Name: Yenidoğan Beyin Hasarını Takiben Çalışma ve Referans Belleğini Değerlendirmek için Sekiz Kollu Radyal Su Labirentinin Kullanımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-04T19:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: Öğrenin sekiz kollu radyal su labirenti ile çalışma ve referans belleğini aynı anda değerlendirmeyi. Bu yöntem, kara tabanlı labirentlerin sınırlamalarını aşarak hayvan modellerinde bilişsel işlevleri inceler.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, labirent üretimi konusunda yardım için William Martin ve Rhode Island College Sanat departmanına teşekkür eder. Ayrıca Rhode Island College öğrencileri Katrina Feyerherm, Molly La Rue ve Nick Lafond'a sekiz kollu su labirentinde ders çalışmaları için teşekkür ederiz. Bu çalışma, Rhode Island Idea Biyomedikal Araştırma mükemmelliği ağı (RIINBRE) ve NIH Ulusal Araştırma Kaynakları Merkezi'nden (Hibe # P20 RR16457-12) bir hibe ile desteklenmiştir. Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin Eunice Kennedy Shriver Ulusal Çocuk Sağlığı ve İnsani Gelişme Enstitüsü tarafından da R15HD077544 numaralı ödül kapsamında destek sağlandı.

Tüm prosedürler Rhode Island College Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygundur.
1. Labirent Yapılandırması
<ol>
	<li>Labirentin etrafına net, statik, göze çarpan ekstra labirent ipuçları (boyalı şekiller, mobilyalar veya diğer sabit oda özellikleri) yerleştirin. 
	Not: Labirent dışı ipuçları, deney süresince aynı konumda kalmalıdır.</li>
	<li>Radyal kol labirentinin göbeğini ve kollarını plastik bir küvete yerleştirin (Bkz. ekipman tablosuna bakınample). 
	Not: Bu protokolde kullanılan labirent, siyaha boyanmış dairesel bir paslanmaz çelik tabana yapıştırılmış sekiz merkezi desteğe bağlı sekiz çıkarılabilir paslanmaz çelik koldan oluşur (diyagram ve ilgili boyutlar için Şekil 1'e bakın). Şekil 1'de örneklendirilen plastik küvetin iç çapı 122 cm ve yüksekliği 60 cm'dir.</li>
	<li>Küveti oda sıcaklığına (22-26 °C) ısıtılmış suyla doldurun7.</li>
	<li>Platformları su yüzeyinin 1 cm altına, sekiz koldan dördünün ucuna yerleştirin. 
	Not 1: Her konu için platform konumları test süresi boyunca sabittir. Konfigürasyondan bağımsız olarak, platformların ikiden fazla bitişik kola yerleştirilmesinden kaçınmak için özen gösterilmelidir (bitişik kollarda ikiden fazla platform bulunmamalıdır). Başlangıç koluna bir platform yerleştirmeyin. 
	Not 2: Gizli platformlar, labirent arka planıyla uyum sağlamak için labirent ekiyle aynı renge boyanmalıdır.</li>
</ol>
2. Test için Konuların Aktarılması
<ol>
	<li>Denekleri, belirlenen test sırasına uygun olarak vivaryumdan test odasına aktarın. 
	Not: Hayvanlar, beklenti stresini azaltmaya yardımcı olmak ve test odası ipuçlarının görüntülenmesini önlemek için opak bir kafese yerleştirilmelidir.</li>
	<li>Test odasına girdikten sonra, grup 1'deki tüm opak kafesleri, test sırasını koruyarak bir sahneleme tezgahına veya masasına yerleştirin. 
	Not: Büyük bir çalışmada (örneğin 30 denek), denekleri test gruplarına ayırmak en iyisi olabilir (örneğin, her biri 10 denekten oluşan 3 grup). Bu, sınav odanızın büyüklüğüne ve konu aktarımının fizibilitesine bağlı olacaktır.</li>
</ol>
3. Labirent Kolu Girişlerini Kaydetmek için Dijital Tablet Protokolü
<ol>
	<li>Dijital tablette bir PDF yazıcı programı açın.</li>
	<li>Grup 1. 'daki konular için önceden kaydedilmiş tüm veri kayıt şablonlarını içe aktarın
	Not: Her kayıt şablonu önceden kaydedilmeli ve her konu için toplam dört şablon (deneme 1-4) olacak şekilde belirli konu ve deneme numaralarıyla (örn. konu 1_trial 1, konu 1_trial 2, vb.) etiketlenmelidir. Şablon, labirent ve platform konumlarının boş bir temsilinin yanı sıra konu numarasını, deneme numarasını, test gününü, kullanılan kaçış platformunu ve deneme gecikmesini kaydetmek için bir yere sahip olmalıdır (bkz. Şekil 2).</li>
	<li>İlk konunuzun ilk denemesi için şablonu açın. 
	Not: Bu sistem, tabletlere veya tablet tabanlı not alma programlarına erişimi olmayan araştırmacılar için kağıt şablonlarla da kullanılabilir.</li>
</ol>
4. Radyal Kol Su Labirenti Testi
<ol>
	<li>Hayvanlar çift olarak barındırılıyorsa, test oturumundan önce denekleri ayırın. İlk test deneğini ayrı bir opak ısıtma kafesine aktarın. 
	Not: Test denemeleri arasında vücut ısısını korumak için kafes ısıtma yastığı kullanılarak 37 °C'ye ısıtılmalıdır.</li>
	<li>Her deneğin ilk denemesinden önce, denek kimlik numarasının veri kayıt sayfasındaki denek numarasıyla eşleştiğini onaylayın ve platformların sekiz kollu su labirentinde doğru şekilde konumlandırıldığından emin olun.</li>
