Name: Osteoartrit Progranulin ve koruyucu rolünü araştırmak için Farelerde bir Cerrahi kaynaklı Modeli Kurulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-25T13:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: Keşfedin, farelerde DMM cerrahi modeli ile osteoartrit gelişimini ve progranulinin koruyucu rolünü. Histopatolojik analizler ve MANKIN skorlaması ile eklem hasarını değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIH araştırma hibeleri R01AR062207, R01AR061484, R56AI100901, K01AR053210 ve (CJ Liu) Romatoloji Araştırma Vakfı Bir Hastalık Hedefli Araştırma Grant tarafından kısmen desteklenmiştir.

Hayvanlara ilişkin tüm cerrahi prosedür ağrı ve cerrahinin neden rahatsızlığı en aza indirmek için yapılan bir çaba ile yerel Kurumun Hayvan Bakım ve Etik Komitesi tarafından onaylanmış olması gerekir. 1.. Hazırlık <ol><li> Ameliyat için yaklaşık 25 g bir vücut ağırlığına sahip 8-12 haftalık erkek C57BL / 6 fareleri seçin. </li><li> Ksilazin (5 mg / kg) ve ketamin (40 mg / kg) her ikisini de içeren bir kokteyl intraperitonal enjeksiyon yoluyla hayvanlara anestezisi. </li><li> Jilet ile diz tıraş, sonra cerrahi drape hayvan ve betadin ve alkol (3x) ile cerrahi alan sterilize ve bir merhem ile fare gözleri kapsamaktadır. </li></ol> 2. Cerrahi Süreci <ol><li> Diz eklemi ortaya çıkarmak için 1 cm boyuna medial para-patellar kesi olun. </li><li> Patella ve patellar ligamentin lateral çıkığı ile hafifçe diz eklemini açın. <ol><li> Uzunlamasına diz eklem kapsülü KesmeAdım 2.1 &#39;de medial para-patellar kesiden. </li><li> Forseps ile diz eklem kapsülü teşrih. </li><li> Sol el ile arka ayak distal kısmını tut ve forseps ile patella ve patellar ligamentin lateral çıkığı gerçekleştirin. Yavaşça arka pençe tutun ve pençe travmayı önlemek için emin olun. Eklem kapsülü disseke daha iyi, daha az kuvvet çıkığı yapmak gerekecektir. </li></ol></li><li> Kıkırdak yüzeyinin kurumasını önlemek için işlem sırasında eklem kıkırdağı yüzeyinde steril tuzlu su Damla. </li><li> Tibia plato medial menisküs çapa medial meniscotibial bağın kesebiliyor. Medial menisküs altındaki kıkırdak yaralanmasına kaçının. <ol><li> Femur medial kondil ve tibia medial platosu arasında bulur medial menisküs tespit. </li><li> Tibia interkondiler itibar ile medial menisküs lateral tarafını bağlayan meniscotibial bağ tanımlayın. </li><li> Hi tutunnd elinizle hafifçe pençe, ve 10 numaralı cerrahi bıçak kullanarak dikkatlice medial meniscotibial bağın kesti. Kıkırdak ve diğer bağ artiküler zarar neden değil emin olun. Birçok durumda, kaplama yağ yastığı tarafına çekilmesine ancak bağ tespit etmek amacıyla kaldırılması gerek yoktur. </li></ol></li><li> 6-0 emilebilir sütür ile diz eklem kapsülü kapatın. </li><li> 6-0 ipek sütür ile cilt kapatın. </li></ol> 3. Post-operatif Bakım <ol><li> Ameliyat sonrası ağrı en aza indirmek için, her fare ameliyat bölgesinde% 0.25 bupivakain bir damla uygulanır. </li><li> Su ve yiyecek almak için ücretsiz ameliyat fareler bırakın. </li></ol> 4. Cerrahi DMM Modelin histolojik Puanlama <ol><li> Belirtilen zaman noktalarında fareler kurban ameliyattan sonra (örneğin, 4 hafta, 8 hafta ve 12 hafta. Burada temsilcisi olarak 8 haftalık sonuçlar elde edilmiştir.) </li><li> Tüm diz eklemleri, kireçlenmiş, embe sabitparafin ile dded ve daha sonra 5 um aralıklarla seri olarak kesit. <ol><li> No: 10 bıçaklarla bütün arka uzuvları kesilmiş. </li><li> Dikkatlice arka bacaklarda cilt ve kasların incelemek, ve RT 3 gün boyunca% 4 PFA ile numunelerini sabitlemek. </li><li> PFA çıkarın ve su ile örnekleri temizleyin. Daha sonra, 2 hafta boyunca 4 ° C&#39;de EDTA içinde örnekleri kirecini. </li><li> Bir etanol gradyanı içinde örnekleri kurutmak. Ayrıntılı olarak, daha sonra etanol değiştirebilir ve O / N için% 70 etanol içinde yeni bir dizi in örnekleri tutmak, 1 saat boyunca% 70 etanol içinde örnekleri tutmak Daha sonra,% 80 örnekleri koymak ve% 90 etanol dolayısıyla ve O / N% 100 etanol ile, ardından, sırasıyla 1 saat boyunca tutmak </li><li> Etanol çıkarın. 