Name: Elektronik von Frey aparatı kullanarak farelerin arka pençesindeki dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçülmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-19T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Öğrenin farelerin arka pençesinde mekanik hassasiyeti ölçmek için elektronik von Frey yöntemini. Bu teknik, enflamatuvar ağrı mekanizmalarını anlamak ve tedavi etkinliğini değerlendirmek için hassas geri çekilme eşikleri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

NIH R15 NS067536-01A1 (DC'ye) ve Macalester College Wallace Araştırma Fonu (DC'ye) bu çalışmaları destekledi. Macalester College Kütüphanesi bu makalenin açık erişimli yayınını desteklemiştir. Ayrıca, mevcut ve eski Chatterjea laboratuvar üyelerine destekleri için teşekkür ederiz.

Macalester College'ın Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tüm protokolleri onayladı. Bu deneyler için 8-12 haftalık erkek ND4 İsviçre fareleri kullanıldı.
1. Bothrops jararaca Zehri Hazırlama ve Enjeksiyon
<ol>
	<li>DİKKAT: B. jararaca zehiri zehirlidir. Tozu tutarken ve solüsyonları hazırlarken eldiven, maske ve göz koruması kullanın.</li>
	<li>45 μg / kg B. jararaca zehiri (daha önceki doz-yanıt deneyleri ile belirlenen rejim) veya% 0.9 salin aracı (10 μl), 29 G x 1/2 iğneli 3/10 ml insülin şırıngaları kullanarak her iki arka pençeye intraplantar enjeksiyon yoluyla uygulayın. Not: Deneysel tasarıma bağlı olarak, tedavi ve kontrol solüsyonları, her denek içinde iç kontroller sağlamak için sırasıyla her bir arka pençeye ayrı ayrı enjekte edilebilir.</li>
</ol>
2. Elektronik von Frey Aparatı Kurulumu ve Çalıştırılması
<ol>
	<li>Elektronik von Frey ünitesini prob standına yerleştirin. Prob ve kablonun ekran ünitesine uygun şekilde bağlandığından emin olun ve cihazı açın. Kurulum modunda okumayı sıfıra (0.00 g) ayarlayın ve sağlanan test ağırlığını (5.00 g) yavaşça von Frey probunun konisine yerleştirin.</li>
	<li>Okumayı bir laboratuvar not defterine kaydedin ve test oturumu bittikten sonra bu prosedürü tekrarlayın. Test oturumundan önce ve sonra test ağırlığı okumalarınız arasında 0.20 g'dan daha büyük bir tutarsızlık varsa veya test ağırlığı uygulandıktan sonra okuma dalgalanıyorsa, cihazın (üretici tarafından) yeniden kalibrasyonu gerekli olabilir.</li>
	<li>Fare arka pençesinin çekilme eşiğini değerlendirmek için, probla birlikte verilenler arasından uygun polipropilen ucu kullanın. Uç seçimi, incelenen dokuya bağlıdır. Sert uçlar daha az hassas, daha sert arka pençe dokusu için iyi çalışırken, yarı esnek uçlar ano-genital sırt gibi daha hassas bir alan için daha iyi bir seçim olabilir (Chatterjea, yayınlanmamış). Sert ucu yavaşça probun konisine monte edin.</li>
	<li>Uygulanan maksimum basıncı kaydetmek için, uygulanan maksimum basınç ekrana kaydedilecek şekilde çalışma modunu kurulumdan çalıştırmaya geçirin. Bu modda, prob geri çekildiğinde uygulanan maksimum basınç okuması görüntü ekranına kaydedilecektir.</li>
</ol>
3. Hind Pençesi Çekilme Eşiği Değerlendirmesi için Genel Hususlar
<ol>
	<li>İdeal olarak, bir EVF aparatı kullanarak arka pençe çekilme eşiğini (mekanik hassasiyet) ölçmek için iki araştırmacıya ihtiyaç vardır - biri cihazı çalıştırmak ve ölçümleri gerçekleştirmek için, diğeri ise kaydedilen ölçümleri yazıya dökmek ve fareleri işlemek için.</li>
	<li>Yanlılığı azaltmak için, cihazı çalıştıran araştırmacı tedavilere ve kaydedilen geri çekilme eşiği değerlerine karşı kör olmalıdır. Ayrıca, ölçümler arasında tutarlılığı sağlamak için, aynı kişi tüm temel ve deneysel geri çekilme eşiklerini değerlendirmelidir.</li>
	<li>Tüm ölçümleri sessiz, sıcaklık kontrollü bir odada ve günün aynı saatinde14 gerçekleştirin.</li>
	<li>Ölçümleri kaydeden deneyci, her fareyi bir ağ zemin standı üzerine yerleştirilmiş çok birimli polimetil metakrilat (PMMA) muhafazasının ayrı odalarına yerleştirmelidir. Hazneleri delikli PMMA kapaklarıyla örtün ve farelerin kaçmasını önlemek için üstüne ağır bir nesne yerleştirin. Atılan atıkları emmek/toplamak için standın altına emici malzeme yerleştirin. Başlangıç veya deneysel geri çekilme eşiği değerlendirmesi 6,7,10'dan önce farelerin odalarda 15 dakika alışmasına izin verin. </li>
	<li>Farelerin arka pençeleri, ağ tabanının açıklıklarından kolayca erişilebilir olmalıdır; bu nedenle, örgü zemin standını frenli bir arabaya veya her taraftan erişilebilen sabit bir tezgah üzerine rahat bir yüksekliğe yerleştirin.</li>
	<li>Ölçümler sırasında, farelerin, ölçüm odasının hemen dışına yerleştirilmiş bir gıda peleti15 veya ölçümden önce, ancak ölçüm sırasında değil, odanın tabanının tel örgüsü boyunca bir kaleme vurularak veya çalıştırılarak üretilen çok hafif bir gürültü ile dikkatinin dağılması gerekebilir. Bu, farenin sabit kalmasına neden olur ve deneycinin daha kolay ölçüm yapmaya başlamasını sağlar.</li>
</ol>
4. Temel Hind Pençe Geri Çekilme Eşiği Değerlendirmesi
<ol>
	<li>İlk temel ölçüm seti, tedavinin uygulanmasından 48 saat önce yapılmalıdır. Sert ucu monte ettikten sonra probu sıfırlayın. İki elinizi kullanarak, sol veya sağ arka pençenin ortasını (ayak tabanı alanı) uyarmak için probu yavaşça kaldırın (her iki pençe de aynı tedaviyi aldıysa).</li>
	<li>Arka pençe geri çekilmesi, arka pençe yalama veya dört pençe atlama6,10 gibi tanımlanmış nosiseptif tepki davranışları gözlenene kadar basıncı kademeli olarak artırın. Diğer araştırmacıya, gözlemlenen davranışı ortaya çıkaran baskıyı yazıya dökmesi talimatını verin.</li>
	<li>Bitişik haznede bulunan farenin geri çekilme eşiğini ölçün. Her farenin para çekme eşiklerini bir kez değerlendirene kadar devam edin. Dört kez daha tekrarlayın, böylece her fare daha önce açıklandığı gibi5x ölçülür 10.</li>
	<li>Her fare için, 5 ölçümün ortanca değerini hesaplayın ve ardından her değerin ortanca değerden ne kadar saptığını hesaplayın. En az sapan 3 değer seçin ve daha önce açıklandığı gibi bir temel para çekme eşiği elde etmek için bunların ortalamasınıalın 10. Bu gösterimde, 5 değerden 3'ü kullanılarak ölçüm standartlaştırılmıştır; Belirli ölçüm sayıları deneysel tasarıma göre değişebilse de, taban çizgilerini değerlendirmek için tüm farelerin eşit sayıda dürtülmesini sağlamak önemlidir.</li>
	<li>Temel ölçümleri 24 saat sonra tekrarlayın. Fare başına 5 ölçüm yapın ve temel bir geri çekilme eşiği elde etmek için medyana en yakın olan 3'ün ortalamasını alın.</li>
	<li>Bir farenin ortalama temel çekilme eşiğini hesaplamak için, tedaviden 48 ve 24 saat önce alınan temel çekilme eşiklerinin ortalamasını alın. Ortalama temel çekilme eşiği 3,50 g'ın altındaysa veya iki temel eşik arasında 2,00 g veya daha fazla fark varsa, fareyi deneyden hariç tutun. Bu kriterler, deneydeki tüm farelerin tutarlı başlangıç yanıtlarına ve tedaviyi takiben daha düşük eşiklerin gözlemlenmesine izin veren yeterince yüksek temel geri çekilme eşiklerine sahip olmasını sağlar.</li>
	<li>Not: Dışlama eşiği, incelenen dokuya, incelenen hayvanların türüne ve kullanılan uç tipine bağlı olacaktır. Örneğin, 3.5 g'nin ND4 arka pençe dokusu için yararlı bir kriter olduğunu bulduk, ancak ano-genital sırt gibi daha hassas alanların daha düşük bir dışlama eşiğine ihtiyacı var (Chatterjea, yayınlanmamış).</li>
	<li>Fareleri tedavi gruplarına atayın, böylece deney gruplarının ortalama geri çekilme taban çizgisi, tedaviler uygulanmadan önce mümkün olduğunca benzer olur.</li>
</ol>
Not: Temel ölçümler, bir deneyden 48 saat önce gerçekleştirilebilir. Bununla birlikte, tedavilerin başlamasından önce düzenli aralıklarla en az 2 set temel ölçüm tamamlanmalıdır.
5. Deneysel Arka Pençe Geri Çekilme Eşiği Değerlendirmesi
<ol>
	<li>Deneyin tasarımı tarafından belirlenen uygun zaman noktalarında tedaviyi takiben arka pençe çekilme eşiğini (mekanik hassasiyet) değerlendirin. Ölçümler tamamlandıktan hemen sonra fareleri yiyecek ve suya erişimi olan kafeslerine geri getirin.</li>
	<li>Yukarıda belirtilen adımları izleyin; özellikle hassasiyet birden fazla zaman noktasında değerlendirilecekse, (tedavi edilen) arka pençe dokusunun aşırı uyarılma olasılığını azaltmak için 5 ölçüm yerine 3 ölçüm yapın. Alınan üç ölçümden herhangi ikisi 2.00 g'dan fazla farklılık gösteriyorsa, dördüncü bir ölçüm yapın.</li>
	<li>Her fare için deneysel çekilme eşiği elde etmek için 3 ölçümün ortalamasını hesaplayın. 4 ölçümün yapıldığı herhangi bir fare için, deneysel geri çekilme eşiğini elde etmek için medyandan en az sapan üçünün ortalamasını hesaplayın.</li>
	<li>Belirli bir zaman noktasında her fare için delta çekilme eşiği elde etmek için, taban çizgisini deneysel çekilme eşiğinden çıkarın. Tüm fareler ve tüm deneysel zaman noktalarıiçin tekrarlayın 9.</li>
	<li>Toplanan veriler üzerinde uygun istatistiksel analizler yapın. Burada JMP 9.0 (SAS, Cary, NC) kullanarak Tek Yönlü Varyans Analizi ve Tukey HSD post hoc analizi gerçekleştirdik.</li>
</ol>

