Name: RNA Virüslerinin geniş spektrumlu Kimyasal Önleyicileri için yüksek verimli tarama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-05T16:15:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Öğrenin, kızamık ve chikungunya virüsleri için yüksek verimli tarama ile geniş spektrumlu antiviral bileşikleri nasıl izole edeceğinizi. Luciferaz tabanlı ölçümlerle replikasyon ve toksisite değerlendirmesi yapın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz onun verimli görüş ve önerileriniz için Dr Yves L. Janin teşekkür ederim. Biz onu teknik destek için CHIK / Ren ve C. Combredet HH Gad teşekkür etmek istiyorum. Pasteur İlletler Infectieuses (POV&#39;un için Program Sting ve HM-- Bu çalışma Institut Pasteur, Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS), Institut National de la Sante et de la Recherche Médicale (INSERM), Institut Carnot tarafından desteklenen L), Agence Nationale la Recherche POV&#39;un için (ANR-RPIB, Program STING 2.0) ve &quot;Conseil Régional d&#39;Ile-de-France&quot; (Kimyasal Kütüphane Projesi dökmek, hibe n I 06-222 / R ° ve ben HM-L 09-1739 / R.). CHIKV / Ren üzerindeki çalışmalar proje ArbOAS tarafından desteklenmiştir (ANR hibe 2010-INTB-1601-02).

Bileşikler ile 96 oyuklu kızı Plakaların 1. Hazırlanması <ol><li> Oda sıcaklığına kadar -20 ° C DMSO kimyasal bileşiklerin 10 mM stok çözeltileri ihtiva eden 96 oyuklu plakalar ana hareket ettirin. Seyreltik bileşikler, 2 mM&#39;de orta 96 oyuklu plakalar seyreltme elde etmek üzere DMSO içinde 5 kat. Seyreltme DMSO içinde 20 ul içine 5 ul pipetleme ve karıştırılarak elde edilir. </li><li> Pipet beyaz, bar kodlu doku kültürü, 96 oyuklu plakaların kuru kuyu içine seyreltme plakalarından 1 ul. Kız plakalar (D1) bu ilk set 20 uM nihai konsantrasyonda bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için kullanılacaktır. -20 ° C&#39;de kullanıma kadar saklayın kızı plakalar. </li><li> DMSO ve karıştırma 36 ul halinde seyreltme plakalarından 4 ul pipetleme ile yeniden bileşikleri 1:10 seyreltin. Beyaz, düz dipli, bar kodlu doku kültürü 96-kuyu tabak kuru kuyu içine Pipet 1 ul. Kız plakalar (D2) bu ikinci grubu PD replicatio inhibisyonunu değerlendirmek için kullanılacaktır2 uM nihai konsantrasyonda bileşiklerle n. -20 ° C&#39;de kullanıma kadar saklayın kızı plakalar. </li></ol> 2.. Hücre Kültürlerinin Hazırlanması Bileşik toksisitesini belirlemek için <ol><li> 37 ° C&#39;de HEK-293T hücrelerin büyümesine ve% 5 CO2 Dulbecco tadil edilmiş Eagle ortamı (DMEM) içinde stabilize L-glutamin ve% 10 fetal buzağı serumu (FCS), streptomisin (100 ug / ml) ve penisilin (100 ile IU / ml). Hücreler, her 4-5 gün tripsinizasyon ile geçişli ve yeni bir şişe içine 1:10 seyreltilir. Hücreler, deney için log fazında olmalıdır. </li><li> Deney gününde, hücreler tripsinizasyon ile geri ve hücre sayımı gerçekleştirin. Pelet santrifüj ile hücreler ve kültür ortamı içinde 3 x 10 5 hücre / ml &#39;de tekrar süspansiyon bunları. Hücre süspansiyonu 12.5 ml, her tarama plakası için gerekli olduğunu göz önünde bulundurun. </li><li> Transfer oluğuna hücreleri ve kirpi kimyasal alçı ihtiva eden D1 plakalar içinde hücre süspansiyonu 100 ul dağıtmakunds. Oluk içinde hücre süspansiyonu düzenli tortulaşmayı önlemek için karıştırılır. </li><li> 1 ul DMSO ile kontrol kuyuları A1, C1, E1, G1, A12, C12, E12 ve G12 başak. Karşılık gelen kuyu canlı hücreler için bir referans (toksisite) olarak kullanılacaktır. Kontrol kuyuları B1 başak, D1, F1, H1, 1 ul DMSO ve hücreleri öldürmek için bir 0.5% IGEPAL çözeltisi 2.5 ul B12, D12, F12 ve H12. Karşılık gelen kuyu ölü hücreleri için bir referans (yüksek toksisite) olarak kullanılacaktır. </li><li> 37 ° C&#39;de 24 