1 saat için ksilen de örnekleri tutmak ve ksilen yeni bir dizi için değiştirin. Bu adım 3x tekrarlayın. </li><li> Leica gömme merkezini kullanarak bir parafin kalıba örnekleri embed. Daha sonra, numuneler bir döner mikrotom (Leica RM225 ile 5 um&#39;lik kesitler edilir5, Almanya) ve daha sonra cam slaytlar üzerine toplandı. </li><li> Seri sagital kesitler kısım, orta kondilin merkezine lateral kondilin merkezi bir bölgeyi kapsayan her bir örnek için kesilir. </li></ol></li><li> Safranin O boyama, gerçekleştirilen önce 25 açıklandığı gibi OARSI skorlama sistemi ile puanlama ve istatistiksel analizi ile takip edilmektedir. <ol><li> İlk olarak, o-ksilen içinde slaytlar deparaffinize ve damıtılmış su, bir etanol gradyanı bunları hidrat. Bundan sonra, slaytlar WEIGERT Demir Hematoxylin Çözüm,% 0.05 Fast Green (FCF) Çözüm,% 1 asetik asit solüsyonu ve% 0.1 Safranin O Çözüm üzerinden lekeli. Reçineli orta kullanarak slaytlar monte edin. </li><li> Histolojik skoru için istatistiksel analiz yapmak, kıkırdak ve kıkırdak yapısında yıkım yüzdesi proteoglycan&#39;ın (kırmızı renk) kaybına dayalı Safranin O lekeli slaytlar Skor. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Herndon, J. H., Davidson, S. M., Apazidis, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+socioeconomic+trends+in+orthopaedic+practice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Joint+Surg.+Am%22%5BJournal%5D)">Recent socioeconomic trends in orthopaedic practice.</a> J. Bone Joint Surg. Am. 83, 1097-1105 (2001).</li>
<li>Johnson, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+stem+cell-based+approach+to+cartilage+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A stem cell-based approach to cartilage repair.</a> Science. 336, 717-721 (2012).</li>
<li>Yang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor-2alpha+is+a+catabolic+regulator+of+osteoarthritic+cartilage+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor-2alpha is a catabolic regulator of osteoarthritic cartilage destruction.</a> Nat. Med. 16, 687-693 (2010).</li>
<li>Glasson, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+active+ADAMTS5+prevents+cartilage+degradation+in+a+murine+model+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Deletion of active ADAMTS5 prevents cartilage degradation in a murine model of osteoarthritis.</a> Nature. 434, 644-648 (2005).</li>
<li>Glasson, S. S., Blanchet, T. J., Morris, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surgical+destabilization+of+the+medial+meniscus+%28DMM%29+model+of+osteoarthritis+in+the+129%2FSvEv+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr.+Cart%22%5BJournal%5D)">The surgical destabilization of the medial meniscus (DMM) model of osteoarthritis in the 129/SvEv mouse.</a> Osteoarthr. Cart. 15, 1061-1069 (2007).</li>
<li>Chia, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+growth+factor+2+is+an+intrinsic+chondroprotective+agent+that+suppresses+ADAMTS-5+and+delays+cartilage+degradation+in+murine+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Fibroblast growth factor 2 is an intrinsic chondroprotective agent that suppresses ADAMTS-5 and delays cartilage degradation in murine osteoarthritis.</a> Arthritis Rheum. 60, 2019-2027 (2009).</li>
<li>Miller, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCR2+chemokine+receptor+signaling+mediates+pain+in+experimental+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">CCR2 chemokine receptor signaling mediates pain in experimental osteoarthritis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109, 20602-20607 (2012).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+central+role+for+complement+in+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Identification of a central role for complement in osteoarthritis.</a> Nat. Med. 17, 1674-1679 (2011).</li>
