Name: Fare Siyatik Sinir Vivo elektrofizyolojik ölçümlerde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 7 s
Description: Öğrenin fare siyatik sinirlerinde in vivo elektrofizyolojik ölçümler yapmayı. Bu yöntem nöromusküler hastalıkların hayvan modellerinde sinir iletim özelliklerini değerlendirmek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma SFB 604, DFG MO 1421/2-1 ve Krebshilfe 107089 (HM) tarafından desteklenmiştir. Çocuk Tümörü Vakfı (New York, ABD) Genç Araştırmacı Ödülü alıcı AS.

Bu çalışma Almanya Federal Cumhuriyeti (Tierschutzgesetz der Bundesrepublik Deutschland) Hayvanlar Yasası Korunmasına göre yapıldı ve Gıda Güvenliği ve Tüketiciyi Koruma (Thüringer Landesamt für Lebensmittelsicherheit und Verbraucherschutz) için Thüringen Eyalet Dairesi tarafından onaylandı. 1.. Ölçümleri Kurma <ol><li> Izofluran / O 2 inhalasyon yoluyla fareler anestezi - anestezi% 3 başlatılması için,% 100 oksijen bakım izofluran% 2 (Şekil 1). Böyle hareket refleksleri ve düşük-dereceli ağrı duyarlılık testleri gibi basit reflekslerinin testi ile yeterli anestezi onaylayın. Prosedür genellikle toplam sadece 30 dakika / hayvan sürer, çünkü anestezi sırasında kuruluğunu önlemek için gözleri merhem kullanılması önerilir, ancak vazgeçilmez değil. Sağkalım deneylerde durumunda, ameliyat sonrası ağrı yönetmek için zamanında uzun etkili analjezikler yönetmek. </li><li> Elektrikli ustura ile arka bacaklarda kaplayan kürk tıraş ve hayvanlar analjezi altında zaten ise piyasada mevcut saç dökücü krem ​​ile epilasyon gerçekleştirin. Prosedür boyunca patojen-serbest statülerini korumak için, aseptik eldiven giyin ve her zaman dikkatli bir şekilde% 70 etanol ile temizlenmiş araçlarını kullanın. </li><li> Bir geri besleme kontrollü ısıtma plakası ve rektal ısı probu (Şekil 2) ile kontrol vücut ısısı kararlılığı. Eğer gerekli ise, steril bir deney ortamı tutmak için hayvanlar arasında, ısıtma plakası karşılamak için steril bir örtü kullanın. Ayrıca, elektronik olarak doku hasarını önlemek için 40 ° C ≤ için ısıtma sıcaklığı sınırlamak için entegre bir sensör ile kontrol edilir, bir ısıtma levhası, kullanımı tavsiye edilir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/51181/51181fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51181/51181fig1.jpg" /> Şekil 1. Exptıraşlı arka uzuvları ile bir anestezi fare gösteren erimental kurulum. </li><li> (EKG) kayıtları hayati bir parametre olarak kalp atışlarının izlenmesi için elektrokardiyografi çekmek. Boyun bölgesinde deri altında, her ön ayakları ve bir elektrot deri altında bir elektrot aşağıdaki gibidir: ECG kayıtları için üç elektrotlar yükleyin. </li><li> Optimum iletkenlik / transfer direnci için iletişim jel kullanarak Sıra halka elektrotlar. (Siyah etiketli) algılama elektrodu gastrokinemius kası maksimum çapa sahip pozisyonda yerleştirilir. (Kırmızı ile gösterilen) referans elektrot sadece algılama elektrodu altındaki yerleştirilir. Not: donanım detayları için &#39;Material tablo&#39; bakınız. </li><li> Proksimal ve distal siyatik sinir uyarımı ve kurşun elektrot arasında önceden tespit edilmiş bir mesafe ile tutarlı fakat ölçüm doğru pozisyonları işaretleyin. Deneysel öneri: algılama elektrottan 4 mm&#39;lik bir mesafede, uzak uyarım gerçekleştirilecektir.Algılama elektroda 16 mm&#39;lik bir mesafede, proksimal stimülasyonu (Şekil 2) yürütülecektir. </li></ol><img alt="Şekil 2," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51181/51181fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51181/51181fig2.jpg" /> Şekil 2.. Hemen önce ölçümlerin başına deneysel durumu gösteren Temsilcisi resim. Beyaz ok algılama (siyah) ve referans (kırmızı), sol arka bacak gastrocnemius kasında elektrot konumunu gösterir. İğne elektrotlar tarafından uyarım siyah algılama elektrodu için tanımlandığı konumlarda gerçekleştirilir. Distal stimülasyon noktası (sol arka bacakta &quot;DS&quot; ile siyah işareti) algılama elektrottan 4 mm&#39;lik bir mesafe vardır; proksimal stimülasyon (&quot;ps&quot; ile siyah marka) yer uzaklıkta 16 mm&#39;dir. Sağ arka bacak üzerinde kırmızı çizgi yakl gösterir<html> siyatik sinirin anatomik ders Imate. Ayrıca, ilgili arka bacak kaslarının kaba pozisyonları işareti olarak gösterilmiştir. Yıldız işareti rektal ısı sondasını göstermektedir. 