saat boyunca inkübe edin ve hücreleri,% 5 CO2. </li></ol> RMV2/Luc tarafından enfekte Hücre Kültürleri 3. Hazırlanması <ol><li> Büyüme ve 2.1 ve 2.2 &#39;de açıklandığı gibi hücreleri kurtarmak. Yine, kültür ortamı içinde 3 x 10 5 hücre / ml &#39;de tekrar süspansiyon hücreleri. Hücre süspansiyonu 12.5 ml, her tarama plakası için gerekli olduğunu göz önünde bulundurun. </li><li> İsteğe bağlı: 20 ug / ml &#39;de ek üridin ile kültür ortamı. Not: viral replicatio için kimyasal kütüphanelerinin taranması zamann inhibitörleri, bu pirimidin biyosentez yolunun erken aşamaları hedefleme bileşikleri sık sık 13,16,27,28 izole gibi görünüyor. Kültür ortamına üridinin ilavesi gibi antiviral molekülleri filtrelemek için kullanılır. Gerçekten de, bu etkin bir pirimidin biyosentez yolunun üst enzimler engellenir viral replikasyonu yükler. </li><li> Enfekte edilmemiş hücreler ile kontrol kuyuları için hücre süspansiyonu 01:10 to ve kalan hacmi ile enfeksiyon geçin. </li><li> RMV2/Luc stok çözeltinin uygun hacmi çözülme. MV stok solüsyonları ml başına 10 6 -10 8 enfeksiyöz partiküller genellikle. Kültür enfeksiyon (MOI) 0.1 çokluğu karşılık gelen hedef hücre başına rMV2/Luc 0.1 bulaşıcı parçacıklar, ile enfekte olması gerekir. Not: rMV2/Luc PD aşısı (Schwarz suşu) elde edilir ve bir BSL2 ortamda değiştirilebilir. </li><li> Hücre süspansiyonu virüs ekleyin ve hafifçe karıştırın. Bir çukur enfekte hücreleri aktarın ve 100 dağıtmaksütun 2 çivili kimyasal bileşikleri ihtiva eden D2 plakaları 11 olarak enfekte edilmiş hücre süspansiyonu ul. Oluk içinde hücre süspansiyonu düzenli yavaşça karıştırılır. </li><li> Sütun 1 ve 12&#39;de, 100 non-enfeksiyonlu hücrelerin ul iyi olarak iki tane dağıtmak. Enfekte hücreler, diğerleri kuyularda dağıtılır. </li><li> 37 ° C&#39;de 24 saat boyunca inkübe edin ve hücreleri,% 5 CO2. </li></ol> 4. Lüsiferaz Aktivite Önlemleri ve Veri Analizi <ol><li> Inkübatörden D1 plakaları çıkarın ve doğrudan kültür çukurlarına lusiferaz tabanlı canlılığı maddesi 50 ul eklenmesi ile hücre canlılığı belirler. Karıştırınız ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca inkübe edilir. Bir lüminometre ile plakaları okuyun. Entegrasyon zamanı kuyunun başına 100 milisaniye olarak belirlenmiştir. </li><li> Inkübatörden D2 plakaları çıkarın ve doğrudan kültür çukurlarına lusiferaz alt-tabaka, 50 ul ekleyerek lusiferaz aktivitesinin belirlenmesi. Oda sıcaklığında 6 dakika boyunca inkübe edin ve anlatıldığı şekilde bir lüminometre ile plakaları okuYukarıdaki yatak. </li><li> Ekranın 29 kalitesini garanti etmek için toksisite deneyi her bir D1 bir plaka için Z&#39;-faktörü hesaplanır. Μ + ve σ + yalnız DMSO ile HEK-293T hücreleri için parlaklık ve standart sapmalar (toksisite) vasıtasıyla tekabül - (μ-, Z &#39;= 1-3 * (σ + + σ-) / μ +) ve μ-ve ışık yayılımı ve hücrelerini öldürmek için Igepal işlemden kültür çukurlarına için standart sapma anlamına gelir σ-bulunmaktadır. Z &#39;, 0.5&#39; in yukarısında olması beklenen, veya karşılık gelen plaka atılır. </li><li> Μ + / 2 toksisite eşiğini ayarlayın. Bu cut-off (Şekil 3A) altında ışıldama değerleri ile bileşikler atın. </li><li> Antiviral tahlil D2 her bir plaka için Z&#39;-faktörü hesaplanır. Burada, μ + ve σ + yalnız DMSO ile enfekte kültürlenmiş hücreler için parlaklık ve standart sapmaların araçlarına karşılık gelir ve μ-ve enfekte olmayan hücreler için parlaklık ve standart sapmaları araçları σ-bulunmaktadır. Yine, Z &amp; # ile plakaları39; 0,5 altındaki değerler de göz ardı edilir. </li><li> - / (Μ + - μ-) x 100 = (bileşik X lusiferaz aktivitesi μ +) inhibisyon yüzdesi: aşağıdaki gibi viral replikasyonun inhibisyonunu hesaplayın. % 75 inhibisyon eşik ayarlayın, hem