Name: Içinde larvaların Devre Fonksiyonel Analiz Drosophila /i (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-19T16:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Öğrenin, Drosophila melanogaster larvalarında davranışsal çıktıları sinir mimarisi değişiklikleriyle ilişkilendirmek için davranışsal analiz ve immünofloresan mikroskopi yöntemlerini nasıl kullanacağınızı.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar WSN layık Aziz Louis Üniversitesi Rektörlük Araştırma Fonu kabul etmek istiyorum

1.. Nüfus Kafes Bakım <ol><li> 12 saat ışık-karanlık çevrimi ile 25 ° C &#39;de nüfus kafesleri koruyun. Sürece kontrol ve deney grupları aynı aydınlatma koşullarına maruz kaldığı zaman, bu teknik, standart bir laboratuvar ortamında gerçekleştirilebilir. </li><li> Kadın elma suyu agar plakaları üzerinde gece yumurtalarını bırakmak için izin verir. </li><li> 24 saat boyunca 25 ° C &#39;de, yeni biriken yumurta plakaları koruyarak yeni yumurtadan çıkmış larva toplayın. Taranmış larva çekmek için plakanın ortasına maya küçük topak yerleştirin. </li><li> Elma suyu plakasının merkezinde maya hamur içine göç 1. instar larvaları toplamak. Taze elma suyu plaka aktarmak için metal bir spatula kullanın. Ek maya hamur tahliller yapılana kadar yeterli gıda olmadığından emin olmak için ilave edilebilir. Üzüm suyu plakaları da elma suyu levhaların yerine kullanılabilir. </li><li> Geç 2.-erken 3 instar l elde1. 40-48 saat için yaş Instars izin vererek arvae. Bu aralıkta yemleme 13 sabittir. Her larva molt bu yapıda belirgin değişiklikler olduğu gibi yaş ağız kanca incelenmesi ile teyit edilebilir. </li><li> 2. geç-erken 3. instar larvaları yavaşça ve yaygın su ile elma suyu tabak yıkama ve bir gözenekli filtre üzerine toplanmasıyla larvaları davranış testleri için toplanır. Larvalar daha sonra bir agar plakası üzerine aktarılır. </li><li> Tüm analizler kontrol ve deney hayvanları kullanarak paralel olarak gerçekleştirilir. </li></ol> 2. Davranış Paradigma - Locomotion <ol><li> Bir 100 mm doku kültürü çanağı içinde bir% 2 agar tabaka üzerinde tek bir 3. deri değiştirme safhasında larva yerleştirin ve larva 30 saniye süre ile uyum sağlamaya izin verir. Larva agar alt-tabakanın yüzeyi üzerinde vücutlarını itmek için cephalopharyngeal sklerit (ağız kanca) kullanın. Bu ayrı bir tabakta yapılır çünkü it hayvan neredeyse maya gibi aynı renkte olduğu gibi maya çözelti içinde vücut kasılmaları görselleştirmek için daha zordur. </li><li> 1 dakikalık bir süre için alt-tabaka üzerinde ön hareketine her posterior dikkat edin ve kaydedin. n = her bir genotip için 20. En fazla 10 hayvan plaka başına test edilmelidir. </li></ol> 3. Davranış Paradigma - Yemleme <ol><li> Küt paslanmaz çelik 5. cımbız kullanarak dikkatli bir şekilde% 2 aktif ekmek mayası çözeltisi, 5 ml ile kaplanmış bir agar dolu plakasının merkezine lokomotor agar plakasından 3. instar larvası aktarın. Maya zamanla razı olacak gibi çözüm homojen olduğundan emin olun. Ne maya çözeltisi içinde büyük ölçüde larva davranış gözlem kolaylaştırmak, yer ve yem kalacaktır. Ağız kanca kasılmaların hızı, doğrudan 14 yutulur gıda miktarı ile ilişkilidir. </li><li> Larva 30 saniye gelmesini bekleyin. </li><li> Gözlemlemek ve sayısını kaydetmek1 dakikalık bir süre boyunca ağız kanca kasılmalar. n = her bir genotip için 