<li>He, Z., Ong, C. H., Halper, J., Bateman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progranulin+is+a+mediator+of+the+wound+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Progranulin is a mediator of the wound response.</a> Nat. Med. 9, 225-229 (2003).</li>
<li>Bateman, A., Bennett, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+granulin+gene+family%3A+from+cancer+to+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">The granulin gene family: from cancer to dementia.</a> Bioessays. 31, 1245-1254 (2009).</li>
<li>Kessenbrock, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteinase+3+and+neutrophil+elastase+enhance+inflammation+in+mice+by+inactivating+antiinflammatoryprogranulin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Proteinase 3 and neutrophil elastase enhance inflammation in mice by inactivating antiinflammatoryprogranulin.</a> J. Clin. Invest. 118, 2438-2447 (2008).</li>
<li>Yin, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exaggerated+inflammation%2C+impaired+host+defense%2C+and+neuropathology+in+progranulin-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Exaggerated inflammation, impaired host defense, and neuropathology in progranulin-deficient mice.</a> J. Exp. Med. 207, 117-128 (2010).</li>
<li>Liu, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progranulin%3A+A+promising+therapeutic+target+for+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Progranulin: A promising therapeutic target for rheumatoid arthritis.</a> FEBS Lett. , (2011).</li>
<li>Tang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+growth+factor+progranulin+binds+to+TNF+receptors+and+is+therapeutic+against+inflammatory+arthritis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The growth factor progranulin binds to TNF receptors and is therapeutic against inflammatory arthritis in mice.</a> Science. 332, 478-484 (2011).</li>
<li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+proepithelin+to+epithelins%3A+roles+of+SLPI+and+elastase+in+host+defense+and+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Conversion of proepithelin to epithelins: roles of SLPI and elastase in host defense and wound repair.</a> Cell. 111, 867-878 (2002).</li>
<li>Baker, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+progranulin+cause+tau-negative+frontotemporal+dementia+linked+to+chromosome+17%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutations in progranulin cause tau-negative frontotemporal dementia linked to chromosome 17.</a> Nature. 442, 916-919 (2006).</li>
<li>Cruts, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Null+mutations+in+progranulin+cause+ubiquitin-positive+frontotemporal+dementia+linked+to+chromosome+17q21%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Null mutations in progranulin cause ubiquitin-positive frontotemporal dementia linked to chromosome 17q21.</a> Nature. 442, 920-924 (2006).</li>
<li>Wils, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+ageing%2C+increased+mortality+and+FTLD-TDP-associated+neuropathology+in+progranulin+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cellular ageing, increased mortality and FTLD-TDP-associated neuropathology in progranulin knockout mice.</a> J. Pathol. , (2012).</li>
<li>Guo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulin-epithelin+precursor+binds+directly+to+ADAMTS-7+and+ADAMTS-12+and+inhibits+their+degradation+of+cartilage+oligomeric+matrix+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Granulin-epithelin precursor binds directly to ADAMTS-7 and ADAMTS-12 and inhibits their degradation of cartilage oligomeric matrix protein.</a> Arthritis Rheum. 62, 2023-2036 (2010).</li>
