Preparation of Segmented Microtubules to Study Motions Driven by the Disassembling Microtubule Ends

Vladimir A. Volkov; Anatoly V. Zaytsev; Ekaterina L. Grishchuk

doi:10.3791/51150

Sökme Mikrotubul saplı tarafından Driven Hareketleri Eğitim için Segment Mikrotübüller hazırlanması

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Preparation of Segmented Microtubules to Study Motions Driven by the Disassembling Microtubule Ends

Sökme Mikrotubul saplı tarafından Driven Hareketleri Eğitim için Segment Mikrotübüller hazırlanması

Full Text

14,968 Views

12:20 min

March 15, 2014

DOI: 10.3791/51150-v

Vladimir A. Volkov^1,2, Anatoly V. Zaytsev³, Ekaterina L. Grishchuk³

¹Center for Theoretical Problems of Physicochemical Pharmacology,Russian Academy of Sciences, ²Federal Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia, ³Physiology Department, Perelman School of Medicine,University of Pennsylvania

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Mikrotübüller doğal kararsız polimerler, büyüme ve kısalması arasında kendi anahtarlama stokastik ve kontrol etmek zordur. Burada photoablatable stabilize kapaklar ile segmentli mikrotübülleri kullanarak protokolleri açıklar. Parçalara Mikrotübüllerin depolimerizasyonu böylece sökmeden mikrotübül uçları ile hareketleri analizi yardımcı, yüksek zamansal ve mekansal çözünürlük ile tetiklenebilir.

Aşağıdaki deneyin genel amacı, protein moleküllerinin ve protein kaplı boncukların hareketlerini depolimerize edici mikrotübüllerin uçlarıyla incelemektir. Bu, temiz boyutlu bir kapak kızağı ile yeniden kullanılabilir bir akış odasının monte edilmesiyle elde edilir. Daha sonra mikrotübüller tohumlar örtü kızağına tutturulmuş olarak hazırlanır ve mikrotübülleri çekirdeklendirmek için kullanılır, bunlar daha sonra foto tahrip edilebilir kapaklarla geçici olarak stabilize edilir.

Daha sonra GFP etiketli proteinler veya protein kaplı boncuklar akış odasına sokulur ve segmentli mikrotübüllere bağlanır. Mikro küvet depolimerizasyonu daha sonra foto ablasyon ile kapakların çıkarılmasıyla tetiklenir. Etiketli proteinlerin, depolimerize edici mikrotübüllerin uçlarıyla hareket eden uç izleme davranışı gösterip göstermediğini belirlemek için görüntüler CH ile analiz edilir.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos