Name: Parkinson Hastalığında Maskeyi Düşürme Duyarlılık Mekanizmalarına Gen-Çevre Etkileşim Modelleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-07T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: Keşfedin lipoksijenaz izozimlerinin Parkinson hastalığında nigrostriatal dejenerasyondaki rolünü. MPTP nörotoksin modeli kullanılarak LOX eksikliğinin dopaminerjik bütünlük üzerindeki etkileri değerlendirilmiştir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri NIGMS 056062 tarafından finanse edildi.

Açıklayacak bir şey yok.

Bu gen-çevre etkileşimi çalışmasının tasarımı, nigrostriatal yoldaki 5-LOX izoziminin çift doğası hakkında yeni bilgiler edinmemizi sağladı. 5-LOX izozim ve wildtype çöp arkadaşlarından yoksun transgeniklerde salin veya MPTP tedavisinden sonra striatal monoaminleri ölçmek için HPLC yaparak, eksikliğinin toksik koşullar altında koruyucu göründüğünü not edebildik (Şekil 1), ancak normal koşullarda enzim eksikliği striatal dopamin seviyelerini azaltır ve zararlı olabilir. Böylece, 5-LOX izozim normal koşull...

Gen-çevre etkileşim modellerinin kullanımı, idiyopatik Parkinson hastalığını (PD) etkilemesi muhtemel risk faktörlerini taklit etmek için bir yaklaşım sağlar ve sadece genetik veya toksik bir sistemin kullanılmasıyla aydınlatılması muhtemel olmayan mekanistik içgörüleri ayırt etme fırsatı sunar1,2. Burada bu noktayı göstermektedir ve lipoksijenaz (LOX) izozim aktivitesinin nöroinflamasyon ve toksisite üzerindeki seçiciliğini daha iyi anlamak için nigrostriatal dejenerasyon3'ün 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidromiridin (MPTP) fare modelinin uygulanmasını açıklıyoruz4. LOX izozimler için bir rol periferik bozukluklarda5,6 ve inme 7 ve Alzheimer hastalığı8,9 dahil olmak üzere CNS hastalığında yaygın olarak değerlendirilmiş olsa da, izozim ailesinin PD ile ilgili nigrostriatal fonksiyon ve dejenerasyondaki rolü iyi anlaşılmamıştır ve çalışmayı garanti eder. MPTP nörotoksin, nigrostriatal yolun tercihli dejenerasyonunu gösterir ve PD hastalarında motorik bozuklukların altında yatan striatal dopamin tükenmesi ve nigral dopaminerjik hücre kaybını rekapitulate eder10. Bu model, nonmotor ve motor PD davranışlarının tam kadrosunu ve frank α-sinüklein pozitif Lewy vücut patolojisini yeniden üretmese de, nigrostriatal hasara katkıda bulunan yeni mekanistik hedeflerin aydınlatılmış olması ve erken aşama çevirisel testler için yararlı olmuştur, çünkü striatal dopamin kaybı11-15eşliğinde nigral hücre ölümünü güvenilir bir şekilde üretmek için mevcut en iyi karakterize noninvaziv modeldir. MPTP farenin geniş kullanımı, akut, subakuttan kronik16-18'ekadar değişen paradigmalarla, tedavi rejimine bağlı olarak farklı toksisite mekanizmalarının aktivasyonu ilehafif ila şiddetli nigrostriatal hasara neden olacak şekilde standartlaştırmaya izin verdi18,21,22. Sonuç olarak, bu,23-25kullanılan terapötik ajana veya transgenik modele bağlı olarak gelişmiş veya azaltılmış nigrostriatal yaralanmaya neden olabilecek bir 'lezyon penceresinin' hedef alınmasına izin veriyor.
