Name: Fare intralenfatik immünoterapi ve Aşılama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Öğrenin farelerde intralenfatik aşılama yöntemiyle lenf düğümlerine doğrudan enjeksiyon yaparak bağışıklık yanıtlarını nasıl güçlendireceğinizi. Bu teknik, geleneksel yöntemlere göre daha etkili sonuçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Iris Erdmann&#39;a, Barbara von Beust ve Julia Maria Martínez-Gómez farelerde intralenfatik bağışıklama yöntemini gelişmekte deneysel yardım için minnettarız. Bize bu video üretimi için kendi cerrahi tiyatro bildirdiğiniz için de Maggy Arras ve Nikola Cesarovic teşekkürler.

1.. Farelerin Anestezi <ol><li> Tamponlu tuz çözeltisi içinde ketamin (dissosiyatif anestezi) ve ksilazini (sedatif ve analjezik) karıştırılarak anestezik hazırlayın. Nihai çözelti içinde ketamin ve ksilazin konsantrasyonları sırasıyla 12,5 ve 2 mg / ml &#39;dir. </li><li> 25-30 G iğnesi olan bir şırınga kullanılarak intraperitonal uygulama ile farelere anestezi enjekte edilir. Vücut ağırlığının 0.1 ml/10 g kullanın. </li><li> Kornea kurutulması Çıkış önlemek için farenin gözlerindeki bir oftalmik merhem uygulayın. </li><li> Fare yeterince forseps ile ayak veya ayak kısma anestezi sağlamalıdır. Fare tutam refleksleri ile tepki vermezse, cerrahi geçin. Fare refleksleri veya kas kasılmaları ile tutam tepki varsa, 1-2 dakika bekleyin ve tutam testi tekrarlayın. Fare hala tepki vermiyorsa, bir yeni hayvan ile fare değiştirin ve sonrası adım 1.2 &#39;den işlemleri tekrarlayın. </li></ol> 2. Cerrahi IMouse Kasık Alanı ncision <ol><li> Sırtında fare yerleştirin. </li><li> Dezenfeksiyon etanol (% 70) ile bir inguinal bölge ıslatın. Daha iyi dezenfeksiyon sağlamak için, inguinal bölge etanol ile kürk önce dezenfeksiyon kaldırmak için traş olabilir. </li><li> Arka bacak alın ve kalça ekleminin yaklaşık 90 ° açı üretmek için kalça eklemi bükün. </li><li> Kavisli bir Microdissecting forseps kullanarak, kalça eklem bükülmüş kasık bölgesinde fare deri alıp hafifçe ıslatılmış cildi yukarı çekin. </li><li> Forseps ile cilt kadar tutarken, cerrahi makas kullanılarak deri yoluyla küçük bir kesi (&lt;5 mm) kesti. </li><li> Kesi içine kapalı makas ucu yerleştirin ve daha fazla ensizyon içine tutarken makas açarak kesi açın. Bu, gözyaşı ve en az 10 mm&#39;lik bir çapa üretmelidir cilt neden olur. Not: esnek ışık kılavuzları ile bir soğuk ışık kaynağı görünürlüğünü artırmak için kullanılabilir. Eski yılındafareler, özellikle erkek, lenf düğümü kimlik nedeniyle kasık bölgesinde fazla yağ dokusu zor olabilir. </li></ol> 3. Intralenfatik Enjeksiyon <ol><li> Bir 28-30 G derialtı iğne ile bir şırınga (0.5 ml veya daha az) hazırlayın; kısa konik uzun eğimin tercih edilebilir. Aşının aspire 10 ul enjekte ve şırınga serbest hava olduğunu garanti edilecek. </li><li> Kavisli bir forseps yardımı ve kapalı makas ucu ile kasık lenf düğümü yerelleştirilmesine. Lenf düğümü daha beyazımsı yağ dokusu içindeki grimsi görünür ve daha fazla giriş ve lenf düğümü terk afferent ve efferent kılcal ile tespit edilebilir. </li><li> Kavisli bir forseps dalları arasında tutarak lenf düğümü hareketsiz. </li><li> Şırınga alın ve yukarı bakacak Eğim ile lenf düğümüne iğneyi, bütün konik lenf düğümü girer emin. </li><li> Aşısı (10 ul) enjekte edilir. Eğer lenf node (üfleme) şişme, enjeksiyon başarılı kabul edilebilir. Iğne lenf düğümüne derinliklerine yeterince yer değilse, bazı veya tüm aşı dışarı sızıntı ve lenf düğümü giremezsiniz. İğne çok derin yerleştirildiğinde ise, deri altından enjekte edilen aşı, lenf düğümü, aşağıda açıklanacak. Ikinci durumunda, tekrar enjeksiyon ya da yeni bir tedavi edilmemiş fare ile fare değiştirin. </li></ol> 4. Dikiş ile kesi Kapanış <ol><li> Steril cerrahi sütür bir paket açın. </li><li> Iğne gövdesinin distal kısmında bir iğne tutucusu ile dikiş iğnesi tutunuz. İlk mandal yakalar kadar sıkarak iğne tutucu sıkın. </li><li> (Un dişli veya dişli forseps veya deri kanca kullanılabilir cerrahın tercihine bağlı olarak) forseps kullanılarak kesi bir tarafında deri tutunuz. İğne ca yerleştirin. 2-3 mm kesi kenarından, derinin dış giren. </li><li> Loosforseps ile cilt beklemeye tr ve forseps ile kesi karşı tarafını kavrayın. İğne ca yerleştirin. 2-3 mm kesi kenarından, deri içine giren. </li><li> İğne tutucu gevşetmek ve forseps ile iğne ucu kavramak. Birkaç farenin tedavi edilecek ise, daha kısa bir uç bırakmak (birinci iğne ekleme noktası dışında taban yüzünün uygun bir uzunluğu bırakarak deri yoluyla profili olan iğne çekin, 5-10 farenin bir dikiş iğnesi ile çalıştırılabilir /) yürümek. </li><li> Standart cerrah protokollere göre tercih edilen düğüm yapın. Kesi 10 mm daha büyük değilse, tek dikiş yeterlidir. Daha büyük kesiler için, ikinci bir dikiş yapmak. </li></ol> 5. Post-operasyonel Tedavi <ol><li> Kafeste fare yerleştirin ve sıcak tutmak için dokuları ile kaplayın. Birden fareler tedavi ederken, sıcak tutmak için birbirine yakın onları yerleştirin. Onlar uyandı kadar alternatif, bir sıcak ped fareler yerleştirinkadar. </li><li> Onlar uyanmak kadar fareler gözlemleyin. </li><li> Iyileşme yanı sıra yara enfeksiyonları gibi diğer klinik belirtiler yara ile ilgili olarak günlük fareler dikkate alınmalıdır. Yara genellikle yeterince iki gün içinde kapalı ve prosedürün yedi gün içinde iyileşti. </li></ol>