	<li>Nesneyi labirentin duvarına bakacak şekilde başlangıç koluna yerleştirin ve zamanlayıcıyı başlatın. 
	Not: Bu protokol, biri verileri kaydetmek ve diğeri denekleri işlemek için olmak üzere iki deneyci için tasarlanmıştır. Bu işbirliği sırasında, deneyciler arasındaki iletişim çok önemlidir. Her denemeden önce başlangıç zamanlarının, konu numaralarının ve uygun platform yerleşiminin onaylanması çok önemlidir.</li>
	<li>Her deneme sırasında işaret tutarlılığını korumak için her deneme sırasında odada belirlenmiş bir konumda sabit kalın. 
	Not: Deneyler sırasında göze çarpan gönderilen ipuçlarından (örneğin parfümler) kaçınmak için özen gösterilmeli ve deneyciler işaret tutarlılığını korumak için her gün aynı giysileri (laboratuvar önlükleri) giymelidir.</li>
	<li>Dijital tabletteki kayıt şablonunda ilgili kola bir işaret koyarak her girişi bir kola kaydedin. 
	Not: Bir deneğin omuzları kolun açılma düzlemini kırdığında bir giriş meydana gelir.</li>
	<li>Öznenin dört platformdan birini bulması için en fazla 120 saniye bekleyin. Hayvan platforma ulaştığında zamanlayıcıyı durdurun, deneme tamamlanmıştır. 
	Not: Tutarlılığı korumak için, bir deneğin ön pençeleri platformdayken hedefe ulaştığı söylenir.</li>
	<li>Denek 120 saniye içinde platformu bulamazsa, hayvanın hedef konumun farkında olduğundan emin olmak için onu dikkatlice en yakın platforma yönlendirin ve çıkarmadan önce 10 saniye platformda kalmalarına izin verin.</li>
	<li>Yalnızca birinci günde, deneğin uzamsal ipuçlarına başvurabilmesi için dört denemenin her birini takip eden 10 saniye boyunca platformda oturmasına izin verin.</li>
	<li>Deneme tamamlandıktan sonra, deneği vücudundan nazikçe kaldırarak platformdan çıkarın.</li>
	<li>90 saniyelik denemeler arası aralık için zamanlayıcıyı başlatın.</li>
	<li>Deneği, termoregülasyon pedinin üzerindeki bireysel kafese geri yerleştirin.</li>
	<li>Veri kayıt şablonunda ilgili konumu daire içine alarak kaçış için kullanılan belirli platformu kaydedin.</li>
	<li>Bu aralık sırasında, denek tarafından önceki denemede kullanılan kaçış platformunu çıkarın.</li>
	<li>Bir sonraki deneme için şablonu açın ve denek tarafından kaçış için kullanılan ve bu nedenle önceki denemeler sırasında kaldırılan tüm platformları bir X. ile işaretleyin
	Not: Bir sonraki denemeden önce tüm eksik platformları işaretlemek, hata türlerini tanımlamak için kritik öneme sahiptir (örneğin, referans belleği ve/veya doğru çalışma belleği).</li>
	<li>Sonraki bir denemeye başlamadan önce konu numarasını, deneme numarasını ve kalan platform konumlarını onaylayın.</li>
	<li>90 saniyelik denemeler arası aralık geçtikten sonra, deneği labirentin duvarına bakacak şekilde başlangıç koluna yerleştirin ve bir sonraki deneme için zamanlayıcıyı başlatın.</li>
	<li>Bu işlemi 2-4 numaralı denemeler için tekrarlayın, her denemeden sonra ulaşılan kaçış platformunu çıkarın ve her deneme sırasında ve sonrasında şablonu uygun şekilde işaretleyin (yani, çıkarılan platformların üzerine X ve yerleştirin, girilen kolları belirtin ve kaçış için kullanılan platformu daire içine alın).</li>
	<li>Bir denek için dört denemenin tümü tamamlandıktan sonra, kaçış platformlarını labirentin uygun kollarına geri yerleştirin ve test sürecini bir sonraki denek için tekrarlayın (test adımları 4.1-4.17).</li>
	<li>Grup 1 için test tamamlandıktan sonra, veri kayıt sayfalarını o test günü için (örn. Gün 1) bir klasöre aktarın ve bir dosya depolama sistemine kaydedin. 
	Not: Veri kaybı olasılığını en aza indirmek için veri kayıt sayfaları, bir sonraki test grubuna başlamadan önce dışa aktarılmalıdır.</li>
	<li>Her grup için tekrarlayın (test adımları 2.1-4.19).</li>
</ol>
5. Bağımlı Değişkenler
<ol>
	<li>Her deneme için, daha önce bir platforma sahip olan herhangi bir kola ilk ve tekrar girişlerinin sayısını sayın. Bu, veri kayıt sayfasında platform üzerinde bir X ile gösterilecektir. Bunlar çalışma belleği düzeltme hatalarıdır. 
	Not: Çalışma belleği düzeltme hataları, kaçış için zaten kullanılmış olan bir platformun konumunu hatırlamaya ve o koldan kaçınmaya bağlı olduğundan, ilk denemede çalışan bellek düzeltme hatası alamazsınız.</li>
	<li>Her deneme için, veri kayıt sayfasından hiçbir zaman bir platform içermeyen herhangi bir kola yapılan ilk girişlerin sayısını sayın. Bunlar referans belleği hatalarıdır.</li>
	<li>Her deneme için, veri kayıt sayfasından hiçbir zaman bir platform içermeyen herhangi bir kola tekrar girişlerinin sayısını sayın. Bunlar çalışma belleği yanlış hatalarıdır.</li>
	<li>Her deneme için platforma ulaşmak için gecikme süresini kaydedin.</li>
</ol>