20. </li></ol> 4. Larva Gut Diseksiyonlarında <ol><li> 3-çukurlu nokta cam 1x fosfat tamponlu tuz (PBS) ve yerinde bir% 4 EM dereceli formaldehit tespit çözüm olun. </li><li> Dikkatle, 1x PBS solüsyonu kullanarak 3-iyi bir cam tabak geç 3 instar larva cesareti dolaşıp proventrikülüs değişmeden kalır emin her zaman yapmak teşrih. Bir forcep ile, posterior ucundan tutun ve diğer, ağız kanca tutun. Posterior uç hareketsiz tutarken, hafifçe cesareti erişmek için ağız kanca çekin. Ilişkili herhangi bir doku (tükrük bezleri, beyin, vücut yağ, vb) çıkarın, daha sonra formaldehit düzeltmeyi içeren 3-iyi bir çanak her gut aktarın. 3. instar larva dolaşıp çünkü gelişme bu aşamada, larva pupariation için hazırlık beslenme ateşkes kullanılan ve proventrikülüs maya temizlenir. </li> &lt;li&gt; opak bir doku kültür kutusuna bir gece boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edin bağırsaklar. </li><li> Kuyulardan formaldehit tespitine çözüm çıkarmadan önce, mide çekumlardan kaldırmak ve projeksiyonlar açıkça engel olmadan görülebilir böylece proventriculus gelen ~ 150 mikron 2 midgut klibi. </li><li> Kuyulardan formaldehit düzeltme çıkarın ve 1x PBT (1 x PBS,% 0.1 &#39;lik bir proteaz içermeyen sığır serumu albümini,% 0.1 Triton X-100) tampon çözeltisi ile değiştirin. İyice 1x PBT 10 dakika boyunca cesaretin 6x yıkayın. Yıkar yaparken mekanik bir döndürücüde doku örnekleri yerleştirin. </li><li> 10 -6 M serotonin sinyalini geliştirmek için 5-HT 1 saat boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edin. İyice 1x PBT 10 dakika boyunca cesaretin 6x yıkayın. Önceki çalışmalar eksojen 5-HT bu konsantrasyon immünohistokimyasal analizler nöronal mimari veya varis yoğunluğunu etkilemez gösterdi ve sadece gürültü oranı, 15-16 sinyal artırır var. </li><li> 4 inkübe &amp;# 176; C gecede, anti-serotonin primer antikor (fare ya da tavşan poliklonal büyüdü monoklonal) içinde. İyice 1x PBT 10 dakika boyunca cesaretin 6x yıkayın. Yıkar yaparken mekanik bir döndürücüde doku örnekleri yerleştirin. </li><li> (; 1:400 seyreltme Alexa Fluor 568 keçi anti-fare ya da anti-tavşan IgG), ikincil antikor olarak, 90 dakika boyunca 4 ° C&#39;de inkübe edin. İyice 1x PBT 10 dakika boyunca cesaretin 6x yıkayın. Yıkar yaparken mekanik bir döndürücüde doku örnekleri yerleştirin. </li><li> Mekanik bir karıştırıcı üzerine, 10 dakika boyunca 4 mM sodyum karbonat içinde inkübe, daha sonra n-propil gallate/20 mM sodyum karbonat% 4 montaj ve floresan altında görünüşüdür. Sodyum karbonat mountant ortam içinde kullanılan tampon ve pH örnekleri dönüştürmek için kullanılır. </li><li> Analizi için 400X büyütme ile immunohistokimyasal doku örneklerinin görüntüler yakalayın. </li></ol> 5. Sinir Devre Analizi <ol><li> Nörit lifler (nicelleştirilmiştir sayısı ve büyüklüğü varikositlerdenve dallanma derecesi) Neuroleucida ve Neuroexplorer kullanarak. Ancak, bu da elle gerçekleştirilir veya Basit Neurite Tracer (online indirilebilir ücretsiz bir uygulama) kullanılarak yapılabilir. </li><li> Proventriculus beyinden gelen tek lif projeksiyonları Trace ve varis numarası, şube ve birim uzunluk başına büyük varisler sayısını ölçmek. Beyinden çıkıntı aksonal lifler nüks sinir bindirildiğini ve onlar onlar ayrı proventrikulus ve salkımlı ulaşana kadar analiz için erişilebilir değillerdir. </li></ol>

