Name: Sırasında Neuroblast Sitokinez görselleştirme C. elegans Embriyo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-12T18:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Öğrenin, Caenorhabditis elegans embriyolarında canlı görüntüleme ile nöroblast bölünmesini ve hücre bölünmesini kontrol eden genleri nasıl inceleyeceğinizi. Bu yöntem gelişimsel biyolojide temel mekanizmaları ortaya çıkarır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar bu çalışma Doğa Bilimleri ve Kanada&#39;nın (NSERC) hibe Mühendislik Araştırma Konseyi tarafından desteklenen olduğunu kabul etmek istiyorum.

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li>
<li>Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+Sequencing+Consortium.+Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans%3A+a+platform+for+investigating+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology.</a> Science. 282, 2012-2018 (1998).</li>
<li>Pennisi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worming+secrets+from+the+C.+elegans+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Worming secrets from the C. elegans genome.</a> Science. 282, 1972-1974 (1998).</li>
<li>Tabara, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rde-1+gene%2C+RNA+interference%2C+and+transposon+silencing+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans.</a> Cell. 99, 123-132 (1999).</li>
<li>Chisholm, A. D., Hardin, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChisholm%2C+AD+%22Epidermal+morphogenesis.+WormBook.+The+C.+elegans+Research+Community%22">Epidermal morphogenesis. WormBook. The C. elegans Research Community</a>. , 1-22 (2005).</li>
<li>Zhang, H., Gally, C., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+morphogenesis%3A+how+multiple+cells+cooperate+to+generate+a+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue morphogenesis: how multiple cells cooperate to generate a tissue.</a> Curr. Opin. Cell Biol. 22, 575-582 (2010).</li>
<li>Kiehart, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing%3A+the+power+of+the+purse+string%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Wound healing: the power of the purse string.</a> Curr. Biol. 9, 602-605 (1999).</li>
<li>Ikegami, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semaphorin+and+Eph+receptor+signaling+guide+a+series+of+cell+movements+for+ventral+enclosure+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Semaphorin and Eph receptor signaling guide a series of cell movements for ventral enclosure in C. elegans.</a> Curr. Biol. 22, 1-11 (2012).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., George, S. E., Ding, M., Moseley, S. L., Lynch, A. S., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ephrin+VAB-2%2FEFN-1+functions+in+neuronal+signaling+to+regulate+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22C.+elegans.+Cell%22%5BJournal%5D)">The ephrin VAB-2/EFN-1 functions in neuronal signaling to regulate epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> C. elegans. Cell. 99, 781-790 (1999).</li>
<li>Wang, X., Roy, P. J., Holland, S. J., Zhang, L. W., Culotti, J. G., Pawson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Ephrins+Control+Cell+Organization+in+C.+elegans+Using+Kinase-Dependent+and+-Independent+Functions+of+the+VAB-1+Eph%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Multiple Ephrins Control Cell Organization in C. elegans Using Kinase-Dependent and -Independent Functions of the VAB-1 Eph.</a> Mol. Cell. 4, 903-913 (1999).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., Moseley, S. L., Ding, M., Harrington, R. J., George, S. E., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+divergent+C.+elegans+ephrin+EFN-4+functions+in+embryonic+morphogenesis+in+a+pathway+independent+of+the+VAB-1+Eph+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The divergent C. elegans ephrin EFN-4 functions in embryonic morphogenesis in a pathway independent of the VAB-1 Eph receptor.</a> Development. 129, 5499-5510 (2002).</li>
<li>Ghenea, S., Boudreau, J. R., Lague, N. P., Chin-Sang, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+VAB-1+Eph+receptor+tyrosine+kinase+and+SAX-3%2FRobo+neuronal+receptors+function+together+during+C.+elegans+embryonic+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The VAB-1 Eph receptor tyrosine kinase and SAX-3/Robo neuronal receptors function together during C. elegans embryonic morphogenesis.</a> Development. 132, 3679-3690 (2005).</li>
<li>Bernadskaya, Y. Y., Wallace, A., Nguyen, J., Mohler, W. A., Soto, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UNC-40%2FDCC%2C+SAX-3%2FRobo%2C+and+VAB-1%2FEph+polarize+F-actin+during+embryonic+morphogenesis+by+regulating+the+WAVE%2FSCAR+actin+nucleation+complex%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">UNC-40/DCC, SAX-3/Robo, and VAB-1/Eph polarize F-actin during embryonic morphogenesis by regulating the WAVE/SCAR actin nucleation complex.</a> PLoS Genet. 8, (2012).</li>
<li>Piekny, A. J., Werner, M., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokinesis%3A+welcome+to+the+Rho+zone%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytokinesis: welcome to the Rho zone.</a> Trends Cell Biol. 15, 651-658 (2005).</li>