<li>Xu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+oligomeric+matrix+protein+associates+with+granulin-epithelin+precursor+%28GEP%29+and+potentiates+GEP-stimulated+chondrocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Cartilage oligomeric matrix protein associates with granulin-epithelin precursor (GEP) and potentiates GEP-stimulated chondrocyte proliferation.</a> J. Biol. Chem. 282, 11347-11355 (2007).</li>
<li>Bai, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAMTS-7%2C+a+direct+target+of+PTHrP%2C+adversely+regulates+endochondral+bone+growth+by+associating+with+and+inactivating+GEP+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">ADAMTS-7, a direct target of PTHrP, adversely regulates endochondral bone growth by associating with and inactivating GEP growth factor.</a> Mol. Cell. Biol. 29, 4201-4219 (2009).</li>
<li>Feng, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulinepithelin+precursor%3A+a+bone+morphogenic+protein+2-inducible+growth+factor+that+activates+Erk1%2F2+signaling+and+JunB+transcription+factor+in+chondrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Granulinepithelin precursor: a bone morphogenic protein 2-inducible growth factor that activates Erk1/2 signaling and JunB transcription factor in chondrogenesis.</a> FASEB J. 24, 1879-1892 (2010).</li>
<li>Liu, C. J., Bosch, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progranulin%3A+A+growth+factor%2C+a+novel+TNFR+ligand+and+a+drug+target%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Therap%22%5BJournal%5D)">Progranulin: A growth factor, a novel TNFR ligand and a drug target.</a> Pharmacol. Therap. 133, 124-132 (2012).</li>
<li>Wu, H., Siegel, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progranulin+Resolves+Inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Progranulin Resolves Inflammation.</a> Science. 332, 427-428 (2011).</li>
<li>Glasson, S. S., Chambers, M. G., Den Berg, W. B. V. an, Little, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+OARSI+histopathology+initiative+-+recommendations+for+histological+assessments+of+osteoarthritis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr.+Cart%22%5BJournal%5D)">The OARSI histopathology initiative - recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the mouse.</a> Osteoarthr. Cart. 18, 17-23 (2010).</li>
<li>Glasson, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+osteoarthritis+target+validation+utilizing+genetically-modified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">In vivo osteoarthritis target validation utilizing genetically-modified mice.</a> Curr. Drug Targets. 8, 367-376 (2007).</li>
<li>Ma, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoarthritis+severity+is+sex+dependent+in+a+surgical+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr.+Cart%22%5BJournal%5D)">Osteoarthritis severity is sex dependent in a surgical mouse model.</a> Osteoarthr. Cart. 15, 695-700 (2007).</li>
<li>Lin, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulating+hedgehog+signaling+can+attenuate+the+severity+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Modulating hedgehog signaling can attenuate the severity of osteoarthritis.</a> Nat. Med. 15, 1421-1425 (2009).</li>
<li>Malfait, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ADAMTS-5+deficient+mice+do+not+develop+mechanical+allodynia+associated+with+osteoarthritis+following+medial+meniscal+destabilization%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr.+Cart%22%5BJournal%5D)">ADAMTS-5 deficient mice do not develop mechanical allodynia associated with osteoarthritis following medial meniscal destabilization.</a> Osteoarthr. Cart. 18, 572-580 (2010).</li>
</ol>

