Name: İndirimli Itraconazole Konsantrasyon ve Süreleri Tedavisi Başarılı mısınız Batrachochytrium dendrobatidis Amfibi Enfeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Öğrenin Batrachochytrium dendrobatidis enfeksiyonlu amfibileri itrakonazol ile tedavi etme yöntemini. Düşük konsantrasyon ve kısa süreli uygulama, enfeksiyonu etkili şekilde elimine eder ve yan etkileri azaltır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ben yardım için deneysel tasarım kavramsallaştırma ve malzeme ile yardımcı bir tedavi rejimi ve otopsi kurulması yardım A. Pessier analizleri, MWH Chatfield, MJ Robak, K. kılıfları ve D. Lenger yardım için CL Richards-Zawacki teşekkür etmek istiyorum laboratuar ve çekimler sırasında kendi alanı kullanımı için destek ve Taronga Hayvanat Bahçesi&#39;nde M. McFadden ve P. Harlow. Proje kısmen LA Brannelly verilen Louisiana Çevre Eğitim Komisyonu hibe yoluyla ve Yaşam Teknolojileri tarafından Yaban Hayatı ve Balıkçılık Louisiana Bakanlığı tarafından finanse edildi.

Etik Onay: Bu çalışma ve yöntemleri Tulane Üniversitesi Hayvan Kullanım ve Bakım Komitesi (. Protokol no 0407) tarafından onaylanmıştır. 1.. Bd Enfeksiyon için test <ol><li> Bd için sürüntü <ol><li> Steril pamuklu çubukla sürüntü hayvanlar Ventrum beş kez, her uyluk, her tarafta, ve 45 darbeleri toplam her bacak üzerinde beş kez. Swab amfibi ciltte Bd için örnekleme noninvaziv bir yöntemdir. </li><li> Yavaşça DNA&#39;nın büyük miktar bez üzerinde toplanan sağlamak vuruşları sırasında ve arasında çubukla döndürün. </li><li> -20 ° C&#39;de 1.5 ml mikrotüplerde Mağazası bezlerden </li></ol></li><li> DNA Ekstraksiyon ve qPCR tahlil <ol><li> Hayvan dokusu için talimatlara uygun olarak, ticari olarak temin edilebilir DNA izolasyon kiti kullanılarak bezlerden alınan genomik DNA ekstrakte edin. </li><li> Boyle aşağıdaki kantitatif gerçek zamanlı PCR (qPCR) kullanılarak ekstre DNA analiz <em&gt; ve arkadaşları 17, aşağıdaki değişikliklerle birlikte yapılmıştır.: </li><li> Çift deiyonize su ile DNA ekstraksiyon numuneleri 01:10 sulandırmak. </li><li> PCR inhibisyonunu önlemek için, sığır serum albümini (BSA) içinde 0.7 ul ekleyin. </li><li> PCR inhibisyonu sonucu etkilemeyen kalmadığından emin olmak için, her numune içinde bir dahili pozitif kontrol içerir. </li><li> Pozitif ve negatif kontrol ve zoospore (enfeksiyon) yük tahmin etmek için seyreltme standartlar serisi ile örnekler. </li></ol></li></ol> 2. Aşılama <ol><li> Kültür Bd <ol><li> (40 dakika boyunca 121 ° C) otoklava ve soğumaya bırakılmıştır, 1 L ters ozmoz veya deiyonize edilmiş su, 10 g tripton eklenerek tripton suyu hazırlayın. Bir kez 23 ° C&#39;ye kadar soğutuldu, 1 ml penisilin-streptomisin ilave edin. </li><li> 23 ° C&#39;de yedi gün boyunca tripton suyu içinde (a Phyllomedusa maki ikinci Guabal, Panama izole J. Longcore ikinci JEL411) Bd suşu büyümek </li></ol></li><li> B aktarınRoth kültür Tripton ve agar plakaları için. <ol><li> Plakaları yapmak için, 1 L ters ozmoz veya deiyonize su ve otoklav (40 dakika boyunca 121 ° C) 10 g tripton ve 10 g agar ekleyin. </li><li> Otoklava karışım dokunmak için yeterince serin, ama congeals önce, bir laminer akış kaputu, Petri kutularına tam 1/4-1/3 dökün kez. </li><li> Agar tamamen pıhtılaşmış ve soğuduğunda, her plakaya 0.5 ml Bd suyu ekleyin ve plaka çevresinde yayılır. Kurumasını bekleyin. </li><li> Plakalar Bd zoospores, Parafilm ile mühür plakaları ile aşılanır kez. </li><li> Plakalar 5-7 gün boyunca 23 ° C&#39;de inkübe izin verin. Aşılamadan önce canlılığı sağlamak için hareket zoospore edin. </li></ol></li><li> Zoospore aşılama çözümü için Sel plakalar <ol><li> Bd inkübasyon ve büyüme 5-7 gün sonra, dokunun yaş 5 ml su ile her bir plak sel ve zoospor, 10 dakika boyunca ortam girmesine izin verir. </li><li> Zoospore suspe döküntaşınabilir bir kap içine nsion. </li><li> Bir hemasitometre ile zoospore konsantrasyonu tahmin. </li><li> Yaşlı musluk suyu ile 1 x 10 6 başına 3 ml &#39;lik bir konsantrasyona kadar seyreltin. </li></ol></li><li> Hayvanları aşılamak <ol><li> Tek tek 50 ml kaplarda, kendi Ventrum boyunca 3 ml aşılama karışımının dökülmesiyle her hayvanı aşılamak. İlave aşılama aşılama kabın tabanına damla izin verin. </li><li> Her bir hayvan, enfeksiyonun sağlama alınması için 24 st için aşı kapta kalır. </li><li> Aşılamadan 24 saat sonra, ayrı ayrı hayvanlar için dezenfekte terraryumlarda döndürür. </li><li> Enfeksiyon iki hafta boyunca inşa etmek için izin verin. Çubukla ve qPCR sonuçları ile enfeksiyon onaylayın ve tedaviye başlar. </li><li> BD-Negatif kontroller için 5 ml sel Bd içermeyen agar plakaları yukarıdaki gibi aynı yöntem kullanılarak musluk suyu ve mock aşılanması yaşlı hayvanlar. </li></ol></li></ol> 3. Tedavi Rejimi <ol><li> Prepamuamele banyosu re <ol><li> 1 L Amphibian Ringer Çözeltisi (- en etkili tedavi konsantrasyonu% 0.0025 itrakonazol) 2.50 ml sulu itrakonazol (% 1 Sporanox Oral çözelti) eklenir. <ol><li> Amphibian Ringer Solüsyonu tarifi: 1 L ters osmoz veya iyonu giderilmiş su, 6.6 g sodyum klorür, 0.15 g potasyum klorür, 0.15 g kalsiyum klorür ve 0.2 g sodyum bikarbonat. Otoklav çözeltisi (40 dakika boyunca 121 ° C) ve oda sıcaklığına soğumaya bırakın. </li><li> % 0.01 itrakonazol muamele konsantrasyonu için, 1 L Amphibian Ringer solüsyonuna 10,00 ml sulu itrakonazol (% 1 Sporanox Oral çözelti) ekleyin </li><li> % 0.005 itrakonazol tedavi konsantrasyonu için, 1 L Amphibian Ringer solüsyonuna 5.00 mL sulu itrakonazol (% 1 Sporanox: Oral solüsyon) ekleyin. </li></ol></li><li> Bd-pozitif ve Bd-negatif kontroller, hiç itrakonazol ile Amphibian Ringer Çözeltisi içine hayvanlar banyo. </li></ol></li><li> Tedavi &lt;ol&gt; <li> Muamele çözeltisinin 35 ml&#39;si ile dezenfekte 50 mi kaplarda tek tek amfibiler yerleştirin. </li><li> Emin hayvanlar tamamen hafifçe kabı dönen beş dakika boyunca kaplıdır. </li><li> Dezenfekte terraryumlarda hayvanları dönün. Altı gün boyunca tekrarlayın. </li></ol></li><li> Tedavi başarısını sağlamak <ol><li> Günlük tedavi Bd bulaşmasına Test hayvanları başlar. </li><li> Enfeksiyon sağlamak için dört hafta boyunca haftada temizlenir Bd enfeksiyon için test hayvanları bir hafta tedavi tamamlandıktan sonra, ve bir kez. </li></ol></li></ol> Bir Biohazard olarak 4. Bd <ol><li> Bireysel terraria haftalık dezenfekte edin. <ol><li> % 10 çamaşır suyu solüsyonu banyosunda terraria ve tedavi kaplar batırın. </li><li> Akan su ile iki kez, her ağartılmış kabı durulayın. </li><li> Kaplar tekrar kullanmadan önce 24 saat kurumasını bekleyin. </li></ol></li><li> Çapraz bulaşmayı önlemek için hayvanları tutarken temiz nitril eldiven giyinBd patojenin. Her hayvan taşıma arasındaki eldiven değiştirmek. </li><li> % 10 çamaşır suyu ile çözüm getirerek atmadan önce tüm sıvı atık dezenfekte edin. </li><li> Potansiyel Atmadan önce bd&#39;ye maruz kaldığı tüm katı atık otoklavlayın. </li></ol>

<ol><li>Stuart, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Status+and+trends+of+amphibian+declines+and+extinctions+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Status and trends of amphibian declines and extinctions worldwide.</a> Science. 306 (5702), 1783-1786 (2004).</li>
<li>Skerratt, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+chytridiomycosis+has+caused+the+rapid+global+decline+and+extinction+of+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22EcoHealth%22%5BJournal%5D)">Spread of chytridiomycosis has caused the rapid global decline and extinction of frogs.</a> EcoHealth. 4, 125-134 (2007).</li>
<li>Wake, D. B., Vredenburg, V. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colloquium+paper%3A+are+we+in+the+midst+of+the+sixth+mass+extinction%3F+A+view+from+the+world+of+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Colloquium paper: are we in the midst of the sixth mass extinction? A view from the world of amphibians.</a> PNAS. 105, 11466-11473 (2008).</li>
<li>Voyles, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrolyte+depletion+and+osmotic+imbalance+in+amphibians+with+chytridiomycosis%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Electrolyte depletion and osmotic imbalance in amphibians with chytridiomycosis.</a> Dis. Aquat. Org. 77 (2), 113-118 (2007).</li>
<li>Ramsey, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amphibian+immune+defenses+against+Batrachochytrium+dendrobatidis%3A+A+war+between+host+and+pathogen%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Amphibian immune defenses against Batrachochytrium dendrobatidis: A war between host and pathogen.</a> , (2011).</li>
<li>McMahon, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chytrid+fungus+Batrachochytrium+dendrobatidis+has+nonamphibian+hosts+and+releases+chemicals+that+cause+pathology+in+the+absence+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Chytrid fungus Batrachochytrium dendrobatidis has nonamphibian hosts and releases chemicals that cause pathology in the absence of infection.</a> PNAS. 110 (1), 210-215 (2013).</li>
<li>Berger, L., Speare, R., Pessier, A., Voyles, J., Skerratt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+chytridiomycosis+requires+urgent+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Treatment of chytridiomycosis requires urgent clinical trials.</a> Dis. Aquat. Org. 92, 165-174 (2010).</li>
<li>Chatfield, M. W. H., Richards-Zawacki, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+temperature+as+a+treatment+for+Batrachochytrium+dendrobatidis+infection+in+captive+frogs%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Elevated temperature as a treatment for Batrachochytrium dendrobatidis infection in captive frogs.</a> Dis. Aquat. Org. 94 (3), 235-238 (2011).</li>
<li>Karbowski, M., et al. Free radical-induced megamitochondria formation and apoptosis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKarbowski%2C+M+%22Free+Rad.+Biol.+Med%22">Free Rad. Biol. Med</a>. 26 (98), 396-409 (1999).</li>
<li>Bishop, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elimination+of+the+amphibian+chytrid+fungus+Batrachochytrium+dendrobatidis+by+Archey%27s+frog+Leiopelma+archeyi%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Elimination of the amphibian chytrid fungus Batrachochytrium dendrobatidis by Archey's frog Leiopelma archeyi.</a> Dis. Aquat. Org. 84 (1), 9-15 (2009).</li>
<li>Pessier, A. P., Mendelson, J. A Manual For Control of Infectious Diseases in Amphibian Survival Assurance Colonies and Reintroduction Programs. , IUCN/SSC Conservation Breeding Specialist Group. Apple Valley, MN. (2009).</li>
<li>Page, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloramphenicol+1.+Hazards+of+use+and+the+current+regulatory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Aus.+Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Chloramphenicol 1. Hazards of use and the current regulatory environment.</a> Aus. Vet. J. 68 (1), 1-2 (1991).</li>
<li>Yoon, H. -J., Seo, M. H., Kim, J. -K. Pharmaceutical formulations for itraconazole. , (2005).</li>
<li>Garner, T. W. J., Garcia, G., Carroll, B., Fisher, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+itraconazole+to+clean+Batrachochytrium+dendrobatidis+infection%2C+and+subsequent+depigmentation+of+Alytes+muletensis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Using itraconazole to clean Batrachochytrium dendrobatidis infection, and subsequent depigmentation of Alytes muletensis tadpoles.</a> Dis. Aquat. Org. 83, 257-260 (2009).</li>
<li>Brannelly, L. A., Richards-Zawacki, C. L., Pessier, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trials+with+itraconazole+as+a+treatment+for+chytrid+fungal+infections+in+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Clinical trials with itraconazole as a treatment for chytrid fungal infections in amphibians.</a> Dis. Aquat. Org. 101 (2), 95-104 (2012).</li>
<li>Jones, M. E. B., Paddock, D., Bender, L., Allen, J. L., Schrenzel, M. S., Pessier, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+chytridiomycosis+with+reduced-dose+itraconazole%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Treatment of chytridiomycosis with reduced-dose itraconazole.</a> Dis. Aquat. Org. 99 (3), 243-249 (2012).</li>
<li>Boyle, D. G., Boyle, D. B., Olsen, V., Morgan, J. A. T., Hyatt, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantitative+detection+of+chytridiomycosis+%28Batrachochytrium+dendrobatidis%29+in+amphibian+samples+using+real-time+Taqman+PCR+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Aquat.+Org%22%5BJournal%5D)">Rapid quantitative detection of chytridiomycosis (Batrachochytrium dendrobatidis) in amphibian samples using real-time Taqman PCR assay.</a> Dis. Aquat. Org. 60 (2), 141-148 (2004).</li>
<li>Martel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+safe+antifungal+treatment+protocol+to+eliminate+Batrachochytrium+dendrobatidis+from+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Developing a safe antifungal treatment protocol to eliminate Batrachochytrium dendrobatidis from amphibians.</a> Med. Mycol. 49 (2), 143-149 (2011).</li>
<li>Bowerman, J., Rombough, C., Weinstock, S. R., Padgett-Flohr, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terbinafine+hydrochloride+in+ethanol+effectively+clears+Batrachochytrium+dendrobatidis+in+amphibians%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Herpetol.+Med.+Surg%22%5BJournal%5D)">Terbinafine hydrochloride in ethanol effectively clears Batrachochytrium dendrobatidis in amphibians.</a> J. Herpetol. Med. Surg. 20 (1), 24-29 (2010).</li>
<li>Young, S., Speare, R., Berger, L., Skerratt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloramphenicol+with+fluid+and+electrolyte+therapy+cures+terminally+ill+green+tree+frogs+%28Litoria+caerulea%29+with+chytridiomycosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Zoo+Wildlife+Med%22%5BJournal%5D)">Chloramphenicol with fluid and electrolyte therapy cures terminally ill green tree frogs (Litoria caerulea) with chytridiomycosis.</a> J. Zoo Wildlife Med. 43 (2), 330-337 (2012).</li>
</ol>

Yazar, hiçbir rakip mali çıkarlarını bildirir.

Bu protokolü kullanarak biz güvenle ve etkili amfibialarda Bd için itrakonazol tedavisi tedavi dozunu ve süresini azaltmak için başardık. Düşük tedavi dozu ve süresi (altı gün boyunca 0.0025%) subklinik enfekte I. başarılı bir tedavi oldu nebulifer. Daha düşük bir doz ve tedavi süresi hem de etkinliği Amfibilerin bütün türlerin ve yaş sınıfları için kullanılacak hiçbir güvenli ve etkili tedaviler şu anda olduğu gibi, Bd enfeksiyon tedavileri için klinik tedavi denemeleri için ihtiyaç ...

Amfibiler şu anda tüm omurgalı takson 1 biyoçeşitliliğin büyük düşüş yaşıyoruz. . Chytridiomycosis, chytrid fungal patojen Batrachochytrium dendrobatidis (BD) neden olduğu bir deri hastalığıdır, Bd biyoçeşitlilik kaybına neden rekor kötü patojen olan bu dramatik düşüşler 2 önemli nedenlerinden biridir: amfibiyenlere 600 tür üzerinde bozar ve var 200 kadar türü kritik tehlike altında veya 2,3 soyu tükenmiş olan 300&#39;den fazla türün düşüşler neden oldu. Amfibi chytrid mantar özgü ev sahibi değil ve ciddi hastalığa neden ilerleme Bd enfeksiyon için izin konağın hangi nitelikleri belli değildir. Chytridiomycosis elektrolit kaybı ve kalp yetmezliği ile sonuçlanan 4, deride iyon kanallarını bozarak ölüme neden olur. Aynı zamanda, (herhangi bir Bd zoosporlar ihtiva) Bd yüzer tetarlar bir bağışıklık tepkisi 5 Leadin neden olurg araştırmacılar Bd ürün 6 toksik üretir inanıyorum. Birçok türün hızla azalmaktadır Çünkü, esir güvence koloniler ve ıslah programlarında önemli koruma önlemleri ve bazı türler için tek can simidi olabilir. Kurulması ve hastalıksız koloni bakımı amfibi yönetimi tesisleri için bir sorundur. Bd enfeksiyonların tedavisi için mevcut kemoterapötik yöntemler, etkili olmasına rağmen, tedavi edilen hayvanlar için zararlı olabilir ve tek bir tedavi yöntemi türleri ve amfibi 7 yaş sınıflar arasında başarılı olmuştur. Bd enfeksiyonu için tedaviler birkaç klinik denemeleri 7 gerçekleştirilmiştir. Tedavinin üç en sık kullanılan yöntemler, ısı terapisi, kloramfenikol ve itrakonazol vardır. Isı terapisi az yan etkileri, çoklu hayat aşamalarında kullanılabilir olması için görünen bir nonchemotherapeutic tedavi seçeneği olduğunu ve homo olduğunumüttefiki etkili. Bir tedavi denemede, Chatfield ve Richards-Zawacki 8 ile muamele edilen hayvanların% 96, 10 gün boyunca 30 ° C &#39;de muhafaza edildikten sonra enfeksiyonların temizlenir olduğunu buldu. Bu deneme% 100 başarılı olmasa da, başkalarının, kendi türleri için ısı terapisi değerlendirmek için bir temel sağlar. Isı tedavisi, birçok türün için etkili olmalarına rağmen, uzun bir süre boyunca yüksek sıcaklıklarda kalamaz birçok dağ türler için pratik değildir. Kloramfenikol, bir bakteri öldürücü, bir çok türde Bd tedavisinde başarılı bir şekilde kullanılmıştır, ve in vitro olarak mantar gelişimini inhibe edilmiştir. Bir antibakteriyel olarak, kloramfenikol, özellikle mantar zarar vermez, ancak ökaryotik hücrelerde apoptosisi 9 neden olduğu bilinmektedir. Bu eylem mekanizması tam olarak bilinmemektedir, ancak kloramfenikol tedavisi, hücre içi sporangia öldürme, deri apoptoza neden olduğu iddia edilmiştir. Herhangi bir klinik deneme, bu nedenle yapılmıştır ve olmasına rağmendoz ve tedavi süresi, değerlendirilmemiştir güncel tedavi protokolleri genellikle karasal amfibiler için bu tedavi pratik yapma, 2-4 hafta 10,11 için suya batmaya gerektirir. İnsan maruz aplastik anemi 12 nadir bir formu ile ilişkili olduğu için kloramfenikol de veteriner kullanımı için bazı ülkelerde sınırlı olmuştur. İtrakonazol, bir azol antifungal, en yaygın olarak tutsak amfibiler Bd enfeksiyonunun tedavisi için kullanılmaktadır. En yaygın olarak kullanılan protokol beş dakika 11 gün boyunca günde bir% 0.01 itrakonazol çözeltisi içinde banyo hayvan. Bu protokol, amfibiler için etkili iken, amfibiler 11,13 klinik çalışmalarda dayanmamaktadır, memeli uygulama için kullanılan standart elde edilmiş ve. Bu protokol, özellikle genus Rana ve tetarlar ve son Metamorphs 11, bazı türlerde olumsuz yan etkilere neden olabilir.Tadpole tedavi itrakonazol çok daha düşük bir konsantrasyonda (% 0.0005) kullanılarak başarılı olmuştur, ama depigmentasyon 14 ile ilişkilendirilmiştir. Bu aynı konsantrasyon son Metamorphs üzerinde trialed ve enfeksiyonu 15 tedavi de başarısız olduğu bulunmuştur. Itrakonazol tedavisi ile olumsuz yan etkilerin riski olduğundan, bazı hekimler 11 gün boyunca bir yarım olağan konsantrasyon (% 0.005) kullanılan ve bu Bd ENFEKSĠYONLARI 16 kür başarılı bulduk. Bu çalışma Bd enfeksiyonunu tedavi etmek için 15 itraconazol&#39;den kullanarak bir klinik tedavi çalışmasının bir özetidir. Protokol itrakonazol ile Bd enfekte hayvanların tedavisinde güvenli ve etkili hem de en düşük doz ve tedavi süresini bulmak için bir girişimde açıklanır. Bu çalışmada kullanılan hayvanların körfez sahili toads son Metamorphs, Incilius nebulifer idi.