2. Ölçüm <ol><li> İlke: monopolar atılabilir 28 G iğne elektrotlar 0.1 msn süresince tekrar tekrar üretilen tek kare dalga darbeleri ile sinir uyarılarının bir dizi yapın (tekrarlama hızı 200 ms; bkz. Şekil 3A). Off-line veri analizi için, aynı anda nedeniyle sinir stimülasyonu için nöromüsküler işlev yanıt eğrisinde (Şekil 3B) ile birlikte uyarma sinyalleri elde etmek için tavsiye edilir. Sonraki veri analizi için maksimal yanıtları bir dizi (&quot;temsilci nöromüsküler fonksiyonu yanıtı&quot;) ortalama. Güvenilir veri, kayıt ve stimülasyon site ve hayvan başına daha sonra ortalama en az 3 bağımsız, optimum tepki eğrileri üretmek için. p_upload/51181/51181fig3highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51181/51181fig3.jpg &quot;/&gt; Veri toplama ve analizi (şematik sunum) Şekil 3. Prosedür. Tekrar tekrar oluşturulan darbe iğne elektrot (Şekil 3A&#39;da üst sıra) ile siyatik sinir uygulanır. Aynı zamanda, karşılık gelen çok sayıda nöromüsküler yanıt eğrileri (Şekil 3A&#39;da alt satır) kaydedilir. Sinyal yanıtın Gecikme hem de süresi ve sinyalin genliği gösterilir ve can edilir: Ortalama ve büyütülmüş zaman nedeniyle uyarım darbeleri (Şekil 3B&#39;de üst satır) nöromüsküler yanıt eğrileri, aşağıdaki karakteristik özellikleri (Şekil 3B&#39;de alt sıra) göster sonraki hesaplamalar ve istatistik elde edilebilir. Düzensiz sinyal iletim ve / veya idare kayıtları genellikle sadece tek bir pozitif ve bir negatif sapma veya sinyal deformasyon daha fazla olan çeşitli sinyal deformasyonlar sonucuDüşük genlikli (Şekil 3C) ile (Bimodal şekli). </li><li> Belirlenmiş bir pozisyonda bir iğne elektrot (Şekil 2&#39;de &quot;PS&quot;) ile yakın stimülasyon yapın. <ol><li> Azami amplitüd ile en iyi kayıt koşulları elde etmek için, uyarım işlemine aynı anda fiili tepki eğrileri görselleştirmek. Böyle yaparak, deneyci hemen tepki eğrilerinin şekli hem de genlik boyutunu değerlendirmek edebilmektedir. </li><li> Gerekirse, hafif ve dikkatli bir şekilde konumunu ve / veya siyatik sinir ile ilgili olarak uyarım iğne açısını işlemek. Uyarım koşulları bu nazik optimizasyon olası en büyük değeri ve tipik bifazik şekil bir yanıt eğrisi (Şekil 4) ile sürekli genlikleri ulaşılmasını sağlar. </li></ol></li><li> Belirlenmiş bir pozisyonda (Şekil 2&#39;de &quot;DS&quot;), bir iğne elektrot ile distal stimülasyon yapın. </li><li> Completio sonraBu sternal yatma korumak için yeterli bilince kavuşana kadar n ölçümü, ayrı bir kafese test fare aktarmak. Tam anestezi kurtarıldı kadar sahipsiz diğer hayvanların şirket bir hayvan bırakmayın. Ameliyat sonrası ağrı yönetmek için zamanında artık oyunculuk analjezikler yönetmek. Steroidal olmayan anti-enflamatuar ilaçlar (NSAID) ve opioid sistemik uygulama 1-3 gün için tavsiye edilir. </li><li> Alternatif olarak, boyun çıkığı örneğin hayvan için herhangi bir başka ağrı olmadan hızlı ve insancıl bir şekilde hala anestezi fare kurban. </li></ol><img alt="Şekil 4," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/51181/51181fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51181/51181fig4.jpg" /> Şekil 4. Maksimum genlikli CMAP kayıtları belirlemek için İllüstrasyon. Eksiksiz bir kaydı serisi sunulmaktadır. (A </stminimal CMAP yanıt ile Rong&gt;) Araya nokta. Maksimum genlikli CMAP kayıtları (b) hafif stimülasyon iğne hareketi sonuçları. (C) iğne yerleştirme ek değişiklikler yakın maksimum genliklerinin dahil olmak üzere farklı genlikli CMAP kayıtları üretmek. Yakın-maksimum genliklerinin seri CMAP kayıtları ile (d) Uyarım iğne değiştirme. Not: CMAP amplitudes Tipik eksiltme stimülasyon sitesinde 12, 13, mükerrer uyarılma sırasında oluşabilir. Yıldız ortalama için gösterilen azami amplitüd ile CMAP kayıtlarını gösterir. 3. Analizi <ol><li> Uygun bir yazılım paketi (örneğin AtisaPro) kullanarak temsilcisi nöromüsküler fonksiyon tepki veri setine dayalı sinir iletim parametrelerini ayıklayın. Not: özel bakım ile zamanla ilişkili verileri kararlılık idare edin çünkü bileşik motor aksiyon pot bükülme noktası tayiniential (CMAP) başlangıçlı ve sonlandırma zor olabilir. Doğrulanmış tekrarlanabildiğini bir prosedür başlangıcından sonra ve sona ermeden önce sinyal deplasmanlar üzerinde teğetlerinin kullanılan Şekil 3B, verilmiştir. </li><li> &#39;Sinyal gecikmesini&#39; ve &#39;CMAP değerlerini hesaplayın. <ol><li> CMAP süresi &#39;Gecikme&#39; ilk negatif sapma CAMP başlangıcı arasındaki zaman aralığı baz denir için dönüşünü alınmalarını ise, uyarılması ve CMAP başlangıcı arasındaki zaman gecikmesini temsil &#39;. Uzak ve yakın stimülasyon siteler arasındaki mesafe ile birlikte iletim hızını hesaplamak için uzak ve yakın gecikmeleri arasındaki farkı kullanın. stimülasyon siteler arasında iletim hızı = gecikme / mesafe </li><li> CMAP &#39;(bileşik motor aksiyon potansiyeli) genlik (mV verilen) CMAP sinyalinin maksimum pozitif ve negatif dönüş noktası arasındaki büyüklüğünü temsil eder. CMAP = değer &#39;olumlu bir dönüş noktası&#39; - değerin &#39;negatif dönüş point &#39; </li></ol></li></ol>

