Farelerde Korku Yastıkları Trace

Aşağıdaki deneyin genel amacı, iz küre koşullanması (trace sphere conditioning) aracılığıyla farelerde hipokampusa bağımlı öğrenme ve belleği değerlendirmektir. Bu, öncelikle hayvanın işitsel bir tonu itici bir uyaranla ilişkilendirmesi sağlanarak gerçekleştirilir. Ertesi gün, hayvan yeni bir bağlama yerleştirilir ve tona yanıt olarak donma davranışı kaydedilir.

Üçüncü günde hayvan orijinal ortama geri getirilir ve donma davranışı kaydedilir. Sonuçlar, şok-ton eşleşmesi ile eğitilen farelerin, şok almayanlara göre daha fazla donma davranışı sergilediğini göstermektedir. Bu yöntem, farelerde hipokampusa bağımlı öğrenme ve bellek hakkında bilgi sağlamak için kullanılabilir ve özellikle transgenik ve nakavt hayvanların çalışılmasında faydalıdır.

Aşağıdaki prosedür, daha büyük bir ses yalıtım odası içerisinde bulunan bir korku koşullandırma odasında gerçekleştirilir. Oda kapısı kapalıyken, ışıkları istenen aydınlatma seviyesine ulaşacak şekilde ayarlayın; ışıklar doğru yerleştirilmişse ışık seviyesi gösterge lambası sönük olmalıdır. Her bir oda içerisindeki arka plan gürültü seviyesinin tutarlılığını onaylamak için bir ses ölçer kullanın.

Ardından, eğitim sırasında kullanılan tonu kalibre edin. Şok seviyesini kalibre etmek için harici bir kalibrasyon cihazı kullanın. Bir ucu bir bara, diğerini ise üç veya dört bar öteye yerleştirin.

Şoku uygulamak için şok jeneratörünü kullanın ve doğru seviyeye ulaşana kadar kalibrasyon yapın. Bu adımı her korku koşullandırma odası için tekrarlayın. Cihaz hazır olduğunda, aşırı tutma/taşıma işlemlerini azaltmak için denekleri test odasından ayrı bir bekleme odasına aktarın.

Testten önce, kuyrukları testten en az 30 dakika önce veya bir gün öncesinde etiketleyin. Başlamaya hazır olduğunuzda, test faresini korku koşullandırma odasına nakletmek üzere temiz ve etiketlenmiş bir kafese aktarın. Fareyi odaya yerleştirin, kapıyı kapatın ve yazılım programını başlatın.

Eğitimin ilk gününde, farelerin odağı keşfetmelerine üç dakika süre verilir. Ardından yazılım, 22 saniyelik bir ton sunar ve bunu, hafif bir ayak şoku ile sona eren 22 saniyelik bir izleme aralığı takip eder. Deneğin itici uyaranları aldığını onaylamak için onu gözlemleyin.

Beş koşullandırma denemesi, 202 saniyelik denemeler arası aralıklarla birbirinden ayrılır. Denemelerden sonra, hayvanı çıkarmadan önce bir dakika boyunca test odasında kalmasına izin verin, ardından hayvanı tekrar transfer kafesine yerleştirip tutma odasına geri götürün. Kendi kafeslerinde tek tek test edilecek ek fareler varsa, tüm fareler testi tamamlayana kadar fareyi barındırın.

Bir sonraki hayvana hazırlık için test odasını %30 isopropanol ile temizleyin. Tüm fareler eğitilene kadar bu adımları tekrarlayın. Tüm fareleri koloni odalarına geri götürün.

Kohorttaki son fare ertesi gün test edildikten sonra, hayvanlar iz sürme korku belleği için test edilir. Bu günde, bağlamlarını değiştirmek için transfer kafeslerinin altlığını parçalanmış kağıtla değiştirin.

Haznenin bağlamı da değiştirilir. Dokusunu ve görünümünü değiştirmek için tabandaki şeffaf akrilik ek parçanın altına bir köpük levha yerleştirin. Test alanının içine akrilik bir bölücü yerleştirin.

Zeminin altına bir whey boat içerisine vanilya özütü yerleştirerek kokuyu değiştirin. Bu günde, her fare arasında bölmeyi %30 isopropanol yerine %70 etanol ile temizleyin. Hazır olduğunda, fareyi test bölmesine yerleştirin ve programı başlatın.

Oturum, iki dakikalık bir bazal dönemle başlar ve ardından üç adet 22nd ton sunumu gerçekleşir. Her ton sunumu arasında 222nd denemeler arası aralık bulunur. Oturum sona erdikten sonra, fareleri ev kafeslerine geri götürün ve ertesi günkü testlerin hazırlığı kapsamında tüm hayvanlar test edilene kadar işleme devam edin.

Birinci günde kullanılan bağlamı yeniden oluşturun. Hazneyi %30 isopropanol ile temizleyin. Bağlamsal koşullandırma üçüncü günde gerçekleştirilir.

Birinci gündeki transfer kafeslerini kullanarak, test faresini bekleme odasından alın. Fareyi test odasına yerleştirin ve ardından bağlamsal hafıza testi programını başlatın. Sekiz dakika boyunca donma davranışını kaydetmek için bir program çalıştırın.

Bu sürenin ardından fareleri ev kafesine geri götürün ve testlere daha önce gösterildiği gibi devam edin; temsilci sonuçlar, eğitim seansı boyunca şok-ton eşleşmesine maruz kalan hayvanlarda donma davranışında bir artış olduğunu göstermektedir. Yeni bir bağlamda, aortif şok uyarısı alan fareler, baz hat ton izi ve denemeler arası aralık sırasında şok almayan farelere kıyasla daha fazla donma göstermiştir. Orijinal bağlama geri döndürüldüklerinde, aortif şok uyarısı alan hayvanlar sekiz dakikalık süre boyunca tutarlı bir şekilde daha yüksek donma davranışı sergilemiştir.

Bu videoyu izledikten sonra, farelerde hipokampusa bağımlı öğrenme ve belleği anlamak için izleme korku koşullanmasının nasıl kullanılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.