Name: Mühendislik Fibrin tabanlı Doku miyofibroblastlar ve Kısıtlar Uygulamasından Yapıları ve Hücre ve Kollajen (Re) Organizasyon tetikleyebilecek süzün (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-28T21:45:00.000+00:00
Duration: 12 min 13 s
Description: Keşfedin fibrin bazlı yapılar kullanarak kollajen reorganizasyonunu gerçek zamanlı izleme yöntemini. Bu sistem hücre biyolojisi ve doku mühendisliği araştırmaları için uyarlanabilir bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Biyomedikal Malzemeler (BMM) enstitü araştırma programı uygulandı. BMM Ekonomik işler, Tarım ve İnovasyon Bakanlığı tarafından Hollanda cofunded edilir. Nederlandse Hartstichting mali katkısı minnetle kabul edilmektedir.

1. İnsan Vena Saphena Hücreleri Kültür <ol><li> Schnell ve arkadaşları tarafından protokole göre ikincil kullanım malzeme kurallarına uygun olarak bir donörden alınan vena safena magna,,. 9 hücreleri izole ve sıvı azot içinde bu saklayın. Altı plaka kültürüne 2 x 2 mm bir donör kesim parçalardan vena safena magna kısmından. Başına iyi 2 adet kullanın. Genel olarak yeterli hücreleri, sıvı nitrojen içinde 0.25 x 10 6 hücre ile yaklaşık 3 şişeleri doldurmak için elde edilebilir. HVSCs vimentin, desmin hiçbir ifade ve α düz kas aktini 10 ifade bir alt ifade göstererek, miyofibroblastlar olarak karakterize edilirler. Sonraki hücrelerinin sayısını arttırmak için sıvı azottan hücreleri çözülme için protokol başlar. </li><li> T75 doku kültürü şişesi içine bir tüpten hücreleri yer ve İleri DMEM, 50 ml cenin sığır serumu (FBS), 5 ml penisilin / oluşan büyüme ortamı (GM), eklemestreptomisin ve 5 ml L-glutamax. 2-3 günde bir orta değiştirin. </li><li> Hücreler yaklaşık 14 gün sonra birleşik büyür. Store 0,5 sıvı azot içinde bir cam şişe içinde x 10 6 hücre, geçit 1 olarak adlandırılır. </li></ol> Not: Hücrelerin dondurularak HVSCs hasat zaman gerekli değildir, fakat sadece depolama için kullanılır. <ol start="4"><li> Bir T175 doku kültürü şişesi içine bir tüpten HVSCs yerleştirin ve GM ekleyin. 2-3 günde bir orta değiştirin. Hücreler yaklaşık 7 gün sonra birleşik büyür. Mağaza 3 ve sıvı azot içinde bir cam şişe içinde x 10 6 hücre, geçit 2 olarak anılacaktır. </li><li> Bir rollerbottle içine bir tüpten hücreleri yer ve GM ekleyin. 2-3 günde bir orta değiştirin. Hücreler, yaklaşık 8 gün sonra konfluent büyür. Bir rollerbottle yaklaşık 20-30 x 10 6 hücre içerir. Geçit 6 Kültür hücreleri. Hücre fenotip değişebilir, çünkü geçit 9 daha yüksek bir geçiş hücreleri kullanmayın. </li></ol&gt; 2. Fibrin tabanlı Doku Yapıları Mühendislik <ol><li> Sertleştirici (10:1) ile elastomer karıştırılarak silikon yapıştırıcı hazırlayın. Velcro 7 x 3 mm dikdörtgen parçaları kesin. Bir çapraz oluşturmak için, ve cırt bant arasında 3 mm kare boşluk bırakmak esnek membran ile 6 kuyu kültür plaka içine tutkal Velcro,. </li></ol> Notlar: Sadece Velcro yumuşak tarafı kullanın ve bu yan yukarı yüz. Ne zaman yapıştırma Velcro, sadece silikon yapıştırıcı ile Velcro kapağı, iyi boyunca tutkal yayılmış yok. Kültür plakaları silikon membran dipleri olduğundan, plaka için kolay yapıştırma sağlamak için, esnek zarlar takviye için plaka altında bir şey kullanın. <ol start="2"><li> Tutkalın sertleştirme sağlamak için 60 ° C&#39;de bir fırın içerisinde gece boyunca silikon yapıştırıcı kurutun. 30 dakika boyunca inkübe kuyular ve% 70 EtOH eklenerek sterilize edin. PBS ile 3x durulayın ve wel tüm PBS kaldırmakls ve Velcro. 30 dakika UV altına ve kullanılıncaya kadar steril tutmak. </li><li> Doku mühendisliği GM oluşan orta (TM) ve L-askorbik asit 2-fosfat ve 130 mg hazırlayın. </li><li> TM, 1 mg / ml &#39;ε-amino kaproik asit (ACA) ekleyin. ACA kırıcı 11 fibrin önlemek için kültürün ilk 7 gün için kullanılır. Alternatif olarak, aprotinin kullanılabilir. </li><li> Yığın oluşumunu önlemek için, fibrinojen açmadan önce oda sıcaklığına gelmesini bekleyin. Kümeleri fibrinojen olmadan daha kolay eriyecektir. ACA ile takviye edilmiş 10 mg gerçek protein / ml TM 7 arasında bir konsantrasyona fibrinojen çözülür. Steril filtre fibrinojen çözüm, birden çok filtre gerekebilir. Kullanılana kadar buz üzerinde muhafaza edin. </li></ol> Not: Çok fazla köpük oluşumunu önlemek için yavaşça fibrinojen karışımı çözülür için. <ol start="6"><li> ACA ile takviye edilmiş 10 IU / ml &#39;TM 7 arasında bir konsantrasyona trombin çözülür. Kullanılana kadar buz üzerinde muhafaza edin. </li> &lt;/ Ol&gt; Not: Buz Depolama