Biz burada biz herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederim.

Bu farelerin suşu DMM modeli indüksiyonu için, farelerin farklı suşları / O C57BL6, 129/SvInJ ve FVB, ardından 129/SvEv gerginlik en yüksek seviyede, DMM sonra OA şiddeti değişen var çok önemli olduğu bildirilmektedir n 26. DMM nispeten duyarlı biz, bu çalışmada kullanılan fare, - transgenlerin büyük bir kısmı gibi PGRN-/ olarak C57BL6 farelerde kurulmuştur. Transgen tür FVB / N fareleri gibi hassas olmayan gerilme dayanan, ancak bu DMM indüksiyon öncesi duyarlı suşlar ile bu fareler geri çaprazlama gerekmekt...

Ayrıca dejeneratif artrit olarak bilinen Osteoartrit (OA), dünya nüfusunun% 15 etkiler ve Amerika Birleşik Devletleri içinde 46 milyon fazla kişi ve sinovit, kıkırdak dejenerasyonu ve osteofit oluşumu 1 ile karakterizedir. Bu, genetik metabolik, biyomekanik ve biyokimyasal faktörlerin karmaşık etkileşimi sonucu olabilir. OA altında yatan mekanizmaları bilimsel topluluk kaçmasına devam ediyor. OA 2,3 patogenezi taklit edebilir çeşitli hayvan modelleri şu anda vardır. Çünkü çeşitli genetiği değiştirilmiş farelerin kullanılabilirliği ve deney maliyet etkinliği hem farelerde hayvan modelleri kurmak önemlidir. Deneysel OA modellerin farklı türde arasında, medial menisküs (DMM) modeli cerrahiye bağlı istikrarsızlaştırma çünkü onun iyi tekrarlanabilirlik ve OA gelişimi sırasında nispeten daha yavaş ilerlemesinin iyi kabul edilen OA modelidir. Bu özelliklerin her ikisi de varfarklı tedaviler veya transgenlerin 3-8 OA ilerlemesi değerlendirilmesi için önemli olmuştur. Ancak cerrahi OA modelin kıvamı ameliyat sırasında ve bir sonucu olarak çeşitli faktörler tarafından etkilenmektedir, cerrahi fare modelinin uygulama sınırlıdır. Progranulin (PGRN), çeşitli hücrelerde ifade edilen çok fonksiyonlu bir büyüme faktörüdür. Bu PGRN yara iyileşmesi 9, tümör oluşumu 10, 11-15 ve enflamasyon gibi çeşitli fizyolojik ve hastalık süreçlerinde önemli bir rol oynadığı bilinmektedir. Çalışmalar ayrıca PGRN yetersizliği, insan ve fareler 16-18 hem de sinir sisteminin dejeneratif hastalıklara neden olduğunu göstermiştir. Bu PGRN insan mafsal kıkırdağının eksprese olduğu bilinmektedir, ve seviyesi önemli ölçüde OA ve romatoid artrit 19 hastaların kıkırdağında yüksektir. Buna ek olarak, aynı zamanda PGRN kondrosit çoğalması 20, farklılaşması ve bölgelerinde ossifikasyonun de önemli bir rol oynargelişim sırasında 21,22 büyüme plağının kemikleşme. Son zamanlarda, PGRN TNF reseptörlerine bağlanma yoluyla TNF-α antagonize ve enflamatuvar artrit modellerinde 13,14,23,24 bir anti-inflamatuar işlevi sergilediğini rapor etmiştir. Ancak, OA PGRN rolü, özellikle in vivo, bir muamma olarak kalır. - Farelerde yazıda, cerrahi DMM modeli neden ve WT ve PGRN-/ in DMM modelini kurarak OA gelişiminde PGRN rolünü araştırmak için prosedürü sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>10 Cerrahi bıçaklar</td><td>Tüy</td><td>25-2976 # 10</td><td></td></tr><tr><td>6-0 sütür</td><td>Uygulamalı Diş</td><td>WG-N53133</td><td></td></tr></tbody></table>

osteoartrit progranulin ve koruyucu rolünü araştırmak için farelerde bir cerrahi kaynaklı modeli kurulması

Establishment of a Surgically-induced Model in Mice to Investigate the Protective Role of Progranulin in Osteoarthritis

Medial menisküs destabilizasyon (DMM) modeli, in vivo olarak, osteoartrit (OA) patojenezinde çeşitli artrit ilişkili moleküllerin patofizyolojik rolü incelemek için önemli bir araçtır. Bununla birlikte, detaylı, özellikle de farelerde bu karmaşık bir model kurmak için görsel protokol, mevcut değildir. Bu yazıda yabanitipte ve progranulin (PGRN) yararlandı - / - örnekler farelerde DMM modeli uyarılması için bir protokol ve bu cerrahiye bağlı modelin kurulması aşağıdaki OA karşılaştırıldığında başlangıcı tanıtmak gibi fareler. Fareler üzerinde yapılan işlemler sadece menisco-tibia ligament kesilir ve medial menisküs istikrarsızlaştırma neden eklem kapsülü veya DMM işlemi, açılan sahte işlem, ya da vardı. Osteoartrit şiddeti histolojik analizi (örneğin, Safranin O ile boyanmıştır) OA-ilişkili genlerin ifadesi, hücre dışı matris moleküllerinin kıkırdak bozulması ve osteofit formu kullanılarak değerlendirilmiştirtirme. Fareler ve bu cerrahiye bağlı modelinde daha şiddetli OA fenotipe yol PGNR büyüme faktörü kaybı - DMM işlemi başarıyla yabanitipte ve PGRN-/ hem OA başlamasını ve ilerlemesini bağlı.

DMM model başarılı farelerde kurulan ve PGRN eksikliği cerrahi kaynaklı OA gelişimini abartılı oldu. Fareler - Sham ve DMM işlemleri (Şekil 1) WT ve PGRN-/ gerçekleştirildi. 8 hafta ameliyat sonrası, fareler kurban edildi ve Safranin O lekeleme diz eklem bölümlerinde gerçekleştirilmiştir, histoloji göre artrit puanının istatistiksel analiz takip etmektedir. Şekil 2A&#39;da gösterildiği gibi, benzer temel koşullarını (üst panel) dolaylı Safra...