<ol><li>Bunge, S. A., Ochsner, K. N., Desmond, J. E., Clover, G. H., Gabrieli, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prefrontal+regions+involved+in+keeping+information+in+and+out+of+mind%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prefrontal regions involved in keeping information in and out of mind.</a> Brain. 124 (Pt 10), 2074-2086 (2001).</li>
<li>Olton, D., Collison, C., Werz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+memory+and+radial-arm+maze+performance+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Learn+Motiv%22%5BJournal%5D)">Spatial memory and radial-arm maze performance of rats.</a> Learn Motiv. 8, 289-314 (1977).</li>
<li>Olton, D., Becker, J., Handelmann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampus%2C+space%2C+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Sci%22%5BJournal%5D)">Hippocampus, space, and memory.</a> Behav. Brain Sci. 2, 313-365 (1979).</li>
<li>Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+of+a+water-maze+procedure+for+studying+spatial+learning+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat.</a> J. Neurosci. Methods. 11 (1), 47-60 (1984).</li>
<li>Hyde, L. A., Hoplight, B. J., Denenberg, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+version+of+the+radial-arm+maze%3A+learning+in+three+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Water version of the radial-arm maze: learning in three inbred strains of mice.</a> Brain Res. 785 (2), 236-244 (1998).</li>
<li>Hyde, L. A., Sherman, G. F., Hoplight, B. J., Denenberg, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Working+memory+deficits+in+BXSB+mice+with+neocortical+ectopias%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Working memory deficits in BXSB mice with neocortical ectopias.</a> Physiol. Behav. 70 (1-2), 1-5 (2000).</li>
<li>Hyde, H. A., Hoplight, L. A., Denenberg, B. J., H, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+two+species%2C+females+exhibit+superior+working+memory+and+inferior+reference+memory+on+the+water+radial-arm+maze%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">In two species, females exhibit superior working memory and inferior reference memory on the water radial-arm maze.</a> Physiol. Behav. 70 (3-4), 311-317 (2000).</li>
<li>Fitch, R. H., Breslawski, H., Rosen, G. D., Chrobak, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+spatial+working+memory+deficits+in+rats+with+bilateral+cortical+microgyria%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Funct%22%5BJournal%5D)">Persistent spatial working memory deficits in rats with bilateral cortical microgyria.</a> Behav. Brain Funct. 4, 45(2008).</li>
<li>Szalkowski, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+spatial+working+memory+deficits+in+rats+following+in+utero+RNAi+of+Dyx1c1%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Persistent spatial working memory deficits in rats following in utero RNAi of Dyx1c1.</a> Genes Brain Behav. 10 (2), 244-252 (2011).</li>
<li>Conklin, H. M., Salorio, C. F., Slomine, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Working+memory+performance+following+pediatric+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Inj%22%5BJournal%5D)">Working memory performance following pediatric traumatic brain injury.</a> Brain Inj. 22 (11), 847-857 (2008).</li>
<li>Luu, T. M., Ment, L., Allan, W., Schneider, K., Vohr, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Executive+and+memory+function+in+adolescents+born+very+preterm%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Executive and memory function in adolescents born very preterm.</a> Pediatrics. 127, 639-648 (2011).</li>
<li>McClure, M. M., Threlkeld, S. W., Fitch, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+processing+and+learning%2Fmemory+following+erythropoietin+administration+in+neonatally+hypoxic-ischemic+injured+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Auditory processing and learning/memory following erythropoietin administration in neonatally hypoxic-ischemic injured rats.</a> Brain Res. 1132 (1), 203-209 (2006).</li>