<li>Piekny, A. J., Maddox, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myriad+roles+of+Anillin+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Sem.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The myriad roles of Anillin during cytokinesis.</a> Sem. Cell Dev. Biol. 21, 881-891 (2010).</li>
<li>Zhao, W. M., Fang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+is+a+substrate+of+anaphase-promoting+complex%2Fcyclosome+%28APC%2FC%29+that+controls+spatial+contractility+of+myosin+during+late+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Anillin is a substrate of anaphase-promoting complex/cyclosome (APC/C) that controls spatial contractility of myosin during late cytokinesis.</a> J. Biol. Chem. 280, 33516-33524 (2005).</li>
<li>Piekny, A. J., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+is+a+scaffold+protein+that+links+RhoA%2C+actin+and+myosin+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Anillin is a scaffold protein that links RhoA, actin and myosin during cytokinesis.</a> Curr. Biol. 18, 30-36 (2008).</li>
<li>Hickson, G. R., O’Farrell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rho-dependent+control+of+anillin+behavior+during+cytokinesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Rho-dependent control of anillin behavior during cytokinesis.</a> J. Cell Biol. 180, 285-294 (2008).</li>
<li>Fraser, A. G., Kamath, R. S., Zipperlen, P., Martinez-Campos, M., Sohrmann, M., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+genomic+analysis+of+C.+elegans+chromosome+I+by+systematic+RNA+interference%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional genomic analysis of C. elegans chromosome I by systematic RNA interference.</a> Nature. 408, 325-330 (2000).</li>
<li>Kamath, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+functional+analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+RNAi%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Systematic functional analysis of the Caenorhabditis elegans genome using RNAi.</a> Nature. 421, 231-237 (2003).</li>
<li>Duerr, J. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDuerr%2C+JS+%22Immunohistochemistry.+WormBook%2C+The+C.+elegans+Research+Community%22">Immunohistochemistry. WormBook, The C. elegans Research Community</a>. , 1-61 (2006).</li>
<li>Maddox, A. S., Habermann, B., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+two+C.+elegans+anillins+in+the+gonad+and+early+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for two C. elegans anillins in the gonad and early embryo.</a> Development. 132, 2837-2848 (2005).</li>
<li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+embryonic+cell+lineage+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 100, 64-119 (1983).</li>
<li>Chin-Sang, I. D., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+of+the+worm%3A+genetics+of+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Form of the worm: genetics of epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> Trends Genet. 16, 544-551 (2000).</li>
<li>Zhang, H., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+through+mechanical+inputs+%E2%80%93+a+coordinated+process%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Signaling through mechanical inputs – a coordinated process.</a> J. Cell Sci. 125, 3039-3049 (2012).</li>
<li>Guenther, C., Garriga, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+distribution+of+the+C.+elegans+HAM-1+protein+in+neuroblasts+enables+daughter+cells+to+adopt+distinct+fates%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Asymmetric distribution of the C. elegans HAM-1 protein in neuroblasts enables daughter cells to adopt distinct fates.</a> Development. 122, 3509-3518 (1996).</li>
<li>Audhya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complex+containing+the+Sm+protein+CAR-1+and+the+RNA+helicase+CGH-1+is+required+for+embryonic+cytokinesis+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A complex containing the Sm protein CAR-1 and the RNA helicase CGH-1 is required for embryonic cytokinesis in Caenorhabditis elegans.</a> J. Cell Biol. 171, 267-279 (2005).</li>
<li>Maddox, A. S., Lewellyn , L., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin+and+the+septins+promote+asymmetric+ingression+of+the+cytokinetic+furrow%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Anillin and the septins promote asymmetric ingression of the cytokinetic furrow.</a> Dev. Cell. 12, 827-835 (2007).</li>
<li>Dorn, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actomyosin+tube+formation+in+polar+body+cytokinesis+requires+Anillin+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Actomyosin tube formation in polar body cytokinesis requires Anillin in C. elegans.</a> Curr. Biol. 20, 2046-2051 (2010).</li>
<li>Calixto, A., Ma, C., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+neuronal+RNAi+in+C.+elegans+using+SID-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1.</a> Nat. Methods. 7, 554-559 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu protokol, orta embriyojenez sırasında görüntü hücre bölünmesi için mikroskopla çeşitli kullanımını tarif eder. Özellikle, bu protokol nasıl epidermal morfogenetiğine kolaylaştırabilir neuroblasts bölünme hücreleri görüntü vurguluyor. Hücre-hücre iletişimi metazoan gelişimi ve C. sırasında doku oluşumu için önemlidir elegans in vivo doku oluşumunu incelemek için mükemmel bir model. Güzel dokuların etkileşimi canlandıran bir olay epitel hücrelerinin bir tabakası içinde embriyo kapsayan, epidermal morf...