<ol><li>Meetoo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+diseases%3A+the+silent+global+epidemic%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Nurs%22%5BJournal%5D)">Chronic diseases: the silent global epidemic.</a> Br J Nurs. (21), 17-21 (2008).</li>
<li>Goldberg, D. S., McGee, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+as+a+global+public+health+priority%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Pain as a global public health priority.</a> BMC Public Health. 11, 770 (2011).</li>
<li>Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+this+thing+called+pain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">What is this thing called pain.</a> J. Clin. Invest. 120 (11), 3742-3744 (2010).</li>
<li>Sandkühler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+and+mechanisms+of+hyperalgesia+and+allodynia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Models and mechanisms of hyperalgesia and allodynia.</a> Physiol. Rev. 89 (2), 707-758 (2009).</li>
<li>Ren, K., Dubner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+the+immune+and+nervous+systems+in+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Interactions between the immune and nervous systems in pain.</a> Nat. Med. 16 (11), 1267-1276 (2010).</li>
<li>Cunha, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+electronic+pressure-meter+nociception+paw+test+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Braz.+J.+Med.+Biol.+Res%22%5BJournal%5D)">An electronic pressure-meter nociception paw test for mice.</a> Braz. J. Med. Biol. Res. 37 (3), 401-407 (2004).</li>
<li>Rudick, C. N., Bryce, P. J., Guichelaar, L. A., Berry, R. E., Klumpp, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+Cell-Derived+Histamine+Mediates+Cystitis+Pain%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Mast Cell-Derived Histamine Mediates Cystitis Pain.</a> PLoS ONE. 3, (2008).</li>
<li>Farmer, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+vulvovaginal+fungal+infections+cause+persistent+pain+in+a+mouse+model+of+vulvodynia%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Repeated vulvovaginal fungal infections cause persistent pain in a mouse model of vulvodynia.</a> Sci. Transl. Med. 3 (101), (2011).</li>
<li>Parada, C. A., Tambeli, C. H., Cunha, F. Q., Ferreira, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+major+role+of+peripheral+release+of+histamine+and+5-hydroxytryptamine+in+formalin-induced+nociception%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The major role of peripheral release of histamine and 5-hydroxytryptamine in formalin-induced nociception.</a> Neuroscience. 102 (4), 937-944 (2001).</li>
<li>Chatterjea, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cell+degranulation+mediates+compound+48%2F80-induced+hyperalgesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Mast cell degranulation mediates compound 48/80-induced hyperalgesia in mice.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 425, 237-243 (2012).</li>
<li>Oliveira, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+mast+cells+in+a+mouse+model+of+postoperative+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Involvement of mast cells in a mouse model of postoperative pain.</a> Eur. J. Pharmacol. 672 (1-3), 88-95 (2011).</li>
<li>Austin, P. J., Wu, A., Moalem-Taylor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+constriction+of+the+sciatic+nerve+and+pain+hypersensitivity+testing+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Chronic constriction of the sciatic nerve and pain hypersensitivity testing in rats.</a> J. Vis. Exp. (61), (2012).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J. Neurosci. Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Akunne, H. C., Soliman, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+modulation+of+pain+responsiveness+in+the+aged+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Biochem.+Behav%22%5BJournal%5D)">Serotonin modulation of pain responsiveness in the aged rat.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 48 (2), 411-416 (1994).</li>
<li>Detloff, M. R., Fisher, L. C., Deibert, R. J., Basso, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+tactile+sensory+testing+after+spinal+cord+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic tactile sensory testing after spinal cord injury in rats.</a> J. Vis. Exp. (62), (2012).</li>
<li>Cunha, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+of+neutrophils+in+the+development+of+mechanical+inflammatory+hypernociception%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Crucial role of neutrophils in the development of mechanical inflammatory hypernociception.</a> J Leukoc. Biol. 83 (4), 824-832 (2008).</li>
<li>Lavich, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+infiltration+is+implicated+in+the+sustained+thermal+hyperalgesic+response+evoked+by+allergen+provocation+in+actively+sensitized+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Neutrophil infiltration is implicated in the sustained thermal hyperalgesic response evoked by allergen provocation in actively sensitized rats.</a> Pain. (1-2), 125-121 (2006).</li>
<li>Galli, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+as+%26%2334%3Btunable%26%2334%3B+effector+and+immunoregulatory+cells%3A+recent+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mast cells as &#34;tunable&#34; effector and immunoregulatory cells: recent advances.</a> Annu. Rev. Immunol. 23, 749-786 (2005).</li>
<li>Levy, D., Burstein, R., Kainz, V., Jakubowski, M., Strassman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cell+degranulation+activates+a+pain+pathway+underlying+migraine+headache%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Mast cell degranulation activates a pain pathway underlying migraine headache.</a> Pain. 130 (1-2), 166-176 (2007).</li>
<li>Bonavita, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+mast+cells+and+snake+venom+metalloproteinases+to+the+hyperalgesia+induced+by+Bothrops+jararaca+venom+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicon%22%5BJournal%5D)">Contribution of mast cells and snake venom metalloproteinases to the hyperalgesia induced by Bothrops jararaca venom in rats.</a> Toxicon. 147 (8), 885-893 (2006).</li>
<li>Zychar, B. C., Dale, C. S., Demarchi, D. S., Gonçalves, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+metalloproteases%2C+serine+proteases+and+phospholipases+A2+to+the+inflammatory+reaction+induced+by+Bothrops+jararaca+crude+venom+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicon%22%5BJournal%5D)">Contribution of metalloproteases, serine proteases and phospholipases A2 to the inflammatory reaction induced by Bothrops jararaca crude venom in mice.</a> Toxicon. 55 (2-3), 227-234 (2010).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak rakip mali çıkarları yoktur.