<li>McClure, M. M., Thrlekeld, S. W., Fitch, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+erythropoietin+on+auditory+processing+following+neonatal+hypoxic-ischemic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The effects of erythropoietin on auditory processing following neonatal hypoxic-ischemic injury.</a> Brain Res. 1132 (1), 203-209 (2007).</li>
<li>LaPrairie, J. L., Murphy, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+impact+of+neonatal+injury+in+male+and+female+rats%3A+Sex+differences%2C+mechanisms+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Neuroendocrinol%22%5BJournal%5D)">Long-term impact of neonatal injury in male and female rats: Sex differences, mechanisms and clinical implications.</a> Front. Neuroendocrinol. 31 (2), 193-202 (2010).</li>
<li>Volpe, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+brain+injury%3A+from+pathogenesis+to+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Ment.+Retard.+Dev.+Disabil.+Res.+Rev%22%5BJournal%5D)">Perinatal brain injury: from pathogenesis to neuroprotection.</a> Ment. Retard. Dev. Disabil. Res. Rev. 7, 56-64 (2001).</li>
<li>Vannucci, R. C., Vannucci, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+perinatal+hypoxic-ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.+Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">A model of perinatal hypoxic-ischemic brain damage.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 835, 234-249 (1997).</li>
<li>McClure, M. M., Peiffer, A. M., Rosen, G. D., Fitch, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Auditory+processing+deficits+in+rats+with+neonatal+hypoxic-ischemic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Auditory processing deficits in rats with neonatal hypoxic-ischemic injury.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 23 (4), 351-362 (2005).</li>
<li>Jarrard, L., Okaichi, H., Steward, O., Goldschmidt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+hippocampal+connections+in+the+performance+of+place+and+cue+tasks%3A+comparisons+with+damage+to+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">On the role of hippocampal connections in the performance of place and cue tasks: comparisons with damage to the hippocampus.</a> Behav. Neurosci. 98, 946-954 (1984).</li>
<li>Bimonte-Nelson, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testosterone%2C+but+not+nonaromatizable+dihydrotestosterone%2C+improves+working+memory+and+alters+nerve+growth+factor+levels+in+aged+male+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurology%22%5BJournal%5D)">Testosterone, but not nonaromatizable dihydrotestosterone, improves working memory and alters nerve growth factor levels in aged male rats.</a> Exp. Neurology. 181, 301-312 (2003).</li>
<li>Acosta, J. I., Hiroi, R., Camp, B. W., Talboom, J. S., Bimonte-Nelson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+the+cognitive+impact+of+clinically-used+hormone+therapies+in+the+female+rat%3A+Models%2C+mazes+and+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">An update on the cognitive impact of clinically-used hormone therapies in the female rat: Models, mazes and mechanisms.</a> Brain Res. 13 (1514), 18-39 (2013).</li>
<li>O'Keefe, J., Nadel, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aO%27Keefe%2C+J+%22The+hippocampus+as+a+cognitive+map%22">The hippocampus as a cognitive map</a>. , Clarendon Press. Oxford, England. (1978).</li>
<li>Whishaw, I. Q., Pasztor, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rats+alternate+on+a+dry-land+but+not+swimming-pool+%28Morris+task%29+place+task%3A+implications+for+spatial+processing%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rats alternate on a dry-land but not swimming-pool (Morris task) place task: implications for spatial processing.</a> Behav. Neurosci. 114 (2), 442-446 (2000).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden herhangi bir mali çıkarları olmadığını beyan ederler.