trombin ve fibrinojen erken jelleşme önlemek için gereklidir. <ol start="7"><li> GM ve sayısında tekrar süspansiyon hücreleri, Trypsinize. </li><li> , Fibrin tabanlı doku yapıları (doku mühendisliği kalp kapakçıkları 7 metotlara göre konsantrasyon) tohum için 15 x 10 6 hücre / ml &#39;kullanın. Tek bir jel 100 ul GOF El ve böylece 1.5 x 10 6 hücre oluşur. Yapılacaktır jellerin sayısı kadar santrifüj tüpleri ile sonuçlanan bir santrifüj tüpü içinde 1.5 x 10 6 hücre koyun. </li><li> 7 dakika 350 x g&#39;de hücreleri Santrifüj ve süpernatant atın. 50 ul trombin hücrelerin tekrar süspansiyon. Bu süspansiyon mavi floresan polistiren mikro 4 ul ekleyin. Bir şişe içinde, fibrinojen 50 ul koyun. Hücreleri ile 50 ul trombin almak için bir pipet kullanın. 100 ul pipet hacmi artırın. Trombin çözeltisi ile 50 ul Pipetfibrinojen ile şişenin içine hücreleri trombin ve fibrinojen karıştırın ve 100 ul karışımı almak. </li></ol> Not: floresan polistiren mikro görüntü analizi için dahili referans işaretleri kullanılmaktadır. Karıştırma trombin ve fibrinojen, dikkatli bir karışım, pipetleme hava kabarcıklarının oluşumunu önlemek zaman. Hava kabarcıkları, fibrin jel delik neden olur. <ol start="10"><li> Içine ve Velcro şeritleri arasında jel karışımı pipetle. Fibrin jel için tipik jelleşme süresi, bir kez bileşenler karıştırılır, 20 sn &#39;dir. </li></ol> Notlar: karışım plaka pipetle önce jelleşme önlemek için mümkün olduğunca çabuk yapın. Hücreleri ve boncuklar kullanmadan önce uygulama. <ol start="11"><li> ACA ile kültür TM eklemeden önce jelleşme izin vermek için, nemlendirilmiş bir% 95 hava /% 5 CO2 kuluçka makinesinde 37 ° C&#39;de 30 dakika boyunca inkübe süspansiyonlar. </li><li> Ilk 7 gün ACA 2-3 gün her ile TM değiştirin. Bir hafta ACA olmadan kültive edilecek sonra jeller yeterince stabildir. İlk haftadan sonra 2-3 günde TM değiştirin. Başına iyi TM 6 ml ekleyin. Günde 12 hücreleri görünüm için yeterli kolajen doğurmuştur. </li></ol> 3. Gerilme ve Kısıtlamalar içinde uygulamak Gerilme ve indükleyen değişiklikler <ol><li> Statik yük hücresi çekiş ve sıkıştırma 12 nedeniyle, doğrudan hücre tarafından uygulanır. Kollajen yeniden ikna etmek için, doku tek yönde iki cırt bant gevşek inşa kesti. Tek yönlü kısıtlamaları (Şekil 1A) ile sonuçlanır. Yapı daha sonra istikrarlı yeterli ve kollajen tevdi beri, 12. günde bu gerçekleştirin. </li><li> Flexcell FX4000T sisteminin kullanımı ile, esnek bir membran ile kültür plakalarının altına bir vakum uygulanarak siklik gerilme uygulanır. Yükleme mesajların üst (ki inci bir parçası olan üzerinde, bir kaide üzerine tabak koyunE döngüsel yükleme cihazı). Pompa, membran üzerine bir vakum uygulanır ve böylece altında yatan dikdörtgen sonrası üzerinde membran çeker. Doku haç biçimli ekleri olarak, membranın (Velcro ile) oluşturur ve dikdörtgen sonrası uygulanan siklik suşu (Şekil 1B) tek eksenli. </li><li> Başlangıçta, döngüsel gerginlik uygulama gün 6 başlamadan önce, ilk mekanik bütünlük elde etmek için 5 gün boyunca statik kültür kullanın. Vakum pompası için kumanda içine programı döngüsel bir leke protokolü. Örneğin tek eksenli yön 13 ile, daha önce kurulmuş aralıklı döngüsel gerginlik protokolünü kullanır. Bu, 3 saat dinlenme süreleri ile dönüşümlü olarak 3 saat dönemleri boyunca 0 dan% 5 suşu için süzme 1 Hz ile bir sinüs dalgası, bir aralıklı gerginlik oluşur. Bir uyumlu kollajen organizasyon uyararak, 7 gün boyunca bu döngüsel gerginlik protokol yapın. </li><li> Tipik olarak 12 gün sonra, bir HVSCs hizalanmış kolajen organ ürettilern. Hizalanmış bir kolajen kuruluş ulaşıldıktan sonra, orijinal gerilme yönüne dik olduğu, tek eksenli siklik suşu yönünü değiştirmek. 90 ° dikdörtgen mesajları çevirerek yapın. </li></ol> 4. Görselleştirme Hücreler ve Kollajen <ol><li> Hücre canlılığı veya kollajen oluşumu ile karışmaz probları ile aktif, gerçek zamanlı kollajen yeniden, etiket örnekleri görselleştirmek için. Floresan hücre sitoplazma ve kollajen leke prob kullanın. </li><li> Konfokal lazer tarama mikroskobu kullanarak Alternatif olarak ikinci harmonik üretimi 780 nm ve 500-550 nm arasında algılama de uyarma ile otofloresansı 14, kullanarak kollajen yapıları görselleştirmek için kullanılabilir. </li><li> 3 saat dinlenme süresi boyunca periyodik olarak gergin örnekler için, kurulum ve inkübatör kültür plakaları çıkarın ve hücreleri ve kollajen görselleştirmek için bir konfokal lazer tarama mikroskobu taşırlar. </li></ol>

