Of kapsül Serotipleme

Bu prosedürün genel amacı, sönümlenme reaksiyonu (quelling reaction) kullanarak streptococcus pneumoniae veya pnömokokların kapsüler stereotiplendirmesini gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle kalp infüzyon besiyerine taze, gece boyu büyütülmüş saf pnömokok kültürü inoküle edilerek gerçekleştirilir. İkinci adımda, bir damla inokülum bir cam mikroskop lamına aktarılır.

Ardından, lama eşit hacimde antis serum eklenir. Son adımda, her iki damla karıştırılır ve süspansiyonun üzerine bir lamel yerleştirilir. Nihayetinde, pozitif veya negatif Quell reaksiyonunu gözlemlemek için süspansiyon faz kontrast mikroskobunda incelenebilir.

Bu yöntem, pnömokok syp için altın standart yöntemi göstermektedir. Yöntem basit, uygulaması kolay ve yorumlanması rahattır. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi önemlidir; çünkü bu tekniğe yeni başlayan kişiler, qualm testini gerçekleştirmek için uygun hücre yoğunluğunun ne olduğunu belirlemekte zorlanabilirler.

Katı, seçici olmayan at kanlı agar plaklarında üretilmiş taze, gece boyu büyütülmüş saf pnömokok kültüründen küçük bir örnek almak için steril tek kullanımlık bir mikrolitre öze kullanarak başlayın; pnömokokları 100 µL kalp infüzyon suyuna inoküle edin. Süspansiyon gözle görülür şekilde hafif bulanık görünmelidir; hücre çözeltisini emülsifiye etmek için tüpü nazikçe çalkalayın. İnokulumdan bir damlayı cam mikroskop lamına aktarmak için yeni bir mikrolitre öze kullanın.

Ardından lam üzerine, süspansiyonun üzerine küçük dairesel bir lameli yerleştirin ve süspansiyonun yoğunluğunu faz kontrast mikroskobunda 400x büyütmede kontrol edin. İnokülum çok yoğunsa hücre süspansiyonunu daha fazla besiyeri ile seyreltin ve hafifçe tekrar karıştırın; eğer inokülum çok seyrekse, örneğin 50'den az hücre görünüyorsa, hücre süspansiyonuna daha fazla bakteri ekleyin ve tekrar hafifçe karıştırın.

Deneyimle, hücre süspansiyonunun yoğunluğu, süspansiyon çalkalanıp ışığa tutulduğunda sadece gözle görülür şekilde bulanık görünmesiyle değerlendirilebilir. Mikroskop altında incelendiğinde, hücre çözeltisinin yaklaşık olarak bu yoğunlukta olması gerekir.

Optimal bakteri hücresi dilüsyonu sağlandığında, inokülumun yaklaşık bir mikrolitresini cam mikroskop lamı üzerine aktarın. Yeni bir öze kullanarak, oda sıcaklığında eşit hacimde ekleme yapın.

Antiserumu lama damlatın ve her iki damlayı iyice karıştırın. Örtü camını, pensle damlaya temas etmemeye dikkat ederek, hemen süspansiyonun üzerine yerleştirin. Ardından, süspansiyonu az önce gösterildiği gibi faz kontrast mikroskobunda inceleyin.

Pnömokok hücrelerinde çok az şişme gözlemlendiğinde veya hiç şişme gözlemlenmediğinde negatif Quellung reaksiyonu izlenir. Bu durum, antisera eklenmemiş bir pnömokok hücre süspansiyonu olan negatif kontrole benzer. Tip spesifik antikorun pnömokok kapsülüne bağlanmasıyla kırılma indeksinde bir değişikliğe yol açtığı durumlar ise pozitif Quellung reaksiyonu olarak gerçekleşir.

Faz kontrastında incelendiğinde, bakteriler şişmiş ve daha görünür görünür. Bu prosedürü uygularken aslında canlı mikroorganizmalarla çalıştığınızı unutmayın. Bu nedenle, iyi laboratuvar uygulamalarına uymaya, koruyucu kıyafetler ve uygun laboratuvar ekipmanları kullanmaya dikkat etmeli ve işlemin sonunda tüm ekipman ile reaktifleri güvenli bir şekilde bertaraf etmelisiniz.

Bu teknik bir kez kavrandıktan sonra, uygun şekilde uygulandığında yaklaşık 10 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü izledikten sonra, Quellung reaksiyonu kullanılarak pneumococcus serotiplendirmesinin nasıl yapılacağı konusunda iyi bir fikre sahip olmalısınız. Bu teknik, hem nazofaringeal taşıyıcılıkta hem de invaziv hastalıklarda pnömokokkal epidemiyolojiyi anlamak açısından önemlidir.