<ol><li>Weiss, E., Maness, P., Lauder, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+do+neurotransmitters+act+like+growth+factors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Perspect+Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Why do neurotransmitters act like growth factors?</a> Perspect Dev Neurobiol. 5, 323-335 Forthcoming.</li>
<li>Herlenius, E., Lagercrantz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransmitters+and+neuromodulators+during+early+human+development%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Hum.+Dev%22%5BJournal%5D)">Neurotransmitters and neuromodulators during early human development.</a> Early Hum. Dev. 65, 21-37 Forthcoming.</li>
<li>Budnik, V., Wu, C., White, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+branching+of+serotonin-containing+neurons+in+Drosophila+mutants+unable+to+synthesize+serotonin+and+dopamine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Altered branching of serotonin-containing neurons in Drosophila mutants unable to synthesize serotonin and dopamine.</a> J. Neurosci. 9, 2866-2877 (1989).</li>
<li>Sodhi, M., Sanders-Bush, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+brain+development%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Serotonin and brain development.</a> International Review of Neurobiol. 59, 111-174 (2004).</li>
<li>Goldberg, J., Kater, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+function+of+the+neurotransmitter+serotonin+during+development+of+the+Helisoma+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression and function of the neurotransmitter serotonin during development of the Helisoma nervous system.</a> Dev. Biol. 131, 483-495 (1989).</li>
<li>Goldberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+regulation+of+neurite+outgrowth+in+identified+neurons+from+mature+and+embryonic+Helisoma+triyolvis%5BTitle%5D)+AND+%22Perspect+Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Serotonin regulation of neurite outgrowth in identified neurons from mature and embryonic Helisoma triyolvis.</a> Perspect Dev Neurobiol. 5, 373-387 (1998).</li>
<li>Haydon, P., McCobb, P., Kater, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+selectively+inhibits+growth+cone+motility+and+synaptogenesis+of+specific+identified+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Sci%22%5BJournal%5D)">Serotonin selectively inhibits growth cone motility and synaptogenesis of specific identified neurons.</a> Sci. 226, 561-564 (1984).</li>
<li>Neckameyer, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+trophic+role+for+serotonin+in+the+development+of+a+simple+feeding+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A trophic role for serotonin in the development of a simple feeding circuit.</a> Dev. Neurosci. 32, 217-237 Forthcoming.</li>
<li>De Vry, J., Schreiber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+selected+serotonin+5-HT+1+and+5-HT+2+receptor+agonists+on+feeding+behavior%3A+possible+mechanisms+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Effects of selected serotonin 5-HT 1 and 5-HT 2 receptor agonists on feeding behavior: possible mechanisms of action.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 24, 341-353 (2000).</li>
<li>Schoofs, A., Niederegger, S., van Ooyen, A., Heinzel, H., Spieß, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+can+eat%3A+Establishing+the+existence+of+a+central+pattern+generator+for+feeding+in+third+instar+larvae+of+Drosophila+virilis+and+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">The brain can eat: Establishing the existence of a central pattern generator for feeding in third instar larvae of Drosophila virilis and Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 56, 695-705 (2010).</li>
<li>Spieß, R., Schoofs, A., Heinzel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+the+stomatogastric+nervous+system+associated+with+the+foregut+in+Drosophila+melanogaster+and+Calliphora+vicin+third+instar+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Anatomy of the stomatogastric nervous system associated with the foregut in Drosophila melanogaster and Calliphora vicin third instar larvae.</a> J. Morphol. 269, 272-282 (2008).</li>
<li>Neckameyer, W. S., Bhatt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophic+actions+of+dopamine+on+the+development+of+a+serotonergic+feeding+circuit+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Cent+NeuroSci%22%5BJournal%5D)">Neurotrophic actions of dopamine on the development of a serotonergic feeding circuit in Drosophila melanogaster.</a> Biomed Cent NeuroSci. 13, 26(2012).</li>
<li>Sewall, D., Burnet, B., Connolly, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+larval+feeding+behavior+in+Drosophila+melanogaste%5BTitle%5D)+AND+%22Genet.+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of larval feeding behavior in Drosophila melanogaste.</a> Genet. Res. 24, 163-173 (1975).</li>
<li>Joshi, A., Mueller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+higher+feeding+rate+in+Drosophila+due+to+density-dependent+natural+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Evolution of higher feeding rate in Drosophila due to density-dependent natural selection.</a> Evolution. 42, 1090-1093 (1988).</li>
<li>Budnik, V., Wu, C., White, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+branching+of+serotonin-containing+neurons+in+Drosophila+mutants+unable+to+synthesize+serotonin+and+dopamine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Altered branching of serotonin-containing neurons in Drosophila mutants unable to synthesize serotonin and dopamine.</a> J. Neurosci. 9, 2866-2877 (1989).</li>
<li>Sykes, P., Condron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+sensitivity+to+serotonin+of+Drosophila+varicosities+in+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Development and sensitivity to serotonin of Drosophila varicosities in the central nervous system.</a> Dev. Biol. 286, 207-216 (2005).</li>
<li>Garrity, P. A., Goodman, M. B., Samuel, A. D., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Running+hot+and+cold%3A+behavioral+strategies%2C+neural+circuits%2C+and+the+molecular+machinery+for+thermotaxis+inC.+elegansand+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Running hot and cold: behavioral strategies, neural circuits, and the molecular machinery for thermotaxis inC. elegansand Drosophila.</a> Genes Dev. 24, 2365-2382 (2010).</li>
<li>McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+sensing+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archives%22%5BJournal%5D)">Temperature sensing across species.</a> Pflugers Archives. 454, 777-791 (2007).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Geç embriyojenez sırasında oluşur serotonerjik stomatogastric devresi, anormal gelişimi, olgun fonksiyonunu etkiler. Nörit mimarisinde değişiklikler gut (bir maya çözelti içinde ağız kanca kasılma ile ölçülen) oranı besleme devresinin fonksiyonel çıkışı, (Şekil 1) ile ilişkili olabilir innerve. Drosophila UAS-Gal4 bipartit sisteminin kullanımı mümkün özellikle belirli bir dokuya belirli transkriptin yukarı-veya aşağı-düzenlenmiş ekspresyonunu hedeflemek için yapar, belirli bir proteinin ifadesi...

