Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Bu prosedürün genel amacı, ortotopik mesane kanseri ksenogreftlerini hızlı, hassas ve minimal invaziv bir şekilde oluşturmaktır. Bu, önce belirli tümör hücre hattının genişletilmesi ve Matrigel'deki tümör hücrelerinin süspansiyonu ile gerçekleştirilir. Daha sonra, hayvan görüntüleme platformuna monte edilir ve mesane ultrason ile görüntülenir.

Daha sonra mesanedeki mukozal ve kas tabakaları salin enjeksiyonu ile ayrılır. Son olarak, tümör hücresi matrigel süspansiyonu yapay olarak oluşturulan bu boşluğa enjekte edilir. Sonuçta, ultrason görüntüleme ve biyolüminesans yoluyla tümör büyümesini gösteren sonuçlar elde edilebilir.

Bu tekniğin, primer ksenogreftlerin aşılanması için laparotomi kullanımı gibi diğer mevcut yöntemlere göre ana avantajı, bu yaklaşımın hızlı, kesin ve minimal invaziv olmasıdır. Bu tekniklerin etkileri mesane kanserinin tanı ve tedavisine kadar uzanır, çünkü oto ksenogreftler yeni tedavilerin klinik öncesi çalışmaları için altın standarttır. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritiktir, çünkü enjeksiyon adımlarının öğrenilmesi oldukça zordur ve su çok inceydi, bu prosedürü göstermek olacaktır.

Igor Mosca'nın bir araştırma asistanı ve doktora sonrası araştırmacı olan Wolfgang Yeager'in var. Her ikisi de ürolog İlgili insan mesane kanseri hücre hatlarının kimliğini doğruladıktan sonra. DNA parmak izi yoluyla yapılan bu çalışma için, hücre hatlarını transfekte etmek için ksenogreft tümörlerinin biyolüminesans büyüme analizi için ateşböceği lusiferaz genini taşıyan bir lentiviral yapı kullanın.

Prosedüre başlamaya hazır olduğunuzda, mevcut hücre hatlarını genişletmek için DMEM'i %10 FBS ile çözün ve kullanın, nemlendirilmiş% 5 CO2 atmosferinde 37 santigrat derecede inkübe edin. Çözüldükten sonra enjeksiyon için bir hücre süspansiyonu hazırlamak için, matrigel ve buz tripsin gözleri,% 70 hücreleri birleştirir ve askıya almak için normal büyüme ortamını kullanır, daha sonra hücreleri sayın ve süspansiyonu beş dakika boyunca 200 kez G'de döndürün. Süpernatanı çıkardıktan sonra, hayvan başına 40 mikrolitrelik bir hacim enjekte etmek için istenen hücre konsantrasyonuna ulaşmak için uygun miktarda eşit hacimde D-M-E-M-F-B-S ve MATRIGEL ekleyin.

İyice karıştırın ve her türlü düz, sert plastik malzemeden hava kabarcıkları oluşturmaktan kaçının. Bir mesane sabitleyici kesin, kayışı dikkatlice inceleyin ve farelere uygulamadan önce keskin kenarları çıkarın. Dişi fareleri oksijende% 3 izofluran ile uyuşturduktan ve bir ayak parmağı çimdikleme yaptıktan sonra.

Yeterli sedasyonu sağlamak için, hayvanı küçük hayvan görüntüleme platformunun ısıtma görüntüleme masasına monte edin ve yaşamsal belirtilerini bir lastik bantla sürekli olarak izleyin. Alt ekstremiteleri sabitleyin ve cildi silmek için steril bir pamuklu uç kullanmadan önce karnı dezenfekte etmek için% 0.5 klorheksidin glukonat kullanın. Daha sonra, mesane stabilizasyon kayışını kullanarak, intramural enjeksiyon sırasında kaçmasını önlemek için mesaneyi hareketsiz hale getirin.