Biz farelerde medial menisküs (DMM) modeli, osteoartrit (OA) araştırma için etkili bir araç istikrarı bozacak bir protokol açıklar. Buna ek olarak, progranulin OA patogenezinde koruyucu bir rol oynadığını gösteren, bu model kullanılarak progranulincan fahiş OA gelişimi ve ilerlemesinde bu eksikliği göstermiştir.

Osteoartrit Progranulin ve koruyucu rolünü araştırmak için Farelerde bir Cerrahi kaynaklı Modeli Kurulması

Destabilization of medial meniscus (DMM) model is an important tool for studying the pathophysiological roles of numerous arthritis associated molecules ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerde bir DMM modeli oluşturmak ve DMM cerrahisini takiben osteoartritin başlangıcını incelemektir. Hayvanların hazırlanmasının ardından, diz eklemini açığa çıkarmak için bir santimetrelik boyuna medial parapatellar insizyon yapılır. Ardından, diz eklem kapsülü diseke edilir ve dizin medial dislokasyonu gerçekleştirilir.Son adım, medial meniskal tibial ligamentin kesilmesi ve dizin sütüre edilmesidir. Nihayetinde, eklem yapısının yıkımının yanı sıra proteoglikan kaybını ve osteoartriti göstermek için histopatolojik analizler kullanılır. Şiddet, safran ve O boyaması kullanılarak MANKIN skorları ile değerlendirilir.Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler, cerrahi işlemin farelerde nasıl uygulandığını görmedikçe zorluk yaşayacaklardır. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik önem taşır. Detaylı basamakların öğrenilmesi zor olduğu ve işlemlerin mikroskop altında gerçekleştirildiği göz önüne alındığında, diz ekleminin her bir yapısı net bir şekilde tanınmalıdır.Bu modeli oluşturmak için, yaklaşık 25 gram ağırlığında, sekiz ila 12 haftalık erkek C 57 black six faresini anestezi altına alarak medial menisküs destabilizasyonu veya DMM cerrahisi için hazırlayın. Ardından, diz çevresindeki bölgeyi tıraşladıktan sonra gözlere oftalmik pomad uygulayın. Bölgeyi üç kez Betadine ve alkol ile sterilize edin ve alanı cerrahi örtüyle kapatın.Knee eklemini ortaya çıkarmak için bir santimetrelik boylamasına medial para patellar insizyon yaparak cerrahiye başlayın. Ardından, femur açığa çıkana kadar diz eklem kapsülünü medial para patellar insizyon üzerinden boylamasına dikkatlice kesin. Sonrasında, kesiyi genişleterek ve derinleştirerek kapsül yapısını gevşetmek için forseps kullanın.Arka ayağın distal kısmı bir elle nazikçe kavranır. Patella ve patella ligamentinin lateral dislokasyonunu gerçekleştirmek için pens kullanın. Eklem kapsülü boylamasına kesilmişse, dislokasyon için fazla güç gerekmemelidir; eklem kıkırdağı yüzeyinin kurumasını önlemek için cerrahinin geri kalan süresi boyunca üzerine steril salin damlatın.