Drosophila nedeniyle hızlı bir nesil zaman, düşük deney maliyetinin, genetik ve çevresel faktörlerin manipüle ve kontrol yeteneği nöral devre geliştirme eğitimi için son derece güçlü bir model sistem. Nöron, nöronal yol bulma ve sinaptogenez insan ve Drosophila arasında muhafaza edilir, bu nedenle, oluşturma, bakım ve nöral devreleri değiştirerek mekanizmalar da korunmuştur. Gibi serotonin (5-hidroksitriptamin veya 5-HT) gibi klasik nörotransmiterler, olgun sinir devresinde 1-3 sinyal molekülleri olarak rollerini kabul etmeden önce, büyüme faktörleri olarak görev yapabilir Daha önceki çalışmalar, olgun nöronların 4&#39;ün bağlantı değiştirebilir embriyojenez sırasında 5-HT seviyelerini tedirgin göstermiştir. Diğer Helisoma kültürlü nöronlar için 5-HT ektopik uygulama nörit gelişimini hem de sinaptogenez 5-7 baskı altında olduğunu göstermiştir. D&#39;derosophila, gelişimsel 5-HT seviyeleri ters olarak CNS 8 foregut için çıkıntı nörit uzunluğu boyunca varis sayısı ve boyutu, hem de aborization derecesi ile ilgilidir. Serotonerjik sinir Drosophila 8-9 de dahil olmak üzere, çeşitli türlerde beslenme davranışları modüle ettiği gösterilmiştir. Drosophila besleme devresi foregut beyinden aksonal çıkıntıların gelişiminde değişiklikler ile fonksiyonel çıkış (besleme) ilişkilendirmek için bir model olarak kullanılabilir nispeten basit bir devredir. Schoofs et al. Drosophila larva besleme kasları 10 etkileyebilir merkezi desen jeneratörleri tarafından düzenlenir olduğunu göstermiştir. Spesifik kas anatomi tam olarak anlaşılamamakla birlikte, bu antennal sinir, üst çene siniri ve protorasik bezle aksesuar sinir katılan kas hedefler için sorumlu olduğu gösterilmiştirbeslenme davranışı. Omurgasız besleme kas ve sinir anatomisi ile ilgili en veri Calliphora larvaları ile sınırlıdır. İkinci instar larvalarının besleme oranı cephalopharyngeal sklerit (ağız kancalar) geri çekilmesi ile değerlendirilmiş ve tekrarlanabilir ve yüksek verimli edilebilir. Cephalopharyngeal plakaları frontal sinir yoluyla santral 5-HT nöronların lifleri tarafından innerve edilir. Proventrikülüs veya foregut, midgut salkımlı ve (Şekil 1) 11-12 foregut kasılmaları sorumludur serotonerjik lifler (sinir nüks) tarafından innerve edilir. Aksonal dallanma değişiklikler ve nörit uzunluğu boyunca varikositlerden sayısı ve büyüklüğü, immünohistokimyasal teknikler kullanılarak kantifiye edilebilir. Ya doğrudan ya da dolaylı olarak, geliştirme sırasında nöronal 5-HT idare etme şekillendirmeler değişiklikler ile değerlendirilir ve korele edilebilir, bu besleme devresinin fonksiyonel çıkışı değiştirebilirnörit mimari gy.