Çeviri ve keşif biyolojisi çalışmaları için de gerekli olan, hasarı değerlendirmek için kullanılan teknikler ve bu tür yöntemlerin sağladığı kanıtlardır. MPTP fare modeli için, Lezyonu değerlendirmek için belirlenen metrikler, HPLC tarafından dopamin ve metabolitleri de dahil olmak üzere striatal dopaminerjik ton belirteçlerinin ölçümü ve tirozin hidroksilazının (TH) Batı blot analizi, dopamin sentezinde hız sınırlayıcı enzim ve Batı blot analizi ve immünostokimya kullanılarak glial aktivasyon gibi dejeneratif olaylarıngöstergeleridir 4. Bunlar klasik nörokimyasal, biyokimyasal ve histolojik prosedürler olmasına rağmen, teknikler nigrostriatal dopaminerjik yol içindeki hasarın boyutu hakkında kritik ve tekrarlanabilir okumalar sağlar, toksisite mekanizmalarını gösterir ve PD'deki dejeneratif olayları anlamada değerli araçlar olduğu kanıtlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>1-Metil-4-fenil-1,2,3,6-tetra-hidropiridin hidroklorür (MPTP-HCL)</td> <td>PD modellemesi için</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>M0896</td></tr><tr><td>% 4 Formaldehit (paraformaldehit) çözeltisi, fosfat tamponlu (PFA)</td> daldırma <td>fiksasyonu için</td> <td>American MasterTech Scientific</td><td>BUP0157</td></tr><tr><td>Perklorik asit ACS reaktifi,% 70 (PCA)</td> <td>HPLC asit ekstraksiyonu</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>için Sigma-Aldrich 244252Doku</td><td>homojenizasyonu için</td>Tris Base <td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td></tr><tr><td>Etilendiaminotetraasetik asit disodyum tuzu dihidrat (EDTA)</td> <td>Doku homojenizasyonu için</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td></tr><tr><td>Proteaz inhibitörü kokteyli</td><td>Doku homojenizasyonu için</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8340</td></tr><tr><td>Doku homojenizasyonu için</td> <td>fosfataz inhibitör kokteyli</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5726</td></tr><tr><td>Lowry protein tahlili için</td> <td>Sodyum Hidroksit (NaOH)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S5881</td></tr><tr><td>Sükroz, moleküler biyoloji ve ge; %99,5 (GC)&nbsp;</td><td>Kriyoproteksiyon için</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su, toz, pH 7.4 (0.01 M PBS için)</td> <td>IHC BCA</td>Protein Test Kiti için <td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813</td></tr><tr><td></td><td>Protein tayini için</td><td>Pierce/Thermo</td><td>23225</td></tr><tr><td>Novex %12 Tris-Glisin Mini Jeller 1.0 mm, SDS-PAGE</td><td>NuPAGE</td><td></td> LDS Numunesi için 12 kuyulu <td>Invitrogen/Life Technologies</td> EC60052BOX</tr><tr><td> </td><td>SDS-PAGE için</td>Tampon (4x)<td>Canlandırıcı/Yaşam Teknolojileri</td><td>NP0007</td></tr><tr><td>Novex Sharp Önceden Boyanmış Protein Standardı&nbsp;</td><td>Invitrojen / Yaşam Teknolojileri</td><td>LC5800</td><td>protein merdiveni</td></tr><tr><td>SDS-PAGE için</td><td>Glisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7126</td></tr><tr><td>Sodyum dodesil sülfat, elektroforez,% 98,5 (SDS)</td> <td>SDS-PAGE için</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>L3771</td></tr><tr><td>Metil Alkol, Susuz, Reaktif&nbsp;</td><td></td><td></td>Sodyum klorür (NaCl), ACS reaktifi Sigma-Aldrich S9888 salin ve tamponlar transfer için <td>American MasterTech Scientific</td> SPM1057C</tr><tr>metanol<td>Yağsız kuru süt tozu</td><td>İmmünoblotlama için</td><td>karanfil</td><td>n/a</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>%5 asetik asit içinde Ponceau S çözeltisi&nbsp;</td><td>İmmünoblotlama için</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P7170</td></tr><tr><td>Anti-Tirozin Hidroksilaz (TH), koyun poliklonal</td><td>Chemicon / Millipore</td><td>AB1542</td><td>immünofloresan için&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-Tirozin