Nasıl görüntü hücre bölünmesi için erken C. anlatan protokoller var olsa elegans embriyo, bu protokol nasıl görüntü hücre bölünmesi orta Embriyogenez sırasında bir doku içinde açıklanır. Gelişimi sırasında organizmaların görüntülenmesinde önemli zorluklardan biri fototoksisite onların duyarlılık olmuştur. Ancak, dönen bir disk konfokal mikroskoplar veya süpürüldü alan mikroskoplar artan erişilebilirlik daha yaygın görüntüleme uygulamaları izin verdi. Her iki sistem de organizmalar maruz kaldığı UV sınırlandırarak, katı hal lazerleri ve dağınık ışık kullanır. Ancak, Widefield standları hala yüksek duyarlılık (örn. EMCCD), diyafram denetimi ve ışık kontrolü (örneğin, LED&#39;ler veya ayarlanabilir cıva ampul) ile kameralar ile donatılmış olan, özellikle in vivo görüntüleme için kullanılabilir. Bu protokol, C, gelişmekte olan görüntü hücre bölünmesi için bir konfokal tabanlı bir sistem veya bir widefield sistemi ya nasıl kullanılacağını açıklar elegans &lt;/ Em&gt; embriyolar. Örnek olarak, biz nasıl resim neuroblast hücre bölünmesini açıklayınız. Nöro-blastlar örten epidermal hücrelere, kimyasal ya da mekanik ipuçları sağlayarak epidermal morfolojilerinden kolaylaştırmak ve dokuların oluşumunda arası iletişimin önemi mükemmel bir örnek sağlayabilir. Caenorhabditis elegans şeffaflığıyla ve basit doku organizasyonu 1 nedeniyle mikroskopi tabanlı çalışmalar için ideal bir model organizmadır. Ayrıca, C. elegans genetik yöntemler ve RNAi için uygun olan, ve genlerin çoğu insan homologlarını beri, bu doku oluşumu için 2-5 korunmuş mekanizmalarını tanımlamak için kullanılabilir. C. In Embriyo&gt; 300 hücreleri olduğunda elegans, epidermis oluşumu, orta embriyojenez sırasında oluşur. Epidermal morfogenez embriyo büzülür epidermal hücrelerin bir tabaka içine ve embr dönüştürmek için uzanan bir süre boyunca birkaç büyük aşamadan oluşurBir solucan 6&#39;nın uzun oval bir şekil formundan yo. Ventral epidermal hücreler embriyonun ventral yüzeyi (Şekil 1) kapsayacak şekilde ventral orta hat doğru geçiş yaparken, ventral muhafaza, bu morfogenetik olaylardan birini açıklamaktadır. İlk olarak, anterior bulunan öncü hücrelerin iki çift kontralateral komşularıyla 6 ile ventral onlar uygun orta hat ve sigorta doğru göç. Bu, ventral cep 6-7 oluşturma şekiller gibi kama oluşturan merkezi bir arka cep hücrelerinin taşınması takip eder. Cebi kapatır mekanizması iyi anlaşılmamıştır. Bir olasılık, bir supracellular aktin miyozin kasılma yapısı 8 yara iyileştirici benzer, moda gibi bir çanta dize birlikte cep hücreleri bağlar olduğunu. İlginç bir şekilde, cep hücrelerin bazı göç epidermi altında bulunan temel neuroblasts 9 (nöronal ön-maddeleri arasında, belirli alt-aracılık eders, Şekil 1 B). Önceki çalışmalar nöro. VAB-1 (efrin reseptörü) ve VAB-2 (efrin ligand) yüksek neuroblasts olarak ifade edilmiştir ve birbirinden anterior ve posterior neuroblasts sıralama kolaylaştırmak edilir ventral epidermal hücre göçü ve ventral muhafaza düzenleyen gösterdi, ve VAB-1 veya VAB-2 neden ventral muhafaza mutasyonlar 10-13 fenotip. Bununla birlikte, promotör kurtarma deneyler VAB-1, aynı zamanda neuroblasts salgıladığı diğer rehberlik ipuçlarının için üstte ventral epidermal hücreleri ve reseptör olarak gerekli olduğunu göstermiştir ventral