<table><tbody><tr><td>Eclipse E-800 Mikroskop</td><td>Nikon Instruments</td> Neuroleucida <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>MBF Biosciences</td><td>NL-15</td><td>Bağırsak lifi mimarisini analiz etmek için kullanılır,</td></tr><tr><td>Northern Eclipse</td><td>Empix Inc</td><td></td><td>Görüntüleme yazılımına</td></tr> sahip olmak gerekli değildir <tr><td>G-2E/C TRITC EX 528-553</td><td>Nikon Instruments</td><td>96312</td><td>Spesifik ikincil antikor</td></tr> <tr><td>için filtreN.A. 0.75; G.D. 0,72 mm; DIC Prizma: 40xI, 40x I-C; Yaylı</td><td>Nikon Instruments</td><td>MRH00400</td><td>Objektif</td></tr>, <tr><td>Basit Nörit İzleyici</td><td>NIH Görüntüsünü görüntülemek</td> için kullanılır, J<td></td><td><a href="http://fiji.sc/Simple_Neurite_Tracer">http://fiji.sc/Simple_Neurite_Tracer</a></td></tr></tbody></table>

içinde larvaların devre fonksiyonel analiz drosophila</i

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

Drosophila melanogaster larvalarda serotonerjik besleme devresi devrenin geliştirilmesi sırasında kritik önem nöronal substratları incelemek için kullanılabilir. Devrenin işlevsel bir çıkış kullanarak, besleme, stomatogastric sisteminin nöronal mimarisinde değişiklikler görülebilir. Besleme davranış beyin sinirlerini almak ağız kanca, retraksiyonun hızını gözlemleyerek tarafından kaydedilebilir. Larvalar bir ağar tabakayı karşısında çapraz onların ağız kanca kullanmak beri lokomotor davranışlar, beslenmesi için bir fizyolojik kontrol olarak kullanılmıştır. Besleme davranış değişiklikleri neurites aksonal mimarisi ile ilişkili olabilir gut innerve. Immünohistokimya kullanılarak bu değişiklikler görselleştirmek ve ölçmek mümkündür. Onlar manipülasyonlara çok hassas olarak davranış paradigmaları sırasında larvaların Yanlış kullanım verilerini değiştirebilir. Nörit mimarlık inervasyonu Uygun görüntülemegut kesin varikositlerden sayısı ve büyüklüğü ölçülmesi hem de dal düğümlerin ölçüde için çok önemlidir. En devrelerin analizi sadece nörit mimari veya davranışsal etkilerinin görselleştirme için izin, ancak bu model bir nöronal mimari engelli devrenin işlevsel çıktı korelasyon sağlar.