de bu cut-off (Şekil 3B) altında ışıldama değerlerini azaltmak ve 4.4 açıklanan kriterlere göre toksik olmayan bileşikler seçin. </li></ol> Toksisite ve Geniş spektrumlu Antiviral Aktivite 5. İkincil Ekran <ol><li> Her biri için 1:2 dizi sulandırmalar 500 uM 4 uM (8 seyreltme) başlanarak DMSO içerisinde bileşik isabet olun. Kültür ortamında 50 ul ile beyaz, bar kodlu doku kültürü plakaları doldurun. Kültür kuyularda Her bileşik seyreltmesinin 1 ul ekle. Her hit bileşik için çift seri seyreltileri ile 3 kültür plakaları iki kez tekrarlayın. </li><li> (Yukarıda tarif edildiği gibi kültür ortamı içerisinde 6 x 10 5 hücre / ml &#39;de bir HEK-293T hücre süspansiyonu hazırlamak 37.5 ml 2.1 ve 2.2). Falcon tüplerde 2x 12.5 ml dağıtın ve MOI&#39;da rMV2/Luc ile ya hücreleri enfekte = 0.1 ya da MOl&#39;de Renilla lusiferaz (CHIKV / Ren) ifade eden biraraya getiren CHIKV = 0.2. Ters çevirerek karıştırın. Not: CHIKV / Ren CHIKV bir vahşi tip suşu elde edilir ve bu nedenle bir BSL3 ortamda temas edilmelidir. Renilla alt-tabaka kültür çukurlarına eklenmiştir sonra levhalar (aşağıya bakınız) BSL1 için BSL3 taşınmış olabilir. </li><li> Hit bileşiklerinin seri seyreltmeleri içeren kültür plakaları içinde, enfekte olmamış rMV2/Luc-infected veya CHIKV / Ren-enfekte edilmiş hücreler, 50 ul koyun. 37 ° C&#39;de 24 saat inkübe </li><li> RMV2/Luc-infected kuyularda ateş böceği lusiferaz aktivitesinin belirlenmesi için, ateş böceği lusiferaz alt-tabaka 50 ul ekle. CHIKV / Ren-enfekte kuyuda Renilla lusiferaz aktivitesinin belirlenmesi için Renilla lusiferaz alt-tabaka 50 ul ekle. Son olarak, hücre yaşayabilirliği belirlemek için, enfekte olmamış hücrelere lusiferaz tabanlı canlılığı tahlil maddesi 50 ul ekle. </li><li> Arsa veri (FiGüre 4) ve% 50 MV ve CHIKV çoğalmasını inhibe vurmak bileşik konsantrasyonları belirler. Bu deneyde bir toksisite gösteren bileşiği göz ardı. </li></ol>

<ol><li>De Clercq, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiviral+drugs+in+current+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Virol%22%5BJournal%5D)">Antiviral drugs in current clinical use.</a> J Clin Virol. 30, 115-133 (2004).</li>
<li>Debing, Y., Jochmans, D., Neyts, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intervention+strategies+for+emerging+viruses%3A+use+of+antivirals%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Virol%22%5BJournal%5D)">Intervention strategies for emerging viruses: use of antivirals.</a> Curr Opin Virol. , (2013).</li>
<li>Leyssen, P., De Clercq, E., Neyts, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+strategies+to+inhibit+the+replication+of+RNA+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Res%22%5BJournal%5D)">Molecular strategies to inhibit the replication of RNA viruses.</a> Antiviral Res. 78, 9-25 (2008).</li>
<li>Leyssen, P., Balzarini, J., De Clercq, E., Neyts, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+predominant+mechanism+by+which+ribavirin+exerts+its+antiviral+activity+in+vitro+against+flaviviruses+and+paramyxoviruses+is+mediated+by+inhibition+of+IMP+dehydrogenase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">The predominant mechanism by which ribavirin exerts its antiviral activity in vitro against flaviviruses and paramyxoviruses is mediated by inhibition of IMP dehydrogenase.</a> J Virol. 79, 1943-1947 (2005).</li>
<li>Wang, B. X., Fish, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+yin+and+yang+of+viruses+and+interferons%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">The yin and yang of viruses and interferons.</a> Trends Immunol. 33, 190-197 (2012).</li>