<ol><li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+intralymphatic+injection+of+peptide+vaccines+enhances+immunogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Direct intralymphatic injection of peptide vaccines enhances immunogenicity.</a> Eur. J. Immunol. 35, 568-574 (2005).</li>
<li>Maloy, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+immunization+enhances+DNA+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic immunization enhances DNA vaccination.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 3299-3303 (2001).</li>
<li>Smith, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+DNA+vaccination+by+sequential+injection+of+lymph+nodes+with+plasmid+vectors+and+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Enhancing DNA vaccination by sequential injection of lymph nodes with plasmid vectors and peptides.</a> Vaccine. 27, 2603-2615 (2009).</li>
<li>Kreiter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranodal+vaccination+with+naked+antigen-encoding+RNA+elicits+potent+prophylactic+and+therapeutic+antitumoral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Intranodal vaccination with naked antigen-encoding RNA elicits potent prophylactic and therapeutic antitumoral immunity.</a> Cancer Res. 70, 9031-9040 (2010).</li>
<li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+kinetics+determines+immune+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Antigen kinetics determines immune reactivity.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 5189-5194 (2008).</li>
<li>Smith, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node-targeted+immunotherapy+mediates+potent+immunity+resulting+in+regression+of+isolated+or+metastatic+human+papillomavirus-transformed+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Lymph node-targeted immunotherapy mediates potent immunity resulting in regression of isolated or metastatic human papillomavirus-transformed tumors.</a> Clin. Cancer Res. 15, 6167-6176 (2009).</li>
<li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll-like+receptor+ligands+as+adjuvants+in+allergen-specific+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Allergy%22%5BJournal%5D)">Toll-like receptor ligands as adjuvants in allergen-specific immunotherapy.</a> Clin. Exp. Allergy. 35, 1591-1598 (2005).</li>
<li>Johansen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+denaturation%2C+a+simple+method+to+improve+the+immunotherapeutic+potential+of+allergens%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Heat denaturation, a simple method to improve the immunotherapeutic potential of allergens.</a> Eur. J. Immunol. 35, 3591-3598 (2005).</li>
<li>Martinez-Gomez, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+injections+as+a+new+administration+route+for+allergen-specific+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Arch.+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic injections as a new administration route for allergen-specific immunotherapy.</a> Int. Arch. Allergy Immunol. 150, 59-65 (2009).</li>
<li>Martinez-Gomez, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+MHC+class+II+pathway+of+antigen+presentation+enhances+immunogenicity+and+safety+of+allergen+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Targeting the MHC class II pathway of antigen presentation enhances immunogenicity and safety of allergen immunotherapy.</a> Allergy. 64, 172-178 (2009).</li>
<li>Mohanan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administration+routes+affect+the+quality+of+immune+responses%3A+A+cross-sectional+evaluation+of+particulate+antigen-delivery+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Administration routes affect the quality of immune responses: A cross-sectional evaluation of particulate antigen-delivery systems.</a> J. Control Release. 147, 342-349 (2010).</li>
<li>Waeckerle-Men, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+targeting+of+BCG+vaccines+amplifies+CD4+and+CD8+T-cell+responses+and+protection+against+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Lymph node targeting of BCG vaccines amplifies CD4 and CD8 T-cell responses and protection against Mycobacterium tuberculosis.</a> Vaccine. 31, 1057-1064 (2013).</li>
<li>von Beust, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+therapeutic+index+of+CpG+oligodeoxynucleotides+by+intralymphatic+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Improving the therapeutic index of CpG oligodeoxynucleotides by intralymphatic administration.</a> Eur. J. Immunol. 35, 1869-1876 (2005).</li>
<li>Senti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+immunotherapy+for+cat+allergy+induces+tolerance+after+only+3+injections%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Allergy+Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic immunotherapy for cat allergy induces tolerance after only 3 injections.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 129, 1290-1296 (2012).</li>
<li>Senti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+allergen+administration+renders+specific+immunotherapy+faster+and+safer%3A+a+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic allergen administration renders specific immunotherapy faster and safer: a randomized controlled trial.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 17908-17912 (2008).</li>
<li>Lesterhuis, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Route+of+administration+modulates+the+induction+of+dendritic+cell+vaccine-induced+antigen-specific+T+cells+in+advanced+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Route of administration modulates the induction of dendritic cell vaccine-induced antigen-specific T cells in advanced melanoma patients.</a> Clin. Cancer Res. 17, 5725-5735 (2011).</li>
<li>Fadul, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+in+patients+with+newly+diagnosed+glioblastoma+multiforme+treated+with+intranodal+autologous+tumor+lysate-dendritic+cell+vaccination+after+radiation+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunother%22%5BJournal%5D)">Immune response in patients with newly diagnosed glioblastoma multiforme treated with intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccination after radiation chemotherapy.</a> J. Immunother. 34, 382-389 (2011).</li>