<ol><li>Beamish, J. A., He, P., Kottke-Marchant, K., Marchant, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+contractile+smooth+muscle+cell+phenotype%3A+implications+for+vascular+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of contractile smooth muscle cell phenotype: implications for vascular tissue engineering.</a> Tissue Eng. Part B Rev. 16, 467-491 (2010).</li>
<li>Isenberg, B. C., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+cyclic+distention+enhances+the+mechanical+properties+of+collagen-based+media-equivalents%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Long-term cyclic distention enhances the mechanical properties of collagen-based media-equivalents.</a> Ann. Biomed. Eng. 31, 937-949 (2003).</li>
<li>Nichol, J. W., Khan, A. R., Birbach, M., Gaynor, J. W., Gooch, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamics+and+axial+strain+additively+increase+matrix+remodeling+and+MMP-9%2C+but+not+MMP-2%2C+expression+in+arteries+engineered+by+directed+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Hemodynamics and axial strain additively increase matrix remodeling and MMP-9, but not MMP-2, expression in arteries engineered by directed remodeling.</a> Tissue Eng. Part A. 15, 1281-1290 (2009).</li>
<li>Sander, E. A., Stylianopoulos, T., Tranquillo, R. T., Barocas, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+multiscale+modeling+predicts+tissue-level+and+network-level+fiber+reorganization+in+stretched+cell-compacted+collagen+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Image-based multiscale modeling predicts tissue-level and network-level fiber reorganization in stretched cell-compacted collagen gels.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 17675-17680 (2009).</li>
<li>Hu, J. J., Humphrey, J. D., Yeh, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+engineered+tissue+development+under+biaxial+stretch+using+nonlinear+optical+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Characterization of engineered tissue development under biaxial stretch using nonlinear optical microscopy.</a> Tissue Eng. Part A. 15, 1553-1564 (2009).</li>
<li>Lee, E. J., Holmes, J. W., Costa, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+of+engineered+tissue+anisotropy+in+response+to+altered+loading+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Remodeling of engineered tissue anisotropy in response to altered loading conditions.</a> Ann. Biomed. Eng. 36, 1322-1334 (2008).</li>
<li>Mol, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+as+a+cell+carrier+in+cardiovascular+tissue+engineering+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Fibrin as a cell carrier in cardiovascular tissue engineering applications.</a> Biomaterials. 26, 3113-3121 (2005).</li>
<li>de Jonge, N., Kanters, F. M., Baaijens, F. P., Bouten, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-induced+Collagen+Organization+at+the+Micro-level+in+Fibrin-based+Engineered+Tissue+Constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Strain-induced Collagen Organization at the Micro-level in Fibrin-based Engineered Tissue Constructs.</a> Ann. Biomed. Eng. 41 (4), 763-774 (2012).</li>
<li>Schnell, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+cell+source+for+cardiovascular+tissue+engineering%3A+venous+vs.+aortic+human+myofibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Thorac.+Cardiovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Optimal cell source for cardiovascular tissue engineering: venous vs. aortic human myofibroblasts.</a> Thorac. Cardiovasc. Surg. 49, 221-225 (2001).</li>
<li>Mol, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autologous+human+tissue-engineered+heart+valves%3A+prospects+for+systemic+application%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Autologous human tissue-engineered heart valves: prospects for systemic application.</a> Circulation. , I152-I158 (2006).</li>
<li>Ahmann, K. A., Weinbaum, J. S., Johnson, S. L., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+degradation+enhances+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+and+matrix+deposition+in+fibrin-based+tissue+constructs+fabricated+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Fibrin degradation enhances vascular smooth muscle cell proliferation and matrix deposition in fibrin-based tissue constructs fabricated in vitro.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 3261-3270 (2010).</li>
<li>John, J., Quinlan, A. T., Silvestri, C., Billiar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Boundary+stiffness+regulates+fibroblast+behavior+in+collagen+gels%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Boundary stiffness regulates fibroblast behavior in collagen gels.</a> Ann. Biomed. Eng. 38, 658-673 (2010).</li>
<li>Rubbens, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+straining+accelerates+the+development+of+tissue+properties+in+engineered+heart+valve+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Intermittent straining accelerates the development of tissue properties in engineered heart valve tissue.</a> Tissue Eng. Part A. 15, 999-1008 (2009).</li>
<li>Chen, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphoton+imaging+and+quantitative+analysis+of+collagen+production+by+chondrogenic+human+mesenchymal+stem+cells+cultured+in+chitosan+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Multiphoton imaging and quantitative analysis of collagen production by chondrogenic human mesenchymal stem cells cultured in chitosan scaffold.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 16, 913-920 (2010).</li>
<li>de Jonge, N., Kanters, F. M., Baaijens, F. P., Bouten, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-induced+Collagen+Organization+at+the+Micro-level+in+Fibrin-based+Engineered+Tissue+Constructs%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Strain-induced Collagen Organization at the Micro-level in Fibrin-based Engineered Tissue Constructs.</a> Ann. Biomed. Eng. 41, 763-774 (2013).</li>
<li>Merryman, W. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+between+heart+valve+interstitial+cell+stiffness+and+transvalvular+pressure%3A+implications+for+collagen+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Correlation between heart valve interstitial cell stiffness and transvalvular pressure: implications for collagen synthesis.</a> Am. J. Physiol. 290, (2006).</li>
<li>Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+cellular+mechanotransduction+to+biologically+inspired+engineering%3A+2009+Pritzker+Award+Lecture%2C+BMES+Annual+Meeting+October+10%2C+2009%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">From cellular mechanotransduction to biologically inspired engineering: 2009 Pritzker Award Lecture, BMES Annual Meeting October 10, 2009.</a> Ann. Biomed. Eng. 38, 1148-1161 (2009).</li>
<li>Sander, E. A., Barocas, V. H., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+fiber+alignment+pattern+alters+extracellular+matrix+synthesis+in+fibroblast-populated+fibrin+gel+cruciforms+and+correlates+with+predicted+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Initial fiber alignment pattern alters extracellular matrix synthesis in fibroblast-populated fibrin gel cruciforms and correlates with predicted tension.</a> Ann. Biomed. Eng. 39, 714-729 (2010).</li>
<li>van der Schaft, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+Skeletal+Muscle+Tissues+from+Murine+Myoblast+Progenitor+Cells+and+Application+of+Electrical+Stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Engineering Skeletal Muscle Tissues from Murine Myoblast Progenitor Cells and Application of Electrical Stimulation.</a> J. Vis. Exp. (73), e4267(2013).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Hücre kalabalık fibrin yapıların tarif model sistem hücre ve kollajen çalışma için büyük bir potansiyele sahiptir (yeniden) organizasyonu (de Jonge ve ark. 15), doku mühendisliği amaçlar için de kullanılabilir örneğin. Ilk hücre taşıyıcı olarak fibrin kullanarak, fibrin bozulduktan sonra, bir doku hücreleri ve endojen matriste ile oluşturulur. Bu şekilde, hücre sınır sertlik 12 algılama veya gerginlik kaçınma gösteren, kasılma güçleri 16,17 uygulayarak, doğada, statik v...

