Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Bu prosedürün genel amacı, farmakolojik bir ajanın veya hastalık durumunun küçük dirençli mezenterik arterlerde basınca bağlı vasküler tonus üzerindeki etkisini belirlemektir. Bu, önce mezenterik arcade'yi bir murin modelinden izole ederek gerçekleştirilir. İkinci adım, dördüncü dereceden küçük direnç arterlerini incelemektir.

Sonraki adımlar, arteriyel preparatın kanülasyonu, basınçlandırılması ve inkübasyonudur. PSS'de son adım, vasküler tonusun spontan gelişimi ve bir vazokonstriktör ve bir vazodilatöre uygun geri dönüşümlü yanıt ile gösterilen arteriyel preparatın fizyolojik bütünlüğünü değerlendirmektir. Sonuç olarak, basınca bağlı daralma ölçülebilir.

Bu tekniğin anlamı, hipertansiyon, hipotansiyon veya vasküler disfonksiyonun tedavisine veya teşhisine kadar uzanır. Çünkü bu teknik, vasküler direnç, perfüzyon ve kan basıncının önemli bir belirleyicisi olan vasküler tonusta basınca bağlı değişikliklerin altında yatan temel mekanizmaları tanımlar. Bu prosedür, laboratuvarımızda doktora sonrası araştırmacı olan Dr.Jja tarafından gösterilecektir.

Bu prosedüre, bir mikro pipet tutucusuna bir cam kanül yükleyerek ve perfüzyon odasını hazırlamak için mikro pipet tutucuyu bir perfüzyon odasına takarak başlayın. Milli Q suyu ile durulayın, ardından her biri beş dakika boyunca diseksiyon solüsyonu uygulayın. Ardından hazneyi iki mililitre diseksiyon solüsyonu ile doldurun.

Ardından, tüm kanülü ve bağlı boruyu herhangi bir kabarcık oluşturmadan dikkatlice doldurun. Diseksiyon mikroskobu altında künt forseps kullanarak her biri yarım düğümlü iki sütür hazırlayın. Diseksiyon forsepsleri kullanarak her iki kanülü de kısmen kapalı sütür düğümleriyle uçtan hafifçe uzağa yükleyin.

Daha sonra, önce deride bir kesi yaparak, ardından alttaki kas tabakasında bir kesi yaparak, pelvisten sternuma anestezi uygulanmış bir sıçan üzerinde orta hat laparotomisi yapın. Karın içi organlara zarar vermemeye özen gösterilmelidir. Hücre dışı banyo solüsyonunun kirlenmesini önlemek için zil ve dışkı sızıntısını önlemek için her iki ucu da ayrı ayrı bağlayın.

Daha sonra bağırsağın proksimal ucunu pori'ye yakın ve distal ucunu ileoçekal bileşkeye yakın bir yerde kesin. Daha sonra, besleme vaskülatürüne yakın tabanında mezsentary üzerinde bir kesi yapın. Daha sonra, tüm ince bağırsak mezenterik yatağını buz gibi soğuk diseksiyon çözeltisi içeren 50 mililitrelik bir behere aktarın ve beş dakika inkübe edin.

Daha sonra kanı çıkarmak için taze diseksiyon solüsyonu ile durulayın. Şimdi bağırsağın proksimal ucunu sağ tarafta sard kaplı bir tabakta sabitleyin, kalan bağırsağı saat yönünün tersine bir şekilde uzatın. Mezsentary'yi yaymak için segmenti sabitlemek ve kan damarlarını bir stereo zoom mikroskobu altında açığa çıkarmak.

İnce bağırsağa paralel olarak üçüncü ve dördüncü dereceden küçük mezenterik arterleri, önce ikinci dereceden dalın yakınındaki tüm örtücü yağları çıkararak diseksiyon yapın. Daha sonra damarı inceleyin ve arteri V şeklinde bir dal noktası ile izole edin. Seçilen segmenti delmemeye dikkat edin.

Daha sonra, ince bağırsağa paralel olan arterin dört ila beş milimetrelik bir bölümünü izole edin. İnce bağırsağa gömülen tüm beşinci dereceden dalları, dalların kökeninden biraz uzakta kesin ve bir kısmını koruyun. Bu kısımlar, arteriyel segmentlerin bir perfüzyon odasına aktarılması ve daha sonra kanülasyonlarına rehberlik edilmesi için tutma alanları olarak hizmet edecektir.

Daha sonra, arterin her iki tarafındaki beşinci dereceden dallara distal iki kesi yaparak arteriyel segmentleri kesin ve bunları perfüzyon odasına aktarın. Damarların bir ucunu bir cam mikro pipet üzerinde, arteriyel segmentin ucunu diseksiyon forseps ile tutarak kanüle edin. Önceden yüklenmiş kısmen kapalı sütürü kanüllü uca kaydırın ve sabitleyin.

