Name: Farelerde Retinal Kan Akışının İntravital Video Mikroskobu Ölçümleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-26T14:15:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: Öğrenin farelerde intravital video mikroskobu ile retinal kan akışı ölçüm yöntemini. Floresan mikroküreler ve dekstran kullanarak damar çapı ile hızı hassas şekilde belirleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

NIH EY017599 (NRH) tarafından finanse edilmektedir.

Hayvanların kullanımını içeren prosedürler, LSUHSC-S'nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından gözden geçirildi ve onaylandı ve Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından belirtilen kriterlere göre gerçekleştirildi.
1. Perfüzyon Solüsyonlarının Hazırlanması
<ol>
	<li>1.9 μm çapında mikrokürelerin% 1'lik (ağırlıkça) stok çözeltisini sonikate.</li>
	<li>~ 25-30 x 106 yeşil floresan mikro küreyi (yani, ~ 10 μl stok çözeltisini) 300 μl'lik bir şırıngaya çekin. Şırıngaya 240 μl daha fazla salin çekerek mikroküreleri seyreltin.</li>
	<li>Enjekte edilen doz 3-10 mg / kg aralığında steril salin içinde çözülmüş 2 x 106 moleküler ağırlıklı floresan dekstrandan oluşan 50 μl'lik bir çözelti hazırlayın. Dekstranı infüzyon zamanına kadar alüminyum folyo ile kaplı tutun.</li>
</ol>
2. Hayvan Anestezisi ve Vasküler Kanülasyon
<ol>
	<li>Vasküler kanüllerin cerrahi olarak yerleştirilmesi ve mikroskop objektifi altında sabit konumlandırma için hayvanı uyuşturun. Çeşitli avantaj ve dezavantajları olan ve sistemik parametreler üzerinde potansiyel etkileri olan birçok anestezik protokol seçeneği mevcuttur. Birçok farklı seçenek arasında ketamin (100-150 mg / kg), ksilazin (10 mg / kg) ve asepromazin (2 mg / kg) kombinasyonu veya ketamin (50 mg / kg) ve pentobarbital (50 mg / kg) kombinasyonu bulunur. Tarif edilen prosedürler akuttur ve aşırı dozda pentobarbital (150 mg / kg) ve ardından torakotomi ile indüklenen ötenazi ile sonuçlanır; Terminal prosedürü için bir analjezik dahil edilmesi gerekli değildir.</li>
	<li>Deneyin geri kalanında hayvanın altında bir ısıtma yastığı bulundurun.</li>
	<li>Vasküler kanüllerin sonraki cerrahi yerleştirilmesi sırasında fosfat tamponlu salin ile gözleri nemli tutun.</li>
	<li>Sonraki floresan izleyici infüzyonları için vasküler bir kanül hazırlayın. 20 cm uzunluğunda bir polietilen boru (örneğin, 0,28 mm iç çap; 0,61 mm dış çap) bir şırınga iğnesinin ucuna yerleştirilir ve iğnenin keskin ucu bir hemostat ile ileri geri bükülerek önceden kırılır.</li>
	<li>Bir şırınga ve hortumu heparinize (25 U / ml) tuzlu su ile doldurun.</li>
	<li>Alt karnın bir tarafını tıraş edin ve femoral veni ortaya çıkarmak için bir kesi yapın.</li>
	<li>Femoral veni kanüle etmek için, damarı 5.0 sütürle bağlayın, damarın kısmi bir kesisini yapın (damar çapının yaklaşık yarısı) ve boruyu damarın içine yerleştirin, boruyu kanüllü bölümün etrafına bağlı sütür ile sabitleyin.</li>
</ol>
3. İntravital Mikroskopi için Hazırlık
<ol>
	<li>Göz bebeğini %1'lik bir damla tropikamid oftalmik solüsyon ve ardından %2.5'lik bir damla hipromelloz oftalmik solüsyon ile genişletin.</li>
