Of kapsül Serotipleme Streptococcus pneumoniae Kapsül şişme deneyi kullanarak Reaksiyon

Bu prosedürün genel amacı, streptococcus pneumoniae veya pnömokokların kapsüler stereotiplemesini bastırma reaksiyonu kullanarak gerçekleştirmektir. Bu, ilk olarak kalp infüzyon suyunun taze, gece boyunca saf bir pnömokok kültürü ile aşılanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, bir damla inokülum bir cam mikroskop lamına aktarılır.

Daha sonra antis serum lam üzerine eşit hacimde eklenir. Son adımda, her iki damla karıştırılır ve süspansiyonun üzerine bir kapak kızağı yerleştirilir. Sonuç olarak, süspansiyon, pozitif veya negatif bastırılmış akciğer reaksiyonunu gözlemlemek için faz kontrastı altında görüntülenebilir.

Bu yöntem altın standart pnömokok yöntemini göstermektedir. Yöntem basit, gerçekleştirmesi kolay ve yorumlanması kolaydır. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi önemlidir, çünkü bu tekniğe yeni olan kişiler, kalite testini gerçekleştirmek için uygun hücre yoğunluğunun ne olduğunu tanımakta zorlanabilirler.

Katı, seçici olmayan bir at kanı agar plakası üzerinde yetiştirilen taze, gece boyunca saf bir pnömokok kültürünün küçük bir taramasını elde etmek için steril tek kullanımlık bir mikrolitrelik halka kullanarak başlayın, pnömokokları 100 mikrolitre kalp infüzyon suyuna aşılayın. Süspansiyon sadece gözle görülür şekilde bulanık görünmeli ve hücre çözeltisini emülsifiye etmek için tüpü hafifçe çalkalamalıdır. Bir damla aşıyı bir cam mikroskoba aktarmak için yeni bir mikrolitrelik halka kullanın.

Daha sonra kaydırın, süspansiyonun üzerine küçük dairesel bir kapak kayma yerleştirin ve zaman zaman 400 büyütme ile faz kontrastı altında süspansiyonun yoğunluğunu kontrol edin. Aşı çok ağırsa, hücre süspansiyonunu daha fazla et suyu ile seyreltin ve aşı çok hafifse hücreleri tekrar nazikçe karıştırın. Örneğin, görünür 50'den az hücre varsa, hücre süspansiyonuna daha fazla bakteri ekleyin ve yavaşça tekrar karıştırın.

Tecrübe ile. Hücre süspansiyonunun yoğunluğu, süspansiyonun sallanması ve gözle görülür şekilde bulanık görünmesi gereken ışığa kadar tutulmasıyla değerlendirilebilir. Mikroskop altında bakıldığında, hücre çözeltisi yaklaşık olarak bu yoğunlukta olmalıdır.

Optimal bakteri hücresi seyreltmesi elde edildikten sonra, inokulumun yaklaşık bir mikrolitresini cam mikroskoba aktarın. Sonraki kaydırın. Yeni bir döngü kullanarak, eşit hacimde oda sıcaklığı ekleyin.

Slaytın üzerine antiserum ve her iki damlayı iyice karıştırın. Halka ile, forseps ile damlaya dokunmamaya dikkat ederek hemen süspansiyonun üzerine küçük bir kapak sürgüsü yerleştirin. Ardından, süspansiyonu az önce gösterildiği gibi faz kontrastı altında görüntüleyin.

Pnömokok hücrelerinde çok az şişme gözlendiğinde veya hiç şişme gözlenmediğinde negatif bir bastırma akciğer reaksiyonu gözlenir. Negatif kontrole benzer şekilde, antiserum eklenmemiş bir pnömokok hücre süspansiyonu. Tip spesifik antikor, pnömokok kapsülüne bağlandığında ve kırılma indisinde bir değişikliğe yol açtığında pozitif bir bastırıcı akciğer reaksiyonu meydana gelir.

Faz kontrastı altında bakıldığında, bakteriler şişmiş ve daha görünür görünür. Bu işlemi yaparken aslında canlı mikroorganizmalarla çalıştığınızı unutmayın. Bu nedenle, iyi laboratuvar uygulamalarını takip etmeye, koruyucu giysi giymeye, uygun laboratuvar ekipmanına sahip olmaya ve işlem sonunda tüm ekipman ve reaktifleri güvenli bir şekilde atmaya dikkat etmeniz gerekir.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde yapılırsa yaklaşık 10 dakika içinde yapılabilir. Bu prosedürü izledikten sonra, qua lung reaksiyonunu kullanarak pnömokokların nasıl serotipleneceği konusunda iyi bir fikre sahip olmalısınız. Bu teknik, hem nazofaringeal taşıyıcılıkta hem de invaziv bir hastalıkta pnömokok epidemiyolojisini anlamak için önemlidir.