Hidroksilaz (TH), tavşan poliklonal</td><td>Pel-Freez Biologicals</td><td>P40101-0</td>, <td>immünoblotlama</td></tr><tr><td>için Anti-&beta; Aktin, tavşan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2066</td>, <td>immünoblotlama için</td></tr><tr><td>Anti-Glial Fibriler Asidik Protein (GFAP),</td><td>immünofloresan</td>Anti-Glial Fibriler Asidik Protein (GFAP) için tavşan poliklonal <td>Chemicon / Millipore</td><td>AB5804</td></tr><tr><td>, fare monoklonal</td><td>Covance Inc.</td><td>İmmünoblotlama için</td> <td>SMI-22R</td></tr>, <tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td>, <td>immünoblotlama için</td></tr><tr><td>Keçi Anti-Tavşan IgG (H + L), Peroksidaz Konjuge ve nbsp;</td><td>İmmünofloresan</td>keçi anti-koyun için <td>Fisher Scientific</td><td>31462</td></tr><tr><td>, peroksidaz konjuge</td><td>Pierce/Thermo</td><td>31480</td>, <td>immünofloresan</td></tr><tr><td>keçi anti-fare için, peroksidaz konjuge</td><td>Pierce/Thermo</td><td>31430</td><td>immünofloresan</td></tr> için <tr><td>SuperSignal West Pico Kemilüminesan Substrat</td><td>Pierce/Thermo</td><td>34078</td><td>immünoblotlama için</td></tr><tr><td>CL-XPosure Film 7 inç x 9,5 inç</td><td>İmmünoblotlama için</td> <td>Pierce / Thermo</td><td>34089</td></tr><tr><td>Western Blot Sıyırma Tamponunu Geri Yükle&nbsp;</td><td>İmmünoblotlama için</td> <td>Pierce/Thermo</td><td>21059</td></tr><tr><td>Sitrik asit monohidrat, ACS reaktifi vb.; 99.0%&nbsp;</td><td>IHC</td>Normal Eşek Serumu için <td>Sigma-Aldrich</td><td>C1909</td></tr> IHC <tr><td>Polivinilpirolidon (PVP)</td> <td>için</td>Millipore S30-100ML IHC Sığır Serum Albümini (BSA) için <td>Sigma-Aldrich</td><td>P5288</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr>, <td>IHC için</td><td>liyofilize</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3294</td></tr><tr><td>IHC için</td><td></td><td></td><td></td> Triton X-100 Fisher Scientific BP151-01</tr><tr><td>Eşek anti-Tavşan IgG, Alexa Fluor 568 etiketli&nbsp;</td><td>IHC</td>Eşek Anti-Koyun IgG (H + L) için <td>Invitrogen/Life Technologies</td><td>A10042</td></tr><tr><td>, FITC&nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>713-095-147</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>Vektör Laboratuvarları</td> ile IHC<td>VECTASHIELD Sert Set Montaj Ortamı</td> için <td>H-1500</td><td>IHC</td></tr><tr><td>Normal Keçi</td><td>Serumu Millipore</td><td>S26-100ML</td><td>için IHC</td></tr><tr><td>VECTASTAIN ABC Kiti (Tavşan IgG )&nbsp;</td>IHC için <td>Vektör Laboratuvarları</td><td>PK-4001</td><td>; 10 & l 1 ml PBS başına A ve B çözeltilerinin her biri (talimatlara göre</td></tr><tr><td>) DAB Peroksidaz Substrat Kiti, IHC için 3,3'-diaminobenzidin</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>SK-4100</td><td>; 5 ml soğuk ddH < alt > 2 < / alt >O başına 2 damla tampon stok çözeltisi, 2 damla DAB ve 1 damla H < alt > 2 < / alt > O <> 2 < / alt > (H < alt > 2 < / >alt ekleyin O2 kullanımdan hemen önce eklenir)</td></tr><tr><td>Hidrojen peroksit,% 30</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>216763 IHC</td> Tavşan anti-Iba1 Biocare Medicals CP290A'da <td>söndürme adımı</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>için IHC</td></tr><tr><td>Cresyl Violet Çözeltisi, Düzenli Mukavemet&nbsp;</td><td>FD Neurotechnologies</td><td>PS102-01</td><td>Iba1 IHC</td></tr><tr><td>%95 Etanol, reaktif alkol</td> için karşı boyama <td>IHC için Sigma-Aldrich</td><td>R8382</td><td>dehidrasyonu</td></tr> %<tr><td>100 Mutlak etanol</td><td>Mallinckrodt</td><td>7019-10</td><td>IHC</td></tr><tr><td>Asetik asit</td> için dehidrasyon <td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td>IHC</td></tr><tr><td>Ksilen</td> için leke <td>giderme Sigma-Aldrich</td><td>534056</td><td>temizleme maddesi IHC</td></tr><tr><td>DPX Mountant</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>06522</td><td>için montaj ortamı DAB IHC</td></tr><tr><td>O.C.T. Bileşik - Donmuş Kesit Gömme Ortamı&nbsp;</td><td>Amerikan MasterTech Scientific</td><td>EMOCTCS</td><td>kriyostat kesimi için gömme ortam</td></tr><tr><td>DAB çözeltisini dekontamine etmek için</td>potasyum<td>permanganat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223468</td></tr> HPLC <tr><td>3,4-Dihidroksifenilasetik asit (DOPAC)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr>için<td>Dopamin hidroklorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8502</td><td>HPLC</td></tr><tr><td>Homovanilik asit (HVA)</td> <td>için Sigma-Aldrich 850217</td><td>HPLC Perklorik</td>asit (PCA) için Sigma-Aldrich <td>H1252</td></tr><tr>- <td>HPLC için</td><td>%70</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>244252</td></tr><tr><td>HPLC için</td><td>sodyum dihidrojen fosfat monohidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71504</td></tr><tr>HPLC için<td>sitrik asit monohidrat</td><td>HPLC için</td><td>1-Oktansülfonik</td> asit sodyum tuzu (OSA) HPLC için <td></td></tr><tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O8380</td><td></td></tr><tr><td>HPLC</td><td>için EDTA Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td><td>HPLC</td></tr><tr><td>için Asetonitril</td><td>EMD</td><td>AX0145-1</td><td></td></tr><tr><td>HPLC dereceli damıtılmış deiyonize su (ddH2O)</td> <td>HPLC</td>0.22 ve mikro için <td>millipor;</td><td></td></tr><tr><td> m GSTF membran</td><td>Filtrasyon için</td><td>millipore</td><td></td></tr><tr><td>Corning Netwells</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3477</td><td>polyester ağ tabanlı polistiren uç, IHC</td></tr><tr><td>Ultrasonik hücre bozucu (Soniprep 150)</td> <td>MSE</td><td>MSE.41371.274</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5414R</td><td></td></tr><tr><td>ESA MD-150 ters fazlı kolon ve nbsp;</td><td>ESA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HPLC Pompası (Ultimate 3000)</td><td>Dionex</td><td>ISO-3100BM</td><td></td></tr><tr><td>HPLC Otomatik Numune Alma Cihazı (Ultimate 3000)</td><td>Dionex</td><td>WPS-3000TSL</td><td></td></tr><tr><td>Elektrokimyasal dedektör</td><td>ESA</td><td>Coulochem III</td><td></td></tr><tr><td>Koruma Hücresi</td><td>ESA</td><td>5020</td><td></td></tr><tr><td>Analitik Hücre</td><td>ESA</td><td>5011A</td><td></td></tr><tr><td>Chromeleon yazılımı</td><td>Dionex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eclipse E400</td><td>Nikon</td><td>E400</td><td>ışık/floresan mikroskobu</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık fare kafesi</td><td>Ancare</td><td>N10HT</td><td></td></tr><tr><td>Mikrofiltre üst</td><td>Ancare</td><td>N10MBT</td><td></td></tr><tr><td>5-LOX eksikliği olan fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>004155</td><td></td></tr><tr><td>12/15-LOX eksikliği olan fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı 002778</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

parkinson hastalığında maskeyi düşürme duyarlılık mekanizmalarına gen-Çevre etkileşim modelleri

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

Lipoksijenaz (LOX) aktivitesi Alzheimer hastalığı gibi nörodejeneratif bozukluklara karışmıştır, ancak Parkinson hastalığı (PD) patogenezinde etkileri daha az anlaşılmaktadır. Gen-çevre etkileşim modelleri, sadece genetik veya toksik bir hastalık modeli kullanılarak gözlemlenemeyen toksisitedeki belirli hücresel yolların etkisinin maskesini düşürmede yardımcı olur. Farklı LOX izozimlerinin PD ile ilgili nörodejenerasyona seçici olarak katkıda bulunup bulunmadığını değerlendirmek için, transgenik(yani 5-LOX ve 12/15-LOX eksikliği) farelere hücre yaralanmasını ve bozukluktaki ölümü taklit eden bir toksinle meydan okunabilir. Burada, LOX izozimlerinin PD ile ilgili nörodejenerasyona belirgin katkılarını ortaya çıkarmak için nigrostriatal bir lezyon üreten nörotoksin, 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidromiridin (MPTP) kullanımını açıklıyoruz. Farede MPTP kullanımı ve insan dışı primat, PD'deki nigrostriatal hasarı yeniden oluşturmak için iyi kurulmuştur. MPTP kaynaklı lezyonun kapsamı, dopamin ve metabolitlerinin HPLC analizi ve dopamin sentezi için hız sınırlayıcı enzim olan tirozin hidroksilaz (TH) için striatumun yarı nicel Batı blot analizi ile ölçülür. LOX iozim seçici duyarlılığı gösterebilen inflamatuar belirteçleri değerlendirmek için substantia nigra içeren beyin bölümlerinde glial fibril asidik protein (GFAP) ve Iba-1 immünofizokimyası, striatal homojenatlar üzerinde ise GFAP Batı blot analizi yapılır. Bu deneysel yaklaşım, nigrostriatal dejenerasyon ve PD'nin altında kalan gen-çevre etkileşimleri hakkında yeni içgörüler sağlayabilir.

Bu toksin maruziyet paradigması, MPTP ve salin enjekte edilen hayvanlarda önemli ve tespit edilebilir% 20 striatal dopamin tükenmesi üretebilir. Farklı mptp çok az veya çok lezyon verebilir dikkat önemlidir; bu nedenle, daha iyi hassasiyet için, yeni bir nörotoksin çok fazla alındığında transgeniklerde kullanılmadan önce wildtype farelerde bir ön deney önerilir. Hafif-orta dereceli lezyon kullanımı transjenin etkisinin gözlenmesini sağlar; şiddetli bir lezyon, zayıflamak için çok sağlam veya zararlı bir yaralanma ile zar...

Lipoksijenaz (LOX) izozimler nöroinflamatuarasyonu ve nörodejenerasyonu artırabilecek veya azaltabilecek ürünler üretebilir. Gen-çevre etkileşimi çalışması LOX izozime özgü etkileri tanımlayabilir. İki LOX izozim eksikliği olan transgenik çizgilerde nigrostriatal hasarın 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidromiridin (MPTP) modelinin kullanılması, LOX izozimlerinin dopaminerjik bütünlük ve inflamasyona katkısının karşılaştırılmasını sağlar.

Parkinson Hastalığında Maskeyi Düşürme Duyarlılık Mekanizmalarına Gen-Çevre Etkileşim Modelleri

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, Parkinson hastalığı ile ilişkili nigrostriatal dejenerasyonda lipoksijenaz ISO enzimlerinin rolünü anlamaktır. Bunu başarmak için, Nigro SAL lezyonu oluşturan bir nörotoksin dikkatle hazırlanır. Ardından, eksikliği olan farelere dört ardışık gün boyunca günlük olarak MPTP çözeltisi enjekte edilir ve son enjeksiyondan yedi gün sonra inceleme yapılır.Numuneler toplanır ve biyokimyasal veya immünohistokimyasal analizler için kullanılır. Sonuçlar, 1215 lock'un NIGROSTRIATAL MPTP toksisitesini etkilemediğini göstermektedir. Ancak, beş lock toksisite koşulları altında hasara katkıda bulunmaktadır.TS yöntemi, Parkinson hastalığı alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Gen-çevre etkileşimlerinin nistri duyarlılığı üzerindeki etkisinin ne olduğunu belirtebiliriz. Gen-çevre modellerini kullanarak, ISO seçici fonksiyonlarını ayırt edebildik ve beş lipin ikili yapısına dair içgörü elde edebildik.Uygun şekilde eğitim almış personel, aşağıdaki prosedür boyunca uygun kişisel koruyucu donanım kullanmalıdır. İşe, nörotoksin solüsyonunun hazırlanması için gerekli olan tüm hesaplamaları yaparak başlayın. Ardından, gerekli tüm ekipman, malzeme ve reaktifleri hazırlayın.Ek olarak, olası dökülmelere müdahale etmek için gerekli malzemeleri hazır bulundurun. Terazi çevresindeki alanı pedlerle veya kağıt havlularla kaplayın. Dökülen tozun riskini azaltmak için %10'luk çamaşır suyu çözeltisi ile nemlendirilmiş mendilleri ve %10'luk çamaşır suyu çözeltisini önlem olarak yakınınızda tutun.Hazır olduğunuzda, kaynak flakonu uygun saklama yerinden çıkarın. Cam MPTP flakonunun üzerine konsantrasyonu ve tarihi etiketleyin. Çeker ocak içerisinde bulunan analitik bir terazi kullanarak, %10'luk çamaşır suyu ile ıslatılmış bir mendil içeren ikincil korumalı bir cam flakona 50 miligram MPTP tartın.Ardından, kaynak flakonu kapatın ve dış kısmını %10 bleach ile yavaşça silin. Flakona 13,763 mililitre steril salin ekleyin ve çeker ocak içerisinde tamamen karıştırmadan önce kapatın. MPTP çözeltisini, %10 bleach emdirilmiş bir mendilin bulunduğu ikincil bir kap içerisinde, etiketlenmiş bir enjeksiyon flakonuna dikkatlice filtreleyerek sterilize edin.Basıncı düşürmek için, MPTP filtrelenmiş çözeltisini içeren flakonun kapağını hafifçe gevşetin. Herhangi bir döküntüyü çamaşır suyu emdirilmiş bir mendille temizleyin ve kullanılmış malzemeleri uygun şekilde etiketlenmiş bir biyotehlike konteynerine atın. Flakondaki MPTP çözeltisini, hayvan uygulama odasına nakil sırasında çamaşır suyu emdirilmiş bir mendille birlikte ikincil bir kap içerisinde muhafaza edin.MPTP kaynak şişesini ikincil konteynerine yerleştirin ve uygun saklama konumuna geri koyun. Son olarak, spatulayı, analitik teraziyi ve çeker ocak yüzeyini %10'luk çamaşır suyu kullanarak 10 dakika boyunca dekontamine edin.Hayvanlara enjeksiyon yapmadan önce, filtreli delikli kapaklara sahip tek kullanımlık kafesler hazırlayın. MPTP şeklinde işaretleyin. Tek kullanımlık kafes altlıklarını, önceden ıslatılmış yem peletlerini ve su kaynağı olarak hidrojeli yerleştirin.Ardından, tüm hayvanları tartın ve kilogram başına 15 miligramlık bir enjeksiyon için gereken MP TP çözeltisi hacmini kaydedin. Hazır olduğunuzda, bir fareyi tek kullanımlık emici bir ped üzerinde tutarken ve MPTP çözeltisini enjekte ederken büyük özen gösterin. Bu prosedürü, iğne kapağını tekrar kapatmadan dört gün boyunca her gün tekrarlayın ve iğneyi etiketlenmiş, özel bir MPTP Biyotehlikeli kesici-delici aletler konteynerine yerleştirin.%10'luk çamaşır suyu çözeltisini ve peçeteleri yakınınızda bulundurun. Yanlışlıkla damlayan sıvıları temizlemek için, MPTP enjekte edilen hayvanları daha önce hazırlanan tek kullanımlık kafeslere yerleştirin ve açık raflarda barındırın. Ardından MPTP sonrası aşamaya geçin.Son enjeksiyondan 72 saat sonrasına kadar raf üzerinde ve barındırma odası kapısında uyarı levhaları kullanın. Çalışma yüzeyini çamaşır suyu ile dekontamine edin. Her işlemden sonra, eşdeğer hacimde %10 çamaşır suyu ekleyerek artan MPTP çözeltisini bertaraf edin.Bunu biyotehlikeli sıvı atık olarak bertaraf etmek için, tüm kullanılmış KKD'leri tahsis edilmiş atık kutularına atın ve gerekirse bertaraf etmeden önce %10 çamaşır suyu ile püskürtün. Bu prosedür sırasında, hayvanların düzenli olarak kontrol edilmesi ve yiyeç ile sularının günlük olarak yenilenmesi önemlidir. Son enjeksiyondan üç gün sonra, tüm malzemeleri imha edin ve hayvanları normal barınaklarına geri gönderin.Önceden belirlenmiş deneysel zaman noktalarında, doku toplama ve işleme için hayvanları geri alın. Yabanıl tip ve saline veya MPTP ile tedavi edilmiş five locks nakavt farelerinden dopamin seviyelerini ölçmek için Stri AAL homojenleri kullanılmıştır. Saline ile tedavi edilen gruplarda, transgenik farelerde daha düşük DA seviyeleri ile birlikte DA seviyeleri üzerinde etkili bir genotip saptanmıştır. Ancak, MPTP tedavisi sonrası, five locks eksikliği olan farelerin SAL DA azalmasına karşı korunduğu görülmüştür.MPTP grubundaki beş locks nakavt fare, salin grubundaki beş locks nakavt fare ile benzer DA seviyelerine sahipti. Buna karşılık, 1215 locks nakavt farelerde genotip, tedavi grubundan bağımsız olarak dopamin seviyeleri üzerinde bir rol oynamadı; substantia nigra'daki TH ve GFAP immunofloresan boyamaları, vahşi tip MPTP grubunda yıldızla belirtilen daha az TH pozitif hücre gövdesi ve artmış GFAP immunoreaktivitesi ortaya çıkardı. Mikroglia için yapılan DAB boyaması, salin ile tedavi edilen farelerde dallanmış hücre gövdeleri ve uzun dallanan uzantılar gösterirken, MPTP ile tedavi edilen farelerde yuvarlak hücre gövdeli ve kısa, kalınlaşmış uzantılara sahip aktive mikroglialar gözlemlendi; SAL, TH ve GFAP için yapılan immunoblotting, MPTP etkisinden kaynaklanan hasar ve nöroinflamasyon için daha fazla kanıt sağladı.Bu etkiler, five locks isy eksikliği olan farelerde azalmıştır. MPTP ile çalışmanın son derece riskli olabileceği göz önüne alındığında; bu prosedürü gerçekleştirirken, kişisel koruyucu ekipman giymek ve kombinasyon için %10 bridge bulundurmak gibi önlemler her zaman alınmalıdır.

gene-environment-interaction-models-to-unmask-susceptibility

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Genel olarak Parkinson hastalığı, hareket bozuklukları, hassas ve güvenilir bir davranış testleri yeni potansiyel terapötikler test etmek için gereklidir. Burada, nigrostriatal sistemine zarar derecelerine ve klinik öncesi çalışmalar için yararlı duyarlı olan fareler için duyu testler yönetilebilir bir pil açıklanmaktadır.

Parkinson Hastalığı Fare Modeller Duyusal Motor Fonksiyon Değerlendirilmesi

Burada, MouseWalker aparatının sıçanların artan boyutuna ve ağırlığına uyum sağlayacak şekilde yeniden tasarlanmasıyla inşa edilen RatWalker sistemini tanımlıyoruz. Bu sistem, yürüyüş parametrelerini izlemek ve ölçmek için hayal kırıklığına uğramış toplam dahili yansıma (FTIR), yüksek hızlı video yakalama ve açık erişimli analiz yazılımı kullanır.

Parkinson Hastalığının Genetik Sıçan Modelinde Yürüme Analizi için RatWalker Sisteminin Uygulanması

Bu yazıda, C. elegans'tadopaminerjik nöron dendrit morfolojislerindeki değişiklikleri tutarlı bir şekilde ölçmek için yedi puanlık bir puanlama sisteminin nasıl kullanılacağını sergiliyoruz. Bu sistem, nörodejeneratif bozuklukların genetik, kimyasal ve yaşa dayalı modellerini kullanan dopaminerjik nörodejenerasyon testlerinin analizleri için tasarlanmıştır.