<ol><li>Kimura, J. 3rd ed. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKimura%2C+J+%22Electrodiagnosis+in+Diseases+of+Nerve+and+Muscle%22">Electrodiagnosis in Diseases of Nerve and Muscle</a>. , Oxford University Press. (2001).</li>
<li>Rutkove, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+temperature+on+neuromuscular+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Effects of temperature on neuromuscular electrophysiology.</a> Muscle Nerve. 24, 867-882 (2001).</li>
<li>Xia, R. H., Yosef, N., Ubogu, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal+caudal+tail+and+sciatic+motor+nerve+conduction+studies+in+adult+mice%3A+technical+aspects+and+normative+data%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Dorsal caudal tail and sciatic motor nerve conduction studies in adult mice: technical aspects and normative data.</a> Muscle Nerve. 41, 850-856 (2010).</li>
<li>Zielasek, J., Martini, R., Toyka, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+abnormalities+in+P0-deficient+mice+resemble+human+hereditary+neuropathies+linked+to+P0+gene+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Functional abnormalities in P0-deficient mice resemble human hereditary neuropathies linked to P0 gene mutations.</a> Muscle Nerve. 19, 946-952 (1996).</li>
<li>Raynor, E. M., Ross, M. H., Shefner, J. M., Preston, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+between+axonal+and+demyelinating+neuropathies%3A+identical+segments+recorded+from+proximal+and+distal+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Differentiation between axonal and demyelinating neuropathies: identical segments recorded from proximal and distal muscles.</a> Muscle Nerve. 18, 402-408 (1995).</li>
<li>Pareyson, D., Scaioli, V., Laura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+electrophysiological+aspects+of+Charcot-Marie-Tooth+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromol.+Med%22%5BJournal%5D)">Clinical and electrophysiological aspects of Charcot-Marie-Tooth disease.</a> Neuromol. Med. 8, 3-22 (2006).</li>
<li>Schulz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Merlin+isoform+2+in+neurofibromatosis+type+2-associated+polyneuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Merlin isoform 2 in neurofibromatosis type 2-associated polyneuropathy.</a> Nat. Neurosci. 16, 426-433 (2013).</li>
<li>Lamontagne, A., Buchthal, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+studies+in+diabetic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurol.+Neurosurg.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological studies in diabetic neuropathy.</a> J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 33, 442-452 (1970).</li>
<li>Andersen, H., Nielsen, J. F., Nielsen, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inability+of+insulin+to+maintain+normal+nerve+function+during+high-frequency+stimulation+in+diabetic+rat+tail+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Inability of insulin to maintain normal nerve function during high-frequency stimulation in diabetic rat tail nerves.</a> Muscle Nerve. 17, 80-84 (1994).</li>
<li>Magda, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+electrodiagnostic+abnormalities+and+criteria+in+a+cohort+of+patients+with+chronic+inflammatory+demyelinating+polyneuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Comparison of electrodiagnostic abnormalities and criteria in a cohort of patients with chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy.</a> Arch. Neurol. 60, 1755-1759 (2003).</li>
<li>Lindberg, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuropathy+in+porphobilinogen+deaminase-deficient+mice+imitates+the+peripheral+neuropathy+of+human+acute+porphyria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Motor neuropathy in porphobilinogen deaminase-deficient mice imitates the peripheral neuropathy of human acute porphyria.</a> J. Clin. Invest. 103, 1127-1134 (1999).</li>
<li>Massey, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electromyography+in+disorders+of+neuromuscular+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Electromyography in disorders of neuromuscular transmission.</a> Sem. Neurol. 10, 6-11 (1990).</li>
<li>Stalberg, E., Falck, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+electromyography+in+neurology%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">The role of electromyography in neurology.</a> Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 103, 579-598 (1997).</li>
<li>Osuchowski, M. F., Teener, J., Remick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+model+of+sciatic+nerve+conduction+in+healthy+and+septic+mice%3A+reliability+and+normative+data%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Noninvasive model of sciatic nerve conduction in healthy and septic mice: reliability and normative data.</a> Muscle Nerve. 40, 610-616 (2009).</li>
<li>Oh, S. S., Hayes, J. M., Sims-Robinson, C., Sullivan, K. A., Feldman, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+anesthesia+on+measures+of+nerve+conduction+velocity+in+male+C57Bl6%2FJ+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">The effects of anesthesia on measures of nerve conduction velocity in male C57Bl6/J mice.</a> Neurosci. Lett. 483, 127-131 (2010).</li>
<li>Dilley, A., Lynn, B., Pang, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pressure+and+stretch+mechanosensitivity+of+peripheral+nerve+fibres+following+local+inflammation+of+the+nerve+trunk%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Pressure and stretch mechanosensitivity of peripheral nerve fibres following local inflammation of the nerve trunk.</a> Pain. 117, 462-472 (2005).</li>
<li>Vleggeert-Lankamp, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiology+and+morphometry+of+the+alpha-+and+beta-fiber+populations+in+the+normal+and+regenerating+rat+sciatic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Electrophysiology and morphometry of the alpha- and beta-fiber populations in the normal and regenerating rat sciatic nerve.</a> Exp. Neurol. 187, 337-349 (2004).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Açıklanan protokol, ilgi konusu siniri ortaya çıkarmak için gerek kalmadan, anestezi uygulanmış farelerde ilgili siyatik sinir iletim özelliklerini belirlemek için kolay ve güvenilir bir yöntem sağlar. Bununla birlikte, bu deneysel prosedür İğne doku hasarına neden olur. Bu nedenle kayıtları bittikten sonra hayvanları kurban etmek makul bir seçenektir. Ancak önceki kayıtları sinirin pozlama gerektiren diğer invaziv işlemler karşılaştırıldığında, doku hasarı 3,14 nispeten küçük. Bu nedenle, tekrarlanan ölçümle...