Şimdi, femur'un medial kondili ile tibia'nın medial platosu arasında yer alan medial menisküsü belirleyin. Gerekirse, medial menisküsün lateral tarafını tibia'nın interkondiler eminensine bağlayan menisküs tibial ligamentini açığa çıkarmak için ligamentin üzerini örten yağ yastığını kenara çekin. Arka patiyi bir elinizle nazikçe tutun.10 numara cerrahi bıçakla medial meniskal tibial ligamenti dikkatlice keserek DMM cerrahisini gerçekleştirin. Artiküler kıkırdağa veya diğer ligamentlere zarar vermediğinizden emin olun. Ardından, diz eklem kapsülünü altı adet emilebilir dikişle ve cildi altı adet ipek dikişle kapatın.Postoperatif ağrıyı en aza indirmek için, kilogram başına 10 miligram meloksikam şeklinde subkütan enjeksiyon yapın ve anestezi etkisi geçtikten sonra fareyi kafesine geri koyun. Ameliyattan birkaç hafta sonra fareyi sakrifiye edin ve 10 numara bistüri ucu ile her iki arka ekstremiteyi çıkarın. Ardından, deri ve kasları arka ekstremiteden dikkatlice diseke edin ve örneği oda sıcaklığında üç gün boyunca %4 paraformaldehitte fikse edin.Üç gün sonra, paraformaldehidi uzaklaştırın ve örnekleri üç dakika boyunca distile su ile temizleyin. Ardından, örnekleri dört derece Celsius sıcaklıkta iki hafta boyunca EDTA içerisinde dekalsifiye edin. İki haftanın ardından, örnekleri bir etanol gradyanında dehidrate edin.Son etanol çıkarıldıktan sonra, örnekleri birer saat boyunca üç ayrı Lene banyosuna yerleştirin. Ardından, örnekleri bir parafin kalıba gömün. Beş mikron kalınlığında kesitler hazırlamak için döner mikrotom kullanın ve kesitleri bir lam üzerine toplayın.Safran ve o boyamasını gerçekleştirmek için lateral kondilin merkezinden medial kondilin merkezine kadar seri sagital kesitler almaya devam edin. İlk olarak lamları üç ila beş dakika boyunca ksilen içinde deparafinize edin. Ksilen banyosunu iki kez tekrarlayın.Ardından lamları, distile su ile sona eren bir etanol gradyanında hidrate edin. Sonrasında lamları sırasıyla Weigert demir hematin çözeltisi, %0,05'lik fast green çözeltisi, %1'lik asetik asit çözeltisi ve %0,1'lik saffron ve O çözeltisine daldırın. Şimdi lamları reçineli bir ortam kullanarak kapatın ve saffron ve O ile boyanmış lamları, kıkırdaktaki kırmızı proteoglikan renginin kaybına ve kıkırdak yapısının yıkım yüzdesine göre puanlayın.Ardından O-A-R-S-I histolojik skorlama sistemini kullanarak istatistiksel analiz yapın. Bu görüntüler, yalancı operasyon veya DMM cerrahisini takiben sekiz hafta sonra, yaban tipi ve PG rrn knockout farelerde safran ve O boyamalı diz eklemlerini göstermektedir. Yalancı operasyon sonrası her iki genotipte de kıkırdakta belirgin bir dejenerasyon görülmemektedir.Buna karşın, DMM operasyonundan sekiz hafta sonra, kıkırdaktaki kırmızı rengin kaybolmasıyla gösterilen proteoglikan kaybı ve hem vahşi tip hem de PGRN nakavt farelerde kırmızı oklarla belirtilen kıkırdak yapısının yıkımı gözlemlenmiş olup, bu durum osteoartritik fenotipin başarılı bir şekilde indüklandığını göstermiştir. DMM cerrahisinin ardından, vahşi tip ve PGRN nakavt fareler arasındaki osteoartrit skorlarının karşılaştırılması, nakavt farelerde anlamlı derecede daha yüksek bir skor olduğunu ortaya koymuş ve PGRN kaybının daha şiddetli bir osteoartrit fenotipine yol açtığını kanıtlamıştır.Bu teknik, doğru şekilde uygulandığında 10 ila 15 dakika içinde tamamlanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, kütleli DMM işleminin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