<li>Eizenberg, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceptance+of+Intanza%28R%29+9+mug+intradermal+influenza+vaccine+in+routine+clinical+practice+in+Australia+and+Argentina%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Ther%22%5BJournal%5D)">Acceptance of Intanza(R) 9 mug intradermal influenza vaccine in routine clinical practice in Australia and Argentina.</a> Adv. Ther. 28, 640-649 (2011).</li>
<li>Durando, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adjuvants+and+alternative+routes+of+administration+towards+the+development+of+the+ideal+influenza+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Vaccin%22%5BJournal%5D)">Adjuvants and alternative routes of administration towards the development of the ideal influenza vaccine.</a> Hum. Vaccin. 7, 29-40 (2011).</li>
<li>Barth, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+randomized+trial+of+ex+vivo+CD40L+activation+of+a+dendritic+cell+vaccine+in+colorectal+cancer+patients%3A+tumor-specific+immune+responses+are+associated+with+improved+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A randomized trial of ex vivo CD40L activation of a dendritic cell vaccine in colorectal cancer patients: tumor-specific immune responses are associated with improved survival.</a> Clin. Cancer Res. 16, 5548-5556 (2010).</li>
<li>Schwaab, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+immunologic+effects+of+intranodal+autologous+tumor+lysate-dendritic+cell+vaccine+with+Aldesleukin+%28Interleukin+2%29+and+IFN-%7Balpha%7D2a+therapy+in+metastatic+renal+cell+carcinoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Clinical and immunologic effects of intranodal autologous tumor lysate-dendritic cell vaccine with Aldesleukin (Interleukin 2) and IFN-{alpha}2a therapy in metastatic renal cell carcinoma patients.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4986-4992 (2009).</li>
<li>Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Allergy+Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic immunotherapy.</a> Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 9, 537-543 (2009).</li>
<li>Catron, D. M., Itano, A. A., Pape, K. A., Mueller, D. L., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+first+50+hr+of+the+primary+immune+response+to+a+soluble+antigen%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Visualizing the first 50 hr of the primary immune response to a soluble antigen.</a> Immunity. 21, 341-347 (2004).</li>
<li>Itano, A. A., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+presentation+to+naive+CD4+T+cells+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen presentation to naive CD4 T cells in the lymph node.</a> Nat. Immunol. 4, 733-739 (2003).</li>
<li>Johansen, P., Mohanan, D., Martinez-Gomez, J. M., Kundig, T. M., Gander, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lympho-geographical+concepts+in+vaccine+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Lympho-geographical concepts in vaccine delivery.</a> J. Control Release. 148, 56-62 (2010).</li>
<li>Johansen, P., von Moos, S., Mohanan, D., Kundig, T. M., Senti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+routes+for+allergen+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Vacc.+Immunother%22%5BJournal%5D)">New routes for allergen immunotherapy.</a> Hum. Vacc. Immunother. 8, 1525-1533 (2012).</li>
<li>Senti, G., Johansen, P., Kundig, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intralymphatic+immunotherapy%3A+from+the+rationale+to+human+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intralymphatic immunotherapy: from the rationale to human applications.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 352, 71-84 (2011).</li>
<li>Duthie, M. S., Windish, H. P., Fox, C. B., Reed, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+defined+TLR+ligands+as+adjuvants+within+human+vaccines%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Use of defined TLR ligands as adjuvants within human vaccines.</a> Immunol. Rev. 239, 178-196 (2011).</li>
<li>Ribas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-lymph+node+prime-boost+vaccination+against+Melan+A+and+tyrosinase+for+the+treatment+of+metastatic+melanoma%3A+results+of+a+phase+1+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Intra-lymph node prime-boost vaccination against Melan A and tyrosinase for the treatment of metastatic melanoma: results of a phase 1 clinical trial.</a> Clin. Cancer Res. 17, 2987-2996 (2011).</li>
<li>Bedrosian, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranodal+administration+of+peptide-pulsed+mature+dendritic+cell+vaccines+results+in+superior+CD8%2B+T-cell+function+in+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intranodal administration of peptide-pulsed mature dendritic cell vaccines results in superior CD8+ T-cell function in melanoma patients.</a> J. Clin. Oncol. 21, 3826-3835 (2003).</li>
<li>Lesimple, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injection+by+various+routes+of+melanoma+antigen-associated+macrophages%3A+biodistribution+and+clinical+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol.+Immunother%22%5BJournal%5D)">Injection by various routes of melanoma antigen-associated macrophages: biodistribution and clinical effects.</a> Cancer Immunol. Immunother. 52, 438-444 (2003).</li>
<li>Brown, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-transduced+dendritic+cells+injected+into+skin+or+lymph+node+prime+potent+simian+immunodeficiency+virus-specific+T+cell+immunity+in+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-transduced dendritic cells injected into skin or lymph node prime potent simian immunodeficiency virus-specific T cell immunity in monkeys.</a> J. Immunol. 171, 6875-6882 (2003).</li>
<li>Fong, L., Brockstedt, D., Benike, C., Wu, L., Engleman, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+injected+via+different+routes+induce+immunity+in+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells injected via different routes induce immunity in cancer patients.</a> J. Immunol. 166, 4254-4259 (2001).</li>
</ol>