	<li>Gözü 5 mm'lik bir cam lamel ile kapatın.</li>
	<li>Hayvanı, dik bir mikroskobun mikroskop hedefinin altına yerleştirilecek olan bir pleksiglas tahtaya yerleştirin. Objektif boyunca merkezi retina ve optik diske doğrudan bir eksen sağlamak için cerrahi gazlı bezi başın altına stratejik olarak yerleştirin.</li>
	<li>Mikroskop aracılığıyla optik diske odaklanın, düşük güçlü 4X objektife sahip diski bulun ve bir floresein filtresi kullanın.</li>
</ol>
4. Hızları Ölçmek için Floresan Mikrokürelerin İnfüzyonu
<ol>
	<li>4X objektif kullanarak, optik disk görüş alanının merkezinde olacak şekilde retinaya odaklanın.</li>
	<li>Floresan mikroküre çözeltisini 250 μl/dak/kg oranında infüze edin.</li>
	<li>~8 msn'lik bir kamera pozlama süresi kullanarak optik diskin etrafındaki görüntülenebilir retinayı videoya kaydedin.</li>
	<li>Yeterli bir video süresi kaydedildiğinde (1-2 dakika) mikroküre infüzyonunu durdurun; bazı mikroküre çözeltileri muhtemelen kullanılmadan kalacaktır.</li>
</ol>
5. Çapları ölçmek için bir floresan plazma işaretleyicisinin infüzyonu
<ol>
	<li>4X objektif kullanarak, optik disk görüş alanının merkezinde olacak şekilde retinaya odaklanın.</li>
	<li>Video kaydı sırasında hazırlanan floresan dekstran solüsyonunu ~ 5 saniye boyunca bir bolus olarak femoral ven içine demleyin. Bu video, arteriyollerin ve venüllerin kimliğini belirlemeye yardımcı olacak ve önce arteriyoller perfüze edilecektir. Bu adımı, kamera pozlama süresi ~8 msn olarak ayarlıyken gerçekleştirin, ancak kesin pozlama süresi kritik değildir.</li>
	<li>Yüzeysel retinadaki 4-7 arteriol ve 4-7 venülün her birini videoya çekmek için daha iyi çözünürlük için 10X objektif ve 20-40 msn pozlama süresine geçin. Optik diskin merkezi görüş alanının bir köşesinde olacak şekilde, görüntülenebilir retinanın yaklaşık dörtte birine bir seferde odaklanın (ve video kaydedin). Işık/boya kaynaklı fototoksisite olasılığını azaltmak için mikroskop ışığının dokuyu aydınlatma süresini en aza indirmeye çalışılmalıdır17.</li>
</ol>
6. Video Analizi
<ol>
	<li>Bir mikrometre ölçeği kullanarak, video sistemini μm/piksel dönüştürme için kalibre edin.</li>
	<li>Görüntü işleme yazılımı ile kaydedilen videoyu oynatın.</li>
	<li>Floresan dekstranın bolus infüzyonunun videosundan, arteriyolleri ve venülleri tanımlayın.</li>
	<li>10X objektif ile kaydedilen 4-7 arteriol ve 4-7 venülün her biri için, floresan dekstran ile doldurulmuş çapları, görüntülenebilir uzunluk boyunca damar başına ortalama 5 çap ölçüsü olacak şekilde ölçün.</li>
	<li>Aynı arteriyollerin ve venüllerin her biri için, seçim yanlılığını önlemek için her damarda 10 ardışık mikroküre çizgisi kullanarak floresan mikrokürelerin çizgi uzunluğunu ölçün. Mikroküre hızını hesaplamak için çizgi uzunluklarını maruz kalma süresine bölün, örneğinample, 160 μm/8 msn = 20 μm/msn = 2 cm/sn. Gemi başına ortalama 10 hız.</li>
	<li>Aşağıdaki denklemle her bir kap için hacimsel akış hızını hesaplayın: akış = ortalama hız × π × çapı2/4.</li>
	<li>Toplam retinal kan akışını elde etmek için arteriolar akış hızlarını toplayın ve ayrı ayrı venüler akış hızlarını toplayın.</li>
</ol>