Kardiyovasküler dokular önemli bir taşıyıcı fonksiyonu var. Hücre dışı matriks kollajen liflerinin belirli bir içerik ve organizasyonda yük taşıyan özellikleri katkı ve genel doku gücü 1 hakim. Doku mühendisliği yapı mekanik klima kullanılır - genellikle (döngüsel) süzme rejimlerinin oluşan - doku organizasyonu ve mekanik özellikleri 2,3 artırmak için. Önceden tanımlanmış kollajen mimarisi ile doku oluşturmak için karmaşık doku geometrilerde gerginlik kaynaklı kollajen organizasyonu tam bir anlayış henüz elde edilmiştir değil. Bu gelişmekte olan dokularda kollajen yeniden bizim sınırlı bilgi kaynaklanmaktadır. Mevcut modeller ağırlıklı olarak statik zorlanma 4-6 kullanımı ile kollajen yeniden nihai net sonucu hakkında bilgi vermek. Burada etkisi altında, 3D, gerçek zamanlı bir şekilde kolajen (yeniden) örgütün çalışma sağlayan son derece ayarlanabilir model sistem sağlarStatik veya siklik suşunun. Doku yapıları yapı tüm kollajen endojen sağlamak, fibrin tabanlı. Yapıları hücre ve kollajen organizasyon görüntülenmiştir ve bir iç referans sistemi bize zaman atlamalı analizi için hücreleri ve kollajen yapı taşınmaya sağlar. Bu hücreler dayalı olarak gelişmiş hücre dışı matriks üretim ve mühendislik kardiyovasküler dokularda 7 matris ve kurulan kullanım bozulmasina yeteneği, tanınırlar beri bu protokolde, İnsan Vena Saphena Hücreleri (HVSCs) için model sisteminin kullanımı anlatacağım de Jonge ve ark. 8 çalışmalarına