Daha sonra, bu kanüle bağlı durdurma musluğuna 10 mililitrelik bir şırınga yüklü bir diseksiyon solüsyonu takın. Şırıngayı yavaşça kaldırın. Çözelti üzerindeki yerçekimi kuvveti, damar içi kanı damarın açık ucundan uzaklaştıracaktır.

İntra arteriyel kanı çıkardıktan sonra, durdurma musluğunu kapatın. Şimdi damarların distal ucunu ikinci bir cam kanül üzerine bağlayın ve diğer kanülü arter segmentinin çözülmemiş ucuna mümkün olduğunca yaklaştırın. Önceki yüklü, kısmen kapalı sütürü kanüllü uca kaydırın ve sabitleyin.

Arteriyel segmentleri çekmemeye veya çekmemeye özen gösterilmeli ve her iki kanüle bağlı stop Cox'un kapalı olduğundan emin olunmalıdır. Perfüzyon odasını, canlı video kaydı ile donatılmış ters çevrilmiş mikroskobun aşamasına aktarın. Ardından, arteriyel segmentin proksimal ucuna bağlı kanülün durdurma musluğunu servo kontrollü bir basınç düzenleme cihazına bağlayın.

Sabit intraluminal basıncı korumak için diğer kanüle bağlı durdurma musluğunun kapalı kaldığından emin olun. Ardından, vakum tüpünü perfüzyon tüpüne ve emme portunu odanın perfüzyon portuna takın. Kabı ılık PSS ile dakikada iki mililitre hızında tek hat içi çözelti ısıtıcısı aracılığıyla perfüze etmeye başlayın.

Peristaltik bir pompa kullanarak, vakumu açın ve odadaki PSS'nin sıcaklığı 37 santigrat dereceye yakındır. İntraluminal basıncı yavaşça 20 ila 100 milimetre cıva arasında artırın. Basınç regülatörünün otomatik basınç ayarını kullanarak kapta herhangi bir sızıntı olup olmadığını kontrol edin.

Bundan sonra, basıncı 100 milimetre cıvada tutarken arteriyel segmenti virajlar için değerlendirin. Vida kolunu kullanarak, arteriyel segmenti düzeltmek için kanülü hareket ettirin ve arteriyel segmentleri aşırı germeyin. Daha sonra, mezenterik arcade'deki in vivo basıncı taklit etmek için basıncı 70 milimetre cıvaya düşürün ve arteriyel segmentin stabilize olmasına ve miyojenik ton geliştirmesine izin verin.

Bu prosedürde, tek renkli bir video yükü ile donatılmış bir mikroskop altında arteri 10 x objektif ile görüntüleyin. Çift cihaz kamerası. Bir video karesi yakalayıcı ve gerçek zamanlı kenar algılama sistemi kullanarak luminum çapını ölçün.

Daha sonra damar çapını kaydedin ve miyojenik tonun gelişimini izleyin. Bundan sonra, basıncı 20 milimetre cıvaya düşürün ve çapın stabilize olmasına izin verin. Daha sonra intraluminal basıncı 20, 40, 60, 80 ve 100 gibi artımlı adımlarla artırın ve arterin her basınçta sabit bir çapa ulaşmasına izin verin.

Bir sonraki adımda, izleme ile belirtildiği gibi 0.39 milimolar EGTA ve 0.1 milimolar sodyum nitropres içeren kalsiyum serbest PSS'de basınç adımı yanıtını tekrarlayın, sıçanlardan gelen küçük mezenterik arterlerin çapı, 70 milimetre cıvada basınçlandırıldığında kendiliğinden azalır, bir mikromolar asetilkolin ilavesi çapı yakın başlangıç çapına yükseltti. Doku banyosuna bir mikromolar fenilefrin eklenmesi arteriyel çapı azaltmıştır ve bu rakam küçük mezenterik arterlerin kalsiyum serbest PSS'de inkübasyonunun arteriyel çapı arttırdığını göstermektedir. Çeşitli perfüz sekizlilerinde tek bir basınçlı arteriyel segmentin çapı bu tabloda gösterilmiştir.

Burada, PSS ve kalsiyum serbest PSS varlığında intraluminal basınç kademeli olarak artarken arteriyel çap sürekli olarak kaydedilir. Burada, her bir basınç adımında elde edilen arteriyel çapın eğrileri verilmiştir ve her bir basınç adımında elde edilen miyojenik tonun çubuk grafiği burada Kapalı olarak gösterilmektedir. Bu videoyu izledikten sonra, küçük dirençli arterlerin miyojenik davranışını nasıl değerlendireceğinizi iyi anlamış olmalısınız.

Bu tekniği takiben endotel bozulması ve arteriyel permeasyon gibi ek işlemler yapabilirsiniz. Her iki prosedür de küçük dirençli arterlerin vasküler tonusunun düzenlenmesinde endotel ve kalsiyumun rolü ile ilgili daha fazla soruya cevap verebilir.