Elektrofizyolojik ölçümler klinik ve laboratuvar ortamında hem de periferik sinirlerin fonksiyonel bütünlüğünü araştırmak için vazgeçilmez bir araç bulunmaktadır. İnsanlarda, nöromüsküler bozukluklar ve nöropatilerin, çok sayıda teşhis elektrofizyolojik ölçümlere dayanmaktadır. Iletim hızı ya da sinyal amplitüdleri potansiyel olarak sinir özellikleri ölçerek, periferik sinir hastalıkları kaba kökenini karakterize etmek mümkündür. Sinir iletim hızı miyelinasyonda tarafından etkin, hızlı sinyal yayılması son derece bağlıdır. Bu nedenle, demiyelinizan süreçleri genellikle iletim hızları 4 azalma göstermektedir. Bileşik motor aksiyon potansiyeli (CMAP) - fonksiyonel akson sayısı ile ilişkilendirilmesi - anlamlı 5 azaltılmış aksonal hasar için bir göstergedir. Bu nedenle, elektrofizyolojik yöntemler vasıtasıyla periferik sinir hasarı etyolojisiörneğin kalıtsal nöropatiler 6,7, diyabetik nöropati 8,9, kronik enflamatuvar demiyelinizan polinöropatiler (CIDP) 10 ya da metabolik nöropatiler 11 için olduğu gibi, ayırt edilebilir. Normalde, insan uygulamasında sural veya ulnar sinire invaziv kayıtları tercih edilir. Ve motorik ve duyu sisteminin küçük kalibreli aksonlar - Farelerde, siyatik sinirlerin sinir özellikleri, büyük hem de içeren periferal sinir sisteminin (PNS) en büyük sinir analiz basittir. Burada gösterildiği gibi prosedür sağlam fare periferik sinirler elektrofizyoloji hakkında tüm standart değerlerini ölçmek için hızlı, kolay ve güvenilir bir yöntemdir. Korunmuş bir organizmadan kayıtları alarak, sinir ortamının fizyolojik koşulları garanti edilir.