<table><tbody><tr><td>% 0.1 Sulu Itrakonazol, Sporonox</td><td>Janssen Pharmaceutica Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S640-500</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366-1</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP510-100</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP328-500</td><td></td></tr><tr><td>Steril pamuklu çubuklar</td><td>Tıbbi ve Tel Ekipmanları</td><td>MW113</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Mikrotüpler</td><td>Sarstedt</td><td>73.703.217</td><td></td></tr><tr><td>Qiagen DNEasy Kan ve Doku Kiti</td><td>Qiagen</td><td>69581</td><td></td></tr><tr><td>7500 Gerçek Zamanlı PCR</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4351104</td><td></td></tr><tr><td>VIC IPC</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4308323</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>AM2618</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Invitrogen</td><td>30391023</td><td></td></tr><tr><td>Tripton</td><td>Invitrogen</td><td>Q10029</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Petri Kabı</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS430589</td><td></td></tr></tbody></table>

İndirimli itraconazole konsantrasyon ve süreleri tedavisi başarılı mısınız<em&gt; batrachochytrium dendrobatidis</em&gt; amfibi enfeksiyon

Reduced Itraconazole Concentration and Durations Are Successful in Treating Batrachochytrium dendrobatidis Infection in Amphibians

Amfibiler herhangi bir omurgalı sınıfının büyük düşüş yaşandığı ve bu düşüşler önde gelen nedeni hastalık chytridiomycosis neden olan bir mantar patojen, Batrachochytrium dendrobatidis (BD), olduğunu. Esir güvence kolonileri tehdit amfibi türlerinin için dünya çapında önemli olan ve nesli kritik tehlike olanlar için tek can simidi olabilir. Hastalıksız koloni bakımı esir yöneticileri bir önceliktir, tüm türler için ve yaşam evreleri arasında henüz güvenli ve etkili tedaviler tespit edilmemiştir. Yaygın olarak kullanılan bir dozaj, bazı bireyler ve türler için zararlı olabilir, ancak en yaygın olarak kullanılan kemoterapötik tedavi, itrakonazol olduğu. Biz itrakonazol daha düşük ve daha güvenli ama etkili doz Bd enfeksiyonları tedavi bulunamadı olmadığını değerlendirmek için klinik tedavi deneme gerçekleştirildi. Bulduğumuz bu 0.01-0.0025 &#39;den% tedavi konsantrasyonu giderek düşürülür ve 11 ila tedavi süresini azaltarak5 dk hamam -6 gün, kurbağalar daha az yan etkileri ve daha az tedavi ile ilişkili mortalite ile Bd enfeksiyon tedavi edilebilir.

Tüm hayvanlar dört hafta sona tedavi sonrasında BD-negatif olsaydı Itrakonazol tedavi başarılı kabul edildi. Tedavi başlamadan önce, tedavisi bittiği, dört hafta sonra, Bd pozitif kontrol hayvanları 16,765.12 bir ortalama zoospore yük varken, aşılamadan iki hafta sonra, her Bd ile aşılanmış hayvanları, ((17,34 ±) 1,121.7 bir zoospore ortalama bir yük ile, enfekte edilmiştir ) 14643,08 ±. Incilius nebulifer tedavisi (n = 15), altı gün boyunca beş dakika sür...