<ol><li>Wang, L., Fortune, B., Cull, G., McElwain, K. M., Cioffi, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microspheres+method+for+ocular+blood+flow+measurement+in+rats%3A+size+and+dose+optimization%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Microspheres method for ocular blood flow measurement in rats: size and dose optimization.</a> Exp. Eye Res. 84, 108-117 (2007).</li>
<li>Wang, L., Grant, C., Fortune, B., Cioffi, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+and+choroidal+vasoreactivity+to+altered+PaCO2+in+rat+measured+with+a+modified+microsphere+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal and choroidal vasoreactivity to altered PaCO2 in rat measured with a modified microsphere technique.</a> Exp. Eye Res. 86, 908-913 (2008).</li>
<li>Pouliot, M., Hetu, S., Lahjouji, K., Couture, R., Vaucher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+retinal+blood+flow+by+kinin+B%281%29+receptor+in+Streptozotocin-diabetic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Modulation of retinal blood flow by kinin B(1) receptor in Streptozotocin-diabetic rats.</a> Exp. Eye Res. 92, 482-489 (2011).</li>
<li>Pouliot, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+and+regional+measurement+of+retinal+blood+flow+in+rats+using+N-isopropyl-p-%5B14C%5D-iodoamphetamine+%28%5B14C%5D-IMP%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative and regional measurement of retinal blood flow in rats using N-isopropyl-p-[14C]-iodoamphetamine ([14C]-IMP).</a> Exp. Eye Res. 89, 960-966 (2009).</li>
<li>Zhi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volumetric+and+quantitative+imaging+of+retinal+blood+flow+in+rats+with+optical+microangiography%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Opti.+Express%22%5BJournal%5D)">Volumetric and quantitative imaging of retinal blood flow in rats with optical microangiography.</a> Biomed. Opti. Express. 2, 579-591 (2011).</li>
<li>Zhi, Z., Cepurna, W. O., Johnson, E. C., Morrison, J. C., Wang, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+intraocular+pressure+on+changes+of+blood+flow+in+the+retina%2C+choroid%2C+and+optic+nerve+head+in+rats+investigated+by+optical+microangiography%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Opti.+Express%22%5BJournal%5D)">Impact of intraocular pressure on changes of blood flow in the retina, choroid, and optic nerve head in rats investigated by optical microangiography.</a> Biomed. Opti. Express. 3, 2220-2233 (2012).</li>
<li>Li, G., De La Garza, B., Shih, Y. Y., Muir, E. R., Duong, T. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Layer-specific+blood-flow+MRI+of+retinitis+pigmentosa+in+RCS+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Layer-specific blood-flow MRI of retinitis pigmentosa in RCS rats.</a> Exp. Eye Res. 101, 90-96 (2012).</li>
<li>Muir, E. R., Renteria, R. C., Duong, T. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+ocular+blood+flow+as+an+early+indicator+of+diabetic+retinopathy+in+a+mouse+model+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Reduced ocular blood flow as an early indicator of diabetic retinopathy in a mouse model of diabetes.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 6488-6494 (2012).</li>
<li>Wright, W. S., Harris, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ozagrel+attenuates+early+streptozotocin-induced+constriction+of+arterioles+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Ozagrel attenuates early streptozotocin-induced constriction of arterioles in the mouse retina.</a> Exp. Eye Res. 86, 528-536 (2008).</li>
<li>Lee, S., Harris, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Losartan+and+ozagrel+reverse+retinal+arteriolar+constriction+in+non-obese+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Losartan and ozagrel reverse retinal arteriolar constriction in non-obese diabetic mice.</a> Microcirculation. 15, 379-387 (2008).</li>
<li>Wright, W. S., Messina, J. E., Harris, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+of+diabetes-induced+retinal+vasoconstriction+by+a+thromboxane+receptor+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Attenuation of diabetes-induced retinal vasoconstriction by a thromboxane receptor antagonist.</a> Exp. Eye Res. 88, 106-112 (2009).</li>
<li>Wang, Z., Yadav, A. S., Leskova, W., Harris, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+of+streptozotocin-induced+microvascular+changes+in+the+mouse+retina+with+the+endothelin+receptor+A+antagonist+atrasentan%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Attenuation of streptozotocin-induced microvascular changes in the mouse retina with the endothelin receptor A antagonist atrasentan.</a> Exp. Eye Res. 91, 670-675 (2010).</li>