<li>Empey, K. M., Peebles, R. S., Kolls, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologic+advances+in+the+treatment+and+prevention+of+respiratory+syncytial+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Pharmacologic advances in the treatment and prevention of respiratory syncytial virus.</a> Clin Infect Dis. 50, 1258-1267 (2010).</li>
<li>Tan, S. L., Ganji, G., Paeper, B., Proll, S., Katze, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems+biology+and+the+host+response+to+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Systems biology and the host response to viral infection.</a> Nat Biotechnol. 25, 1383-1389 (2007).</li>
<li>Prussia, A., Thepchatri, P., Snyder, J. P., Plemper, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+Approaches+towards+the+Development+of+Host-Directed+Antiviral+Therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Systematic Approaches towards the Development of Host-Directed Antiviral Therapeutics.</a> Int J Mol Sci. 12, 4027-4052 (2011).</li>
<li>Connolly, D. J., O'Neill, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+developments+in+Toll-like+receptor+targeted+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">New developments in Toll-like receptor targeted therapeutics.</a> Curr Opin Pharmacol. , (2012).</li>
<li>Thakur, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+activators+of+RNase+L+with+broad-spectrum+antiviral+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Small-molecule activators of RNase L with broad-spectrum antiviral activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 9585-9590 (2007).</li>
<li>Shoji-Kawata, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+candidate+therapeutic+autophagy-inducing+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of a candidate therapeutic autophagy-inducing peptide.</a> Nature. 494, 201-206 (2013).</li>
<li>Hoffman, E. S., Smith, R. E., Renaud, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+the+analyst%27s+couch%3A+TLR-targeted+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">From the analyst's couch: TLR-targeted therapeutics.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 879-880 (2005).</li>
<li>Bonavia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+broad-spectrum+antiviral+compounds+and+assessment+of+the+druggability+of+their+target+for+efficacy+against+respiratory+syncytial+virus+%28RSV%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Identification of broad-spectrum antiviral compounds and assessment of the druggability of their target for efficacy against respiratory syncytial virus (RSV).</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108, 6739-6744 (2011).</li>
<li>Rider, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broad-spectrum+antiviral+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Broad-spectrum antiviral therapeutics.</a> PLoS One. 6, (2011).</li>
<li>Krumm, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potent+host-directed+small-molecule+inhibitors+of+myxovirus+RNA-dependent+RNA-polymerases%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Potent host-directed small-molecule inhibitors of myxovirus RNA-dependent RNA-polymerases.</a> PLoS One. , (2011).</li>
<li>Hoffmann, H. H., Kunz, A., Simon, V. A., Palese, P., Shaw, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Broad-spectrum+antiviral+that+interferes+with+de+novo+pyrimidine+biosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Broad-spectrum antiviral that interferes with de novo pyrimidine biosynthesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108, 5777-5782 (2011).</li>
<li>Harvey, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GSK983%3A+a+novel+compound+with+broad-spectrum+antiviral+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Res%22%5BJournal%5D)">GSK983: a novel compound with broad-spectrum antiviral activity.</a> Antiviral Res. 82, 1-11 (2009).</li>
<li>Swinney, D. C., Anthony, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+were+new+medicines+discovered%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">How were new medicines discovered.</a> Nat Rev Drug Discov. 10, 507-519 (2011).</li>
<li>Jochmans, D., Leyssen, P., Neyts, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+high-throughput+screening+to+quantify+antiviral+activity+against+viruses+that+induce+limited+CPE%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel method for high-throughput screening to quantify antiviral activity against viruses that induce limited CPE.</a> J Virol Methods. 183, 176-179 (2012).</li>
<li>Puig-Basagoiti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+assays+using+a+luciferase-expressing+replicon%2C+virus-like+particles%2C+and+full-length+virus+for+West+Nile+virus+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">High-throughput assays using a luciferase-expressing replicon, virus-like particles, and full-length virus for West Nile virus drug discovery.</a> Antimicrob Agents Chemother. 49, 4980-4988 (2005).</li>
<li>Panchal, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+high-content+imaging+assays+for+lethal+viral+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Development of high-content imaging assays for lethal viral pathogens.</a> J Biomol Screen. 15, 755-765 (2010).</li>
<li>Pohjala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitors+of+alphavirus+entry+and+replication+identified+with+a+stable+Chikungunya+replicon+cell+line+and+virus-based+assays%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inhibitors of alphavirus entry and replication identified with a stable Chikungunya replicon cell line and virus-based assays.</a> PLoS One. 6, (2011).</li>
<li>Zou, G., Xu, H. Y., Qing, M., Wang, Q. Y., Shi, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+a+stable+luciferase+dengue+virus+for+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Res%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of a stable luciferase dengue virus for high-throughput screening.</a> Antiviral Res. 91, 11-19 (2011).</li>
<li>Thorne, N., Inglese, J., Auld, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Illuminating+insights+into+firefly+luciferase+and+other+bioluminescent+reporters+used+in+chemical+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Illuminating insights into firefly luciferase and other bioluminescent reporters used in chemical biology.</a> Chem Biol. 17, 646-657 (2010).</li>
<li>Komarova, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+virus-host+interactions+in+an+infectious+context+using+recombinant+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of virus-host interactions in an infectious context using recombinant viruses.</a> Mol Cell Proteomics. , (2011).</li>
<li>Henrik Gad, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+E2-E166K+substitution+restores+Chikungunya+virus+growth+in+OAS3+expressing+cells+by+acting+on+viral+entry%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">The E2-E166K substitution restores Chikungunya virus growth in OAS3 expressing cells by acting on viral entry.</a> Virology. 434, 27-37 (2012).</li>
<li>Wang, Q. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+dengue+virus+through+suppression+of+host+pyrimidine+biosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of dengue virus through suppression of host pyrimidine biosynthesis.</a> J Virol. 85, 6548-6556 (2011).</li>
<li>Smee, D. F., Hurst, B. L., Day, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D282%2C+a+non-nucleoside+inhibitor+of+influenza+virus+infection+that+interferes+with+de+novo+pyrimidine+biosynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Antivir+Chem+Chemother%22%5BJournal%5D)">D282, a non-nucleoside inhibitor of influenza virus infection that interferes with de novo pyrimidine biosynthesis.</a> Antivir Chem Chemother. 22, 263-272 (2012).</li>
<li>Zhang, J. H., Chung, T. D., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Statistical+Parameter+for+Use+in+Evaluation+and+Validation+of+High+Throughput+Screening+Assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A Simple Statistical Parameter for Use in Evaluation and Validation of High Throughput Screening Assays.</a> J Biomol Screen. 4, 67-73 (1999).</li>
<li>Qing, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+dengue+virus+resistance+to+brequinar+in+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Characterization of dengue virus resistance to brequinar in cell culture.</a> Antimicrob Agents Chemother. 54, 3686-3695 (2010).</li>
<li>Munier-Lehmann, H., Vidalain, P. O., Tangy, F., Janin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+dihydroorotate+dehydrogenases+and+their+inhibitors+and+uses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">On dihydroorotate dehydrogenases and their inhibitors and uses.</a> J Med Chem. 56, 3148-3167 (2013).</li>
<li>Yoon, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening-based+identification+of+paramyxovirus+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening-based identification of paramyxovirus inhibitors.</a> J Biomol Screen. 13, 591-608 (2008).</li>
<li>Maréchal, E., Roy, S., Lafanechère, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMar%C3%A9chal%2C+E+%22Chemogenomics+and+Chemical+Genetics%3A+A+User%27s+Introduction+for+Biologists%2C+Chemists+and+Informaticians%22">Chemogenomics and Chemical Genetics: A User's Introduction for Biologists, Chemists and Informaticians</a>. , Springer. (2011).</li>
<li>Gentzsch, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+C+virus+complete+life+cycle+screen+for+identification+of+small+molecules+with+pro-+or+antiviral+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Res%22%5BJournal%5D)">Hepatitis C virus complete life cycle screen for identification of small molecules with pro- or antiviral activity.</a> Antiviral Res. 89, 136-148 (2011).</li>
<li>Caignard, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+V+protein+of+Tioman+virus+is+incapable+of+blocking+type+I+interferon+signaling+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The V protein of Tioman virus is incapable of blocking type I interferon signaling in human cells.</a> PLoS One. 8, (2013).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Burada açıklanan tarama hattı RNA virüslerinin geniş spektrumlu inhibitörleri olarak uygun bir profili olan bileşiklerin seçilmesi amaçlamaktadır. 10000 bileşiklerinin bir kütüphane bu protokol ve belirtilen kriterleri filtreleme uygulanmıştır ile tarandı zaman,% 75, 40 bileşikleri (% 0.4) daha üstün PD replikasyonunun inhibisyonu, yani pozitif attı. Bunun yanı sıra, bunların yaklaşık yarısı lusiferaz tabanlı canlılığı deneyde bir toksisite göstermiştir ve bu nedenle göz ardı edilmiştir. Son olarak, büyük bir m...