Caenorhabditis elegans'ta Dopaminerjik Nöron Morfolojik Değişim ve Dejenerasyon Seviyelerinin Ölçülmesi

Bu çalışma, Parkinson hastalığının bu klinik öncesi modelinde nöroinflamasyonu, nörodejenerasyonu ve motor bozukluğu indüklemek için gereken vektör dozunu ve maruz kalma süresini analiz etmektedir. İnsan α-sinükleini kodlayan bu vektörler, Parkinson hastalığı ile ilişkili sinüklein patolojisini özetlemek için substantia nigra'ya verilir.

İnsan α-Sinükleini Kodlayan Adeno İlişkili Viral Vektörler Tarafından İndüklenen Parkinson Hastalığı Fare Modelinin Analizi

Bu protokol, insan orta beyin dopaminerjik nöronlarının hücre kültürünü, ardından immünolojik boyamayı ve genetik veya kimyasal modülasyonlara bağlı fenotipik varyasyonların tanımlanmasına izin veren elde edilen mikroskobik yüksek içerikli görüntülerden nöronal fenotipik profillerin oluşturulmasını tanımlar.

İnsan Kök Hücre Kaynaklı Orta Beyin Dopaminerjik Nöronlarının Fenotipik Profillemesi

Bu protokol, MPTP ile tedavi edilen zebrafish larvalarında Parkinson hastalığına benzeyen motor ve motor dışı eksiklikleri değerlendirmek için davranışsal fenotipleme paradigması oluşturur.

Davranışsal Deneye Dayalı Zebrafish Larvalarında MPTP Kaynaklı Parkinson Benzeri Davranışsal Fenotiplerin Fenotipik Profillenmesi

Karsinom ile ilişkili fibroblastlar (CAFs) tümör stroma içinde mevcut miyofibroblastlar zengin, tümör progresyonu sürüş önemli bir rol oynamaktadır. Biz deneysel insan meme fibroblastlar CAFs üretmek için bir coimplantation tümör xengraft modeli geliştirdi. Protokolü tumourigenesis teşvik etmek için bir yeteneği kazandırmak CAF miyofibroblastlar kurmak anlatılmaktadır.

İnsan Meme Fibroblastlar Karsinom İlişkili Fibroblastlar Deneysel Nesil (CAFs)

Bir protokol unilateral 6-OHDA lezyonlar, farelerde medyal önbeyin demet gerçekleştirmek için tarif edilmektedir. Bu yöntem, striatal dopamin ve 90,63&gt;% 95 kaybı gösteren hayatta kalan hayvanların% 89 ile düşük mortalite oranı (% 13.3) ±% -4,02, lezyonun tarafa doğru ipsiversive dönme önyargı vardır.

Parkinson Hastalığının tek taraflı lezyonlanmıştır 6-OHDA Mouse Model Geliştirme

Dopamin değiştirme farmakoterapi L-DOPA ile Parkinson hastalığının en yaygın olarak kullanılan semptomatik tedavi, anormal istemsiz hareketleri olarak adlandırılan diskinezi dahil olmak üzere, yan etkileri ile...

Parkinson Hastalığında nöropeptitler MALDI Görüntüleme Kütle Spektrometresi

Insan derisi punch biyopsi gelen fibroblast eksplant kültür protokolü düşük bir geçit numaradan milyon 15-20 hücre bankacılığı için 4-8 hafta içinde cilt hücrelerini elde etmek teknik olarak sağlam ve basit bir yoludur.

İlköğretim İnsan Fibroblastlar türetilmesi için Cilt Punch Biyopsi Eksplantın Kültür

Keşfedin lipoksijenaz izozimlerinin Parkinson hastalığında nigrostriatal dejenerasyondaki rolünü. MPTP nörotoksin modeli kullanılarak LOX eksikliğinin dopaminerjik bütünlük üzerindeki etkileri değerlendirilmiştir.

Parkinson Hastalığında Maskeyi Düşürme Duyarlılık Mekanizmalarına Gen-Çevre Etkileşim Modelleri

Daha fazla video keşfet