<li>Yadav, A. S., Harris, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+tempol+on+diabetes-induced+decreases+in+retinal+blood+flow+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of tempol on diabetes-induced decreases in retinal blood flow in the mouse.</a> Curr. Eye Res. 36, 456-461 (2011).</li>
<li>Wang, Z., Yadav, A. S., Leskova, W., Harris, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+20-HETE+attenuates+diabetes-induced+decreases+in+retinal+hemodynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of 20-HETE attenuates diabetes-induced decreases in retinal hemodynamics.</a> Exp. Eye Res. 93, 108-113 (2011).</li>
<li>Wright, W. S., Yadav, A. S., McElhatten, R. M., Harris, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+blood+flow+abnormalities+following+six+months+of+hyperglycemia+in+the+Ins2%28Akita%29+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal blood flow abnormalities following six months of hyperglycemia in the Ins2(Akita) mouse.</a> Exp. Eye Res. 98, 9-15 (2012).</li>
<li>Lee, S., Morgan, G. A., Harris, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ozagrel+reverses+streptozotocin-induced+constriction+of+arterioles+in+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Ozagrel reverses streptozotocin-induced constriction of arterioles in rat retina.</a> Microvasc. Res. 76, 217-223 (2008).</li>
<li>Rumbaut, R. E., Sial, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+phototoxicity+of+fluorescent+dye-labeled+albumin+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Differential phototoxicity of fluorescent dye-labeled albumin conjugates.</a> Microcirculation. 6, 205-213 (1999).</li>
<li>Tadayoni, R., Paques, M., Gaudric, A., Vicaut, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Erythrocyte+and+leukocyte+dynamics+in+the+retinal+capillaries+of+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Erythrocyte and leukocyte dynamics in the retinal capillaries of diabetic mice.</a> Exp. Eye Res. 77, 497-504 (2003).</li>
<li>Walsh, M. K., Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+time-lapse+fluorescence+imaging+of+individual+retinal+ganglion+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">In vivo time-lapse fluorescence imaging of individual retinal ganglion cells in mice.</a> J. Neurosci. Methods. 169, 214-221 (2008).</li>
<li>Shahidi, M., Wanek, J., Blair, N. P., Mori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+mapping+of+chorioretinal+vascular+oxygen+tension+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional mapping of chorioretinal vascular oxygen tension in the rat.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 50, 820-825 (2009).</li>
<li>Hughes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+schematic+eye+for+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Vis.+Res%22%5BJournal%5D)">A schematic eye for the rat.</a> Vis. Res. 19, 569-588 (1979).</li>
<li>Remtulla, S., Hallett, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+schematic+eye+for+the+mouse%2C+and+comparisons+with+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Vis.+Res%22%5BJournal%5D)">A schematic eye for the mouse, and comparisons with the rat.</a> Vis. Res. 25, 21-31 (1985).</li>
<li>Schmucker, C., Schaeffel, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+biometry+in+the+mouse+eye+with+low+coherence+interferometry%5BTitle%5D)+AND+%22Vis.+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo biometry in the mouse eye with low coherence interferometry.</a> Vis. Res. 44, 2445-2456 (2004).</li>
<li>Mulivor, A. W., Lipowsky, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-+and+ischemia-induced+shedding+of+venular+glycocalyx%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Inflammation- and ischemia-induced shedding of venular glycocalyx.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 286, 1672-1680 (2004).</li>
<li>Harris, N. R., Whatley, J. R., Carter, P. R., Specian, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Venular+constriction+of+submucosal+arterioles+induced+by+dextran+sodium+sulfate%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm.+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Venular constriction of submucosal arterioles induced by dextran sodium sulfate.</a> Inflamm. Bowel Dis. 11, 806-813 (2005).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu intravital video mikroskobu tekniği sadece farelere değil aynı zamanda sıçanlara da uygulanabilir. Bu protokol sadece birkaç varsayıma dayanır, ancak anestezi altında ve tanımladığımız gibi pupil dilatasyonu ile kullanımla sınırlıdır. Diğer varsayımlar ve sınırlamalar aşağıdaki gibidir:
1. Gözün kırıcı doğasından kaynaklanan minimum optik büyütme hatası varsayımı. Diğerleri 18-20 tarafından tarif edildiği gibi, kornea ile lamel arasındaki boşluğu oftalmik solüsyon...