Geri çekilme tepkilerindeki değişikliklerin ölçümü, kemirgen ağrı ve inflamasyon modellerinde dokunsal duyarlılıktaki değişiklikleri değerlendirmek için kullanılan önemli bir araçtır. Burada, bu değerlendirmeyi gerçekleştirmek için elektronik bir von Frey cihazının faydasını gösteriyoruz. Bu tekniğin çeşitli avantajları vardır: i) birbirine oldukça yakın birden fazla zaman noktasında birden fazla fare için uygulanan basınca verilen geri çekilme tepkilerini hızlı bir şekilde değerlendirebiliriz, ii) küçük bir doku alanına sürekli ve spesifik basınç uygulamak için tek bir uç kullanabiliriz, iii) bir geri çekilme tepkisi elde etmek için uygulanan kesin basıncı doğru bir şekilde ölçebiliriz, ve iv) davranışsal değerlendirmelerin mümkün olduğunca kesin ve objektif olmasını sağlamak için sağlam temel kesintileri, dışlama kriterlerini ve iç kontrolleri kolayca uygulayabiliriz.
Bir EvF testi için en iyi sonuçları elde etmek için kritik adımlar, cihazın önceden kalibrasyonu ve tutarlı ölçüm uygulamalarıdır. Protokol bölümünde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi, cihazın dikkatli bir şekilde kullanılması ve kullanımdan önce ve kullanım sırasında uygun kalibrasyonun sağlanması gerekir. Herhangi bir ölçüm yapılmadan önce, makinenin optimum şekilde çalışmasını sağlamak için test ağırlığı okumalarının onaylanması gerekir. Okumalar önemli ölçüde dalgalanıyorsa veya test ağırlığı okumaları doğru değilse, aparatı kalibre etmek için derhal üreticiyle iletişime geçilmelidir. Bunu akılda tutarak, cihazın beklenmedik bir kalibrasyon ihtiyacı nedeniyle zamana duyarlı deneylerden ödün vermemek için mümkünse yedek bir elektronik von Frey aparatına sahip olunması tavsiye edilir. Ayrıca, iyi eğitimli tek bir araştırmacı, tedavi gruplarına kör kalırken belirli bir çalışma veya deney serisi için tüm temel ve deneysel ölçümleri yapmalıdır. Fareler sessiz bir odada değerlendirilmeli, sabit bir sıcaklıkta tutulmalı, EvF odalarına en az 15 dakika alıştırılmalı, ancak odada gereğinden fazla tutulmamalıdır (özellikle tek bir gün içinde birden fazla ölçüm yapılırsa) stres ve rahatsızlığa bağlı davranış varyasyonlarını en aza indirmek için.
EvF ölçümleri, mevcut CvF tekniklerine göre önemli gelişmeler sunar. Araştırmacılar sürekli basınç uygulayabilir ve CvF filament deneylerinde 6 yapıldığı gibi çeşitli ağırlıklardaki uçlar arasında geçiş yapmak zorundakalmazlar. Bu, özellikle iltihaplı veya yaralı doku durumunda geçerli olan dokuda daha az dürtmeye yol açar. Geri çekilmenin meydana geldiği kesin basınç, CvF ölçümlerinde kullanılan mevcut filament ağırlıkları ile de sınırlı olan %50 geri çekilme ölçümleri kullanılarak ölçülebilir13. Rasyonel ve tek tip dışlama kriterleri uygulanabildiğinden (yukarıda tartışıldığı gibi), fareler deney gruplarına atanabilir, böylece tüm gruplar deneyin başında benzer ortalama taban çizgilerine sahip olur. EvF ölçümleri, mutlak tepkilerin kendisini değil, belirli bir uyarana verilen davranışsal tepkideki değişiklikleri değerlendirir. Bu nedenle, her farenin nosiseptif yanıtındaki değişiklik, bireysel deneysel ve temel geri çekilmeleri arasındaki fark olarak ölçülür, böylece alınan her ölçüm için dahili kontroller sağlanır.
EvF'nin belki de en önemli sınırlaması, manuel muadiline benzer şekilde, aynı araştırmacının belirli bir dizi temel ve deneysel ölçüm için tüm ölçümleri yapması gerektiğidir. Bu, tekniğin ölçeklendirilmesini zaman, personel ve ekipman açısından zorlaştırıyor. Bir seferde ~20 farenin (tahlil odalarının konfigürasyonuna bağlı olarak), ölçümler arasında en az 45 dakika olması koşuluyla, birden fazla zaman noktasında 30-45 dakika veya daha kısa sürede ölçülebileceğini bulduk. Bu bağlamda ilgili bir husus, bireysel deneycilerin öğrenme eğrisidir. Bireysel bir araştırmacının tam ölçekli bir deneye başlayabilmesi için iç tutarlılığın sağlanması gerekir ve bu, istenen tutarlılığa ulaşılana kadar tekrarlanan temel yanıt ölçümlerini içeren saatlerce özel uygulama gerektirir. Ek olarak, temel değerlerin kullanılması, bir deney için temel alınan tüm farelerin dahil edilemeyeceği anlamına gelir; Deney başına baz alınan farelerin %25-30'unun tipik olarak hariç tutulduğunu bulduk.
Değişiklikler ve gelecekteki uygulamalar açısından, EvF davranışsal ölçümleri, inflamatuar patolojilerin altında yatan eşlik eden akut ve/veya kronik ağrıyı analiz etmek için çok çeşitli inflamasyon modellerine güçlü bir boyut katar. Zehirlenmede, ND4 erkek farelerin arka pençelerinde doku şişmesi, lökosit alımı ve mast hücre degranülasyonunun beklenen sonuçlarına dokunsal duyarlılıkta belirgin, hızlı başlangıçlı değişikliklerin eşlik ettiğini bulduk. Bu bulgular, mast hücre aracılarının sıçanlarda20 termal duyarlılığa katkıları ve CvF21 kullanılarak ölçülen ND4 İsviçre farelerinde B. jararaca zehiri tarafından indüklenen mekanik duyarlılık hakkındaki önceki gözlemleri doğrulamaktadır. EvF protokolü, arka pençe dışındaki dokularda, örneğin CvF'nin şu anda kullanıldığı karın7 ve ano-genital sırt8'de kullanım için kolayca değiştirilebilir. Alerjiler, yara iyileşmesi, nöropatiler ve diğer patolojilerin kemirgen modelleri, arka pençe dahil ve ötesindeki dokulardaki mekanik duyarlılık ölçümlerini içerecek şekilde kolayca uyarlanabilir.
Özetle, EvF, kemirgenlerde nosisepsiyon ölçümüne yönelik klasik bir yaklaşımı güncelleyen yararlı ve etkili bir tekniktir ve çok çeşitli hastalık modellerinde ağrının altında yatan karmaşık mekanizmaların araştırılmasında önemli bir yeni araçtır.