Drosophila larva serotonerjik besleme devresi sinir sistemi gelişiminde belirli faktörlerin etkisini gözlemlemek için son derece etkili bir model olarak hizmet edebilir. Besleme hızı ile ölçülmesi, bu fonksiyonel çıkış (Şekil 1) ile birlikte besleme devresinin aksonal mimarisi bağlamak mümkündür. Larvalar agar yüzeyi boyunca kendilerini itmek için ağız kanca kullandığından lokomotor deney, ağız kancaların geri çekme için fizyolojik bir kontrol olarak kullanılır. Mutasyonlar besleme devresi <sup...

Drosophila melanogaster larvaları besleme devresi besleme hızındaki değişimler stomatogastric sinir devresi değişiklikler ile korelasyon sağlayan bir basit ama güçlü bir model oluşturuyor. Bu devre, ağız kanca projeksiyonlar hem de foregut göndermek merkezi serotonerjik nöronların oluşmaktadır.

Içinde larvaların Devre Fonksiyonel Analiz Drosophila</i

The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

Bu prosedürün genel amacı, davranışsal çıktıları nöral mimarideki değişikliklerle ilişkilendirmek için Drosophila model sistemini kullanmaktır. Bu, öncelikle larva toplamak amacıyla yetişkin drosophila popülasyon kafeslerinin kurulmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün bir sonraki adımı, geç ikinci evreden erken üçüncü evreye geçişteki larvaların lokomotor yeteneğini değerlendirmektir.Üçüncü adım, ağız kancalarının uzanma ve geri çekilme hareketlerini gözlemleyerek larvaların beslenme davranışını değerlendirmektir. Son adım ise, geç üçüncü instar larvalardan elde edilen kanıtlanmış ventriküler örneklerin immünohistokimyasal teknikler kullanılarak diseke edilmesi ve hazırlanmasıdır. Nihayetinde, davranışsal analizler ve immünofloresan mikroskopisinin birlikte kullanımıyla, gelişim sırasındaki nöral mimari anomalilerinin davranışsal değişikliklerle nasıl ilişkili olduğu gösterilebilir.Bu tekniğin etkileri, nörolojik hastalıkların seyriyle ilgili daha iyi bir anlayış sağlanmasına olanak tanıyan nöral mimarinin gelişiminin daha iyi kavranmasına yöneliktir. Prosedür, laboratuvarımdaki bir lisansüstü öğrenciye gösterilecektir. Drosophila popülasyon kafeslerini, 12 saatlik ışık-karanlık dön

functional-analysis-of-the-larval-feeding-circuit-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Belirlenen Nöronlar ve Beslenme Davranışı Kalsiyum sinyaller aynı anda kayıt Drosophila melanogaster</em

Drosophila larvaları tat ödül ile koku uyaranlara ilişkilendirmek edebiliyoruz. Burada iştahlı çağrışımlı koku öğrenme analizine olanak sağlayan bir basit davranışsal paradigma tarif.

In iştahlı İlişkilendirilebilir Olfaktör Öğrenme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

Bu video, Yakınlık Ligasyon Testi (PLA) kullanılarak Drosophila nöromüsküler kavşakta (NMJ) protein-protein etkileşimlerinin görselleştirilmesini göstermektedir. Vücut duvarlarını izole ettikten sonra, etkileşen proteinler birincil antikorlar ve PLA ile konjuge ikincil antikorlar ile incelenir. Etkileşen proteinlerin yakınlığı, probların konektör oligonükleotidleri ile bağlanmasını kolaylaştırır, dairesel DNA oluşturur ve bu daha sonra yuvarlanan daire amplifikasyonu ile amplifiye edilir.