<table><tbody><tr><td>Kültür plastiği</td><td>Greiner</td><td></td><td>Kültür şişeleri ve pipetleri içerir</td></tr><tr><td>Gelişmiş DMEM</td><td>Gibco</td><td>12491</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Greiner</td><td>758075</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/streptomisin</td><td>Gibco</td><td>10378016</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax</td><td>Gibco</td><td>35050-079</td><td></td></tr><tr><td>Elastomer ve kürleme maddesi</td><td>Dow Corning Corporation</td><td>3097358-1004</td><td>Silastik MDX 4-4210 #</td></tr> <tr><td>Velcro</td><td>Normal mağaza</td><td></td><td>Bunu normal bir mağazadan satın alabilirsiniz, sadece yumuşak tarafı kullanın</td></tr><tr><td>Bioflex kültür plakaları</td><td>Flexcell Int</td><td>BF-3001U</td><td>İşlenmemiş</td></tr><tr><td>L-Askorbik Asit 2-fosfataz</td><td>Sigma</td><td>A8960</td><td></td></tr> <tr><td>ve epsilon;-Amino Kaproik Asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D7754</td><td></td></tr><tr><td>Sığır trombini</td><td>Sigma</td><td>T4648</td><td></td></tr><tr><td>Sığır fibrinojeni</td><td>Sigma</td><td>F8630</td><td></td></tr><tr><td>0.45 şırınga filtresi</td><td>Whatmann (Schleicher ve Scheul)</td><td>10462100</td><td></td></tr><tr><td>Polistiren mikroküreler</td><td>Invitrogen</td><td>F-8829</td><td>Mavi floresan, 10 & mu; m çaplı</td></tr><tr><td>Flexcell FX-4000T</td><td>Flexcell Int</td><td></td><td>Dikdörtgen yükleme direkleri içerir</td></tr><tr><td>Hücre İzleyici Turuncu</td><td>İnvitrojen Moleküler Problar</td><td>C2927</td><td></td></tr><tr><td>CNA35-OG488</td><td></td><td></td><td>Makromoleküler ve Organik Kimya Laboratuvarı tarafından samimi olarak sağlanmıştır, Biyomedikal Mühendisliği Bölümü, Eindhoven Teknoloji Üniversitesi</td></tr><tr><td>Konfokal lazer tarama mikroskobu</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>LSM 510 Meta lazer tarama mikroskobu ve İki Foton-LSM modu</td></tr><tr><td>Amfoterisin</td><td>Gibco</td><td>15290-018</td><td>Hücre izolasyonu için gerekli</td></tr></tbody></table>