Kronik bulaşıcı olmayan hastalıklar, insan mortalite ve morbidite yüklerinin orantısız bir payından sorumludur1. Kronik ağrı, küresel hastalık yükünün önemli bir bileşeni olarak giderek daha fazla kabul edilmektedir2. Bu, ağrının önlenmesi, yönetimi ve tedavisindeki yeniliklere büyük bir ivme kazandırmıştır. Aynı zamanda, ağrının altında yatan biyolojinin karmaşık olduğuna dair bol miktarda kanıt vardır3. Koruyucu, uyumsuz ve kronik ağrının altında yatan mekanizmalar, bağışıklık ve sinir sistemleri arasındaki karmaşık etkileşime işaret eder3,4. Bu mekanizmaların aydınlatılması, moleküler diseksiyondan davranışsal analize kadar titiz nicel, tekrarlanabilir deneysel yaklaşımlar gerektirir.
Kemirgen modelleri, inflamatuar ve nöropatik ağrının moleküler oyuncularının karakterizasyonunda paha biçilmez olmuştur5. Zararlı uyaranlara daha önce belirtilen tepkilerin zaman ve yoğunluğundaki azalma, bu hayvanlarda ağrı durumlarını ölçmek için kullanılır, çünkü kemirgen denekler başka türlü bir ağrı hissi bildiremezler6. Sıcaklık ve basınca karşı değişen tepkiler, enfeksiyon 7,8, kimyasal maruziyet6, 9,10, cerrahi insizyon11 ve sinir ligasyonunun neden olduğu nöropatik ağrının12 neden olabileceği kemirgen inflamatuar nosisepsiyon modellerinde doku duyarlılığının ölçümleri olarak yaygın olarak kullanılır.
 Mekanik duyarlılık veya basınç uyaranlarına yanıt, genellikle klasik von Frey filamentleri (CvF) kullanılarak ölçülür - bir dizi (örn. 0.4-15 g13) ağırlıklı uç, deneysel deneklere karşı kontrollerde ağrı davranışları indüklenene kadar seri artışlarla test dokusuna manuel olarak uygulanır. Mekanik hassasiyeti değerlendirmek için bu uçları veya kılları kullanmanın çeşitli yöntemleri vardır6,13; En sık kullanılan yöntem aşağıdaki gibidir. Belirli bir basınca sahip bir uç (seri içinde; Örneğin, 2 g13) bir başlangıç noktası olarak seçilir ve bir sıçan veya farenin %50 geri çekilme eşiği (ucun dokuya uygulanma zamanlarının %50'sinde bir yanıt üretmek için gereken uyaran yoğunluğu), daha önce belirtilen yanıt davranışlarının13 görüntülenmesine dayalı olarak uç ağırlığında yukarı ve aşağı hareket ettirilerek belirlenir. Tedavi grupları için mutlak% 50 geri çekilme eşikleri daha sonra başlangıç ve tedavi sonrası zaman noktaları arasında karşılaştırılır. Bu manuel teknik oldukça zaman alıcıdır. Bir von Frey odasında hapsedilen her bir denek tarafından harcanan zamanın artmasına ek olarak, bu aynı zamanda çeşitli ağırlıklardaki test uçlarının iltihaplı dokuya uygulanma sayısını da arttırır ve bu da çalışmadaki kemirgenlere daha fazla rahatsızlık verir. Ayrıca, kemirgen grupları arasında %50 geri çekilme eşikleri hesaplanır ve karşılaştırılır; Deneysel deneklerin bireysel tepkileri, bildiğimiz kadarıyla, bir istisna6 dışında, tipik olarak bireysel tedavi edilmemiş temel yanıtlarına normalleştirilmemiştir. Sonuç olarak, kemirgen denekler genellikle önceden belirlenmiş bir aralıkta tutarlı başlangıç yanıtları temelinde tedavi gruplarına atanmış olarak rapor edilmez ve bireysel denekler de temel yanıtların standartlaştırılmasına izin veren tutarlı bir şekilde uygulanan bir dizi dışlama kriteri temelinde değerlendirilmez.
Burada, bir elektronik von Frey cihazı (EvF) kullanarak Bothrops jararaca zehirine maruz kaldıktan sonra fare arka pençe dokunsal hassasiyetini ölçmek için alternatif bir yöntem sunuyoruz. Cunha ve meslektaşları6, kemirgenlerde EvF tekniklerinin kullanımına öncülük ettiler ve EvF'nin kemirgen inflamatuar ağrı modellerinde "daha hassas, objektif ve nicel" bir dokunsal duyarlılık ölçüsü sağladığını göstermek için CvF ve EvF etkinliğini sistematik olarak karşılaştırdılar. Kısaca EvF ölçümlerinde, test edilen doku için uygun sertlikte tek tip çapa (0,8 mm) sahip higroskopik olmayan bir polipropilen von Frey ucu, kemirgenin uçtan geri çekildiği kuvveti/ağırlığı gösteren bir elektronik proba ve okumaya bağlanır. CvF ve EvF ölçümleri arasında birkaç önemli fark vardır. İlk olarak, EvF kullanarak hem temel hem de deneysel tepkileri ölçme süreci, bir yanıt olana kadar arka pençe üzerindeki basınç artan kuvvetle uygulanabildiğinden ve CvF'de olduğu gibi uçları değiştirmeye gerek olmadığından büyük ölçüde kolaylaştırılmıştır; Hayvanlar tahlil odalarında daha az zaman harcarlar ve bu nedenle deney sırasında daha az stresli ve daha rahattırlar. İkincisi, EVF, çalışma konuları için rasyonel dışlama kriterlerinin kabul edilebilir temel eşik aralıkları şeklinde göreceli olarak uygulanmasına izin verir. Bu, tedavi grupları içinde ve arasında temel yanıtların standardizasyonuna izin verir. Üçüncüsü, deneysel bir tedaviyi takiben bir deneğin tepkisi her zaman kendi bireysel temel tepkisiyle karşılaştırılır ve ölçümler için önemli iç kontroller oluşturur. Dördüncüsü, geri çekilme eşiklerinin doğruluğu, manuel filamentlerin ağırlıkları şeklinde mevcut olan artışlar yerine sürekli olarak basınç uygulanabildiğinden, daha yüksek bir çözünürlük seviyesinde kaydedilir. İyi tasarlanmış CvF tahlillerinde olduğu gibi, EvF tabanlı deneyler de aynı araştırmacı (tedaviye kör) ile kuvvet uygulayarak ve tepki davranışlarını kaydederek gerçekleştirilir. Bu tekniğin, ölçümlerin iç tutarlılığını sağlamak için araştırmacılar tarafından zaman ve çaba gerektirdiğini ve tutarsız başlangıç tepkileri nedeniyle dışlanması gerekebilecek fareler için uygun ödeneklerin yapılması için deneylerin planlanmasını gerektirdiğini belirtmek önemlidir.
Mekanik duyarlılığın uygulanması kolay, etkili, iyi kontrol edilen bir değerlendirmesi, zehirlenme gibi enflamatuar olay modellerine davranışsal değerlendirmenin eklenmesini kolaylaştırır - burada dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçümünde EVF ölçümlerinin kapasitelerini ve gücünü göstermek için kullandığımız örnek. Erkek ND4 İsviçre farelerinin, arka pençedeki Güney Amerika çukur engereği Bothrops jarkaraca'dan elde edilen zehir enjeksiyonunu takiben gelişmiş bir mekanik hassasiyet gösterdiğini bulduk. Davranışsal tepkilere, etkilenen dokuda ödem, nötrofil akışı ve mast hücre degranülasyonu eşlik etti.

