Küçük ve Büyük Kemirgen Modelleri ile Barnes Labirent Test Stratejileri

Bu prosedürün genel amacı, kuru arazi Barnes Labirenti ile küçük kemirgenlerde ve sıçanlarda uzamsal öğrenme ve hafıza yeteneklerini incelemektir. Bu, önce deney hayvanlarının test odasına ve Barnes labirentine alıştırılmasıyla gerçekleştirilir. Bir sonraki adım, hayvanı labirentin ortasına yerleştirmek ve kaçış kafesini bulmak için gecikmesini izlemeye başlamaktır, hayvan kaçış kafesine girdiğinde veya 300 saniye sonra izleme durdurulur.

Sonuçlar, uzamsal öğrenme ve bellekteki aksaklıkları, artan gecikme süreleri, artan hata oranları ve arama stratejilerinin değiştirilememesi olarak gösterebilir. Bu tekniğin su labirenti gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajları, biraz daha az stresli, gerçekleştirmesi daha kolay ve karasal kemirgenler için ekolojik olarak daha uygun olmasıdır. Bu yöntem, uzamsal öğrenmenin ve hafıza bozulmalarının toksikolojik etkileri hakkında fikir verebilir.

Nörodejeneratif bozukluklar, yaşlanma ve konjenital bilişsel kusurlar gibi diğer alanlara da uygulanabilir. Barnes labirent tasarımları değişiklik gösterir, ancak genellikle her birinde 12 veya 20 potansiyel kaçış deliği bulunur ve bunlardan yalnızca biri eve veya bir kaçış kafesine çıkar. Kaçış kafesi, labirentin üst kısmındaki kaçış deliğinin hemen altına yerleştirilebilir veya labirentin çevreleyen duvarına yerleştirilebilir.

İpuçlarının boyutu, labirent içindeki yaklaşık 16,5 santimetre, yükseklik veya genişlikten, labirentin dışındaki oda duvarının zemininden tavanına yerleştirilen 21,6 santimetre genişliğindeki yatay bir çizgiye kadar değişebilir. Tıkaçlar veya sahte dipler, hayvanın labirentten düşmesini önlemek için kaçış olmayan delikleri kapatmalıdır. Test odasının boyutu değişebilir, ancak labirent için bolca alana sahip olmalıdır.

Hayvan kafesleri için bir yer, video kurulumlu bir bilgisayar için oda ve deneycinin labirentten en az bir buçuk metre uzakta oturması için bir yer. Hayvanların tek tip çevresel koşullara maruz kalması, bir hayvanın performansını farklı şekilde etkileyebilecek değişken gürültüleri veya dış ipuçlarını en aza indirmesi önemlidir. Kaçış kafesi yerinin atanması, tedavi grupları arasında ve denemeler arasında cinsiyet arasında dengelenmelidir.

Labirent, kaçış kutusunda olduğu gibi koku ipuçlarını gidermek için etanol ile silinerek temizlenir. Bu video, büyük olasılıkla yazılıma özel oldukları için belirli izleme yazılımı işlemleriyle ilgili ayrıntıları içermez. Bununla birlikte, sürekli olarak kullanılan test zamanında böyle bir sistem arzu edilir.

Labirentin üzerindeki ışıkları yakarak ve yerleştirerek odayı kurun. İlk denemeden 30 dakika önce laboratuvarın dışına tabela girmeyin. Alışmalarına yardımcı olmak için fareleri normal ev kafeslerinde test odasına getirin.

İzleme programını ayarlayın. Şimdi ilk fareyi yavaşça ev kafesinden çıkarın ve uzun kaplı plastik kutuya yerleştirin. Hayvanı bir dakika boyunca kaçış kafesine alıştırın.

Tüpü tıkayan kağıdın bu kaçış deliğinden çıkarıldığından ve diğer tüm deliklerin tıkalı olduğundan emin olun. Fareyi labirentin ortasına yerleştirin ve fareyi plastik bir kutu ile örtün. Hayvanı labirentin ortasına yerleştirdikten sonra, sessizce bilgisayar alanına gidin ve kaydı hızlı bir şekilde başlatın.

Hayvanın performansını bilgisayarda izlerken, delik numarasını, deneme numarasını, arama stratejisini ve yapılan hataların sayısını kaydedin. Hata, yanlış bir deliği koklamak olarak tanımlanır. Arama stratejisinin değerlendirilmesi, kaydedilen izleme kalıpları ile canlı olarak veya daha sonra yapılabilir.