<table><tbody><tr><td>Konsantrik İğne Elektrotları (Stimülasyon)</td><td>Natus Medical Incorporated, San Carlos, CA, ABD</td><td>9013S0901</td><td></td></tr><tr><td>Dijital Halka Elektrotlar (Kayıt)</td><td>Natus Medical Incorporated, San Carlos, CA, ABD</td><td>9013S0302</td><td></td></tr><tr><td>ToM - Tower of Measurement (A/D dönüştürücü)</td><td>GJB Datentechnik GmbH, Langewiesen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AtisaPro, veri toplama ve analiz yazılımı</td><td>GJB Datentechnik GmbH, Langewiesen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HSE Stimülatörü T</td><td>Hugo Sachs Elektronik, Hugstetten, Almanya</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare siyatik sinir vivo elektrofizyolojik ölçümlerde

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

Elektrofizyolojik çalışmalar patofizyoloji 1 anlayış, birlikte nöropatolojik teknikleri ile çeşitli nöromüsküler hastalıklar rasyonel bir sınıflandırma izin ve yardım vardır. Burada in vivo fare siyatik sinirlerin elektrofizyolojik çalışmalar gerçekleştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Hayvanlar, test edilen fareler için analjezi sağlamak amacıyla izofluran ile anestezi uygulandı ve yaklaşık 30 dakika / hayvan almak ölçümler sırasında çalışma ortamı engellenmez. 37 ° C&#39;lik bir sabit vücut sıcaklığı bir ısıtma plakası ile tutulur ve bir termo rektal sonda 2 ile ölçülür. Buna ek olarak, bir elektrokardiyogram (EKG) rutin olarak sürekli olarak incelenen hayvanların fizyolojik durumunu izlemek amacıyla, ölçümler sırasında kaydedilir. Elektrofizyolojik kayıtlar siyatik sinir th en büyük sinir yapılmaktadırmotorik ve duyusal hem de elyaf yolları ile fare arka uzuv temin e periferik sinir sistemi (PNS),. Protokolde, siyatik sinirler yerinde kalır ve bu nedenle ekstre veya maruz zorunda değilsiniz, gerçek kayıtları ile birlikte herhangi bir olumsuz sinir tahriş olmadan ölçümler sağlar. Uygun iğne elektrotlar 3 kullanma biz gastrokinemius kaslara algılama elektrotlar ile iletilen potansiyelleri kayıt, yakın ve uzak sinir uyaranları hem de gerçekleştirin. Veri işleme, güvenilir ve sinir iletim hızı (NCV) ve bileşik motor aksiyon potansiyeli (CMAP) için son derece tutarlı değerler, brüt periferik sinir işleyişi ölçümü için anahtar parametreler, elde edilebilir sonra.

<html> Her bir cinsiyet 6 hayvan: Bu çalışma için toplam 12 fareden oluşan siyatik sinirler üzerinde in vivo elektrofizyolojik ölçümler bir dizi yapılmıştır. Ölçümler sunulan protokol ile gerçekleştirilmiştir ve aşağıdaki sonuçlar elde edildi: Hem erkek hem dişi farenin yaklaşık 20 m / sn &#39;lik bir ortalama siyatik sinir iletim hızı (Şekil 5) gösterir. Bu, literatürde diğer ölçümler ile tutarlıdır. Ayrıca, kadınlar ve erkekler arasındaki sinir iletim hızı hiç bir ...

In vivo sinir iletim özelliklerinin ölçümleri nöromüsküler hastalıkların çeşitli hayvan modelleri karakterize etmek için güçlü bir araç örneklemektedir. Burada, biz anestezi farelerin siyatik sinirlerin elektrofizyolojik analizi yapılabilir hangi ile kolay ve güvenilir bir protokol mevcut.

Fare Siyatik Sinir Vivo elektrofizyolojik ölçümlerde

Electrophysiological studies allow a rational classification of various neuromuscular diseases and are of help, together with neuropathological ...