<table><tbody><tr><td>ND4 İsviçre erkek fareleri</td><td>Harlan</td><td>0-32</td><td>Burada kullanılan fareler 8-12 haftalıktı ve Macaleter College'ın IACUC yönergelerine göre barındırıldı ve kullanıldı.</td></tr><tr><td>3 ml / 100 İnsülin şırıngası, 29 G 1/2 iğne</td><td>BD</td><td>BD309301</td><td>Her kullanımdan sonra uygun kaba atın.</td></tr><tr><td>B. jararaca zehir</td><td>Sigma</td><td>V5625</td><td>DİKKAT: Toksik madde. Göz ve cilt koruması kullanın. Steril% 0.9 tuzlu su içinde çözülür.</td></tr><tr><td>Elektronik von Frey cihazı; prob = 90 g aralığı</td><td>IITC</td><td>2394</td><td>Yavaşça hareket edin ve her zaman yatay olduğundan emin olun. Probu sıfırlamak için "Program" ve "Temizle" tuşlarına basın. Kurulumdan çalışma moduna geçmek için "Fonksiyon" ("MH" okuması için) veya "MAX" düğmesine basın.</td></tr><tr><td>Kafes standı + PMMA odaları</td><td>IITC</td><td>410</td><td>Her tarafa erişmek için sabit bir tezgah üstüne veya dört tekerlekli bir arabaya yerleştirin.</td></tr><tr><td>Yalnızca elektronik von Frey sert uçlar, 90 g aralığı</td><td>IITC</td><td>2390</td><td>n/a</td></tr></tbody></table>

elektronik von frey aparatı kullanarak farelerin arka pençesindeki dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçülmesi

Measuring Changes in Tactile Sensitivity in the Hind Paw of Mice Using an Electronic von Frey Apparatus

Mekanik basınçtan arka pençe çekilme eşiklerinde iltihaplanmanın neden olduğu değişikliklerin ölçülmesi, kemirgenlerde ağrı algısındaki değişiklikleri değerlendirmek için yararlı bir tekniktir. Geri çekilme eşikleri önce başlangıçta ve daha sonra cildin çok spesifik bölgelerine doğru bir kuvvet uygulayarak ilaç, zehir, yaralanma, alerjen veya başka bir şekilde uyarılmış iltihabı takiben ölçülebilir. Elektronik bir von Frey cihazı, klasik von Frey ölçümlerinin aksine, mevcut filament boyutlarıyla sınırlı olmayan fare arka pençe çekme eşiklerinin hassas bir şekilde değerlendirilmesine olanak tanır. Ölçümlerin kolaylığı ve hızlılığı, kısa bir süre içinde birden fazla ölçüm yapılabildiğinden, hızlı başlangıçlı inflamatuar ve nöropatik ağrının çeşitli modellerinde dokunsal duyarlılık sonuçlarının değerlendirilmesine izin verir. Bireysel kemirgen denekler için deneysel ölçümler, deney grupları içinde ve arasında temel yanıtları standartlaştırmak için kolayca oluşturulan bireysel başlangıç tepkilerine ve dışlama kriterlerine karşı dahili olarak kontrol edilebilir. Bu nedenle, bir elektronik von Frey aparatı kullanılarak yapılan ölçümler, diğer insan olmayan memeli modellerine de uygulanabilen, kemirgen mekanik allodini için iyi bilinen klasik von Frey filament bazlı tahlillerin yararlı bir modifikasyonunu temsil eder.