RNA virüsleri, insan enfeksiyonlarına çok çeşitli sorumludur, hem halk sağlığı ve ekonomik maliyet açısından dünya nüfusu üzerinde büyük bir etkisi var. Etkin aşıların pek çok insan RNA virüslerine karşı geliştirilmiş ve yaygın olarak profilaktik tedavi olarak kullanılır. Ancak, RNA virüs enfeksiyonlarına karşı tedavi edici ilaçların önemli bir eksikliği var. Gerçekten de, verimli bir aşı, dang virüsü, Hepatit C virüsü ya da insan solunum sinsisyal virüsü (hRSV) gibi büyük, insan patojenlerine karşı mevcut değildir. Ayrıca, RNA virüsleri, çünkü küresel değişim ve ekolojik sistemler üzerindeki insan etkisi sıklığı arttı ortaya çıkan hastalıkların bir çoğunluğu sorumludur. RNA virüsleri temsil Bu tehdide karşı, bizim terapötik arsenal son derece sınırlı ve 1-3 nispeten verimsizdir. Mevcut tedaviler esas itibariyle, doğuştan bağışıklığı uyarmak için rekombinant tip I interferonlar (IFN-α / β) dayanmaktadırya da ribavirin yönetimi. Bu ribonükleosit analog etkime şekli tartışmalıdır ve muhtemelen çeşitli mekanizmalar kullanır, ancak, hücre içi GTP havuzları tüketen hücresel İMPDH (inosin monofosfat dehidrogenaz) inhibisyonu, 4 açıkça gereklidir. Ribavirin, pegile edilmiş IFN-α ile birlikte, Hepatit C virüsüne karşı ana tedavidir. De etkin bir şekilde küt IFN-α / β 5 hastalık oluşturma faktörleri sentezlenmesi yoluyla sinyal ve genellikle ribavirin 3 kaçış Ancak, IFN-α / β ve ribavirin tedavileri en RNA virüslerine karşı in vivo koşullarında nispeten zayıf bir etkiye sahiptir. Son zamanlarda tartışmalı yararları 6, ağır hRSV hastalığa karşı kabul edildi, ancak bu, önemli bir tedavi ribavirin toksisite sorunlar yaratmaktadır gerçeğine ilave edildi. Daha yakın zamanda, bir virüs özel tedaviler geliştirme o ile influenza virüsüne karşı, özellikle de pazarlanmıştırf nöraminidaz inhibitörleri 3. Ancak, büyük çeşitlilik ve RNA virüslerinin sürekli ortaya çıkması nispeten yakın bir gelecekte bunların her birine karşı özel tedavilerin gelişimini engellemektedir. Toplamda, bu yakın gelecekte güçlü antiviral molekülleri tanımlamak ve geliştirmek için etkili stratejiler için gereğini vurguluyor. Bu RNA virüslerinin büyük bir paneline karşı aktif, geniş spektrumlu inhibitörü, bu sorunu çözmek olacağını söylemek saçmadır. Böyle bir molekül hala Virolog rüyası olmasına rağmen, hücresel savunma mekanizmaları ve doğuştan gelen bağışıklık sistemi bizim daha iyi anlaşılması bazı olasılıklar 7,8 var olduğunu göstermektedir. Çeşitli akademik ve endüstriyel laboratuarlar şimdi hücresel savunma mekanizmaları veya viral replikasyon künt metabolik yolların belirli yönlerini uyaran moleküller arıyorlar. Bu tür bileşikler, muhtemelen önemli yan etkiler gösterir, ancak akut viral enfeksiyonlara karşı işlemleri yapmak olacakuzun vadede bazı potansiyel toksisitesi rağmen onları kabul edilebilir hale, nispeten kısa bir süre için ed. Çeşitli stratejiler gibi geniş spektrumlu bir anti-viral molekülleri tanımlamak için geliştirilmiştir. Bazı araştırma programları belirli savunma veya metabolik yolları hedef molekülleri bulmayı hedefliyoruz. Bunlar arasında, örneğin, anti-viral gen ekspresyonu 9 ortaya çıkarmak ve bu RNaseL 10, virüs bozulma 11 desteklemek için autophagy makineleri gibi antiviral faktörleri aktif hale getirmek için bir patojen tanıma reseptörleri, nükleosid sentezi, virüs ile enfekte olmuş hücrelerin ölümünü çökeltmek için 12,13 veya apoptotik kaskadlar yolaklar 14. Diğer gruplar 13,15-17 hedef bazlı olmayan fenotipik ekranlar geliştirdik. Bu durumda, anti-viral moleküller sadece belirli bir hücresel sistemde viral replikasyonu bloke etme kapasitesi ile tanımlanır. Genel varsayım 2-3 olmayan RNA virüslerini inhibe eden bir bileşiği, bir geniş-sp için uygun bir profile sahip olduğunu ifade ettiantiviral molekülü ectrum. Bu tür bir yaklaşım ile seçilen ampirik hit bileşiklerin etki modu yalnızca ikinci kez tespit edilir ve sonunda, antiviraller için yeni hücre hedeflerin tanımlanmasına yol açabilir. İlginçtir, 1999 ve 2008 yılları arasında