TMK adam intralenfatik immünoterapi ile ilgili patent mucidi olarak adlandırılır. TMK bilimsel danışmanı olmuştur ve ImVisioN GmbH, Cytos Biyoteknoloji, MannKind Corporation ve XBiotech USA Inc PJ ifşa hiçbir çatışma ilgi seyahat masraflarını aldı.

Lenf içine aşılama ve immünoterapi antikor karşılıkları ve T-hücresi tepkilerinin her ikisinin stimülasyonu için uygun olduğu gösterilmiştir. Bu video-makale de gösterildiği gibi, aşı intralenfatik prosedür farelerde güçlü bir immün yanıtları stimüle etmek için hızlı ve kolay bir yöntemdir. Eğitimli bir cerrah 3-4 dakika boyunca yordamı gerçekleştirebilir. Oturumda ayrıca bir genellikle anestezi ve dikiş atılmasını yapıyor ve ikinci cerrah kesi ve enjeksiyon yapıyor, iki cerrahlar arasında paylaşılabilir. Prosedürün etk...

Aşılar genellikle bağışıklık yanıtlarının uyarılması için deri altından ya da kas içinden enjekte edilir. Bu prosedürün başarısı, antijen sunan hücreler, T-ve B-hücresi tepkilerinin üretilmesi için lenfositleri ile etkileşim lenf düğümlerine aşının etkili bir drenaj gerektirir. Buna ek olarak, dayanıklılık ve kaynaklı bağışıklık tepkilerinin türü de yoğunluğu ya da frekans gibi etkileşimlerin hem de mikro kendisi, sitokinlerin, özellikle içeriğine bağlıdır. Çevresel bir doku içine enjekte edilen bir aşının sadece küçük bir kısmı, bir lenf düğümü ulaştığında, lenf düğümleri içine aşı direkt enjeksiyonu ile farelerde ve insanlarda ve aşılar, site bağışıklık cevapları oluşturulur edildi gerçekleştirilmiştir. İnsanlarda, prosedür ultrason da lenfatik sistem görselleştirme ve teşhis için görüntüleme maddeleri uygulanması için kullanılan bir prosedür ile yönlendirilir. Farelerde, prosedür invaziv. Burada, bir küçük (5-10 mm) incision, anestezi uygulanmış hayvanlar 1&#39;in kasık bölgesinde yapılır, lenf düğümü ve lokalize forseps ile hareketsiz ve aşı 10-20 ul&#39;lik bir hacim görsel kontrol altında enjekte edilir, 10 ul ilk enjeksiyon için kullanılır ve genç farelerde küçük lenf düğümleri ile, oysa 20 ul büyük lenf düğümleri lenf düğümleri daha büyük ya da zaten farede, enjekte edilebilir. İnsizyon edilebilir cerrahi dikişle, bir tek dikiş ile kapatılabilir. Bu yöntem ile, farenin plazmid DNA 2,3, haberci RNA 4, 1,3,5,6 peptid, protein, 7-10, 11, parçacıklar, bakteriler 12 hem de 7,13 ilave maddeler ve bağışıklık güçlü iyileşme ile aşılanmış olan aşıların her tür karşı tepkiler gözlenmiştir. Aşılama intralenfatik yöntemi geleneksel aşılama yetersiz bağışıklık üreten veya mevcut aşının miktarı sınırlı ya da ver olduğu durumlarda özellikle uygundurpahalı y. İnsanda, lenf sistemi içi aşılama yöntemi, alerji hastalara 14,15 ya da kanserli 16-21 olan hastalara uygulanmıştır. Mevcut kavramı intralenfatik yöntem, kas içi ve deri altı enjeksiyonlar gibi diğer enjekte edilebilir yöntemlere göre daha invaziv olmasıdır, ancak ağrı algısı, damar delinerek 15 sonra daha yüksek değildir. Bu lenf sistemi içi aşı koruyucu ve tedavi edici aşıların, özellikle diğer yöntemlere bir alternatif veya tamamlayıcı olacağı beklenmektedir. Bu makalede, lenf sistemi içi aşılama prosedürü farelerde gerçekleştirilir kadar ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Açıklanan tüm prosedürler, Zürih Kantonu Veterinerlik Kurumu tarafından onaylanan ve İsviçre federal kuralları ve bilimsel amaçlar için kullanılan hayvanların korunması ile ilgili direktifleri göre yapılmıştır.

<table><tbody><tr><td>Ketamin (Ketasol-100)</td><td>Graeub AG, İsviçre</td><td>Anestezikler</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin (Rompun)</td><td>Bayer, Almanya</td><td></td><td>Anestezikler</td></tr><tr><td>Viscotears Göz Jeli</td><td>Novartis, İsviçre</td><td></td><td>Anestezi sırasında gözlerin kurumasını önlemek için.</td></tr><tr><td>BD Micro-Fine 0.5 ml</td><td>BD Medikal, Fransa</td><td></td><td>29 G Kalıcı olarak takılan iğneli insülin şırıngaları</td></tr><tr><td>6-0 Dermalon Monofilament Naylon</td><td>Covidien, MA, ABD</td><td></td><td>Sütürler için (0.7 metrik, 18 G, 45 cm, Mavi)</td></tr><tr><td>Kavisli forseps, 4.5 in</td><td>Polymed, İsviçre</td><td></td><td>Lenf nodunun kesilmesi ve tutulması için</td></tr><tr><td>Düz cerrahi makas, 4.5</td><td>Polymed, İsviçre</td><td></td><td>İnsizyon</td></tr><tr><td>için İğne tutucu, 5.5</td><td>Polymed, İsviçre'de</td><td></td><td>İnsizyonu dikişle kapatmak için</td></tr></tbody></table>

fare intralenfatik immünoterapi ve aşılama

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Aşılar genellikle bağışıklık yanıtlarının uyarılması için deri altından ya da kas içinden enjekte edilir. Bu başarısı, antijen sağlayan hücreler, aranan bağışıklık yanıtlarının oluşturulması için lenfositleri ile etkileşim lenf düğümlerine aşının etkili bir drenaj gerektirir. Gücü ve kaynaklı bağışıklık tepkilerinin türü de yoğunluğu veya frekans etkileşimlerin hem de mikro-, sitokinlerin, özellikle içeriğine bağlıdır. Çevresel olarak enjekte edilen aşı sadece küçük bir kısmını, lenf düğümleri ulaştığında, fareler ve insanlarda aşı kasık lenf düğümleri, örneğin lenf sistemi içi enjeksiyonu içine aşı direkt enjeksiyonu ile yapılmıştır. İnsanlarda, prosedür ultrason tarafından yönlendirilmektedir. Farelerde, bir küçük (5-10 mm) bir kesik, lenf düğümü ve lokalize forseps ile hareketsiz hale anestezi uygulanmış hayvanların kasık bölgesinde yapılır ve aşı 10-20 ul&#39;lik bir hacim görsel kontrol altında enjekte edilir.Kesik, cerrahi dikiş kullanarak tek bir dikiş ile kapatılmıştır. Fareler plasmid DNA, RNA, peptid, protein, parçacıklar ve bakteriler gibi yardımcı maddeler ile aşılandı ve aşıların her tür karşı bağışıklık karşılıklarının güçlü bir iyileşme gözlendi. Aşılama intralenfatik yöntem, geleneksel aşı yetersiz bağışıklık veya Müsait aşı miktarı sınırlıdır üreten durumlarda özellikle uygundur.