Amfibiler Batrachochytrium dendrobatidis enfeksiyon, azaltılmış konsantrasyonu (% 0.0025) ve genel olarak kullanılan daha itrakonazol daha kısa süre (altı gün boyunca beş dakika banyolar) kullanılarak ortadan kaldırılabilir. Daha az mortalite ve daha az olumsuz yan etkileri bu modifiye tedavi protokolü kullanılarak gözlenmiştir.

İndirimli Itraconazole Konsantrasyon ve Süreleri Tedavisi Başarılı mısınız<em&gt; Batrachochytrium dendrobatidis</em&gt; Amfibi Enfeksiyon

Amphibians are experiencing the greatest decline of any vertebrate class and a leading cause of these declines is a fungal pathogen, Batrachochytrium ...

Bu prosedürün genel amacı, amfibi Kitt mantarı olan Bera key tridium, dendro, he veya BD ile enfekte olmuş amfibileri, antifungal kemoterapi ilacı atriazole ile tedavi etmektir. Bu işlem, öncelikle BD kültürlerinin yetiştirilmesi ve hayvanların fungal patojen ile inoküle edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, BD enfeksiyonunu doğrulamak için cilt sürüntülerinde DNA ekstraksiyonu ve QPCR kullanılarak hayvanların test edilmesidir.Ardından, enfekte hayvanlar altı gün boyunca günde beş dakika %0,0025'lik econazole çözeltisi ile yıkanarak tedavi edilir. Son adım, hayvanın başarılı bir şekilde tedavi edildiğinden emin olmak için tedavi tamamlandıktan sonra en az dört hafta boyunca deri sürüntülerine QPCR analizi yaparak tedavi edilen hayvanların enfeksiyon durumunu izlemektir; bu prosedür, antifungal itraconazole'un düşük konsantrasyonunun ve daha kısa tedavi süresinin bd ile enfekte hayvanların tedavisi için etkili olduğunu göstermektedir. 11 gün boyunca %0,01'lik itraconazole çözeltisi şeklinde olan önerilen tedavi dozuna kıyasla bu tedavi rejimini kullanmanın temel avantajı, önerilen dozun dörtte biri oranındaki düşük bir konsantrasyonun ve altı güne indirilmiş tedavi süresinin BD enfeksiyonunu iyileştirmede hâlâ etkili olması ve aynı zamanda önerilen tedavi dozunun kullanımından kaynaklanan negatif yan etkileri minimize etmesidir.Metin protokolünde belirtildiği şekilde BD'yi tritone besiyerinde inkübe ettikten ve Zo spor hareketini kontrol ettikten sonra, her plak beş mililitre dinlendirilmiş musluk suyu ile doldurulur ve ZO sporların medyuma girmesi için 10 dakika beklenir. Ardından, Zo Spor süspansiyonu taşınabilir bir kaba dökülür. Zo spor konsantrasyonu bir hemositometre ile tahmin edilir ve burada gösterilen Latoria vei Alpina gibi bir hayvanı inoküle etmek için karışım, dinlendirilmiş musluk suyu ile üç mililitrede 1 × 10⁶ konsantrasyona seyreltilir.Bir 50 mililitrelik kabın üzerinde tutun ve inokülüm karışımının üç mililitresini hayvanın venter bölgesine dökün. Ardından, hayvanı inokülümden süzülen sıvının bulunduğu kaba yerleştirin. Kabın kapağını kapatın ve enfeksiyonun gerçekleşmesini sağlamak için hayvanı inokülasyon kabında 24 saat bekletin.BD patojeni ile kontaminasyonu önlemek için eski eldivenleri çıkarın ve imha etmeden önce otoklavlanmak üzere uygun yere yerleştirin. Yeni bir çift eldiven giydikten sonra bir sonraki hayvanı inoküle etme işlemine geçin.İnokülasyondan 24 saat sonra, hayvanları iki hafta boyunca kendilelerine ait dezenfekte edilmiş teraryumlarına geri yerleştirin. İki haftanın sonunda çözeltiyi %10'luk çamaşır suyu konsantrasyonuna getirerek, tüm sıvı atıkları imha etmeden önce dezenfekte etmeyi unutmayın. Başarılı BD enfeksiyonunu test etmek için hayvanlardan steril bir pamuklu çubukla sürüntü alın.Sürükleme işlemleri sırasında ve arasında pamuklu çubuğu nazikçe döndürün. Her iki tarafta karın bölgesine, her bir uyluğa ve dört uzvun her birine beşer kez sürükleme yaparak toplam 45 sürükleme gerçekleştirin. Pamuklu çubukları -20 °C'de 1,5 ml'lik mikro tüplerde saklayın.Ticari olarak mevcut bir DNA izolasyon kiti kullanarak sürüntülerden genomik DNA'yı ekstrakte edin ve metin protokolünde belirtildiği şekilde QPCR gerçekleştirin. Metin protokolünde açıklandığı üzere, itrakonazolün üç farklı dozajı için birer tane olmak üzere üç tedavi banyosu hazırlayın. Ardından, tekil amfibileri dezenfekte edilmiş35 mililitre tedavi çözeltisi içeren 50 mililitrelik kutu kaplar. Hayvanlar arasında eldivenleri değiştirmeyi unutmadan, hayvanların beş dakika boyunca tamamen kaplandığından emin olmak için kabı ara sıra nazikçe çalkalayın. Beş dakika sonra, hayvanları dezenfekte edilmiş alanlarına geri döndürün.Beş dakikalık işlemi beş gün boyunca her gün tekrarlayın. Enfeksiyonun temizlendiğinden emin olmak için, tedavi tamamlandıktan bir hafta sonra ve ardından dört hafta boyunca haftada bir kez hayvanları tekrar BD enfeksiyonu açısından test edin. Tedavi tamamlandıktan sonra bile, hayvanların hâlâ kontaminasyon riski taşıyormuş gibi değerlendirilmesi gerektiğini unutmayın.Hayvanların enfeksiyondan sonra en az bir ay boyunca ayrı bir alanda tutulması gerekir. Tedavi başarısız olursa, işlem tekrarlanmalıdır. Farklı türler ve farklı yaşam evreleri enfeksiyona ve tedavi rejimlerine farklı tepkiler verir; bu nedenle tedavi, yaygın olarak uygulanmadan önce denenmelidir.BD biyotehlike oluşturduğundan, teraryumları ve tedavi kaplarını %10'luk bir çamaşır suyu çözeltisiyle yıkayarak her hafta dezenfekte edin. En az 30 saniye boyunca bekletin, çamaşır suyunu iki kez suyla durulayarak temizleyin ve kurbağaların tekrar yerleştirilmesinden önce kapların 24 saat boyunca kurumasına izin verin. Burada, 11 günlük BD tedavisi veya altı günlük BD tedavisi sonrası durumlar gösterilmiştir.Siyah oklar tedavinin son gününü göstermektedir. Düz çizgiler kontrol gruplarının sağkalımını belirtmektedir. Düz siyah çizgiler, BD pozitif olan ancak BD tedavisi almayan hayvanlar içindir.Düz gri çizgiler ise BD negatif olan ve BD tedavisi görmeyen hayvanları temsil etmektedir. Kesikli çizgiler, belirtilen konsantrasyonda ekonazol alan tedavi gruplarının sağkalım oranlarını göstermektedir. Altı gün boyunca %0,0025 konsantrasyonda nebulizatörle tedavi edilen tüm hayvanlar, tedavi sona erdikten dört hafta sonra BD negatif bulunmuştur ve bu nedenle bu tedavi başarılı kabul edilmiştir.Ek olarak, bu dozdaki ekonazol tedavisi, mortalite açısından BD pozitif kontrollerle karşılaştırıldığında anlamlı bir farklılık göstermemiştir. 11 gün boyunca uygulanan %0,01 ve %0,005 ekonazol tedavilerinin, BD pozitif kontrollere kıyasla mortalitede anlamlı bir artışa yol açtığına dikkat ediniz. Fungal patojen BD'nin bir biyotehlike olduğunu; eldiven giyme ve değiştirme, tüm katı atıkların otoklavlanması ve dezenfeksiyon gibi önlemlerin gerektiğini unutmayınız.Bu prosedür uygulanırken tüm sıvı atıkların bertarafı gerçekleştirilmelidir.

