Elektronik von Frey aparatı kullanarak farelerin arka pençesindeki dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçülmesi

Bu prosedürün genel amacı, farelerin arka patilerindeki mekanik basınca karşı duyarlılık tepkilerini ölçmektir. Bu işlem, öncelikle hayvanların tel örgü bir zemine yerleştirilmesi ve hazır olduklarında alışmalarının sağlanmasıyla gerçekleştirilir. Arka patinin altına polipropilen bir uç uygulanır ve basınç kademeli olarak artırılır.

Uygun davranışsal yanıt gözlemlendiğinde, uyaran geri çekilir. Bazal değerler toplandıktan sonra, hayvanlara daha fazla test yapılmadan önce deneysel bir müdahale uygulanır. Son olarak, belirli bir tedavinin basınçla tetiklenen taktil hassasiyetteki değişimler üzerindeki etkisini belirlemek amacıyla, arka pençe çekilme eşiklerindeki değişimler tedavi grupları arasında karşılaştırılır.

Ağrı, inflamasyonun temel bir bileşenidir. Ağrının farklı bağlamlarda ölçülmesi ve karakterize edilmesi önemlidir. Bu nispeten basit ağrı değerlendirme yöntemi, birçok farklı inflamasyon modeline uygulanabilir.

Prosedür, laboratuvarımdaki araştırma teknisyeni Tiana ov, bu çalışmada lisans öğrencisiyken yer alan Madison Mack ve şu anda laboratuvarımda lisans öğrencisi olan Akila Sykes tarafından uygulamalı olarak gösterilecektir. Arka patilere kolay erişim sağlamak için test düzeneğini kurarak başlıyoruz.

Münferit bölmeleri tel örgü tabanın üzerine yerleştirin. Tel örgü taban, uygun bir yükseklikte ve sağlam bir yüzey üzerinde olmalıdır. Ardından, elektronik Von Frey cihazını tezgahın üzerine yerleştirin.

Probun ve kablonun ekran ünitesine uygun şekilde bağlandığından emin olun ve cihazı kurulum modunda açın. Okumayı sıfırlayın ve verilen test ağırlığını nazikçe Von Frey probunun konisinin üzerine yerleştirin. Okunan değeri kaydedin ve bu prosedürü testin sonunda tekrar uygulayın; iki değer arasında fark varsa, cihazın yeniden kalibre edilmesi gerekebilir.

Test edilecek doku için uygun boyutta bir polipropilen uç seçin. Sert uçlar, daha az hassas olan, daha dayanıklı arka pati dokusu için uygundur. Ucu, probun konisine nazikçe yerleştirin.

Ardından kurulum modundan çalışma moduna geçin. Bu işlem, prob geri çekildiğinde uygulanan maksimum basıncı görüntüleyecektir. Arka pençe çekilme eşiklerini ölçmek için iki araştırmacı gereklidir.

Yanlılığı azaltmak amacıyla, bir kişi cihazı çalıştırmak ve ölçümleri gerçekleştirmek, bir diğeri ise bu ölçümleri kaydetmekle görevlendirilir. Anestezi cihazını kullanan araştırmacı, hem uygulanan tedavilere hem de kaydedilen çekilme eşiği değerlerine karşı körlenmiş olmalıdır. Ayrıca, ölçümler arasında tutarlılığı sağlamak için tüm bazal ve çekilme eşiği değerleri aynı kişi tarafından kaydedilmelidir.

Tedaviden 48 saat önce, ilk bazal ölçümler kaydedilir. Boşaltım atıklarını toplamak için standın altına emici malzeme yerleştirin. Uç takılıp prob sıfırlandıktan sonra, ölçümleri kaydeden deneyci fareleri ayrı bölmelere yerleştirmelidir.

Odacıkları delikli kapaklarla kapatın ve üzerine ağır bir nesne yerleştirin. Farelerin kaçmasını önlemek için, işleme devam etmeden önce farelerin 15 dakika boyunca odacığa alışmasını sağlayın. Genellikle bu tekniği ilk kez deneyen kişiler, basıncın kademeli olarak artırılmasında ve kendi ölçümleri arasında iç tutarlılık sağlamada zorluk çekerler; tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için pratik yapmak esastır.

Hazır olduğunda, probu iki elle yavaşça kaldırın ve sol veya sağ arka pençenin ayak tabanını stimüle edin. Nosiseptif bir davranış gözlemlenene kadar basıncı kademeli olarak artırın. Bu davranışlar; arka pençenin geri çekilmesi, arka pençenin yalanması veya pençeyle zıplama şeklinde tanımlanır.

Diğer araştırmacıya, gözlemlenen davranışı tetikleyen basıncı kaydetmesini söyleyin. Ölçüm sırasında, oda dışına bir yem paleti yerleştirerek veya ölçüm alınmadan önce hafifçe vurmak gibi küçük bir ses çıkararak fareyi hareketsiz durmaya teşvik etmek faydalıdır. Her fare bir kez test edilene kadar bir sonraki fareyle devam edin ve bu prosedürü dört kez daha tekrarlayın.

Beş bazal değer toplandıktan sonra, her fare için bir ortalama hesaplayın. Bazal ölçümleri 24 saat sonra tekrarlayın ve bu değerleri kullanarak başka bir ortalama hesaplayın. Tüm farelerin tutarlı bazal tepkilere sahip olduğundan emin olmak için, ortalama bazal geri çekilme eşiği 3,5 gramın altında olan veya bazal eşikleri arasında iki gram veya daha fazla fark olan hayvanları hariç tutun.

Son olarak, fareleri, her bir grubun ortalama yoksunluk temel çizgisi birbirine mümkün olduğunca benzer olacak şekilde ayrı tedavi gruplarına ayırın. Burada, yoksunluk eşikleri arka pençeye venom uygulamasından sonra ölçülmüştür. Salin ile tedavi edilen kontrol fareleri, tüm zaman dilimlerinde temel çizgiye kıyasla çok az değişim göstermiştir.

İşlem görmüş farelerde test edilen nosiseptif yanıtların altı saate kadar net bir şekilde korunduğu görülmüştür. Ayrıca, inflamasyonun karakteristik bir özelliği olan doku ödemi, sadece venom uygulanan arka patilerde belirginleşmiş, salin uygulananlarda ise görülmemiştir. Venomun taktil hassasiyette yol açtığı değişimlere, yaklaşık 1000 katlık bir nötrofil infiltrasyonu eşlik etmiştir.

Salin ile işlem görmüş arka patilerle karşılaştırıldığında, salin ile işlem görmüş patilerdeki plantar mast hücreleri büyük ölçüde sağlam kalmış veya hafif degranülasyon göstermiştir. Buna karşılık, çiftleşmiş arka patilerde mast hücrelerinin %15 ila %20'sinde orta ve yaygın degranülasyon görülmüştür. Bu teknik, arka pati dışındaki çok çeşitli dokularda mekanik veya taktil hassasiyeti değerlendirmek için uyarlanabilir.

Bu nedenle, bu teknik birçok farklı kemirgen inflamasyon ve ağrı modeline entegre edilebilir.