Kültürler Hücre Şok Dalga Uygulama

Bu prosedürün genel amacı, tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için in vitro şok dalgası tedavisi sırasında dikkat dağıtıcı fiziksel etkilerden kaçınmaktır. Bu, öncelikle bir hücre kültür flaskının tamamen kültür medyumu ile doldurulması ve ardından flaskın ısıtılmış bir su banyosuna yerleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, aplikatör su banyosuna kenetlendiğinde bol miktarda ultrason jeli kullanmaktır.

Ardından, aplikatör su banyosunun membranına yatay bir şekilde yerleştirilir. Son adım, hücrelerin dalga odağına konumlandırılmasını sağlamak amacıyla şok dalga kaynağının hücre kültürü flaskının merkeziyle aynı hizaya getirilmesidir. Son olarak, ilgilenilen genlerdeki ve sitokinlerdeki değişimi göstermek için gerçek zamanlı PCR ve bir sitokin dizisi ile hücrelerinizin analizi örneğin şu şekilde gerçekleştirilebilir.

Kısa dalgaları doğrudan hücre kültürlerine uygulama yöntemlerinin, kültür ortamından ortam havasına geçişteki dalga yansımasının etkisini dikkate almadığını fark ettiğimizde bu model fikri ilk kez ortaya çıktı. Prosedürü araştırma grubumdan doktora öğrencisi Dr. Chante uygulamalı olarak gösterecek. Başlamak için 3,5 litre musluk suyunu 37 °C'ye ısıtın.

Ardından, ısıtılmış suyu su banyosuna aktarın. Su seviyesi, su banyosunun üst kenarının üç santimetre altında olmalı ve membranı tamamen örtmelidir. Sonrasında, sıcaklık sensörünü bir güç kaynağına bağlayın ve sıcaklık sensörünü su banyosunun arka duvarındaki yuvaya yerleştirin.

Ardından, suyu karıştırırken ısıtıcıyı sürekli olarak bir güç kaynağına bağlayın ve suyu 37 °C sabit sıcaklığa kadar ısıtın. Steril koşullar altında, hücreleri T 25 kültür flasklarına ekleyin.

Böylece, gece boyu inkübasyonun ardından %90 konfluense ulaşacaklardır. Ardından, kontaminasyonu önlemek için erlenleri dikey konuma getirin ve kültür besiyerini erlen boynunun altına kadar doldurun. Besiyerinin erlen boynuyla veya kapatma kapağıyla temas etmesine izin vermeyin.

Ardından, banyodaki suyun kontaminasyonunu önlemek için flaskları filtresiz, sağlam bir kapakla kapatın. Daha sonra kapakları parafilm ile mühürleyin. Flasklar mühürlendikten sonra, onları bir standa sabitleyin.

Ardından, sabitlenmiş flaskları su banyosuna yerleştirin ve hücre kültürü flaskının ortasını hizalayın. Şok dalgası aplikatörünün membranının merkezine, hem aplikatöre hem de su banyosunun membranına bol miktarda ultrason iletim jeli uygulayın. Daha sonra aplikatörü membrana bağlayın ve aralarında hava kabarcığı kalmadığından emin olun.

Ardından, şok dalgası aplikatörünü membranın merkezinde tutun ve tüm hücre büyüme alanının tedavi edildiğinden emin olmak için aplikatörün hücre kültürü flaskı ile yatay ve dikey olarak hizalandığını kontrol edin. Daha sonra, şok dalgası aplikatörü ile kültür flaskı arasındaki ideal mesafeyi belirlemek ve doğru tedavi parametrelerini tanımlamak için bir pilot deney gerçekleştirin. Şok dalgası cihazı aktifken kültür flaskının ve aplikatörün sabit bir konumda tutulduğundan emin olun.

İdeal mesafe belirlendikten sonra, deneyi istenen şok dalgası tedavi parametreleri altında gerçekleştirin. Şok dalgası tedavisi tamamlandıktan sonra, hücre kültür flaskını su banyosundan çıkarın, kağıt havlu ile kurulayın ve flaskın dış yüzeyini dezenfekte edin. Ardından, ortamı flasktan bir santrifüj tüpüne aktarın.

Hücreleri normal santrifüj parametreleri altında çöktürün. Hücre peletini iki mililitre hücre kültür ortamında yeniden süspande edin, ardından hücre süspansiyonunu beş mililitre hücre kültür ortamı içeren flaska geri aktarın ve hücreleri hücre analizi deneyleri için gerekli konfluense ulaşana kadar büyütün. İnsan göbek kordonu ven endotel hücrelerinin gerçek zamanlı PCR analizi, şok dalgası tedavisi sonrası tie2 mRNA seviyelerinde bir artış olduğunu ortaya koymuştur.

Bu durum, şok dalgası tedavisinin endotel hücre proliferasyonunu ve anjiyogenezi artırdığını göstermektedir. Göbek venindeki sitokin seviyeleri, bir sitokin dizisi kullanılarak sayısal olarak belirlenmiştir.

Ayrıca, her ikisi de anjiyojenik süreç gelişimini takip eden inflamasyonda rol oynayan IL six ve IL eight inflamatuar sitokinlerinin de anlamlı düzeyde arttığı tespit edilmiştir. Bu teknik, şok dalgası temel bilimleri alanındaki birçok araştırmacının in vitro deneylerde tek bir hücre tipi üzerindeki etkileri keşfetmesinin önünü açmıştır. Şok dalgası biliminde tekrarlanabilir ve karşılaştırılabilir sonuçlar elde etmek amacıyla, daha fazla araştırmacıyı bu modeli kullanmaya ikna etmeyi umuyoruz.