Farelerde intralenfatik enjeksiyon prosedürü, cerrahi doğasına rağmen, yalındır ve nispeten hızlı. Eğitimli bir kişi 3-4 dakika içinde işlemi gerçekleştirebilirsiniz. Bir dikiş ile kapatılmıştır kesik tipik haliyle iki gün içinde iyileştirir (Şekil 1) Lenf içine aşı veya aşı mRNA ile gerçekleştirilmiştir, plazmid DNA, peptidler, proteinler, virüs ve bakteri. 2 protein fosfolipaz A2 (PLA2), ana alerjen arı zehiri ile immünizasyondan sonra antikor üretimini gö...

Profilaktik ve terapötik aşılama çoğu zaman düğümleri ve bağışıklık hücrelerinin dolayısıyla kötü katılımını lenf nedeniyle aşının hafta drenaj güçlü bağışıklık tepkilerini uyarmak için başarısız olur. Lenf düğümlerine aşı doğrudan enjeksiyon ile, sözde lenf sistemi içi enjeksiyon, aşı etkinliği güçlü geliştirilebilir ve aşı doz azaltılabilir.

Fare intralenfatik immünoterapi ve Aşılama

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerin lenf düğümlerine doğrudan aşı enjekte ederek bağışıklık yanıtlarını uyarmaktır. Bu işlem, önce farenin anestezi altına alınması ve kasık bölgesinde küçük bir insizyon yapılmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, kasık lenf düğümleri belirlenir ve sabitlenir.Son adım, aşının inguinal lenf düğümüne enjekte edilmesidir. Nihayetinde, intralenfatik aşı uygulaması, verdiği yanıt ölçülerek ve deri altı enjeksiyonlar gibi geleneksel iletim yöntemleriyle karşılaştırılarak değerlendirilebilir. Genelde bu yöntemde yeni olan bireyler, aşıyla lenf düğümünü isabet ettirmekte zorlanırlar.İğnenin kolayca yerinden kayması ve buna bağlı olarak aşının lenf nodunun dışına enjekte edilmesi nedeniyle; lenf nodunun sabitlenmesi, iğnenin yerleştirilmesi ve aşının enjeksiyonu süreçlerini koordine etmek biraz pratik gerektirebilir. Başlamak için, ekteki metin protokolünde açıklandığı şekilde fareyi anestezi altına alın. Korneaların kurumasını önlemek amacıyla, mümkün olan en kısa sürede farenin gözlerine oftalmik pomad uygulayın.Ardından fareyi sırt üstü pozisyona getirin ve yeterince anestezi altında olduğunu doğrulamak için farenin ayağını pens ile sıkın. Herhangi bir tepki gözlemlenmezse, ışık koruması sağlamak için farenin başının üzerine bir doku yerleştirin ve bir kasık bölgesini %70 ethanol ile dezenfekte edin. Daha sonra arka bacağı kaldırın ve kalça eklemini 90 derecelik bir açıyla bükün.Şimdi kavisli mikro diseksiyon pensi ile kıvrımdaki birleşmiş deriyi yukarı kaldırın ve deri üzerinden küçük bir insizyon yapın. Ardından, kapalı makasın ucunu insizyona yerleştirin. Kasık bölgesinde 10 milimetreden daha küçük bir çapta yırtık oluşturmak için makası açın.Lenf nodunu, çevresindeki daha beyaz yağ dokusuna karşı küresel ve grimsi görünümünden tanımlayın. Enjekte edilecek aşıdan 10 µL aspire etmek için 28 gauge kısa eğimli hipodermik iğneye sahip 0,5 mL'lik bir şırınga kullanın. Şimdi lenf nodunu kavisli pensin uçları arasında