mühendislik fibrin tabanlı doku miyofibroblastlar ve kısıtlar uygulamasından yapıları ve hücre ve kollajen (re) organizasyon tetikleyebilecek süzün

Engineering Fibrin-based Tissue Constructs from Myofibroblasts and Application of Constraints and Strain to Induce Cell and Collagen Reorganization

Kolajen içerik ve kollajen doku gelişmekte olan organizasyon lokal doku suşları ve doku kısıtlaması tarafından etkilenebilir. Doku mühendisleri önceden tanımlanmış kollajen mimarileri ile dokuları oluşturmak için bu ilkeleri kullanmayı hedefliyoruz. Son mimari dokusu kontrol etmek için kollajen yeniden tam yatan süreçlerin tam bir anlayış, ancak eksik olduğunu. Özellikle, küçük bir doku mekanik yükleme koşullarındaki değişikliklere yanıt olarak kollajen liflerinin (yeniden) yönlendirme hakkında bilinmektedir. Biz daha kollajen aydınlatmak için, iki taraflı-kısıtlı miyofibroblast numaralı seribaşı fibrin yapıları oluşan, in vitro model sistem bir geliştirilen i yanıt olarak (yeniden) yönlendirme) tek eksenli statik yükleme koşulları ve ii iki eksenli geri alma) Çift yönlü-kısıtlı siklik tek eksenli yükleme Flexcell FX4000T yükleme cihazı kullanımı ile, yön değişikliği yükleme öncesi ve sonrası yapıları. Time-lapse konfokal görüntüleme vi için kullanılırbir tahribatsız şekilde kolajen (yeniden) yönlendirme sualize. Yapıları hücre ve kollajen organizasyon gerçek zamanlı olarak görüntülenmiştir olabilir, ve bir iç referans sistemi bize zaman atlamalı analizi için hücreleri ve kollajen yapı taşınmaya sağlar. Model sisteminin çeşitli yönleri hücre kaynağı ya da sağlıklı ve hastalıklı hücrelerin kullanımı gibi, ayarlanabilir. Katkı maddeleri örneğin MMP ekleyerek veya integrinler tarafından bloke edilmesi için, daha altta yatan mekanizmalar kollajen yeniden aydınlatmak için kullanılabilir. Bu yapı şekli ve büyüklüğü kolayca hücresi ve kollajen (yeniden) organizasyonu incelemek için bir çok ayarlanabilir modeli sistemi ile sonuçlanan, özel ihtiyaçlarına göre adapte edilebilir.