establishment-surgically-induced-model-mice-to-investigate-protective

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Öncü hücrelerin osteoklastlara farklılaşması sitokinler ve büyüme faktörleri tarafından düzenlenir. Burada, osteoklastların in vivo olarak farklılaşması için yeni bir gen transfer tekniği ve sitokinlerin osteoklastogenez üzerindeki etkilerini incelemek için bir yöntem olarak öncü hücrelerin in vitro osteoklastlara farklılaşması için hücre kültürü protokolleri açıklanmaktadır.

Bir Roman In vivo Gen Transferi Tekniği ve In vitro Hücre Tabanlı Tahliller

Fare modelleri kemik dokusu mühendisliği için paha biçilmez araçlar olmasına rağmen, uzun kemik defektlerinin modelleri seyrektir. Bu ihtiyaç, düşük morbiditeye sahip tekrarlanabilir, femoral, kritik boyutlu bir defekti gerçekleştirmek ve stabilize etmek için dört vidalı bir kilitleme plakası ve özel bir aparat kullanan mevcut protokolün geliştirilmesini motive etti.

Farelerde bir Segmental Femoral Kritik boyutlu Defekt Modelinde kurulması Plaka Osteosentez tarafından Stabilize

Osteoartrit (OA), ya da dejeneratif eklem hastalığı, yalnızca kısmen kullanılabilir analjezik tarafından kontrol kalır ağrı ile ilişkili bir zayıflatıcı bir durumdur. Hayvan modelleri OA ile ilgili ağrı mekanizmalarının anlayışımızı geliştirmek için geliştirilmektedir. Burada fare OA ağrısının monoiodoacetate modeli için bir yöntem tarif eder.

Fare Osteoartrit Ağrı Monoiodoacetate Modeli

Bu protokol mekanizmaları ameliyat sonrası neuroinflammation ve davranış değişiklikleri ve doku rejenerasyonu yaşlanma sırasında çalışmaya parabiosis, birlikte çalışma için kullanılan ortopedik cerrahi bir fare modeli açıklar.

Ameliyat sonrası bilişsel işlev bozukluğu ve doku rejenerasyonu çalışmaya ortopedik cerrahi bir fare modeli

Mevcut protokol osteoartrit eşlik morfolojik eklem değişikliklerinin nicelleştirilmesi için titiz ve tekrarlanabilir bir yöntem kurar. Bu protokolün uygulanması hastalığın ilerlemesinin izlenmesi ve osteoartritte terapötik müdahalelerin değerlendirilmesinde değerli olabilir.

Cerrahi Fare Modelinde Osteoartritin Standart Histomorfometrik Değerlendirilmesi

Mevcut protokol, medial miniskotibial ligamenti keserek fare dizinin dengesini bozduktan sonra eklem kıkırdağının yüzeyindeki kontrollü mikrobıçak çiziklerini tanımlamaktadır. Bu hayvan modeli, osteofit oluşumunu, osteosklerozu ve erken evre ağrıyı incelemek için uygun hızlandırılmış bir osteoartrit (OA) formu sunar.

Hızlandırılmış Osteoartritin Medial Menisküs ve Kıkırdak Çizik Murin Modelinin Destabilizasyonu

Bu protokol, Hematoksilen-Eozin (HE) boyama ve mikro-bilgisayarlı tomografi (Mikro-BT) tekniklerini birleştirerek osteoporozun fare modelinde kemik mikromimarisinin kantitatif değerlendirilmesi için ekonomik ve etkili bir yöntem sunar.

Osteoporoz Fare Modelinde Trabeküler Kemik Mikromimarisinin Değerlendirilmesi

Burada, SKG farelerinden CD4 + T hücrelerinin evlat edinilmiş transferi yoluyla bir romatoid artrit (RA) fare modeli oluşturan, immünolojik mekanizmaları, patolojik ilerlemeyi ve RA için yeni tedavilerin geliştirilmesini araştırmak için hızlı ve güvenilir bir deneysel araç sağlayan bir protokol sunuyoruz.

Farelerde Romatoid Artritin Evlat Edinen Bir Transfer Modeli

Bu makale, panoramik görüntüleme sistemi kullanılarak Langendorff perfüze tavşan kalbinde, optik haritalama deneylerini için temel prosedürleri ve ikili (voltaj ve kalsiyum) görüntüleme yöntemidir.

Çok parametreli Langendorff perfüze Tavşan Kalp Optik Haritalama

Uzun zincirli altın Alkan tiyoller oluşan Kendinden monte mono tabakaları (SAMs), protein desen ve hücre hapsi oluşumu için iyi tanımlanmış substratları sağlar. Microcontact baskı ile dolgu takip polidimetilsiloksan (PDMS) damga kullanarak hexadecanethiol glikol-sonlandırılır Alkan tiyol monomer damgalı hexadecanethiol bölgede sadece protein ve hücreler adsorbe bir desen üretir.

Protein ve hücre Etrafının İki Boyutlu Desenli Yüzeyler Oluşturma

Keşfedin, farelerde DMM cerrahi modeli ile osteoartrit gelişimini ve progranulinin koruyucu rolünü. Histopatolojik analizler ve MANKIN skorlaması ile eklem hasarını değerlendirin.

Osteoartrit Progranulin ve koruyucu rolünü araştırmak için Farelerde bir Cerrahi kaynaklı Modeli Kurulması

Daha fazla video keşfet