Retina, vücuttaki metabolik olarak en aktif dokulardan biridir ve bu nedenle cömert bir kan kaynağı gerektirir. Bu talebi iki ayrı dolaşım karşılar: retinanın dış kısmı için koroid dolaşımı ve retinanın iç kısmı için retina dolaşımı. Diyabetik retinopati, oksijene bağlı retinopati, retinal arter veya ven tıkanıklığı ve inmenin patolojik mekanizmalarını ve sonuçlarını anlamak için retina perfüzyonunun araştırılması zorunludur. Retinal kan akışını ölçmek için çeşitli yöntemler kullanılmıştır ve her tekniğin avantajları, dezavantajları, sınırlamaları ve varsayımları vardır. Bu teknikler arasında prekapiller arteriyollere yerleşen 7-8 μm çapında mikroküreciklerin infüzyonu1,2, kantitatif otoradyografi3,4, optik mikroanjiyopati-optik koherens tomografi5,6, manyetik rezonans görüntüleme7,8 ve intravital video mikroskobu9-16 yer almaktadır. İkincisinin avantajları arasında retina damarlarının ve akışının doğrudan canlı görselleştirilmesi, sadece birkaç küçük varsayıma bağımlılık ve bağlı bir video kameraya sahip bir floresan mikroskobuna sahip laboratuvarlar için satın alınabilirlik yer alır. İntravital video mikroskobu9-16'nın önceki çalışmalarında, floresan dekstran bir plazma belirteci olarak kullanılmış ve floresan olarak işaretlenmiş kırmızı kan hücreleri (bir donör hayvandan) hız belirteçleri olarak kullanılmıştır. Mevcut protokolde, hızı ölçmek için kırmızı kan hücreleri yerine 1.9 μm çapında floresan etiketli mikroküreler kullanılmakta ve bu değişiklik bir kan hücresi donörüne olan ihtiyacı ortadan kaldırmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Floresan mikroküreler</td><td>Bangs Laboratories</td><td>FS04F/10584 (yeşil)</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek moleküler ağırlıklı floresan dekstran</td><td>Moleküler Problar</td><td>D-7137 (yeşil); D-7139 (kırmızı)</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop sistemi</td><td>Nikon</td><td>Eclipse E600FN + ekler</td><td></td></tr><tr><td>4X objektif</td><td>Nikon</td><td>Plan Fluor 4X</td><td>sayısal açıklık 0.13; çalışma mesafesi 17,2 mm</td></tr><tr><td>10X objektif</td><td>Nikon</td><td>Plan 10X</td><td>sayısal açıklık 0.25; çalışma mesafesi 10,5 mm</td></tr><tr><td>Tropicamide oftalmik çözelti</td><td>Bausch Lomb</td><td>%1 Tropicamid</td><td></td></tr><tr><td>Hipromelloz oftalmik çözüm</td><td>HUB Pharmaceuticals%</td><td>2.5 Goniovisc</td><td></td></tr><tr><td>Görüntü işleme yazılımı</td><td>California Üniversitesi San Francisco Vale Lab</td><td>Mikro Yönetici</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopi için dijital video kamera</td><td></td><td>Fotometri CoolSnap ES</td><td>1392 x 1040 piksel çözünürlük; piksel boyutu 6.45 x 6.45 &mu; m</td></tr></tbody></table>