Doğrudan bir strateji, kemirgenin üç veya daha az hatayla doğrudan kaçış kafesine girdiğini gösterir. Seri bir model, kaçış kafesi bulunana kadar labirent çevresi boyunca seyahat etmeyi içerir. Ve son olarak, desen rastgele olabilir, yani çeşitli delikleri kontrol etmek için labirentin merkezden birden çok kez geçtiği anlamına gelir.

Hayvanın kaçış kafesinin içinde dört pençesi de olduğunda izleme programını durdurun. Hayvan beş dakika içinde labirentten kaçamazsa, kaydı durdurun. Ardından hayvanı nazikçe kaçış deliğine itin.

Dürtülen hayvanları ev kafeslerine geri göndermeden önce tam olarak iki dakika kaçış kafesinde kalmalarına izin verin. Şimdi labirentin üstüne %70 etanol püskürtün ve kurulayın. Daha sonra hayvanı odanın dışındaki alana geri koyun ve 30 dakika sonra tekrar test edin.

Her fare günde iki kez test edilir. Labirentte bir sonraki fareyi başlatmadan önce, daha önce doğru olan kaçış deliğini tıkayın ve bunun için belirlenen kaçış deliğinden deliği tıkayan kağıt tapayı çıkarın. Bir sonraki konu nesnesi kurulumu, labirenti tepe ışıklarının altında ortalamayı içerir, bu da kaçış olmayan delikleri tıkayan ve hayvanın düşmesini önleyen sahte tabanların labirentte güvenli bir şekilde olduğundan ve kaçış kafesinin belirlenen konumda olduğundan emin olmak için açık olmalıdır.

İlk konu için, Barnes labirentinin tepesi, hayvanı motive etmek için yeterince caydırıcı olmalıdır. Kaçış kafesini bulmak için, labirentin tepesinin hemen üzerindeki yoğun parlak aydınlatmanın bu amaca çok iyi hizmet ettiğini belirledik. Ayrıca bilgisayarın ve kameranın hazır olduğundan ve bir kronometrenin mevcut olduğundan emin olun.

Şimdi arka plan seslerini azaltmak için beyaz gürültüyü açın. Sandalye labirentten yaklaşık bir metre uzakta olmalı ve test boyunca orada kalmalıdır. İki dakika geri saymak için bir zamanlayıcı hazırlayın, ancak odanın dışında herhangi bir ses çıkarmamak için bir zamanlayıcı hazırlayın.

Bir girme işareti yerleştirin. Not almak için bir test sayfası da hazır bulundurulmalıdır. İlk sıçan test edilmeden 30 ila 60 dakika önce, hayvanları ev kafeslerinde alışkanlık kazanmaları için test odasına getirin.

Şimdi, farenin Mayıs Merkezi'nde denemeye başlaması için tüpün üzerine bir tüp yerleştirin, kullanılırsa videoyu kolayca tanımlamak için hayvanın kimliğini içeren bir başlık kartı yerleştirin. Hayvan kimlik sayfasını yakalamak için birkaç saniye kaydedin. Hayvanı evinden çıkarın ve nazikçe kaçış kafesine baş üstü yerleştirin.

Ardından kaçış kafesini sahte bir tabanla örtün ve iki dakikalık zamanlayıcıyı başlatın. İki dakika sonra, hayvanı kaçış kafesinden nazikçe çıkarın ve tüpün ortasına yerleştirin. Kimlik sayfasını tüpün üstüne geri koyun ve tertibatı yavaşça kaldırarak fareyi serbest bırakın.

Hemen kronometreyi başlatın ve test sayfasındaki test cihazı koltuğuna oturun. Deneme için günün saatini kaydedin. Sıçan kaçış kafesini bulmak için beş dakikaya kadar sürerken başlayın ve sabırla bekleyin.

Kronometre süresini kaydedin. Sıçan kaçış kafesini bulduğunda, hayvanı kaçış kafesinden çıkarın ve tekrar ev kafesine yerleştirin. Sıçan kaçış kafesini beş dakika içinde bulamazsa, bunu not edin, ardından yavaşça oraya yönlendirin.