Yerel B. jararaca zehri uygulaması, ND4 Swiss erkek farelerin arka pençe dokunma hassasiyetinde değişikliklere ve doku ödemine neden olur.
45 µg/kg B. jararaca zehri uygulamasından 1,5 saat sonra, ND4 Swiss erkek fareler arka patilerini bazal seviyeden 3,0 g daha düşük bir basınçta geri çektiler (Şekil 1A). Tüm gruplar için bazal geri çekme tepkisi ~4,5 g uygulanan basınçta gerçekleşti; zehir tedavisi sonrası deney fareleri arka patilerini 1-1,5 g uygulanan basınçta geri çektiler (veriler gösterilmemiştir). Salin uygulanan kontrol fareleri, test edilen tüm zaman noktalarında bazal seviyeye kıyasla basınca verilen tepkide çok az azalma gösterdiler veya hiç göstermediler. Tedavi edilen farelerdeki azalmış yanıt eşikleri, zehirleme sonrası 3. ve 6. saatlerde açıkça korundu (Şekil 1A) ve 24. saate gelindiğinde kontrollerden ayırt edilemez hale geldi (veriler gösterilmemiştir). Zehirlenmiş farelerin arka patilerinde inflamasyonla karakteristik olan doku ödemi görüldü. Zehir uygulamasından 1,5 saat sonra, daha önce tanımlandığı şekilde10 ölçülen tedavi edilmiş arka patiler, bazal seviyeden 1,5 mm daha kalındı; ödem 3. ve 6. saatlerde devam etti (Şekil 1B). Buna karşılık, salin uygulanan patiler deney süresince herhangi bir şişme veya kalınlık değişimi göstermedi. Burada gösterilen temsilci deney için, bazal ölçümler için toplam 21 fare kullanıldı ve deneye dahil edilmek üzere 14 fare seçildi. Bunlar, bazal seviyedeki ortalama geri çekme yanıtları grup genelinde yaklaşık 4,5 g olacak şekilde tedavi gruplarına atandı.
B. jararaca zehriyle indüklenen dokunma hassasiyetindeki değişikliklere, ND4 Swiss erkek farelerin arka pençelerinde mast hücre degranülasyonu ve nötrofil infiltrasyonu eşlik eder.
Artan taktil duyarlılık ve doku ödemine ek olarak, zehirlenmiş ve salin uygulanmış farelerin arka ayaklarında nötrofil göçünü (Şekil 2A-B) ve mast hücresi degranülasyonunu (Şekil 2C-D) değerlendirdik. Nötrofiller, dolaşımdan lezyona göç eden ilk inflamatuar hücrelerdir ve inflamatuar nosiseptif yanıtları araciledikleri bilinmektedir10,16,17. Mast hücreleri dokuda yerleşik sentinel hücrelerdir18 ve mast hücresi degranülasyonu, farelerin arka ayağındaki10 ve sıçanların dura materindeki19 nosiseptif yanıtlarla ilişkilendirilmiştir.
Burada, ötanize edilen farelerden venom uygulamasının 1,5 saat sonrası alınan, hematoksilin-eosin boyalı 4 µm parafin gömülü sagital plantar doku kesitlerinin10 sayılmasıyla yapılan değerlendirmede, venom verilen arka pençelere nötrofil akışının, salin uygulanan arka pençelere kıyasla yaklaşık 1.000 kat arttığı saptanmıştır (Şekil 3A).
Salinle işlem görmüş patilerde, arka pati dokusundaki plantar mast hücreleri büyük ölçüde sağlamdı veya hafif granül kaybı gösteriyordu (Şekil 3B). Buna karşılık, zehir etkisindeki arka patiler, mast hücrelerinde %15-20 oranında orta ve yaygın granül kaybı sergiledi (Şekil 3B). Yukarıda açıklanan doku kesitleri toluidine blue ile boyandı ve granül kaybı durumunu belirlemek için daha önce tanımlandığı üzere10 gözlemlenen mast hücresi başına görünür granül sayıları sayıldı.
<img alt="B. jararaca venom effect graphs: A) Mechanical threshold, B) Paw width over time. Statistical data.
" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51212/51212fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 1"> 
Şekil 1. Yerel B. jararaca Venom uygulaması, ND4 Swiss erkek farelerin arka pençe mekanik duyarlılığında değişikliklere ve doku ödemine neden olur. Bazal geri çekilme eşikleri ve bazal pati genişliği, intra-plantar uygulama öncesindeki 48. ve 24. saatlerde değerlendirildi. B. jararaca zehir (Bjv; 45 µg/kg) veya taşıyıcı (salin) uygulaması (10 µl). Geri çekilme eşikleri, tedaviyi takiben 1,5, 3 ve 6. saatlerde değerlendirildi (A). Aorta plantar bölgedeki ortalama pençe genişliği (bir farenin sol ve sağ pençesinin genişliğinin ortalaması) dokuların ödem durumunu belirlemek amacıyla, daha önce tarif edildiği üzere, başlangıçta ve ardından tedaviyi takiben 1,5, 3 ve 6. saatlerde dijital kumpas kullanılarak değerlendirildi10 (B). Anlamlılıklar, Sal ile işlem görmüş farelerle karşılaştırılmıştır (* = p &lt; 0,05, ** = p &lt; 0,01, *** = p &lt; sırasıyla 0,001). Tedavi grubu başına n = 10-11 fare. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51212/51212fig1highres.jpg" target="_blank">Daha büyük resmi görüntülemek için buraya tıklayın</a>.
<img alt="Salin ve B. jararaca etkilerinin 400x ve 1000x büyütme altında histolojik karşılaştırması." fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51212/51212fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Şekil 2"> 
Şekil 2. B. jararaca zehirinin neden olduğu mekanik hassasiyete, ND4 Swiss erkek farelerin arka pençelerinde mast hücresi degranülasyonu ve nötrofil infiltrasyonu eşlik etmektedir. Tedaviden 1,5 saat sonra her grup için 3 fare CO2 ile ötanize edildi ve arka pençeleri çıkarılıp 24 saat boyunca %10'luk formalinde saklandı, ardından %70'lik etanola aktarıldı, 1-2 hafta boyunca %15'lik EDTA ile dekalsifiye edildi ve parafine gömüldü. Nötrofilleri (A-B) ve mast hücrelerini (C-D) görüntülemek için 4 µm'lik sagital kesitler sırasıyla hematoksilin-eozin (A-B) ve toluidin mavisi (C-D) ile boyandı. Görüntüler, belirtildiği üzere 400X ve 1.000X büyütmelerde elde edildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51212/51212fig2highres.jpg" target="_blank">Daha büyük görüntüyü görüntülemek için buraya tıklayın</a>. 
<img alt="Neutrophils and degranulation by B. jararaca venom; bar graph; venom impact analysis." fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51212/51212fig3.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 3"> 
Şekil 3. B. jararaca Zehirle tetiklenen mekanik hassasiyete, ND4 Swiss erkek farelerin arka patilerinde mast hücre degranülasyon seviyelerinde ve nötrofil girişinde meydana gelen belirgin artışlar eşlik etmektedir. Boyanmış doku kesitlerindeki nötrofiller ve mast hücreleri, bir Olympus CX21LED mikroskobu kullanılarak sayıldı. Nötrofiller, her işlem grubu için 3 arka patide, topuktan parmak uçlarına kadar, 400X büyütmede yan yana gelen görüş alanlarında sayıldı. (A). Mast hücreleri, her grup için 3 ayak tabanında sayıldı ve degranülasyon durumları, hücre sınırının dışında görülen granül sayısına göre; daha önce açıklandığı üzere; sağlam (0), hafif (0-10), orta (10-20), yaygın (21+) şeklinde skorlandı.10 (B).  Aynı hücrelerin iki kez sayılmasını önlemek için, arka pençe kesitlerinde nötrofil sayılarını ve mast hücresi degranülasyon seviyelerini değerlendiren araştırmacılar, oküler retikülüne işlenmiş bir ızgara kullandılar. Araştırmacılar, uygulanan tedaviye karşı körleme yöntemine tabi tutulmuştur.s. Anlamlılıklar, Sal ile tedavi edilen farelerle karşılaştırılmıştır (* = p &lt; 0,05, ** = p &lt; 0,01, *** = p &lt; sırasıyla 0,001). Tedavi grubu başına n = 3 fare.  <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51212/51212fig3highres.jpg" target="_blank">Daha büyük resmi görüntülemek için buraya tıklayın</a>.