epidermal hücrelerinde 9 olarak ifade edilmiştir. Bu reseptörlerin herhangi mutasyonlar ventral muhafaza fenotiplerini neden olsa da kusurları nedeniyle neuroblast konumlandırma veya bağlı rehberlik yanıt ventral epidermal hücrelerin başarısızlık 14 istekalar Sorunlara ortaya çıkması durumunda, bu açık değildir. Nöroblastlar wi bölümü değiştirilmesirehberlik ipuçları salgılama yeteneğini etkileyen thout neuroblasts rolü ve epidermal morfolojilerinden sırasında mekanik girdi sağlama yeteneği ışık tutabilir. Son zamanlarda, bir hücre bölünmesi geni, ani-1 (anillin) yüksek neuroblasts (Şekil 2A) olarak ifade edilmiştir ve tükenme neuroblast bölme kusurlarına neden olduğu bulunmuştur. İlginçtir, bu embriyolar ventral muhafaza fenotipleri (Fotopoulos, Wernike ve Piekny, yayınlanmamış gözlemler) gösterilecek. Anillin hücre bölünmesi için gerekli olan ve özellikle de, bir ana hücre fiziksel olarak iki yavru hücrelere bölündüğü işlemi tarif sitokinez, içindir. Sitokinler sıkıca düzgün kardeş kromatid ayrılması ile birlikte olduğundan emin olmak için mekan ve zaman olarak kontrol edilmesi gereken bir aktomizin kontraktil halka oluşumu ile tahrik edilir. Metazoan sitokinez ana düzenleyicisi RhoA (C. elegans RHO-1), bir küçük bir GTPaz olduğunuonun GTP-bağlı formda yönerge. GEF Ect2/ECT-2 RhoA-GTP kontraktil halka oluşturur ve girişini 15 aracılık eden alt baş efektörlerinin ile etkileşime sonra, RhoA etkinleştirir. Anillin C-terminalinde ile ve N-terminal ile aktin ve miyozin için RhoA bağlanan bir çok alan bir proteindir. Anillin memeli veya Drosophila S2 hücreleri 16 kontraktil halkanın konumunu stabilize etmek için gereklidir. Anillin tükenmesi yanal salınımlar geçmesi kasılma yüzük olur, ve sitokinez sonunda çok çekirdekli hücreler 17-19 oluşturulması başarısız. İlginç bir şekilde, her ne kadar C. elegans ani-1 it sitokinez için gerekli değildir, erken embriyo aktomizin kasılmasını koordine eder. Yukarıda açıklandığı gibi Ancak, ani-1 orta Embriyogenesis (Fotopoulos, Wernike ve Piekny, yayınlanmamış gözlemler) sırasında neuroblast sitokinez için gereklidir. Sitokinez başarısızlık neuroblasts sayısını ve konumunu değiştirecek ve loc etkileyebilecekKimyasal rehberlik ipuçlarının tirme ya da doku mekanik özelliklerini değiştirebilir. Her iki model de ventral muhafaza için neuroblasts otonom olmayan rolünü, ve embriyonik gelişim sırasında doku doku iletişimin önemini vurgulamak. Bu deneysel protokol anlatıyor görüntü hücre bölünmesi sırasında C. elegans floresan mikroskopi kullanılarak orta embriyogenezis. Hücre bölünmesi mekanizmalar üzerinde çalışmaya Deneylerin çoğu hücre sınırlı sayıda (örneğin C. tek hücreli embriyo, Xenopus veya echinoderm elegans ile kültür tabaklarında (örn.. HeLa veya S2 hücreleri) tek hücre ya da erken embriyolar gerçekleştirilmiştir embriyo). Ancak, bu bölünme uçağın zamanlaması ve yerleştirme etkileyebilecek dış ipuçları olduğu gibi, aynı zamanda dokuların içinde hücre bölünmesi çalışma için önemlidir. Ayrıca, hücreler komşu doku gelişimini etkilemek için kimyasal veya mekanik ipuçları verebilirs, ve hücreler arası iletişim gelişimi sırasında meydana dokuların nasıl yardımcı anlamak önemlidir.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BioShop Kanada A.Ş.