Sekiz kollu radyal su labirenti paradigması, yenidoğan beyin hasarı olan ve olmayan sıçanlarda çalışma ve referans bellek performansını değerlendirmek için laboratuvarımızda ve başkaları tarafından başarıyla kullanılmıştır5-7,18-20. Mevcut paradigmada, her denemeden sonra bir kaçış platformunun kaldırılması, sonraki denemelerde çalışma belleği talebini artırır (deneklerin daha az kaçış seçeneği vardır). Bu nedenle, dördüncü denemede yalnızca bir platform kalır ve çalışma belleği talebi en yüksek seviyededir, b...

Çalışma belleği (WM), hedefe yönelik davranış1 sırasında nesnelerin veya yerlerin temsili için gerekli olan kritik bir bilişsel alana karşılık gelir. Alternatif olarak, bu nesnelerin veya yerlerin geçici olarak kararlı temsilleri için referans belleği (RM) gereklidir. Çalışma ve referans hafızası, kemirgenlerde kara tabanlı radyal kol labirent paradigmaları2,3 kullanılarak uzun süredir değerlendirilmektedir. Bununla birlikte, sıçanlar kendiliğinden labirent koşusuna yatkın olmadığından, bu görevler sıklıkla ön eğitim gerektirir. Bu, bir deneyi tamamlamak için gereken süreyi önemli ölçüde artırabilir ve zamana duyarlı uzunlamasına tasarımlara müdahale edebilir. Kara tabanlı sekiz kollu labirentin diğer sınırlamaları arasında, yiyecek yoksunluğu gereksinimleri ve her denemeden sonra labirentte bırakılan koku ipuçlarındaki değişiklikleri kontrol etme zorluğu yer alır. Bu sınırlamaların çoğu, Morris su labirenti paradigması4 kullanılarak aşılmıştır, ancak tarihsel olarak bu tasarımlar referans belleği ve uzamsal öğrenmeyi test etmekle sınırlı kalmıştır (istisna5-9). Sekiz kollu radyal su labirenti, sıçanlarda vefarelerde 5-7 arasında hem referans hem de çalışma belleğini değerlendirmek için kullanılan sekiz kollu radyal kara labirentinin değiştirilmiş bir versiyonudur. Geleneksel kara tabanlı labirentlerin aksine, sekiz kollu radyal su labirenti yiyecek yoksunluğu gerektirmez, olası kafa karıştırıcı koku ipuçlarını en aza indirir ve deneklerin kaçış motivasyonunu, ön eğitime gerek kalmadan aynı anda çalışma ve referans öğrenme ve hafızayı değerlendirmek için etkili bir araç olarak kullanır5-7.
Bu paradigma için bir uygulama, yenidoğan beyin hasarını takiben çalışma belleği açıklarını test etmektir. İnsanlarda yapılan araştırmalar, beyin hasarı riski taşıyan erken doğmuş bebeklerin daha sonraki yaşamlarında çalışma belleği eksiklikleri sergilediğini göstermiştir10,11. Yenidoğan beyin hasarı, doğum sonrası gelişimin erken dönemlerinde hipoksi / iskemi (HI) indükleyerek kemirgenlerde modellenebilir12-15. Daha da önemlisi, risk altındaki bebeklerde bulunan uzamsal öğrenme ve çalışma belleği eksiklikleri, radyal kol su labirenti kullanan kemirgenlerde paraleldir ve bu da onu bu tür bozuklukların incelenmesi için sağlam bir model haline getirir8,9. Sekiz kollu radyal su labirenti aynı zamanda referans ve çalışma belleğinin aynı anda ölçülmesine izin verir, bu da onu zamana duyarlı modellerde (yani ayrık gelişimsel dullar sırasında) beyin hasarlı ve yaralanmamış deneklerin karşılaştırılması veya karşı dengeli uzunlamasına tasarımlar için ideal hale getirir.
Bu protokolde, sekiz kollu radyal su labirenti kullanan test prosedürlerini (bkz. Şekil 1) ve neonatal hipoksik-iskemik hasarı olan ve olmayan sıçanlar için örnek verileri açıklıyoruz. Hipoksi-iskemi (HI), sağ ana karotis arterin koterizasyonunu ve 120 dakika% 8 oksijen maruziyetini takiben doğum sonrası 7. günde indüklendi. Bu cerrahi prosedür, prematürite ve neonatal beyin hasarı patolojisini modellemek için yaygın olarak kullanılmaktadır (ayrıntılar için bkz.12,13,16,17). Radyal kol su labirenti paradigmasının, yenidoğan HI yaralanmasını takiben referans bellek ve çalışma belleği yeteneklerindeki eksiklikleri ortaya çıkardığını gösterdik. Mevcut protokolde, referans hafızası, sekiz kollu radyal su labirentinin dört özel kolu kullanılarak değerlendirilir ve bunlar test boyunca ekstra labirent ipuçlarına sabit kalır. Bu kollar hiçbir zaman bir kaçış platformu içermez, bu nedenle, bu kollara yapılan denek girişleri, zayıf referans bellek performansını ve uzun süreli öğrenmedeki eksiklikleri yansıtır. Kalan dört kolun tümü günün başında kaçış platformları içerir, ancak hayvan başarılı bir şekilde bir kola girip sudan5-7 kaçtığında her platform çıkarılır. Bu, hayvanın art arda dört deneme boyunca hangi kollara girdiğini hatırlamasını gerektirir ve her ek platform çıkarıldıkça çalışma belleği talebini artırır. Çalışma belleği, aynı test günü içinde daha önce kaçış için kullanılan kollara yeniden girişler veya referans hafıza kollarına yeniden girişler incelenerek değerlendirilir. Ek olarak, bu tasarım, hipokampal bağımlı uzamsal öğrenmeyi yansıtan kaçış platformlarını bulmak için ekstra labirent ipuçlarını kullanır. Çalışma ve referans belleği hatalarını değerlendirmek için kullanılan bu yöntem ilk olarak Jarrard ve arkadaşları tarafından kullanılmıştır.18 ve o zamandan beri yaşlanma ile ilgili nörolojik bozuklukların, öğrenme güçlüğünün ve hormonal manipülasyonların ardından kemirgen modellerini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır5,6,7,19,20.
Bu paradigmanın birincil amacı, referans ve çalışma belleğini değerlendirmektir, bu nedenle, sekiz kollu radyal su labirenti tasarımı, gelişimsel beyin hasarına bağlı eksiklikleri test etmek için sınırlandırılmamalıdır. Bunun yerine, bu paradigmayı kullanan önceki çalışmalar, birçok deneysel bağlamda öğrenme ve hafıza patolojisini değerlendirmek için çeşitli kemirgen modellerinin değerlendirilebileceğini göstermektedir5,6,7,18,19,20.