sabitleyin.Ardından, eğik uç yukarı bakacak şekilde şırınga iğnesini lenf düğümüne yerleştirin. Eğik ucun tamamının lenf düğümüne girdiğinden emin olun. Aşıyı enjekte edin ve başarılı bir enjeksiyonu belirten şişliği gözlemleyin.Steril cerrahi sütür paketini bir iğne tutucu ile açın. Sütür iğnesini, iğne gövdesinin distal kısmından kavrayın. Ardından, ilk diş tutana kadar sıkarak iğne tutucuyu sabitleyin ve ipi dışarı çekin.Ardından, insizyonun bir tarafındaki deriyi tutun. İğneyi, insizyon kenarından derinin dışından içeriye doğru batırın. Şimdi deriyi tutuşunuzu gevşetin ve pensle insizyonun karşı tarafını kavrayın.İğneyi, insizyon kenarından yaklaşık iki ila üç milimetre uzaklıkta olacak şekilde cildin iç kısmından geçirin. İğneyi tekrar tutun. Pens ile işlemi tamamlayın ve iğne tutucuyu gevşetin.İğneyi ve ipliği deri boyunca çekerek, ilk iğne giriş noktasının dışında uygun uzunlukta bir ip bırakın. Tercih edilen cerrahi düğümü atın. Eğer insizyon 10 milimetreden daha büyükse.İnsizyon yeterince kapandığında ikinci bir dikiş atın. Fareyi iyileşmesi için bir ısıtma pedine aktarın. Fareleri yara iyileşmesinin yanı sıra enfeksiyon gibi diğer klinik semptomlar açısından günlük olarak izleyin.Farelerdeki bu intralenfatik enjeksiyonlar basit ve nispeten hızlıdır. Tek dikişle kapatılan bir insizyon genellikle iki gün içinde iyileşir. Burada, protein fosfolipaz A2 ile immünizasyon sonrası antikor üretimi ölçülmüştür.Majör B zehir alerjeni. İntralenfatik kök stimülasyonu, 0.01 µg PLA A2 enjeksiyonu ile güçlü antikor yanıtları oluşturmuştur. Buna karşılık, yeterli bir yanıt elde etmek için 10 µg subkütan PLA A2 enjeksiyonu gerekmiştir.Bu deneyde, sitotoksik T-hücresi yanıtlarını uyarmak için intralenfatik aşılama kullanılmıştır. TCR 3 1 8 farelerine uygulanan tek bir subkütan G 33 enjeksiyonu, beklenen sitotoksik T-hücresi yanıtını tetiklemiştir. Bu yanıt, intralenfatik bir enjeksiyondan sonra yaklaşık altı kat artmıştır. CD four T-hücresi fonksiyonları da bir tümör challenge testi ile değerlendirilmiştir.İmmünize edilen fareler, syngeneic EL four tümör hücrelerini eksprese eden NP 52 ile intravenöz olarak challenge edildiklerinde, farelerde sistemik lenfoma gelişti. İntralenfatik yolla yapılan immünizasyon, subkütan yolla yapılan immünizasyona kıyasla çok daha uzun sağkalım süreleriyle sonuçlandı. İnsanlarda.İntralenfatik aşı uygulaması, subkütan lenf düğümleri belirlenerek ultrason yardımıyla gerçekleştirilir. İnsanlarda radyolojik olarak işaretlenmiş protein izleyiciler, subkütan enjeksiyonların lenf düğümlerine biyodağılımının zayıf olduğunu, buna karşın lenfatik sisteme yapılan doğrudan intralenfatik enjeksiyonun, bağışıklık yanıtını uyarmak amacıyla bağışıklık hücrelerine etkin iletimi kolaylaştırdığını göstermektedir. Uzmanlaşıldığında, bu intralenfatik aşılama prosedürü fare başına yaklaşık iki ila üç dakikada tamamlanabilir.