Bu model sistem kültür miyofibroblast numaralı seribaşı fibrin jeller için izin verir. Şekil 1A statik iki eksenli kısıtlar altında ilk kültüre bir doku gösterir. Doku kısıtlamaları tek eksenli statik kısıtlamaları oluşturmak için, iki kısıtlamaları fibrin jel kesim tarafından yayımlanan ve doku kompakt ve daha sonra remodels (Şekil 1A) vardır. Siklik bir suş için, doku hem de statik eksenli kısıtlamalar altında kültürlenir. 5 gün sonra, siklik tek eksenli gerilme (Şekil 1B)</st...

Bu model sistem bir tahribatsız şekilde endojen kolajen (yeniden) organizasyonu gerçek zamanlı çalışma için kullanılabilecek bir miyofibroblast nüfuslu fibrin jel başlar. Bu model sistemi, farklı hücre kaynakları, orta katkı maddeleri ile birlikte kullanılabilir gibi çok ayarlanabilir, ve özel ihtiyaçlarına göre kolay bir şekilde adapte edilebilir.

Mühendislik Fibrin tabanlı Doku miyofibroblastlar ve Kısıtlar Uygulamasından Yapıları ve Hücre ve Kollajen (Re) Organizasyon tetikleyebilecek süzün

Collagen content and organization in developing collagenous tissues can be influenced by local tissue strains and tissue constraint. Tissue engineers aim ...

Bu prosedürün genel amacı, hücre ve kolajen reorganizasyonunu incelemek için kullanılabilecek fibrin tabanlı yapılar oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle donör dokusundan insan venöz safen hücrelerinin izole edilmesi ve kültürde çoğaltılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise Velcro şeritlerin esnek membranlara yapıştırılmasıdır.Konstrüktü tutacak merkezdeki kare alanı oluşturmak için altı kuyucuklu plakaların tabanına cırt cırt şeritler yerleştirilir. Ardından, fibrinogen trombin hücreleri ve floresan işaretli boncuklardan oluşan bir karışım, cırt cırt şeritler arasındaki boşluğa eklenir ve bir jel oluşturmak üzere polimerleşmeye bırakılır. Son adım, konstrükte ya tek eksenli döngüsel gerilme uygulayarak ya da statik gerilmeyi serbest bırakarak hücreleri koşullandırmak ve yönlendirilmiş matris oluşumunu tetiklemektir.Fibrin jel, Velcro desteklerden tek bir yönde budanarak temizlenir. Nihayetinde, konfokal mikroskopi kullanılarak yapıların zaman içindeki takibiyle, hücresel ve kollajen yeniden organizasyonundaki değişiklikleri tanımlayan sonuçlar elde edilebilir. Bu yöntem, farklı hücre tipleri tarafından kollajen oluşumunun ve yeniden yönlenmesinin hızıyla ilgili olarak kollajen y

engineering-fibrin-based-tissue-constructs-from-myofibroblasts

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Burada, kolajen doku, iskelet matür içeren yapıları imalatı göstermektedir. Bu 3-D mühendislik yapıları dokuların değiştirmek veya onarmak için kullanılan...

MİYOJEN Engineered Doku oluşturur imalatı

Biz yenidoğan kardiyomiyositlerde izolasyonu ve doku mühendisliği için fibrin hidrojel yapıları kapsülleme hücrelerin hazırlanması açıklar. Biz elektrik stimülasyonu ve hücre canlılığı ve immünohistolojik boyama üzerine oluşturulan etkin bir güç de dahil olmak üzere kültür süre sonra doku mühendislik miyokardın analiz yöntemleri açıklanmaktadır.

Kalp Doku Mühendisliği Fibrin Hidrojel kardiyomiyositlerinin Kapsülleme

Bu protokol çevreleyen hücre dışı matriks gelen ipucu almak ve birden fenotipleri farklılaşması için indüklenebilir kök hücrelerin doğal yeteneği kullanılmasına odaklanmıştır. Bu yöntemler yazının aynı anda yağ kaynaklı kök hücreleri birlikte ayırt etmek için, PEG-fibrin ve kollajen oluşan iki katmanlı hidrojel kullanan bir model, bizim ve nitelendirilmesi...