<table><tbody><tr><td>ARM-19455</td> http://www.gototanks.com <td>Plastik Küvet</td><td>Gototankları</td><td>Boyut, test edilen türe veya bireysel laboratuvar gereksinimlerine bağlı olarak değişebilir.</td></tr><tr><td>iPad veya diğer dijital tablet</td><td>Apple Inc.</td><td>Yok</td><td>http://www.apple.com</td></tr><tr><td>Kayda değerlik veya diğer not alma uygulaması</td><td>Gingerlabs</td><td>N/A</td><td> http://www.gingerlabs.com Dijital pdf yazıcı veya not alma programı </td></tr><tr><td>Dijital zamanlayıcı</td><td>Herhangi bir</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>Deltafaz izotermal ısıtma yastığı</td><td>Braintree Scientific</td><td>ASS7D</td><td>http://www.braintreesci.com/</td></tr> <tr><td>Paslanmaz çelik labirent</td><td>Evde imal N</td><td>/ A</td><td></td></tr></tbody></table>

yenidoğan beyin hasarını takiben Çalışma ve referans belleğini değerlendirmek için sekiz kollu radyal su labirentinin kullanımı

Use of an Eight-arm Radial Water Maze to Assess Working and Reference Memory Following Neonatal Brain Injury

Çalışma ve referans belleği genellikle kara tabanlı radyal kol labirenti kullanılarak değerlendirilir. Bununla birlikte, bu paradigma ön eğitim, yiyecek yoksunluğu gerektirir ve koku ipucu karışıklıklarına neden olabilir. Sekiz kollu radyal su labirenti, deneklerin kaçış platformlarını bulmak için ekstra labirent ipuçlarını kullanmalarını gerektirerek referans ve çalışma belleği performansını aynı anda değerlendirmek için tasarlanmıştır ve kara tabanlı radyal kol labirent tasarımlarında gözlemlenen sınırlamaları giderir. Özellikle, deneklerin her test günü boyunca daha önce kaçış için kullanılan kollardan (çalışma belleği) kaçınmaları ve hiçbir zaman kaçış platformları içermeyen sabit kollardan (referans belleği) kaçınmaları gerekir. Bir test oturumu sırasında kaçış için zaten kullanılmış olan kollara yeniden girişler (ve böylece kaçış platformu kaldırılmıştır) ve referans hafıza kollarına yeniden girişler, çalışma belleği eksikliklerinin göstergesidir. Alternatif olarak, referans bellek kollarına ilk girişler, referans bellek açıklarının göstergesidir. Bu labirenti, hipoksi-iskemi indüksiyonunu takiben yenidoğan beyin hasarı ve sahte kontroller ile sıçanların performansını karşılaştırmak için kullandık ve on bir günlük testten sonra hem çalışma hem de referans hafızasında önemli eksiklikler gösterdik. Bu protokol, diğer birçok öğrenme bozukluğu modelini incelemek için kolayca değiştirilebilir.

Laboratuvarımızdan elde edilen örnek veriler, testlerin on birinci gününde HI hayvanlarının sham grubuna kıyasla anlamlı derecede daha fazla çalışma belleği hatalı yanlışı yaptığını göstermektedir (t = 2.124, p&lt;0.05, (bakınız Şekil 3A)). HI hayvanları ayrıca, testlerin on birinci gününe gelindiğinde sham deneklerine kıyasla anlamlı derecede daha fazla referans belleği hatası göstermiştir (t = 2.303, p&lt;0.05, (bakınız Şekil 3B)). Çalışma belleği hatalı yanlışları ve referans hataları...

Sekiz kollu radyal su labirenti, deneklerin kaçış platformlarını bulmak için ekstra labirent ipuçlarını kullanmalarını gerektirerek referans ve çalışma belleği performansını aynı anda değerlendirmek ve kara tabanlı radyal kol labirent tasarımlarında gözlemlenen sınırlamaları gidermek için tasarlanmıştır.

Yenidoğan Beyin Hasarını Takiben Çalışma ve Referans Belleğini Değerlendirmek için Sekiz Kollu Radyal Su Labirentinin Kullanımı

Working and reference memory are commonly assessed using the land based radial arm maze.&#160;However, this paradigm requires pretraining, food ...