</td><td>#AGR001.1</td><td>C. elegans NGM ve RNAi plakaları yapmak için</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Bio Basic Inc.</td><td>#9002-18-0</td><td>Bakteri yapmak için LB agar plakaları</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#AGA001.500</td><td></td></tr><tr><td>Anti-fare Alexa Fluor 488 antikor</td><td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td><td>#A11029</td><td></td></tr><tr><td>Anti-fare anti-GFP antikoru</td><td>Roche Uygulamalı Bilimler</td> <td>#11814460001</td><td></td></tr><tr><td>Anti-tavşan Alexa Fluor 568 antikor</td><td>Yaşam Teknolojileri Şirketi (Invitrogen)</td><td>#A11011</td><td></td></tr><tr><td>Ampisilin</td><td>BioShop Kanada A.Ş.</td><td>#AMP201.5</td><td>Tozu 4 ° C'de saklayın; C ve -20 ° C'de çözünmüş ampisilin; C</td></tr><tr><td>Baktopeton&nbsp; (pepton-A)</td><td>Biyo Temel A.Ş.</td><td></td><td></td>#G213</tr><tr><td>CaCl2 (kalsiyum klorür)</td><td>BioShop Turkey Inc.</td><td>#C302.1</td><td></td></tr><tr><td>Kolesterol BioShop</td><td>Kanada A.Ş.</td><td>#CHL380.25</td><td>Etanol DAPI içinde çözün</td></tr><tr><td>ve nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#D9542</td><td>Nükleik asitleri (DNA) boyamak için</td></tr> <tr><td>kullanınGlycerol</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#GLY001.1</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (izopropiltio-&beta;-galaktozit)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td># 367-93-1</td><td>Tozu ve çözünmüş IPTG'yi -20 ° C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>KH2PO4 (potasyum fosfat, monobazik)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#PPM666.1</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4 (potasyum fosfat, dibazik)</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>#PPD303.1</td><td></td></tr><tr><td>L4440&nbsp; (besleme vektörü)</td><td>Addgene</td> <td># 1654</td><td>-80 & °C'de gliserol stoğu olarak tutun; C</td></tr><tr><td>MgSO<alt>4</alt>&nbsp; &nbsp; (magnezyum sülfat)</td><td>BioShop Kanada A.Ş.</td><td>#MAG511.500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (sodyum klorür)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td># 7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4 (sodyum fosfat, dibazik)</td><td>Bio Basic Inc.</td><td># 7558-79-4</td><td></td></tr><tr><td>Normal Eşek Serumu (NDS)</td> <td>Wisent Bioproducts</td> <td># 035-110</td><td></td></tr><tr><td>n-Propil-3,4,5-trihidroksibenzoat (propil gallat)</td> <td>Alfa Aesar</td><td>#A10877</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-lizin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#P8920</td><td>En iyi sonuçlar için kaplama mikroskobu üç kez kayar&nbsp;</td></tr><tr><td>Streptomisin</td><td>BioShop Kanada A.Ş.</td><td>#STP101.50</td><td>Tozu 4 ° C'de saklayın; C ve -20 ° C'de çözünmüş streptomisin; C</td></tr><tr><td>Tetrasiklin BioShop</td><td>Kanada A.Ş.</td><td>#TET701.10</td><td>Tozu 4 ° C'de saklayın; C ve -20 ° C'de çözünmüş tetrasiklin; C</td></tr><tr><td>Ara-20</td><td>Bio Temel A.Ş.</td><td>CAS # 9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>Tripton BioShop</td><td>Kanada Inc.</td><td>#TRP402.500</td><td></td></tr><tr><td>Maya Özü Bio</td><td>Basic Inc.</td><td>#8013-01-2</td><td></td></tr></tbody></table>