Bu yöntemin genel amacı, canlı farelerin SCIC sinirlerindeki temel sinir iletim özelliklerini belirlemektir. Test edilecek fare karnının üzerine yerleştirilir. Burada mavi ile belirtilen SCIC siniri anatomisine aşina olmanız ve siyah ile belirtilen algılama elektrotlarının, gastro kasının maksimum çapının olduğu konuma yerleştirilmesi gerektiğini lütfen göz önünde bulundurun.Kırmızıyla belirtilen referans elektrotlar, algılama elektrotlarının hemen altına yerleştirilir. Şimdi distal stimülasyon noktası işaretlenmelidir. Tanımlanmış ve sabit olan dört milimetrelik mesafeyi keyfi olarak seçtik.Proksimal stimülasyon noktası, algılama elektrodundan 16 milimetre uzaklıktadır. Bu durum, STIC sinirinin proksimal ve distal stimülasyon noktaları arasında tam olarak 12 milimetrelik bir boşluk olduğu anlamına gelir. İğne elektrotlar kullanılarak yapılan stimülasyon, sırasıyla önce proksimal stimülasyon bölgesinde, ardından distal stimülasyon konumunda gerçekleştirilir.Merhaba, benim adım Alexander Schultz. Almanya'nın Gina şehrindeki Ance H Araştırmaları Enstitüsünde, Dr. Helen Morrison'ın gözetiminde çalışıyorum. Gina Üniversitesi Hastanesi Moleküler Hücre Biyolojisi Enstitüsünden Profesör Reinhard Power ile iş birliği yaparak, canlı farelerin sky sinirleri üzerinde elektrofizyolojik ölçümler yapmamıza olanak tanıyan bir yöntem geliştirdik.Bu kayıtlar, nöromüsküler hastalıkların fare modellerini karakterize etmek için kullanılan güçlü bir araçtır. Öyleyse başlayalım. Ölçümleri gerçekleştirmek için ihtiyacınız olan ekipmanlar bunlardır.EKG kayıtları için üç iğne elektrot. Stimülasyon için bir iğne elektrot, algılama için halka elektrotlar ve referans olarak kıl, kremi temizlemek için bir elektrikli tıraş makinesi, geri besleme kontrollü bir ısıtma plakası, bir recal termo prob, anestezi için bir fare ağızlığı ve kontak jeli. Anestezinin başlatılması için farelere sürekli izofloran inhalasyonu ile anestezi uygulanır.%100 oksijen içerisinde %3 izofluran uyguladık. Daha sonraki ölçümler sırasında, %100 oksijen içerisinde %2 izofluran ile çalışmak yeterlidir. Ölçümler sırasında deri direncini azaltmak için, test edilen farelerin arka ekstremitelerindeki tüyleri tamamen temizledik.Bu işlem elektrikli bir tıraş makinesi ile gerçekleştirilir. Ayrıca, ticari olarak satılan bir tüy dökücü krem kullanılır. Son aşamada, krem tamamen temizlenir ve cilt %70 ethanol kullanılarak temizlenir.Bir sonraki adımda, EKG kayıtları için üç elektrot yerleştiriyoruz; birer elektrot her bir ön bacağın deri altına ve bir elektrot boyun bölgesindeki deri altına yerleştirilir. Ölçümler sırasında EKG kayıtlarının alınması, en az bir hayati parametrenin izlenmesine olanak tanır. Halkalı elektrotların yaklaşık yerleşiminin ardından, her iki arka bacak yapışkan bant ile zemine sabitlenir.Optimal sinyal iletkenliği için, cilt ile halka elektrotlar arasındaki transfer direncini azaltan bir kontak jel kullanıyoruz. Siyahla işaretlenen algılayıcı elektrotlar, gastroknemius kasının maksimum çapının olduğu konuma yerleştirilir. Kırmızıyla belirtilen referans elektrotlar ise algılayıcı elektrotların hemen altına yerleştirilir.Ardından, siyatik sinir stimülasyonu için kesin konumlar belirlenir ve algılama elektrotlarından dört milimetre uzağa işaretlenir. Distal stimülasyon, algılama elektrotlarından 16 milimetre uzaklıkta gerçekleştirilecektir. Proksimal stimülasyon ise burada uygulanacaktır.Burada, veri toplama ve analizine yönelik bir programın kullanıcı arayüzünü görüyorsunuz. İlk satırda, EKG kaydı görselleştirilmiştir. İkinci satırda.Stimülatörden gelen tekrarlayan darbeleri görebilirsiniz. Üçüncü satırda, algılama elektrodu tarafından tespit edilen yanıt sinyalleri 50 kilohertz örnekleme hızı kullanılarak görünecektir. Artık asıl kayıtlara başlayabiliriz.Stimülasyon iğnesi öncelikle proksimal stimülasyon pozisyonuna enjekte edilir. İğnenin doğru konumlandırılması veya daha spesifik olarak STIC sinirinin uygun şekilde stimüle edilmesi, STIC sinirinin aşağısındaki uygun bir kas yanıtı ile izlenebilir. Algılama elektrotlarının bulunduğu bölgede, algılama elektrotları tarafından tespit edilen sinyaller kullanıcı arayüzünde görselleştirilir.Eş zamanlı olarak, lütfen sabit maksimum Genliğe sahip net bifazik yanıt eğrileri elde etmeye çalışın. Ardından, distal Stimülasyon aynı şekilde gerçekleştirilir. Sol üst köşede, kullanıcı Arayüzü'ndeki sabit elektrotların eş zamanlı kayıtlarını görebilirsiniz.Üst sırada, stimulasyon iğne elektrotları tarafından her 200 milisaniyede bir uygulanan 0.1 milisaniye süreli tek bir kare dalga darbesinin temsilci görüntüsünü görüyorsunuz; alt sırada ise buna karşılık gelen nöromüsküler yanıt eğrisi gösterilmektedir. Veri analizi, kaydedilen sinyallerin latans ve amplitüdünün belirlenmesini içerir. Bu amaçla, tek bir stimulasyon bölgesinden elde edilen birden fazla yanıt eğrisinin ortalamasının alınması önerilir.Sinyalin latansı, stimülasyon başlangıcı ile yanıt eğrisinin başlangıcı arasındaki süredir. Daha kesin bir ifadeyle, infleksiyon noktasıdır; proksimal ve distal stimülasyon sonrası latanslar arasındaki zaman farkı artık sinir iletim hızını hesaplamak için kullanılabilir. Bu amaçla, proksimal ve distal stimülasyon arasındaki mekansal mesafeyi de bilmeniz gerekir, bizim durumumuzda bu mesafe 12 milimetredir.Ek olarak, sözde bileşik motor aksiyon potansiyelini belirlemek amacıyla yanıt eğrisinin genliği nicelendirilebilir. Bu, sinyalin maksimum pozitif ve negatif dönüş noktaları arasındaki büyüklüğü temsil eder. Bazı uygulamalar için, yanıt eğrisinin ilk büküm noktasından sonuncusuna kadar süren sinyal genliği süresini ölçmek de faydalı olabilir.Sinir iletim hızı, miyelinasyon sayesinde mümkün olan hızlı sinyal yayılımına oldukça bağımlıdır. Bu nedenle, demiyelinizan hastalıklar genellikle azalmış iletim hızları gösterir. Fonksiyonel akson ve nöromüsküler bileşke sayısıyla ilişkili olan bileşik motor aksiyon potansiyeli, belirgin şekilde azaldığında aksonal hasar için bir göstergedir.Farelerde temel sinir iletim özelliklerini belirlemek için kolay ve güvenilir bir yöntem göstermiş olduk. Bu prosedürü uygularken, tüylerin tamamen temizlenmesi ve cildin arındırılmasıyla cilt direncini düşürmek büyük önem taşır. Böylece, optimal bir sinyal-gürültü oranıyla sinyalleri kaydedebilirsiniz.Ayrıca, uygun veri toplama işlemi için maksimum uyaran yanıtının belirlenmesi önemlidir. Bu, bifazik yanıt eğrilerini tespit edebileceğiniz şekilde stimülasyon iğnesinin nazikçe hareket ettirilmesiyle sağlanabilir. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