Elektronik von Frey ölçümleri, enflamatuar bir olaydan önce ve sonra sürekli olarak uygulanan basınç uyaranlarına kemirgen mekanik çekilme eşiklerindeki değişikliklerin hızlı ve hassas bir şekilde ölçülmesine izin verdiği için klasik von Frey filamentlerine etkili ve geliştirilmiş bir alternatiftir.

Elektronik von Frey aparatı kullanarak farelerin arka pençesindeki dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçülmesi

Measuring inflammation-induced changes in thresholds of hind paw withdrawal from mechanical pressure is a useful technique to assess changes in pain ...

Bu prosedürün genel amacı, farelerin arka patilerindeki mekanik basınca karşı duyarlılık tepkilerini ölçmektir. Bu işlem, öncelikle hayvanların tel örgü bir zemine yerleştirilmesi ve hazır olduklarında alışmalarının sağlanmasıyla gerçekleştirilir. Arka patinin altına polipropilen bir uç uygulanır ve basınç kademeli olarak artırılır.Uygun davranışsal yanıt gözlemlendiğinde, uyaran geri çekilir. Bazal değerler toplandıktan sonra, hayvanlara daha fazla test yapılmadan önce deneysel bir müdahale uygulanır. Son olarak, belirli bir tedavinin basınçla tetiklenen taktil hassasiyetteki değişimler üzerindeki etkisini belirlemek amacıyla, arka pençe çekilme eşiklerindeki değişimler tedavi grupları arasında karşılaştırılır.Ağrı, inflamasyonun temel bir bileşenidir. Ağrının farklı bağlamlarda ölçülmesi ve karakterize edilmesi önemlidir. Bu nispeten basit ağrı değerlendirme yöntemi, birçok farklı inflamasyon modeline uygulanabilir.Prosedür, laboratuvarımdaki araştırma teknisyeni Tiana ov, bu çalışmada lisans öğrencisiyken yer alan Madison Mack ve şu anda laboratuvarımda lisans öğrencisi olan Akila Sykes tarafından uygulamalı olarak gösterilecektir. Arka patilere kolay erişim sağlamak için test düzeneğini kurarak başlıyoruz. Münferit bölmeleri tel örgü tabanın üzerine yerleştirin. Tel örgü taban, uygun bir yükseklikte ve sağlam bir yüzey üzerinde olmalıdır. Ardından, elektronik Von Frey cihazını tezgahın üzerine yerleştirin.Probun ve kablonun ekran ünitesine uygun şekilde bağlandığından emin olun ve cihazı kurulum modunda açın. Okumayı sıfırlayın ve verilen test ağırlığını nazikçe Von Frey probunun konisinin üzerine yerleştirin. Okunan değeri kaydedin ve bu prosedürü testin sonunda tekrar uygulayın; iki değer arasında fark varsa, cihazın yeniden kalibre edilmesi gerekebilir.Test edilecek doku için uygun boyutta bir polipropilen uç seçin. Sert uçlar, daha az hassas olan, daha dayanıklı arka pati dokusu için uygundur. Ucu, probun konisine nazikçe yerleştirin.Ardından kurulum modundan çalışma moduna geçin. Bu işlem, prob geri çekildiğinde uygulanan maksimum basıncı görüntüleyecektir. Arka pençe çekilme eşiklerini ölçmek için iki araştırmacı gereklidir.Yanlılığı azaltmak amacıyla, bir kişi cihazı çalıştırmak ve ölçümleri gerçekleştirmek, bir diğeri ise bu ölçümleri kaydetmekle görevlendirilir. Anestezi cihazını kullanan araştırmacı, hem uygulanan tedavilere hem de kaydedilen çekilme eşiği değerlerine karşı körlenmiş olmalıdır. Ayrıca, ölçümler arasında tutarlılığı sağlamak için tüm bazal ve çekilme eşiği değerleri aynı kişi tarafından kaydedilmelidir.Tedaviden 48 saat önce, ilk bazal ölçümler kaydedilir. Boşaltım atıklarını toplamak için standın altına emici malzeme yerleştirin. Uç takılıp prob sıfırlandıktan sonra, ölçümleri kaydeden deneyci fareleri ayrı bölmelere yerleştirmelidir.Odacıkları delikli kapaklarla kapatın ve üzerine ağır bir nesne yerleştirin. Farelerin kaçmasını önlemek için, işleme devam etmeden önce farelerin 15 dakika boyunca odacığa alışmasını sağlayın. Genellikle bu tekniği ilk kez deneyen kişiler, basıncın kademeli olarak artırılmasında ve kendi ölçümleri arasında iç tutarlılık sağlamada zorluk çekerler; tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için pratik yapmak esastır.Hazır olduğunda, probu iki elle yavaşça kaldırın ve sol veya sağ arka pençenin ayak tabanını stimüle edin. Nosiseptif bir davranış gözlemlenene kadar basıncı kademeli olarak artırın. Bu davranışlar; arka pençenin geri çekilmesi, arka pençenin yalanması veya pençeyle zıplama şeklinde tanımlanır.Diğer araştırmacıya, gözlemlenen davranışı tetikleyen basıncı kaydetmesini söyleyin. Ölçüm sırasında, oda dışına bir yem paleti yerleştirerek veya ölçüm alınmadan önce hafifçe vurmak gibi küçük bir ses çıkararak fareyi hareketsiz durmaya teşvik etmek faydalıdır. Her fare bir kez test edilene kadar bir sonraki fareyle devam edin ve bu prosedürü dört kez daha tekrarlayın.Beş bazal değer toplandıktan sonra, her fare için bir ortalama hesaplayın. Bazal ölçümleri 24 saat sonra tekrarlayın ve bu değerleri kullanarak başka bir ortalama hesaplayın. Tüm farelerin tutarlı bazal tepkilere sahip olduğundan emin olmak için, ortalama bazal geri çekilme eşiği 3,5 gramın altında olan veya bazal eşikleri arasında iki gram veya daha fazla fark olan hayvanları hariç tutun.Son olarak, fareleri, her bir grubun ortalama yoksunluk temel çizgisi birbirine mümkün olduğunca benzer olacak şekilde ayrı tedavi gruplarına ayırın. Burada, yoksunluk eşikleri arka pençeye venom uygulamasından sonra ölçülmüştür. Salin ile tedavi edilen kontrol fareleri, tüm zaman dilimlerinde temel çizgiye kıyasla çok az değişim göstermiştir.İşlem görmüş farelerde test edilen nosiseptif yanıtların altı saate kadar net bir şekilde korunduğu görülmüştür. Ayrıca, inflamasyonun karakteristik bir özelliği olan doku ödemi, sadece venom uygulanan arka patilerde belirginleşmiş, salin uygulananlarda ise görülmemiştir. Venomun taktil hassasiyette yol açtığı değişimlere, yaklaşık 1000 katlık bir nötrofil infiltrasyonu eşlik etmiştir.Salin ile işlem görmüş arka patilerle karşılaştırıldığında, salin ile işlem görmüş patilerdeki plantar mast hücreleri büyük ölçüde sağlam kalmış veya hafif degranülasyon göstermiştir. Buna karşılık, çiftleşmiş arka patilerde mast hücrelerinin %15 ila %20'sinde orta ve yaygın degranülasyon görülmüştür. Bu teknik, arka pati dışındaki çok çeşitli dokularda mekanik veya taktil hassasiyeti değerlendirmek için uyarlanabilir.Bu nedenle, bu teknik birçok farklı kemirgen inflamasyon ve ağrı modeline entegre edilebilir.