Daha sonra alt karın bölgesine steril ultrason jeli uygulayın. Ultrason taramasını yavaşça ilerletin, cilde gidin ve mesaneyi ultrason ekranında görselleştirin. Mesane boşsa, mesane duvar katmanlarını ayırmak için doldurmak için transüretral 24 gauge anjiyo kateterde 50 mikrolitre ılık PBS kullanın.

PBS ile doldurulmuş ve şırınga kelepçesine 30 gauge üç çeyrek inçlik bir iğneye bağlı 1.0 mililitrelik bir şırınga takarak başlayın. İğneyi kasık kemiğinin hemen üzerindeki cilde doğru konumlandırın. 30 ila 45 derecelik bir açıyla, cildi ve karın duvarı kaslarını yavaşça delmeden önce ultrason ekranındaki iğneyi tespit edin.

Daha sonra, iğnenin eğimini arkaya bakacak şekilde 180 derece döndürün ve iğnenin ucunu mukozaya nüfuz etmeden mesane duvarına yerleştirin. Daha sonra yapay bir alan oluşturmak için, iğneyi çekmeden önce kas tabakası ile mukoza arasına yavaşça 50 mikrolitre PBS enjekte edin. Mesane kanseri hücrelerini enjekte etmek için, kanser hücresi matrigel süspansiyonu ile doldurulmuş ikinci bir 1.0 mililitrelik şırınga ve şırınga kelepçesine 30 gauge üç çeyrek inçlik bir iğne takın.

İğnenin ucunu PBS dolu boşluğa yönlendirin. Sadece 40 mikrolitre süspansiyon oluşturdu ve boşluğa enjekte etti. Ardından, fareyi görüntüleme platformundan çıkardıktan sonra iğneyi geri çekin.

Sürekli izleme altında sıcak ve rahat bir ortamda saklayın. Bilincini geri kazandıktan ve normal ambulasyondan sonra, hayvanı ev kafesine geri koyun. Üç farklı tümör hücre hattının intramural enjeksiyonu, ultrason rehberliğinde 50 hayvanda art arda üç gün boyunca gerçekleştirildi.

Aşılama verimli bir şekilde gerçekleştirildi ve herhangi bir girişim içi veya sonrası komplikasyon ile ilişkili değildi. Tümör büyümesinin izlenmesi ultrason görüntüleme ve biyolüminesans ile yapıldı. Üçüncü günde, 50 hayvanın tamamının ön mesanesinde ultrason ile bir tümör tespit edilebildi ve farelerin% 98'i, uc aşılamasını takip eden takip döneminde sürekli tümör büyümesi sergiledi. Üç.

Bir farede intraperitoneal tümör yayılımı gelişti ve tümör yedinci günden sonra ikinci bir hayvanda kıvrıldı. Bu, uc aşılandıktan sonra bu yeni teknikle aşılanan ilk fare grubuydu. Üç. Luke uc, bir Luke ve uc.

13 Luka. Fareler sırasıyla 24, 28 ve 37. günlerde sakrifiye edildi. Ksenogreft tümörleri çıkarıldı ve h ve d kesitleri ile incelendi.

Tüm tümörler kas invazivdi ve bazıları viseral yağ başına infiltre oldu, ancak bitişik organlara invazyon gözlenmedi. UC'nin %60'ı, 13 Luke ve UC'nin %20'si. Luke tümörü taşıyan üç farede retroperitoneal lenf nodu metastazı gelişti ve bunlar h ve e boyaması ile doğrulandı.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik üç dakika içinde yapılabilir. Ultrason görüntülemeye aşinalık, bu prosedürü gerçekleştirmek için bir ön koşuldur: Tümörler bu şekilde aşılandıktan sonra, ultrason sadece zaman içinde tümör büyümesini izlememize değil, aynı zamanda mikro kabarcıklarla tümör perfüzyonuna bakmamıza da izin verir. Ayrıca yeni deneysel ajanlarla intratümöral enjeksiyon yapmamıza izin verir.