8 Nisan 2014
Şok dalgaları günümüzde de kendi rejeneratif etkileri bilinmektedir. Bu nedenle in vitro deneyler, giderek artan ilgi çekmektedir. Bu nedenle, böylece rahatsız edici fiziksel etkilerini önlemek vivo koşullarda taklit bize sağlayan in vitro şok dalgası çalışmalarda (IVSWT) için bir model geliştirmiştir.
Bu prosedürün genel amacı, tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için in vitro şok dalgası tedavisi sırasında dikkat dağıtıcı fiziksel etkilerden kaçınmaktır. Bu, önce bir hücre kültürü şişesinin tamamen kültür ortamı ile doldurulması ve ardından şişenin ısıtılmış bir su banyosuna yerleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, aplikatörü su banyosuna bağlarken bol miktarda ultrason jeli kullanmaktır.
Daha sonra aplikatör, su banyosunun zarına yatay bir şekilde yerleştirilir. Son adım, hücrelerin dalga odağı içinde konumlandırılmasını sağlamak için şok dalgası kaynağının, hücre kültürü şişesinin merkezi ile aynı hizada olmasını sağlamaktır. Sonuç olarak, hücrelerinizin analizi, ilgilenilen genlerde ve sitokinlerde bir değişiklik olduğunu göstermek için gerçek zamanlı PCR ve bir sitokin dizisi ile şimdi bir örnek olarak gerçekleştirilebilir.
Bu model için ilk olarak, kısa dalgaları doğrudan hücre kültürlerine uygulamak için mevcut yöntemlerin, kültür ortamından ortam havasına geçişte dalga yansımasının etkisini dikkate almadığını gördüğümüzde aklımıza geldi. Prosedürü göstermek, araştırma grubumdan Dr.Chante PhD öğrencisi olacak. Başlamak için 3,5 litre musluk suyunu 37 santigrat dereceye ısıtın.
Ardından ısıtılmış suyu su banyosuna aktarın. Su seviyesi, su banyosunun üst kısmının üç santimetre altında olmalı ve zarı tamamen örtmelidir. Ardından, sıcaklık sensörünü bir güç kaynağına bağlayın ve sıcaklık sensörünü su banyosunun arka duvarındaki bağlantı parçasına yerleştirin.
Daha sonra suyu karıştırırken, ısıtıcıyı sürekli olarak bir güç kaynağına bağlayın ve suyu 37 santigrat derece sabit bir sıcaklığa ısıtın. Steril koşullar altında. T 25 kültür şişelerindeki koltuk hücreleri.
Böylece gece boyunca kuluçka sonrası %90 akıcılığa ulaşacaklar. Daha sonra şişeleri dikey olarak yerleştirin ve kontaminasyonu önlemek için şişenin boynunun dibine kadar kültür ortamı ile doldurun. Ortamın şişenin boynu veya kapatma kapağı ile temas etmesine izin vermeyin.
Daha sonra, banyodaki suyun kirlenmesini önlemek için şişeleri filtresiz sağlam bir kapakla kapatın. Ardından kapakları paraform ile kapatın. Şişeler kapatıldıktan sonra, bunları bir standa sıkıştırın.
Daha sonra sabit şişeleri su banyosuna yerleştirin ve hücre kültürü şişesinin ortasını hizalayın. Şok şok dalgası aplikatörünün zarının merkezi ile, şok dalgası aplikatörüne ve su banyosunun zarına bol miktarda ultrason iletim jeli uygulayın. Ardından aplikatörü membrana bağlayın ve aralarında hava kabarcığı olmadığından emin olun.
Ardından, şok dalgası aplikatörünü zarın ortasında tutun ve tüm hücre büyüme alanının tedavisini garanti etmek için hücre kültürü şişesi ile yatay ve dikey olarak kaplandığından emin olun. Ardından, şok dalgası aplikatörü ile kültür şişesi arasındaki ideal mesafeyi belirlemek ve doğru tedavi parametrelerini tanımlamak için bir pilot deney yapın. Shockwave cihazının aktivasyonu sırasında kültür şişesini ve aplikatörü sabit bir konumda tuttuğunuzdan emin olun.
İdeal bir mesafe belirlendikten sonra, deneyi istenen şok dalgası tedavi parametreleri altında gerçekleştirin. Şok dalgası tedavisi tamamlandıktan sonra, hücre kültürü şişesini su banyosundan çıkarın, kağıt havluyla kurulayın ve şişenin dış yüzeyini dezenfekte edin. Ardından, ortamı şişeden bir santrifüj tüpüne aktarın.
Hücreleri normal santrifüj parametreleri altında peletleyin. Resus, hücre peletini iki mililitre hücre kültürü ortamında süspanse eder, daha sonra hücre süspansiyonunu beş mililitre hücre kültürü ortamı içeren şişeye geri aktarır ve hücreleri hücre analizi deneyleri için gerekli ortak akıcılığa kadar büyütür. İnsan göbek damarı endotel hücrelerinin gerçek zamanlı PCR analizi, şok dalgası tedavisinden sonra iki mRNA seviyesinde bir yukarı regülasyon ortaya çıkardı.
Bu, şok dalgası tedavisini, artmış endotel hücre proliferasyonunu ve anjiyogenezi düşündürmektedir. Göbek damarındaki sitokin seviyeleri. Endotel hücreleri bir sitokin dizisi kullanılarak ölçüldü.
İki inflamatuar sitokin IL altı ve IL sekizinin de önemli ölçüde arttığı bulundu, her ikisi de anjiyojenik sürece eşlik eden inflamasyonda rol oynar. Bu teknik, şok dalgası temel bilimi alanındaki çok sayıda araştırmacının in vitro deneylerde tek bir hücre tipi üzerindeki etkilerini keşfetmesinin yolunu açtı. Şok dalgası biliminde tekrarlanabilir ve karşılaştırılabilir sonuçlar elde etmek için daha fazla araştırmacıyı bu modeli kullanmaya ikna etmeyi umuyoruz.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu çalışma, in vivo koşullarını çoğaltmak ve rahatsız edici fiziksel etkileri en aza indirgemek için tasarlanmış in vitro şok dalgası denemeleri (IVSWT) için bir model sunar. Metodoloji, şok dalgası tedavisi deneylerinde sonuçların tekrarlanabilirliğini artırmayı amaçlamaktadır.
This model addresses a critical gap in shockwave research by enabling reproducible in vitro studies that closely mimic in vivo conditions. By eliminating wave reflection artifacts through a water-coupled system, it supports reliable mechanistic de-risking of shockwave therapies in early discovery. The approach enhances predictive confidence in target validation for angiogenic and inflammatory pathways relevant to cardiovascular and wound healing indications.
The method fits within the early discovery continuum, supporting target validation through mechanistic insight before progressing to lead identification and preclinical efficacy testing.