Kafeste 15 saniye kaldıktan sonra, fareyi ev kafesine geri koyun. Sıçan labirenti zihinsel olarak terk ederse, zamanı not edin ve hayvanı hızlıca yakalayın. 10 saniye içinde yakalanırsa, labirentin merkezine geri koyun ve denemeye devam edin.

Aksi takdirde, denemeyi iptal edin ve analizden çıkarın. Her iki durumda da, düşme zamanını kaydedin veya denemeden sonra test kağıdına atlayın, kaydı durdurun ve denemeler arasında denemeyle ilgili yorumları not edin. Labirentin üstündeki idrar veya dışkıyı temizleyin.

% 70 etanol püskürtün ve iyice kurulayın. Kaçış kafesini de %70 etanol ile temizleyin. Havada kurumasına izin verin ve bir sonraki deneme için ikinci bir kaçış kafesi kullanın.

Her zaman alternatif kaçış kafesleri. Şimdi işlemi tekrarlayın. Bir sonraki hayvanı test etmek.

Her hayvanı günde sadece bir kez test edin. Sonraki günlerde, labirenti tek bir değişiklikle çalıştırın. Fareleri doğrudan ev kafesinden orta tüpe yerleştirin, kaçış kafesi alışkanlığını atlayın, nokta.

Sevgili fareler, Çok eşli bir tür, gelişimsel olarak fitoöstrojen içermeyen bir diyette çevresel olarak ilgili BPA dozlarına veya pozitif bir kontrol ile aynı diyette östrojene veya negatif bir kontrol olarak fitoöstrojen içermeyen bir diyete maruz bırakıldı, fareler Barnes labirenti kullanılarak değerlendirildi. En yüksek iki BPA dozu, mekansal navigasyon yeteneğinin bozulmasına yol açtı, ancak test edilen en düşük BPA dozu değil, mekansal öğrenmede eşdeğer eksiklikler gösterdi ve deneme süresi boyunca doğrudan arama stratejisine geçememe, erkek. Sevgili Fareler, daha yüksek dozlarda BPA'ya maruz kalmak, düşük doz BPA erkeklerine ve negatif kontrol erkeklerine göre uzun süreli gecikme gösterdi.

Östrojen pozitif kontroller de aynı derecede kötü performans gösterdi, artan gecikme süresi ile birlikte artan bir hata oranı da geldi. Erkek farelerin aksine, EE iki ve orta BPA dozuna maruz kalan dişi fareler, ancak diğer BPA dozlarına maruz kalmayan, erkeksi uzamsal öğrenme ve hafıza kalıpları sergiledi. Bu, doğrudan arama stratejisinin anormal kullanımıyla gösterilir ve mantıksal olarak bu, gecikme süresinin azalmasıyla yansıtılmıştır.

Çok eşli geyik farelerinin aksine, ilgili kuzenleri, tek eşli erkek Kaliforniya fareleri de erken BPA ve EE iki maruziyeti ile dozlandı ve labirentte test edildi. Arama stratejileri etkilenmedi. Erkek Kaliforniya fareleri, bu türdeki erkek geyik fareleri gibi doğrudan arama stratejisini kullanmadı, BPA ve EE iki, kontrollere göre arama hatalarını etkilemedi.

Kontrollü geyik fareleri ile karşılaştırıldığında, kontrol Kaliforniya farelerinin art arda yedi test günü boyunca yapılan hata sayısını azaltmadığına dikkat edin. Gecikme de etkilenmedi. Geyik fareleri ve Kaliforniya fareleri arasındaki mekansal navigasyon bozulmasında gözlenen fark, muhtemelen BPA'ya gelişimsel maruz kalmaya karşı davranışsal savunmasızlıktaki tür farklılıklarından kaynaklanmaktadır.

Ne olursa olsun, gelişimsel dozlamanın, test rejimi altında Kaliforniya farelerinin bu davranışlarını ölçülebilir bir şekilde değiştirmediği açıktır. Bu prosedürü takiben, hayvanların değişmiş anksiyete veya aktivite seviyeleri veya diğer bilişsel bozukluklar sergileyip sergilemediği gibi ek soruları yanıtlamak için anksiyete veya aktivite değerlendirmeleri gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir. Özellikle, geliştirilmesinden sonra, bu teknik, çeşitli kemirgen ve kemirgen olmayan türlerde uzay navigasyonunu keşfetmek için biliş alanındaki araştırmaların yolunu açtı.