in-vivo-electrophysiological-measurements-on-mouse-sciatic-nerves

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, farelerde bileşik kas aksiyon potansiyelini (CMAP) ölçmek için in vivo bir tekniği göstermektedir. Elektrotların kurulması, kas liflerini innerve eden ön ayak nöronlarının uyarılması ve kas tepkilerinin kaydedilmesi için adımları ana hatlarıyla belirtir. Teknik, nöronal demiyelinizasyon ve fonksiyonel nöron kaybını değerlendirir.

Fare Ön Ayak Kaslarında Bileşik Kas Aksiyon Potansiyellerinin İn Vivo Olarak Ölçülmesi

Bu video, ulnar sinire elektriksel uyarılar uygulayarak, optimal sinyal için elektrotları ayarlayarak ve sinir işlevselliğini değerlendirmek için stimülasyonu artırarak sıçanlarda bileşik kas aksiyon potansiyelini (CMAP) kaydetme prosedürünü göstermektedir. Bu yöntem nörolojik hastalıklarda periferik sinir fonksiyonlarının in vivo olarak araştırılmasını sağlar.

Bir Sıçanda Bileşik Kas Aksiyon Potansiyelinin İn vivo Ölçümü

Bu video, sıçanlarda C-fiber sinir iletiminin tek lifli bir kaydını göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir sıçan, alt ekstremitelere duyusal ve motor besleme sağlayan siyatik siniri açığa çıkarmak için kesilir. Tek tek C-lifleri daha sonra açığa çıkar. Ayağa yerleştirilen uyarı elektrotları kullanılarak elektriksel stimülasyon sağlanır ve tek bir sinir lifinden yanıt kaydedilir.