sırasında neuroblast sitokinez görselleştirme<em&gt; c. elegans</em&gt; embriyo

Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

Bu protokol, Caenorhabditis elegans, gelişmekte olan embriyo bölünen hücreleri görüntüye floresan mikroskobu kullanımını tarif eder. Özellikle, bu protokol epidermal hücrelerin altında bulunan ve epidermal morfogenezisi önemli olabilir neuroblasts, bölünmesi nasıl görüntü üzerinde duruluyor. Doku oluşumu metazoan gelişimi için çok önemlidir ve komşu dokuların dış işaretlere dayanmaktadır. C. elegans mikroskobu ile çalışmak için kendi dokuları kolay hale nedeniyle şeffaflık ve basit organizasyon in vivo doku morfogenetiğine incelemek için mükemmel bir model organizmadır. Ventral muhafaza embriyonun ventral yüzey epitel hücrelerinin tek bir tabaka ile kaplanmıştır süreçtir. Bu olay örten epitel hücrelerinin göçüne aracılık kimyasal rehberlik ipuçları sağlamak temel neuroblasts, kolaylaştırılabilir düşünülmektedir. Bununla birlikte, son derece nöro-proliferatif ve aynı zamanda hareket edebilirventral epidermal hücreler için mekanik bir alt-tabaka olarak. Bu deney protokolü kullanılarak yapılan çalışmalar, doku oluşumu sırasında arası iletişimin önemini ortaya çıkarmak olabilir, ve gelişmekte olan dokular içinde hücre bölünmesi ile ilgili genlerin rollerini ortaya çıkarmak için kullanılabilir.

Bu deneysel protokol nasıl C. görüntü hücre bölünmesi açıklanmaktadır elegans ortalarında Embriyogenez sırasında embriyolar. Özellikle, epidermal morfolojilerinden kolaylaştırabilir ki ne resim neuroblasts için tarif etmektedir. Epidermal morfogenez nedeniyle epidermal hücre şekli değişiklikleri, göç ve yapışma, aynı zamanda altında yatan neuroblasts (Şekil 1 B) kimyasal ya da mekanik ipuçları dayanır bir arada oluşur. Nöro-blastlar göç 10,14,25 düzenleyen ventral epidermal ...