measuring-changes-tactile-sensitivity-hind-paw-mice-using-an

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Farelerin Arka Pençesinde Elektronik von Frey Cihazı Kullanarak Dokunma Hassasiyetinde Değişiklikleri Ölçmek

Ayrılan Sinir Sakatlık hayvan modeli kalan sural sinir zedelemeden, siyatik sinirin kısmi denervasyon aşağıdaki tibial ve peroneal sinir dallarının lezyon periferik nöropatik ağrı bir fare modeli olarak burada açıklanmıştır. Mekanik allodini kaynaklanan davranış değişikliği von Frey filamentler miktarı.

Fare İndüklenmiş Mekanik allodini ayrılan sinir hasarı (SNI) Model

Biz ratlarda spinal kord yaralanmasının akut veya kronik dönemlerde iki dokunma duyusal test yöntemleri açıklanmaktadır. Bu onaylanmış prosedürler allodini gibi duyumların geliştirme ve bakım algılayabilir.

Sıçanlarda Spinal Kord Yaralanma sonrası Akut ve Kronik Dokunsal Duyu Testi

Cerrahi basitlik ve sağlam davranışsal sonuçları nedeniyle, siyatik sinirin kronik daralma nöropatik ağrı seçkin hayvan modelleri biridir. Ameliyat sonrası 24 saat içinde, ağrı aşırı duyarlılık kurulan ve kantitatif bir von Frey aesthesiometer (mekanik test) ve plantar analjezi metre (termal testi) kullanılarak ölçülebilir.

Siyatik Sinir Sıçanlarda Ağrı aşırı duyarlılık Test Kronik daraltma

Nöropatik ağrı somatosensory sistemini etkileyen bir yara ya da hastalık, bir sonucudur. Farelerde nöropatik ağrı "ağzı model" siyatik sinirin ana dal etrafında bir polietilen manşetin implantasyon oluşur. Mekanik alodinia von Frey filamentleri kullanılarak test edilir.

Farelerde Nöropatik Ağrı Siyatik Sinir cuffing Modeli

Burada, protokolleri insanda psikofiziksel yöntemler kullanılarak titreşim algılama eşikleri ve dokunsal keskinliği belirlemek için sunuyoruz.

İnsan Bireylerde Titreşim Algılama Eşiği ve Tactile Mekansal Keskinliği Ölçümü

Ağrı yanıt nöropatik hayvan modeli olarak hassas bir değerlendirme ağrı hastalıkları Patofizyoloji araştırmak ve yeni analjezikler geliştirmek çok önemlidir. Biz bir otomatik yürüyüş analizi sistemi tarafından hind pençe kemirgen duyusal işlev belirlemek için hassas ve objektif bir yöntem mevcut.

Kronik daralma Yaralanmalı farelerde otomatik yürüyüş analizi

Bu çalışmada deneysel bir model saf küçük fiber nöropati ile resiniferatoxin (RTX) kurar. RTX benzersiz bir doz (50 µg/kg) hasta özellikleri taklit eden bir küçük fiber nöropati modeli geliştirmek için en uygun ve nöropatik ağrı altında yatan nosiseptif moleküler önemini araştırmak yardımcı olabilir.

Saf küçük Fiber nöropati bir fare modeli ile geçici reseptör potansiyel Vanilloid tip 1 Ultrapotent Agonist kurulması

Modifiye cerrahi, hem ortak peroneal hem de sural sinirleri yaralamak için sadece bir ligasyon ve bir kesi gerektiren fare veya sıçan korunmuş sinir yaralanması modeli için basitleştirilmiş bir yöntemdir.

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Farelerde sırt ağrısı modelinin basit, hızlı indüksiyonu için yöntemler burada idrar plazminojen aktivatörünün intraligament enjeksiyonu kullanılarak sağlanmaktadır.

Ürokinaz tipi Plazminojen Aktivatörü ile İndüklenen Fare Sırt Ağrısı Modeli

Parsiyel siyatik sinir ligasyonu, termal ve mekanik uyaranlara abartılı tepkilerle karakterize uzun süreli kronik nöropatik ağrıya neden olur. Nöropatik ağrının bu fare modeli, ağrı yönetimi için yenilikçi terapileri incelemek için yaygın olarak kullanılır. Bu makalede, standardizasyonu ve tekrarlanabilirliği artırmak için cerrahi prosedür ayrıntılı olarak anlatılmaktadır.

Kısmi Siyatik Sinir Ligasyonu: Yeni Tedavilerin Antinosiseptif Etkisini İncelemek için Kronik Nöropatik Ağrının Bir Fare Modeli

Burada, Trypanosoma evansi ile enfekte olmuş farelerde nosisepsiyonu değerlendirmek için, elektronik von Frey aparatını bir araç olarak kullanarak, arka pençe ve iç organların mekanik eşiklerini ölçen bir protokol sunuyoruz.

Elektronik von Frey, Trypanosoma evansi ile Enfekte Farelerde Allodini ve Ağrıyı Değerlendirmek için Fare Yüz Buruşturma Ölçeği ile ilişkili

Öğrenin farelerin arka pençesinde mekanik hassasiyeti ölçmek için elektronik von Frey yöntemini. Bu teknik, enflamatuvar ağrı mekanizmalarını anlamak ve tedavi etkinliğini değerlendirmek için hassas geri çekilme eşikleri sağlar.

Elektronik von Frey aparatı kullanarak farelerin arka pençesindeki dokunsal hassasiyetteki değişikliklerin ölçülmesi

Daha fazla video keşfet