Bu prosedürün genel amacı, kara tabanlı labirentlerde yaygın olan kısıtlamalar olmaksızın, çalışma ve referans belleğini eş zamanlı olarak nicelendirmektir. Başlangıçta, bir hayvan su labirentinin başlangıç koluna yerleştirilir ve gizli bir platformu bulmasına izin verilir. Her bir kola girişlerin yanı sıra, kaçış için kullanılan platformun konumu da kaydedilir.Ardından, hayvanın kullandığı kaçış platformu kaldırılır ve prosedür üç deneme daha tekrarlanır. Son adımda, girişler çalışma belleği, düzeltilmiş hatalar, referans bellek hataları veya çalışma belleği yanlış hataları olarak kodlanır.Nihayetinde, sekiz kollu radyal su labirenti, birden fazla hayvan modelinde çalışma ve referans belleğini değerlendirmek için kullanılabilir. Bu tekniğin Morris su labirenti gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, deneycinin hem çalışma hem de referans belleğini eş zamanlı olarak değerlendirmesine olanak tanımasıdır. Radyal labirent, dairesel bir tabana bağlı sekiz paslanmaz çelik koldan oluşur.Oda sıcaklığındaki su ile doldurulmuş bir küvete yerleştirilir. Gizli platformlar su yüzeyinin bir santimetre altına yerleştirilir. Kolların dördünde iki deneyci gereklidir.Bir kişi verileri kaydetmek, diğeri ise deneklerle ilgilenmekle görevlidir. Bu iş birliği sırasında, deneyciler arasındaki iletişim büyük önem taşır. Her deneme öncesinde başlangıç zamanlarının, denek numaralarının ve platformun doğru yerleştirildiğinin onaylanması esastır.Mısır labirenti kayıtları için dijital bir tablet kullanılır. Bir PDF yazıcı programı açın ve birinci gruptaki denekler için önceden kaydedilmiş tüm veri kayıt şablonlarını içeri aktarın. Şablon; labirentin ve platform konumlarının boş bir gösteriminin yanı sıra denek numarasının, deneme numarasının, test gününün, kullanılan kaçış platformunun ve deneme gecikme süresinin kaydedileceği bir alana sahip olmalıdır.Başlamak için, ilk denek ayrı bir ısıtılmış kafese aktarın. Ardından, platformların sekiz kollu su labirentinde doğru şekilde konumlandırıldığını doğrulayın. Denek tanımlama numarasını kontrol ettikten sonra, deneği labirentin duvarına bakacak şekilde başlangıç koluna yerleştirin ve zamanlayıcıyı başlatın.Genel tutarlılığı korumak için her deneme sırasında belirlenmiş bir pozisyonda hareketsiz kalmak önemlidir. İlgili kola bir işaret koyarak test kayıt girişlerini yapın. Kayıt şablonunda, bu işlem bir giriş olarak sayılır.Deneğin omuzları kolun başlangıç düzleminden geçtiğinde, deneğin dört platformdan birini bulması için maksimum 120 saniye süre tanıyın. Hayvan platforma ulaştığında, denemeyi tamamlamak için zamanlayıcıyı durdurun. Platforma ulaşma süresini (latans) kaydedin.Tutarlılığı sağlamak amacıyla, her deneme için deneğin ön patileri platform üzerindeyken hedefe ulaştığı kabul edilir. Testin ilk gününde, deneğin mekansal ipuçlarını referans alabilmesi için dört denemenin tamamında platform üzerinde 10 saniye boyunca beklemesine izin verin.Denek 120 saniye içerisinde platformu bulamazsa, onu dikkatlice en yakın platforma yönlendirin ve 10 saniye boyunca platformda kalmasına izin verin. Deneme tamamlandıktan sonra, deneği gövdesinden nazikçe kaldırarak platformdan çıkarın. 92. denemeler arası aralık için zamanlayıcıyı başlatın.Hipotermiyi önlemek için deneyi havluyla kurulayın. Deneyi, termoregülasyon pedinin üzerindeki bireysel kafese geri yerleştirin. Veri kayıt şablonunda ilgili konumu daire içine alarak, kaçış için kullanılan spesifik platformu kaydedin.Denemeler arası ara sürede, deneğin önceki denemede kullandığı kaçış platformunu çıkarın. Bir sonraki deneme için şablonu açın ve deneğin kaçış için kullandığı ve bu nedenle önceki denemeler sırasında çıkarılmış olan tüm platformları x ile işaretleyin. Ardından, bir sonraki deneme için platformların yerleşimini onaylayın.Hazır olduğunda, denek labirentin duvarına bakacak şekilde başlangıç koluna yerleştirin ve zamanlayıcıyı başlatın. Bu işlemi toplam dört deneme için tekrarlayın. Her denemeden sonra ulaşılan kaçış platformunu kaldırın ve her deneme sırasında ve sonrasında şablonu uygun şekilde işaretleyin.İşlem tamamlandığında, kaçış platformlarını labirentin uygun kollarına geri yerleştirin ve test sürecini bir sonraki denek için tekrarlayın. Birinci grup için testler tamamlandığında, veri kayıt sayfalarını o test gününe ait bir klasöre aktarın ve gelecekteki analizler için kaydedin. Her deneme için, daha önce platform bulunduran herhangi bir kola yapılan ilk ve tekrarlayan girişlerin sayısını belirleyin.Bunlar çalışma belleği yanlış cevaplarıdır. Referans bellek hataları, platform içermeyen herhangi bir kola yapılan ilk girişlerin sayısı olarak sayılır. Platform içermeyen herhangi bir kola yapılan tekrarlı girişlerin sayısı ise çalışma belleği yanlış cevaplarıdır. Sekiz kollu radyal su labirenti kullanılarak yapılan çalışmada, neonatal hipoksik iskemik beyin hasarı olan kemirgenlerde yanlış cevap sayısında anlamlı bir artış olduğu ortaya konulmuştur.Beyin hasarlı hayvanlarda referans bellek hataları, kontrol hayvanlarına kıyasla artış göstermiştir. Bu prosedür uygulanırken, deneysel manipülasyonlara tabi tutulan hayvanların görev yetkinliği kazanmaları için daha fazla zamana ihtiyaç duyabilecekleri unutulmamalıdır. Bu durum, suyla kaçışın bir motivasyon kaynağı olduğu göz önüne alındığında, sıçanların doğal olarak platform koluna dönme eğilimi nedeniyle özellikle çalışma belleği hataları için geçerlidir.

