir.

Güç kulesinde uygulanan sineklerin performansı, Hızlı Yinelemeli Negatif Geotaxis testi veya kısaca RING testi kullanılarak ölçülür. Boş şişelerdeki sinekler bir kameranın önüne yerleştirilir. Şişelere dokunulur ve çıkılan mesafeler kaydedilir. Bu deney, bir kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, egzersizin zaman içinde aktivite üzerinde olumlu bir etkisi olduğunu göstermektedir.

Bu JoVE videosu, Drosophila melanogaster'in bakımını ve yetiştiriciliğini kapsıyor. Bu videoyu izledikten sonra, sinek yemi ortamı hazırlayabilmeli, uygun muhafazayı doğru bir şekilde tanımlayabilmeli, sinekleri çevirebilmeli ve basit deneyler yapabilmelisiniz. İzlediğiniz için teşekkürler!