Bu protokol, görüntüye Caenorhabditis elegans embriyolarında bir doku içinde bölünen hücreleri açıklamaktadır. Birkaç protokoller embriyonun erken görüntü hücre bölünmesi için, bu protokol nasıl mid geç embriyonik dönemde gelişmekte olan bir doku içinde hücre bölünmesi görüntü açıklar nasıl tarif ederken.

Sırasında Neuroblast Sitokinez görselleştirme<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriyo

This protocol describes the use of fluorescence microscopy to image dividing cells within developing Caenorhabditis elegans embryos. In particular, this ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, C. elegans embriyogenezi sırasında gelişmekte olan bir doku içindeki bölünen hücreleri gözlemlemektir. Hücre bölünmesini kontrol eden genleri incelemek için bu işlem, ilgilenilen hücreleri işaretleyen transgenik belirteçleri stabil olarak eksprese eden bir C. elegans suşu oluşturularak veya elde edilerek gerçekleştirilir. İkinci bir adım olarak, L4 larvalarına 24 ila 48 saat boyunca dsRNA beslemesi yapılarak ilgili bir gen seçici olarak susturulur.RNAI embriyoları grafik hermafroditlerden toplanır ve canlı görüntüleme için bir aros pedine aktarılır. Ardından, hücre bölünmesi fenotiplerini görselleştirmek için geniş alan veya konfokal mikroskobi kullanılarak embriyolar görüntülenir. Sonuçlar, deniz kestanesinin embriyogenezi sırasında nöroblastların nasıl bölündüğünü ve bölünmeleri için gerekli olan genlerin rolünü gösterecektir.Bu yöntem, gelişimsel ve hücre biyolojisi alanındaki temel soruların aydınlatılmasına yardımcı olabilir. Örneğin; doku gelişimi sırasında mitozun düzenlenmesinde, hücreler arası iletişimde, hücre göçünde veya hücre polaritesinde rol oynayan genler ve mekanizmalar bu yöntemle ortaya çıkarılabilir. Kontrol veya RNAI plaklarında 2

visualizing-neuroblast-cytokinesis-during-c-elegans-embryogenesis

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz sahnelenen hazırlamak için prosedürü...

Tüm montaj Embriyonik Sinir Sistemi Görselleştirme Drosophila Embriyolar

Görüntüleme C. elegans Embriyolar Epifluorescent Mikroskop ve Açık Kaynak Yazılım

Bu makale, nematod embriyogenezisin erken olayların görselleştirme için kullanılan bir...

Erken Embriyo Oluşumu Zaman atlamalı Mikroskopi Caenorhabditis elegans

Kaynak: Williams, A. L.,  et al. Gelişimi Gerçek Zamanlı Olarak Görselleştirmek için Çoklu Foton Hızlandırılmış Görüntüleme: Zebra Balığı Embriyolarında Göç Eden Nöral Krest Hücrelerinin Görselleştirilmesi. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, bir zebra balığı embriyosundaki nöral krest hücrelerinin göçünü gerçek zamanlı olarak yüksek çözünürlükte görselleştirmek için çok fotonlu hızlandırılmış bir görüntüleme protokolünü göstermektedir.

Çoklu Foton Zaman Atlamalı Görüntüleme Kullanarak Bir Zebra Balığı Embriyosunda Nöral Krest Hücre Göçünü Görselleştirme

Kaynak: Jeong, S. Drosophila'da embriyonik motor nöronların aksonal projeksiyon modelinin görselleştirilmesi. J. Vis. Uzm.  (2017)Bu video, Drosophila embriyolarında aksonal projeksiyonların görselleştirilmesini göstermektedir. Motor nöronların immünoetiketlenmesi, nöronal yapıları ortaya çıkarmak için hassas diseksiyon ve diferansiyel girişim kontrast mikroskobu toplu olarak ayrıntılı nöronal mimariyi ortaya çıkararak aksonal projeksiyon paternlerini vurgular.