reduced-itraconazole-concentration-durations-are-successful-treating

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu çalışma, bir antibiyotik ile cilt ve bağırsak mikrobiyomları toplulukları kompozisyon değiştirilmesinden model balık konak üzerindeki etkilerini ortaya çıkarmak için yöntemler içerir.

Ana fenotipleri incelenmesi halinde<em&gt; Gambusia affinis</em&gt; Takiben Antibiyotik Tedavisi

İnsan influenza A virüsü için sistemik ve lokalize zebra balığı enfeksiyon modelleri gösterilmiştir. Sistemik bir enfeksiyon modeli kullanarak, zebra balığı antiviral ilaçları taramak için kullanılabilir. Lokalize bir enfeksiyon modeli kullanarak, zebra balığı konakçı bağışıklık hücresi tepkilerini karakterize etmek için kullanılabilir.

İnsan İnfluenza A Virüs Enfeksiyonları Zebra balığı Modeller Kullanılarak Antiviral İlaçlar Ekran ve Host Bağışıklık Hücre Yanıtları karakterize etmek

Bu iletişim kuralı karter temizleme bezi kullanımı ve Zebra balığı sistemleri, hangi nöbetçiler tek kullanım göre artan algılama patojen Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. ve gibi algılamaya yol çamur analizini açıklar Pseudocapillaria tomentosa. P. tomentosa yumurta karantinada izlemek için bir sistem de önerilmiştir.

Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. ve Pseudocapillaria tomentosa Zebra balığı sistemlerinde çevre tarama

Bu çalışmada, akut, kronik ve multigenerational bir bioassay turkuaz killifish Nothobranchius furzeritek ve kombine stresler etkilerini çalışmaya açıklar. Bu iletişim kuralı hayat-Tarih özellikleri (ölüm, büyüme, verimlilik, ağırlık) ve kritik termal maksimum çalışma için tasarlanmıştır.

Akut ve kronik Ecotoxicity test turkuaz Killifish Nothobranchius furzeri için iletişim kuralı

İki yöntem kullanarak chytridiomycosis ile kurbağa epidermal hücre ölümü ölçmek. Öncelikle, terminal dUTP transferaz-aracılı nick son etiketleme (tünel) situ Histoloji klinik olarak bulaşmış ve bulaşmamış hayvanlar arasındaki farkları belirlemek için kullanabilirsiniz. İkinci olarak, biz bir caspase 3/7 protein analizi ile enfeksiyon üzerinde apoptosis bir zaman serisi analizi kuralları.

Terminal transferaz-aracılı dUTP kullanarak Nick uç-etiketleme (tünel) ve Caspase 3/7 deneyleri için ölçü Epidermal hücre ölümünde kurbağalar Chytridiomycosis ile

Amfitiyoloji biyolojisinin incelenmesi, birçok taksononomik grubun organizmalarını kullanan üreme, fizyolojik, embriyolojik ve gelişimsel süreçler hakkında değerli bilgiler sağlar. Burada, biz ayı kontrol ve amfitezya izleme incelemek için kullanılabilecek farklı metodolojiler üzerinde kapsamlı bir rehber sunuyoruz.

Anbürlerde Ovaryalı Izleme ve kontrol için üreme teknikleri

Zebra balığı embriyoları kimyasal bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için kullanılır. Onlar harici geliştirmek ve kimyasallara duyarlı, ince phenotik değişikliklerin tespitine izin. Deney sadece doğrudan embriyo içeren plaka eklenir bileşik küçük bir miktar gerektirir, test sistemi verimli ve maliyet-etkin hale.

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

Antikorların C. tropicalis tarafından oluşturulan biyofilmler üzerindeki etkilerini incelemek için 2,3-bis (2-metoksi-4-nitro-5-sülfofenil)-5-karboksanil-2H-tetrazolyum (XTT) indirgeme testi kullanan 96 kuyucuklu mikrotitrek plaka bazlı bir protokol burada açıklanmıştır. Bu in vitro protokol, potansiyel yeni antifungal bileşiklerin biyofilmlerdeki Candida türü hücrelerinin metabolik aktivitesi üzerindeki etkisini kontrol etmek için kullanılabilir.

Antikorların Candida tropicalis Biyofilmleri Üzerindeki Etkisini Değerlendirmek için Çözünür Tetrazolyum Bazlı İndirgeme Testi

Bu, Avrupa plethodontid semenderlerinin (Speleomantes cinsi) kutanöz mikrobiyotasından kültürlenebilir bakterilerin örneklenmesi ve izole edilmesi için bir yöntemdir. Burada, semender derisinden sürüntülerle numune almak ve bunları kültürlenebilir yaklaşımlar kullanarak işlemek için bir protokol sunuyoruz. Bakteri suş karakterizasyonu ile numune almayı, izolasyonu ve aksenik kültürün kurulmasını tarif ediyoruz.

Karasal Amfibilerin Derisinden Bakteri Suşlarının İzolasyonu ve Tanımlanması

Protein tasarımı, amino asit dizilerinin inşasını ve fonksiyonel varyantlar oluşturmak için belirli motiflerin dahil edilmesini içerir. Bu yaklaşım, antibiyotiğe dirençli patojenlerle savaşmak için antimikrobiyal peptitlerin (AMP'ler) geliştirilmesi için kritik öneme sahiptir. Bu makale, çeşitli biyoinformatik araçları kullanılarak protein yapımı için bir prosedür sunmaktadır.

Proteinlerin De Novo ve In Silico Tasarımı için I TASSER, trRosetta, UCSF Chimera, HADDOCK sunucusu ve HEX loria uygulaması

Bu protokol, mantar enfeksiyonu sırasında konak-patojen etkileşimlerini incelemek için planarial Schmidtea akdeniz deniz sistemini model sistem olarak kullanmak için optimize edilmiş ve ayrıntılı bir rehber sunar. Yöntem, insan mantar patojeni Candida albicans ile planarian hayvanları enfekte etme prosedürünün üzerine inşa edilerek, tekrarlanabilirliği ve deneysel tutarlılığı artırmak için ayrıntılı rehberlik sağlar.

Schmidtea Akdeniz'de Candida albicans enfeksiyonu için Mantar Patogenezi ve Konak Savunmasını Araştırmak İçin Optimize Edilmiş Bir Protokol

Öğrenin Batrachochytrium dendrobatidis enfeksiyonlu amfibileri itrakonazol ile tedavi etme yöntemini. Düşük konsantrasyon ve kısa süreli uygulama, enfeksiyonu etkili şekilde elimine eder ve yan etkileri azaltır.

İndirimli Itraconazole Konsantrasyon ve Süreleri Tedavisi Başarılı mısınız

Daha fazla video keşfet