intralymphatic-immunotherapy-and-vaccination-in-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz anestezi farelerin trakea yoluyla ciğerlerine test malzemelerin cerrahi olmayan teslimat göstermektedir. Bu yöntem, bakteriyel ve viral patojenler, sitokinler, antikorlar, boncuk, kimyasallar, ya da boyalar akciğer maruz izin verir. Daha hasat ve flow sitometri akciğer ve akciğer drenaj lenf düğümleri (LDLNs) işlenmesi açıklanmaktadır.

Akış Sitometri Akciğerler ve Akciğer Boşaltma lenf düğümleri Analizi fareler cerrahi olmayan intratrakeal damlatma

Bu videoda, fare dalağında in situ interferon-gama (IFN-γ) sekresyonunu görselleştirmek için bir görüntüleme yöntemi gösterilmektedir. Bakteriyel enfeksiyon ve T hücreleri ve doğal öldürücü hücreler içinde IFN-γ birikiminin indüklenmesini takiben, dalak fareden alınır. Doku kesitleri elde edildikten sonra, hücrelerin içindeki IFN-γ'yi görselleştirmek için immün boyama yapılır.

Murin Lenfoid Organlarında İnterferon-Gama Sekresyonunun Tanımlanması için Test

Bu videoda hücre bazlı bir tümör aşılama testi gösterilmektedir. Tümör oluşumu için intradermal olarak B16-F10 melanom hücreleri enjekte edilen bir fare, geliştirilen tümörün yakınında Flt3L sitokin salgılayan B16-F10 hücreleri ile aşılanır. Aşıdan salgılanan Flt3L, daha sonra lenf düğümlerindeki T hücrelerine tümör antijenleri sunan dendritik hücrelerin olgunlaşmasını ve çoğalmasını teşvik ederek hedeflenmiş bir anti-tümör bağışıklık tepkisini tetikler.

Bir fare modelinde tümör implantasyonu ve bir tümör aşısının enjeksiyonu

Lenf düğümleri immün yanıtı düzenleyen immünolojik dokulardır ve aşılar için kritik bir hedeftir. Lenf düğümlerini daha iyi hedeflemek ve antijenlerin veya yardımcıların doğumlarını kontrol etmek için biyomalzemeler bunların uzaması haline getirildi. Bu makalede, lenf düğümlerine biyouyumlu polimer parçacıkları enjekte etmek için bu fikirleri birleştiren bir teknik açıklanmaktadır.

Biyobozunur Polimer Parçacıklarının Lenf İçi Düğüm Enjeksiyonu

Bu çalışma, farelerde akut pnömokok pnömonisine karşı koruma sağlamak için akciğerlerde doğuştan gelen bağışıklık tepkisini artırmak için dil altı immünoterapisinin kullanılmasının rahatlığını göstermektedir.

Alternatifi olarak dilaltı immünoterapi Akut Solunum Enfeksiyonları Karşı Koruma tetikleyebilecek

Burada, fare modelinde BCG ile intranazal ve subkutan bağışıklamanın neden olduğu koruyucu etkinliği ve akciğer immün yanıtını karşılaştırmak için izlenen metodolojiyi detaylandırıyoruz. Sonuçlarımız, pulmoner aşılamanın faydalarını göstermekte ve aşı kaynaklı korumada IL17 aracılı yanıtın rolünü önermektedir.

Koruyucu etkinliği ve Pulmoner Bağışıklık Tepkisi Fare Subkutan ve Burun BCG İdaresi ardından

Açıklanan antijenik liposomal nano tanecikleri ve kullanımları uyarıcı B-hücre harekete geçirmek vitro ve in vivohazırlıktır. Tutarlı ve güçlü antikor yanıt-e doğru yeni bir fıstık alerjisi model gelişmesine yol açtı. Antijenik lipozomlar oluşturmak için protokol farklı antijenleri ve bağışıklama modeller için genişletilebilir.

Antijenik lipozomlar hastalığa özgü antikorların üretimi için

Burada tanıtılan Protokolü içinde vivo inflamatuar koşullar altında birincil insan lenfosit akciğer izleme kapasitesini karakterizasyonu sağlar. Alerjik iltihap bir fare modeli adoptively transfer edilen insan bağışıklık hücrelerinin pulmoner infiltrasyon görüntüsü ve kimyasal olarak temizlenen Akciğer doku ışık sayfalık Floresans mikroskobu tarafından sayılabilir.

Akciğer yolu bulabilen insan lenfosit içinde deneysel bir alerjik iltihap ışık sayfalık mikroskobu üzerinde dayalı, Vivo modeli görüntüleme gelişmiş

Protokol, Flt3L eksprese eden B16-F10 melanomu ile hücre bazlı tümör aşılamasını kullanan bir kanser immünoterapi modeli sunmaktadır. Bu protokol, kültürlenmiş tümör hücrelerinin hazırlanması, tümör implantasyonu, hücre ışınlaması, tümör büyümesinin ölçülmesi, intratümöral immün hücrelerin izolasyonu ve akış sitometrisi analizi dahil olmak üzere prosedürleri göstermektedir.

Hematopoetik Sitokin ile Tümör Aşılaması Kullanılarak Deneysel Melanom İmmünoterapi Modeli

Bu protokol, açık cerrahi riskini önlemek ve kör perkütan enjeksiyonların doğruluğunu artırmak için farelerde intratimik enjeksiyon için oluşturulan girişimsel bir radyoloji prosedürünü tanımlamaktadır.

Farelerde İntratimik Enjeksiyon için Minimal İnvaziv, Doğru ve Etkili Bir Teknik

Çalışma, epikütan (EC) bağışıklama yoluyla farelerde bağışıklık tepkilerini modüle etmede cildin rolünü göstermektedir. Bir protein antijeni ile EC bağışıklaması, patojenle ilişkili moleküler paternlerle birleştirildiğinde temas aşırı duyarlılığında veya ters cilt kaynaklı baskılamada bağışıklık tepkilerini baskılayabilir. EC bağışıklaması, immünoterapiye etkili, iğnesiz bir yaklaşım olarak umut vaat etmektedir.

Epikütan İndüklenen İmmünomodülasyonun Murin Modeli

Öğrenin farelerde intralenfatik aşılama yöntemiyle lenf düğümlerine doğrudan enjeksiyon yaparak bağışıklık yanıtlarını nasıl güçlendireceğinizi. Bu teknik, geleneksel yöntemlere göre daha etkili sonuçlar sunar.

Fare intralenfatik immünoterapi ve Aşılama

Daha fazla video keşfet