Drosophila'da Embriyonik Motor Nöronların Aksonal Projeksiyon Modellerinin Görselleştirilmesi

Nöral progenitör mitoz nöron kritik bir parametredir. Nöral progenitör mitoz anlayışımızın çok sabit doku analizine dayanmaktadır. Embriyonik beyin dilimleri Canlı görüntüleme, kontrollü bir ortamda, yüksek zamansal ve mekansal çözünürlük ile mitoz değerlendirmek için çok yönlü bir tekniktir.

Gelişmekte Fare Embriyonik Cortex mitoz Canlı Görüntüleme

Burada C. elegans'ta gelişimsel süreçlerin nasıl izleneceği ve nicelleştirileceği gösterilmektedir. Sunulan yöntemler, kolayca uygulanabilen açık kaynaklı araçlara dayanmaktadır. 3B hücre şekli modellerinin nasıl yeniden yapılandırılacağı, hücre altı yapıların manuel olarak nasıl izleneceği ve kortikal kasılma akışının nasıl analiz edileceği gösterilmiştir.

Gelişim Süreçleri İzleme ve nicel<em&gt; C. elegans</em&gt; Açık kaynak Araçlarını Kullanma

Bu çalışma, geç evre-16 Drosophila melanogaster embriyolarının motor nöron projeksiyonlarını görselleştirmek için standart bir immünohistokimya yöntemini ayrıntılarıyla anlatıyor . FasII antikoru ile lekelenmiş sabit embriyoların filleted hazırlığı, motor akson yol bulma ve sinirsel gelişim sırasında hedef tanıma için gerekli genlerin karakterize edilmesi için güçlü bir araç sağlar.

Embriyonik Motor Nöronlarının Aksonal Projeksiyon Paterninin Görselleştirilmesi<em&gt; Drosophila</em

Burada, nörogelişme sırasında tek hücreli dinamikleri anlamak için C. elegans embriyoları yaşayan yüksek çözünürlüklü mikroskobik, Hesaplamalı araçlar ve tek hücreli etiketleme kullanarak bir Kombinatoryal yaklaşım sunuyoruz.

İzotropik hafif levha mikroskobu ve otomatik hücre Lineage analizleri kataloğa Caenorhabditis elegans Embriyogenesis Subcellular çözünürlük ile

Bu çalışma, embriyogenezin 80-100 C.'de eşzamanlı 3Boyutlu hızlandırılmış görüntülemesine olanak tanıyan yarı-yüksek iş letme protokolünü açıklamaktadır. Ayrıca, veri çözümlemesi kolaylaştırmak için görüntü işleme ve görselleştirme araçları dahildir. Bu yöntemlerin özel muhabir suşları ile birleşimi embriyogenezin ayrıntılı olarak izlenmesini sağlar.

C. elegans Embriyonik Gelişimi Analiz Etmek Için Yarı-yüksek-throughput Görüntüleme Yöntemi ve Veri Görselleştirme Araç Seti

Burada, model nematod C. elegans'ın germ hattında eksprese edilen genetik olarak kodlanmış bir kalsiyum raportörü kullanarak döllenme ve erken embriyogenez sırasında kalsiyumu görselleştirmek için protokoller ve araçlar sunuyoruz.

C. elegans'ta Döllenme ve Erken Gelişim Sırasında Kalsiyum Geçişlerinin İn Vivo Olarak Görüntülenmesi

Öğrenin, Caenorhabditis elegans embriyolarında canlı görüntüleme ile nöroblast bölünmesini ve hücre bölünmesini kontrol eden genleri nasıl inceleyeceğinizi. Bu yöntem gelişimsel biyolojide temel mekanizmaları ortaya çıkarır.

Sırasında Neuroblast Sitokinez görselleştirme

Daha fazla video keşfet