farelerde retinal kan akışının İntravital video mikroskobu Ölçümleri

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

Retina kan akışındaki değişiklikler, oküler hastalığa ve görme işlev bozukluğuna katkıda bulunabilir veya bunların bir sonucu olabilir. Bu nedenle, değişmiş perfüzyonun kantitasyonu, retinal patolojilerin mekanizmalarının araştırılmasına yardımcı olabilir. Floresan izleyicilerin intravital video mikroskobu, retina damar sisteminin, özellikle merkezi retinal arterden dallanan arteriyollerin ve merkezi retinal vene giden venüllerin vasküler çaplarını ve kan dolaşım hızlarını ölçmek için kullanılabilir. Kan akış hızları, arterioler akışın toplamı ve ayrı ayrı venüler akışın toplamı ile çaplardan ve hızlardan hesaplanabilir ve toplam retinal kan akışının değerlerini sağlar. Bu kağıt ve ilgili video, 1) anestezi uygulanmış hayvanın intravital mikroskobu için gözün hazırlanması, 2) kan dolaşımı hızını ölçmek için floresan mikrokürelerin intravenöz infüzyonu, 3) retinal mikrovaskülatür sisteminin mikroskobik görüntülenmesine yardımcı olmak için yüksek moleküler ağırlıklı bir floresan dekstranın intravenöz infüzyonu, 4) perfüze retinanın videolarını elde etmek için bir dijital mikroskop kamerasının kullanılması ve 5) videoyu analiz etmek için görüntü işleme yazılımının kullanılması. Aynı teknikler, sıçanlarda retinal kan akış hızlarını ölçmek için de kullanılabilir.

Şekil 1, bir deneyden alınan videonun tek karelerini göstermektedir; A-D ve F-I panelleri, 4X objektif ve 8 msn pozlama süresiyle (videonun dosya boyutunu azaltmak için 2 x 2 piksel ikili gruplamalı) yakalanan floresan mikroküre izlerini göstermektedir. Şekil 1E, figürün diğer panellerinde retina damarlarının yönelimini gösterir. Videonun her karesi odaklanmış bir floresan izi içermeyebilir; ancak bazı kareler analizde kullanılmak üzere birden fazla iz içerebilir (örn. C, D, G, ...

İntravital mikroskopi, hayvanlarda retina vasküler çaplarını, kan dolaşım hızlarını ve toplam retinal kan akışını görselleştirmek ve ölçmek için kullanılabilir.

Farelerde Retinal Kan Akışının İntravital Video Mikroskobu Ölçümleri

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerde retinal kan akışını ölçmektir. Bu, ilk önce anestezi uygulanmış bir farenin kanüllü femoral veninden floresan mikrokürelerin infüze edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, farenin retina damarlarından akan mikro küreleri videoya kaydetmektir.Daha sonra, floresan dekstranı femoral venden infüze edin ve retina damarlarından akarken video çekin. Son adım, retinal kan akışının hesaplanması için kaydedilen videolardan mikroküre hızlarını ve damar çaplarını ölçmektir. Bu tekniğin birincil avantajı, standart bir floresan mikroskobu kullanarak retina kan akışını doğru bir şekilde ölçme yeteneğidir.Bu yöntem, kan akışındaki değişikliklerin diyabetik retinopatiye ne ölçüde katkıda bulunduğu gibi retina alanındaki önemli soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Her ne kadar bu tekniği bir farenin retinasında gösterecek olsak da. Genel yöntem diğer dokularda ve ayrıca sıçanlarda kullanılabilir.1.9 mikron çapında mikrokürelerin% 1'lik bir stok çözeltisini sonikleştirin, 10 mikrolitre stok çözeltisini 300 mikrolitrelik bir şırıngaya çekin, daha sonra şırıngaya 240 mikrolitre steril salin çekerek mikroküreleri seyreltin. Daha sonra, enjekte edilen dozun

intravital-video-microscopy-measurements-of-retinal-blood-flow-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Farelerde Retinal Kan Akımının İntravital Video Mikroskobu Ölçümleri

Intravital mikroskopi pial mikrosirkülasyon zamansal ve mekansal hemodinamik ve inflamatuar olayları takip etmek.

Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

Fare M. Cremaster'ın mikro intravital mikroskopi eşsiz ve çevresel kemik iliği kök hücre göçü analizi için in vivo model yanı sıra standart sunmaktadır.

Periferik Kök Hücre Göç Analizi Fare Cremaster Muscle Mikrosirkülasyon Intravital Mikroskopi

Bu makale, görüntü elde etme ve analiz için özel bir metodoloji ile birlikte intravital mikroskopi görüntüleme kullanılarak fare karaciğer damar sisteminin tek tek kan damarları içindeki kan akış hızının dinamik ölçümü ve miktarının belirlenmesi için ayrıntılı bir yöntem hakkında ayrıntılı bir yöntem hakkında rapor vermektedir.