Drosophila Larvalarında Protein-Protein Etkileşimlerinin Yakınlık Ligasyon Testi Kullanılarak Saptanması

CApillary FEeder (CAFE) testi, gıda alımının altında yatan mekanizmaları araştırmak için basit, bütçe dostu, son derece güvenilir bir yöntemdir. Çok yönlü genetik model organizma Drosophila melanogaster ile birlikte kullanıldığında, gıda alımının düzenleyici mekanizmaları hakkında yeni bilgiler edinmenin güçlü bir yolunu sunar.

Kılcal Besleyici Testi Gıda Alımını içinde Tedbirler<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Nicel gıda alımı deneyleri boyalı gıda ile sağlam sağlamak ve yüksek üretilen iş besleme motivasyon değerlendirileceği anlamına gelir. Gıda tüketimi tahlil ile thermogenetic birleştiren ve optogenetic ekranlar iştah yetişkin temel sinir devreleri araştırmak için güçlü bir yaklaşımdır Drosophila melanogaster.

Nicel gıda alımı deneyleri birleştirerek ve zorla iştah Drosophila içinde çalışmaya nöronların aktive

Bu protokolün amacı mahsul daralma ölçmek ve Drosophila bağırsak gıda dağılımı ölçmektir.

Drosophila'da Bitki Hareketliliği ve Gıda Geçişinin Ölçülmesi

Burada açıklanan, farklı makro besin kalitesinde diyetlere maruz kalan Drosophila melanogaster larvaları tarafından belirli bir zaman aralığında yenen yiyecek miktarının kolorimetrik olarak ölçülmesini sağlayan bir protokoldür. Bu tahliller nöronal termogenetik ekran bağlamında gerçekleştirilir.

Drosophila Larvaları Kullanılarak Termogenetik Nöronal Ekranda Makro besin alımının nicelleştirilmesi

Sinekler için iki seçenekli bir besleme tahlilleri için bir protokol sunuyoruz. Bu besleme testini çalıştırmak hızlı ve kolaydır ve sadece küçük ölçekli laboratuvar araştırmaları için değil, aynı zamanda sineklerdeki yüksek verimli davranışsal ekranlar için de uygundur.

Drosophila&apos;da Hızlı Bir Yemek Tercihi Tahlil

Mikro plaka besleyici tahlili, Drosophila'dakisıvı gıda tüketimini ölçmek için ekonomik, yüksek verim yöntemi sunar. 3D baskılı bir cihaz, sineklerin barındırıldığı 96 kuyulu bir mikro plakayı, sineklerin bir izleyici boyası ile bir besleme çözeltisi tükettiği 1536 kuyulu bir mikro plakaya bağlar. Çözelti hacmi düşüşü spektrofotometrik olarak ölçülür.

Drosophila'da Tüketimin Nicelleştirilmesi için Yüksek Verimli Mikro Plaka Besleyici Tahlili

Burada, fizyolojik koşullar altında hücresel ve hücre altı dinamikleri gözlemlemek için Drosophila melanogaster üçüncü instar larvalarından canlı eksplant beyinlerini hazırlamak, parçalamak, monte etmek ve görüntülemek için bir iş akışını tartışıyoruz.

Drosophila melanogaster Üçüncü Instar Larva Beyinlerinin Canlı Hücre Görüntülemesi

Protokol, geleneksel memeli modellerine bir alternatif olarak lokomotor disfonksiyonun nicelleştirilmesi yoluyla meyve sineğindeki nörotoksisiteyi değerlendirmek için yüksek verimli, uygun maliyetli bir yöntem sunar. Farmasötik bileşiklerin, çevresel ajanların veya genetik modifikasyonların nörotoksik etkilerini hassas, tekrarlanabilir ve etik açıdan uygun bir model kullanarak değerlendirmeyi amaçlar.

Drosophila melanogaster'de Lokomotor Disfonksiyonun Nörotoksisite için Bir Okuma Olarak Davranışsal Analizi

Öğrenin, Drosophila melanogaster larvalarında davranışsal çıktıları sinir mimarisi değişiklikleriyle ilişkilendirmek için davranışsal analiz ve immünofloresan mikroskopi yöntemlerini nasıl kullanacağınızı.

Içinde larvaların Devre Fonksiyonel Analiz Drosophila

Daha fazla video keşfet