Sıçanlarda siyatik sinir C-liflerinin in vivo tek lif kaydı

Kaynak: Shannonhouse, J.,  et al. İn Vivo Sağlam dorsal kök gangliyonlarındaki primer duyusal nöron ağlarındaki nöronal toplulukların kalsiyum görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2023). Video, transgenik bir farenin dorsal kök gangliyonlarındaki (DRG) nöronal aktiviteyi izlemek için in vivo bir kalsiyum görüntüleme tekniğini göstermektedir. DRG nöronları, kalsiyuma bağlandıktan sonra floresan yoğunluğunu artıran bir kalsiyum indikatörünü ifade eder. Bir arka pençeye uygulanan mekanik veya termal...

Bir farenin sağlam dorsal kök gangliyonlarındaki nöronal toplulukların in vivo kalsiyum görüntülemesi

GABAerjik presinaptik inhibisyonu motor ve omurilik ağlarında duyusal sinyal entegrasyon için önemli omurilikteki güçlü bir önleyici mekanizmadır. Altta yatan primer afferent depolarizasyon dorsal kök potansiyelleri (DRP) kaydı ile ölçülebilir. Burada farelerde DRP in vivo kayıt için bir yöntem ortaya koymaktadır.

Dorsal Kök Potansiyel Kayıt By Farelerde Spinal Presinaptik Engellenme Ölçme<em&gt; In Vivo</em

Mezenterik afferent sinirler, normal homeostaz ve patofizyoloji ile ilgili bilgileri gastrointestinal sistemden beyne doğru iletir. Gastrointestinal afferent sinir aktivitesi, bağlı afferent sinirlere sahip izole bağırsak segmentlerinin bir organ banyosuna monte edilmesi, sinirin izole edilmesi ve bazal ve uyarılmış aktivitenin değerlendirilmesi ile değerlendirilebilir.

Fare jejunal ve Kolon Segmentlerde Mezenterik Afferent Sinir Faaliyet Vitro kaydedilmesi

Aksonal uyarılabilirlik teknikleri patofizyolojisi ve geri dönüşü olmayan dejeneratif olayları öncesinde biyofiziksel değişiklikleri incelemek için güçlü bir araç sağlar. Bu el yazması imzalat sıçan ulnar sinir üzerinde bu tekniklerin kullanımı gösterilmiştir.

Vivo Aksonal uyarılabilirlik test ile sıçan Ulnar sinirin Elektrofizyolojik ölçüm

Sinir iletim ölçümü ateş fare modelleri değerlendirmek için yararlı bir araçtır ama sık sık öyle yalnızca hindlimbs siyatik sinir uyarmak için geçerlidir. Burada, bileşik kas aksiyon potansiyeli (CMAP) vivo brakiyal pleksus tarafından innervated fare forelimb kaslarda ölçmek için bir teknik açıklayın.

Vivo Bileşik kas aksiyon potansiyeli Motor nöron hastalığı, fare modellerinde ön ayakları üzerinden elektrofizyolojik ölçümü

Tek lifli kayıt, merkezi ve periferik sinir sistemleri için geçerli olan etkili bir elektrofizyolojik tekniktir. Bağlı siyatik sinir ile bozulmamış DRG hazırlanması ile birlikte, iletim yetmezliği mekanizması incelenir. Her iki protokol de periferik sinir sisteminin ağrı ile ilişkisini geliştirmek.

İletim Yetmezliği Mekanizmasını İncelemek Için Bağlı Siyatik Sinir ile In Vivo Tek Lifli Kayıt ve Bozulmamış Dorsal Kök Ganglion Kullanımı

Spastisitenin Hoffmann refleksine (H-refleksi) dayanarak ve periferik sinirlerin elektriksel stimülasyonu kullanılarak klinik olarak değerlendirilmesi kanıtlanmış bir yöntemdir. Burada, fare ön pençesinde H-refleks ölçümü için bir terminal ve doğrudan sinir stimülasyonu için bir protokol sağlıyoruz.

Farelerde Terminal H-refleks Ölçümleri

Bu makalede, kemirgen gastroknemius kası üzerinde in vivo (yüzey ve iğne elektrot dizileri kullanılarak) ve ex vivo (dielektrik hücre kullanılarak) elektriksel empedans miyografisinin nasıl yapılacağı açıklanmaktadır. Hem farelerde hem de sıçanlarda tekniği gösterecek ve mevcut modifikasyonları detaylandıracak (yani, obez hayvanlar, yavrular).

Kemirgenlerde In Vivo ve Ex Vivo Elektriksel Empedans Miyografisi Gerçekleştirme

Öğrenin fare siyatik sinirlerinde in vivo elektrofizyolojik ölçümler yapmayı. Bu yöntem nöromusküler hastalıkların hayvan modellerinde sinir iletim özelliklerini değerlendirmek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

Fare Siyatik Sinir Vivo elektrofizyolojik ölçümlerde

Daha fazla video keşfet