ASC farklılaşma kontrol için bir iki tabakalı Hidrojel mühendislik

48 saatlik bir süre boyunca çevre kontrollü bir biyoreaktörde fibroblast aracılı jel sıkıştırma ve fibrin fiber yeniden hizalamayı gözlemlemek ve analiz etmek için zaman atlamalı mikroskopi ve görüntü işleme teknikleri kullanılmıştır.

Fibroblast aracılı Fibrin Jel Sıkıştırmayı Gözlemleme ve Ölçme

Bu çalışmada, kollajen, düz kas hücreleri ve endotel hücrelerinin doğrudan kültürlenmesi yoluyla canlı vasküler dokuların hızlı bir şekilde üretilmesi için bir teknik sunuyoruz. Ek olarak, tasarlanmış vasküler dokuların mekanik karakterizasyonu için yeni bir protokol tanımlanmıştır.

Vasküler Doku Rejenerasyon için Mühendislik 3D cellularized Kollajen jeller

Üç boyutlu yapıların insan egzersize şartlandırılmış serum ile muamele edildiği ve kollajen içeriği, fonksiyonu ve hücre biyokimyası için analiz edildiği bir ligament doku modeli sunuyoruz.

Egzersiz Koşullandırılmış Serum İle Ligament Yapılarının Tedavisi: Bir Translasyonel Doku Mühendisliği Modeli

Bu makale, bir elektrik alanına (EF) maruz kalan lifli iletken malzemelerin sonlu eleman modellerini oluşturmak için bir strateji sunmaktadır. Modeller, bu tür malzemelerde tohumlanan hücrelerin aldığı elektrik girişini tahmin etmek ve iskelenin kurucu malzeme özelliklerini, yapısını veya yönünü değiştirmenin etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.

Hücresel Elektrik Mikroçevriminin Sonlu Eleman Modellemesi

Burada sunulan, mekanistik çalışmalar, hastalık modelleme ve tarama uygulamaları için uygun, çift kutuplu çok kuyulu bir plakada 48 dokudan oluşan paralel bir kültür için tasarlanmış bağ dokuları üretmek için bir protokoldür. Protokol, farklı organ ve türlerden fibroblastlarla uyumludur ve burada insan primer kardiyak fibroblastlarla örneklenmiştir.

Fibroblast Türetilmiş İnsan Tarafından Tasarlanmış Bağ Dokusu Tarama Uygulamaları için

Aşağıdaki protokol, çok çeşitli doku mühendisliği uygulamalarına uygulanabilen nano ölçekli desenli fibrillere sahip kollajen hidrojellerin üretimi için kesme tabanlı bir ekstrüzyon yöntemi sunar.

Doku Mühendisliği İçin Nanofibriler Desenli Kollajen Üretimi

Eriyik elektrospinning yazma (MEW), polikaprolakton (PCL) iskeleleri ve fibrin hidrojelleri hiPSC türevi kardiyomiyositler ve fibroblastlarla birleştiren 3D miyokardiyal dokular oluşturmak için tekrarlanabilir bir yöntem sunulmuştur. Bu teknik, iskele mimarisi üzerinde hassas kontrol sağlar ve klinik öncesi ilaç testlerinde ve kalp hastalığı modellemesinde uygulanabilir.

Polikaprolakton İskelelerinin ve hiPSC'den Türetilmiş Kardiyak Hücrelerin Eriyik Elektrospinning Yazımı Kullanılarak 3D İnsan Miyokard Dokusu Üretimi

Keşfedin fibrin bazlı yapılar kullanarak kollajen reorganizasyonunu gerçek zamanlı izleme yöntemini. Bu sistem hücre biyolojisi ve doku mühendisliği araştırmaları için uyarlanabilir bir platform sunar.

Mühendislik Fibrin tabanlı Doku miyofibroblastlar ve Kısıtlar Uygulamasından Yapıları ve Hücre ve Kollajen (Re) Organizasyon tetikleyebilecek süzün (Video) | JoVE Journal

Mühendislik Fibrin tabanlı Doku miyofibroblastlar ve Kısıtlar Uygulamasından Yapıları ve Hücre ve Kollajen (Re) Organizasyon tetikleyebilecek süzün

Daha fazla video keşfet