Aşağıdaki Karaciğer intravital Mikroskopi Görüntüleme<em&gt; Leishmania</em&gt; Enfeksiyon: Karaciğer Hemodinami Üzerine Bir Değerlendirme

Göz dolaşımındaki etiketli kan hücrelerinin canlı hücre görüntülemesi, diyabetik retinopati ve yaşla ilişkili maküler dejenerasyonda inflamasyon ve iskemi hakkında bilgi sağlayabilir. Kan hücrelerini etiketlemek ve retinal dolaşımda etiketli hücreleri imal etmek için bir protokol tarif edilmiştir.

Fare Retinal Sirkülasyonunda Akış Dinamikleri Çalışmak İçin Eritrositler ve Lökositlerin Floresan Boya Etiketlenmesi

Vizyon tehdit eden birçok oküler hastalıklar işlevsel olmayan retina yüzdeki ile ilişkilidir. Bu nedenle, retina arteriyol yanıt ölçümü temel patofizyolojik mekanizmaları araştırmak önemlidir. Bu makalede fare retina arteriyol yalıtım ve damar çapı vazoaktif maddelerin etkilerini değerlendirmek için hazırlık için detaylı bir iletişim kuralı.

Fare retina arteriyoller Ex Vivo reaktivite ölçümü için hazırlık adımları

Floresan izleyiciler kullanan açık damar-pencere yaklaşımı, koklear kan akışı (CoBF) ölçümü için yeterli çözünürlük sağlar. Yöntem, normal ve patolojik koşullar altında farede CoBF'deki yapısal ve fonksiyonel değişikliklerin incelenmesini kolaylaştırır.

Açık Damar Penceresi ve İntravital Floresan Mikroskobu Kullanılarak Fare Kokleasında Strial Kan Akışının Ölçülmesi

İn vivo görüntüleme, sağlık ve hastalıkta biyoloji çalışmaları için güçlü bir araçtır. Bu protokol, standart iki foton mikroskobu ile fare retinasının transpupiller görüntülemesini tanımlar. Ayrıca, retinanın birden fazla hücresel kohortunu floresan olarak etiketlemek için farklı in vivoimaging yöntemleri göstermektedir.

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

Bu protokol, farelerin retinal düz montajlarının hazırlanması ve immünofloresan boyanması ve analizi için ayrıntılı bir yöntemi açıklamaktadır. Floresein fundus anjiyografinin (FFA) fare yavruları ve görüntü işleme için kullanımı da ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

Oksijene Bağlı Retinopati Fare Modelinde Retina Damarlarının Dinamik Büyümesinin İzlenmesi

Bu makalede, tüm mount retinal preparatları için iyi kurulmuş ve tekrarlanabilir bir lektin lekesi testi ve proliferatif ve proliferatif olmayan retinopatilerde sıklıkla değiştirilen vasküler parametrelerin nicel ölçümü için gerekli protokoller açıklanmaktadır.

Proliferatif Olmayan ve Proliferatif Retinopatilerle Farelerin Tüm Mount Retinalarında Vasküler Parametrelerin Nicelemesi

Burada, Retinal Ven Tıkanıklığı (RVO) çalışmasında floresein anjiyografi (FA) ve optik koherens tomografi (OCT) görüntüleri için üç veri analizi protokolü sunulmuştur.

İn vivo Tekrarlanabilirliği Artırmak için Fare Retinasında Vasküler Yaralanma Okumaları

Fare retinal damar sistemi, vasküler patern oluşumunun mekanizmalarını anlamada özellikle ilgi çekicidir. Bu protokol, optik diskten sabit bir mesafede floresan anjiyografi fundus görüntülerinden fare retina damarlarının çapını otomatik olarak ölçer.

Fare Floresan Anjiyografi Görüntülerinden Retina Damar Çapının Ölçülmesi

Öğrenin farelerde intravital video mikroskobu ile retinal kan akışı ölçüm yöntemini. Floresan mikroküreler ve dekstran kullanarak damar çapı ile hızı hassas şekilde belirleyin.

Farelerde Retinal Kan Akışının İntravital Video Mikroskobu Ölçümleri

Daha fazla video keşfet