use-an-eight-arm-radial-water-maze-to-assess-working-reference-memory

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Neonatal Beyin Hasarı Sonrası Çalışan ve Referans Belleği Değerlendirmek için Sekiz Kollu Radyal Su Labirentinin Kullanımı

Beyin tümörlerinin radyoterapi yönetimi kaynaklanan bilişsel bozukluk yaşam kalitesini olumsuz etkileyen bir klinik inatçı bir durumu temsil eder. Eleştirel radyasyona bağlı bilişsel azaltır iyileştirmede için potansiyel müdahaleleri değerlendirmek için yeteneği sonuçta biliş sıkı kantitatif değerlendirmeler taahhüt yeteneğine bağlıdır.

Kranial Radyoterapi Yarattığı Bilişsel Azaltır nicel

Bu makale, farelerde öğrenme ve hafıza işlevleri değerlendirmek için bir değiştirilmiş otomatik bir aparat kullanılarak T-labirent test protokolü sunar.

T-labirent Zorla Değişim ve Çalışma ve Fareler Referans Bellek değerlendirilmesi için sağ-sol Ayrımcılık Görevler

Bu videoda, kemirgenlerde çalışma belleğini incelemek için kullanılan bir navigasyon görevi olan platform yer değiştirme ile Morris su labirenti testini açıklıyoruz.

Platform Yer Değiştirmeli Su Labirenti: Çalışma Belleğini Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Bu protokolün amacı kemirgenlerde uzamsal bilişi araştırmaktır. Çift H su labirenti, öğrenme, pekiştirme ve hafızanın farklı bileşenlerinin yanı sıra hafıza sistemlerinin etkileşimini aydınlatmak için özellikle yararlı olan yeni bir testtir.

Çift H Maze: Kemirgenler A Sağlam Davranış Öğrenme için test ve Hafıza

yeni modelde ortak morbid Alzheimer hastalığı (AH) ve inme durumunu araştırmak, üç davranış görevleri motor kontrolü ve bilişsel davranışları hem değerlendirmelerini tarif edilmiştir. Bu görevler ışın yürüme görevi, silindir görev ve Morris su labirenti içerir.

İnme ile Alzheimer Hastalığının bir Transgenik Fare Modelinde Motor ve Hipokampal Bağımlı Mekansal Öğrenme ve Referans Hafıza Değerlendirme

Burada, yüzmeye ihtiyaç duymayan bilişe ait fare-spesifik bir test için bir protokol sunuyoruz. Bu test kontrollü kortikal darbe kaynaklı travmatik beyin hasarı farelerini sahte kontrollerden başarılı bir şekilde ayırt etmek için kullanılabilir.

Radyal bir Su Basamalı Labirent Kullanarak Travmatik Beyin Hasarı Fare Modelinde Mekansal Bellek Bozukluğunu Değerlendirme

Bu iletişim kuralı fonksiyonel öğrenme/bellekte boğulma serebral iskemi kalp krizi kaynaklı değerlendirmek için değiştirilmiş bir T-maze açıklar.

Kardiyak Arrest sonra işlevsel hafıza sonuçları değerlendirmek için değiştirilmiş T-Maze kullanan

Travmatik beyin hasarı (TBI) genellikle hafıza bozukluğu ile ilişkilidir. Burada, TBI'dan sonra mekansal çalışma belleğini bir metrik görev aracılığıyla değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz. Metrik test, TBI'dan sonra mekansal çalışma belleği bozukluğunu incelemek için yararlı bir araçtır.

Travmatik Beyin Hasarından Sonra Yetişkin Sıçanlarda Mekansal Çalışma Belleğini Değerlendirmek için Bir Metrik Test

Kemirgenler için yapılan davranış deneylerinin çoğu başlangıçta fareler için tasarlanmıştır. Sıçanlar ve fareler arasındaki davranışsal farklılıklar nedeniyle, bazen fareler için modifikasyonlar gerekebilir. Farelerde uzamsal çalışma belleğini test etmek için bir yöntem sunuyoruz ve çalışma belleği görevi sırasındaki stresi en aza indiriyoruz.

Yarı otomatik 8 kollu radyal labirentte fareler için iştah açıcı bir uzamsal çalışma belleği görevi, labirentteki korkulu hafıza ilişkisini azaltır

Farelerde Su Maze Testleri Sığ Su (kürek çekmeye) Türevleri

Öğrenin sekiz kollu radyal su labirenti ile çalışma ve referans belleğini aynı anda değerlendirmeyi. Bu yöntem, kara tabanlı labirentlerin sınırlamalarını aşarak hayvan modellerinde bilişsel işlevleri inceler.

Yenidoğan Beyin Hasarını Takiben Çalışma ve Referans Belleğini Değerlendirmek için Sekiz Kollu Radyal Su Labirentinin Kullanımı

Daha fazla video keşfet