ABD Gıda ve İlaç İdaresi tarafından onaylanan yeni ilaçların bir retrospektif analizi genel olarak, bu tür fenotipik gösterimleri birinci sınıfında küçük moleküllü ilaçlar 18 keşfetmek için hedef odaklı yaklaşımlar daha iyi performans eğiliminde olduğunu göstermiştir . , Yüksek yayılmalı hücre bazlı deneylerde Viral replikasyonu çoğunlukla virüs sitopatik etkiler belirlenir. Hücreler, enfekte edilmiş ve 96 içinde kültürlenir - ya da test edilen bileşiklerin mevcudiyetinde 384 oyuklu plakalar. Birkaç gün sonra, hücre katmanları sabittir ve bu kristal mor gibi boyalarla boyanmıştır. Son olarak, absorbans, bir plaka okuyucu ve viral replikasyonu inhibe edici bileşikleri, ileri hücre katmanları korumak için kapasiteleri ile tanımlanır belirlenirm virüs kaynaklı sitopatik etkiler. Seçenek olarak ise, viral kaynaklı sitopatik etkileri, MTS azaltılması gibi standart canlılığı tahliller kullanılarak değerlendirilir. Bu tür deneyler son derece uysal ve maliyet-etkili, ancak üç büyük sınırlamalar muzdarip. İlk olarak, böylece 19, alternatif yaklaşımlar çağrısında, viral replikasyonu sadece birkaç gün sitopatik, ancak bu her zaman mümkün değildir, bir virüs-hücre kombinasyonunu gerektirir. İkincisi, onlar viral replikasyon dolaylı ölçümüne dayalı olduğundan kötü nicel vardır. Son olarak, toksik bileşikler, pozitif sonuç olarak atılır ve bu nedenle hücre canlılığını ölçen bir sayaç ekranı olan giderilmelidir. Bu engel bazılarının üstesinden gelmek için, yeniden birleştirici virüs veya replikonlar ek transkripsiyon biriminden ya da viral protein gen (birkaç örnek 20-23 olan) ile aynı çerçevede, bu tür EGFP veya lusiferaz gibi haberci proteinleri ifade etmek için ters genetik mühendislik edilmiştir. Bu virüsleri çoğalmak, muhabir proteins viral proteinler kendileri ile birlikte üretilmektedir. Bu viral replikasyonu ölçmek ve Aday moleküllerin inhibitör aktivitesini değerlendirmek için, çok nicel analizi sağlar. Bu, raportör sistem, yüksek hassasiyet ve hemen hemen hiç arka plan ile bir geniş dinamik aralık sergiler Başlangıcı lusiferaz (ya da bio-ışıldamanın sahip başka enzimler) ifade eden rekombinant virüs için geçerlidir. Bundan başka, herhangi bir uyarı ışığı kaynağı, bileşik floresan 24 ile girişimi önleyen vardır. Burada ayrıntılı bir yüksek verimli bir protokol RNA virüslerinin geniş spektrumlu inhibitörleri için kimyasal kütüphanelerinin taranması için. Bileşikler, ateş böceği luciferase 25 (rMV2/Luc, Şekil 1, bir primer eleme) eksprese eden bir rekombinant kızamık virüsü (MV) ile enfekte edilmiş insan hücreleri üzerindeki ilk test edilmiştir. PD Mononegaviraller sınıfı, ve genellikle, negatif dallı RNA virüsü bir prototip üyesi olarak kabul edilires. Bu nedenle, MV genom viral proteinler için kodlayan mRNA moleküllerinin sentezlenmesi için viral polimeraz ile bir şablon olarak kullanılır. RMV2/Luc olarak adlandırılan, rekombinant MV suşu olarak, lüsiferaz ifadesi P ve M gen (Şekil 2A) arasında herhangi bir ek transkripsiyon biriminden ifade edilir. Buna paralel olarak, bileşikler, ATP miktarının ölçülmesi ile, değerlendiren bir ticari lusiferaz bazlı bir reaktif kullanılarak, insan hücreleri üzerindeki toksisite için test edilir, kültür içinde metabolik olarak aktif hücrelerin sayısı (Şekil 1, birinci ekranı). Bütün kimyasal kütüphaneler kolayca toksik olmayan ve etkili bir şekilde bloke eden bileşikler PD çoğaltma seçmek için bu iki deneyleri ile taranabilir. Daha sonra, bulgular, Chikungunya virüsü (CHIKV) çoğaltma (Şekil 1, ikinci ekranı) bozduğu kapasiteleri için doz-yanıt PD replikasyonun inhibisyonu, toksisite eksikliği yanı sıra için yeniden test edilir. CHIKV Togaviridae ailesinin bir üyesidir ve genom apOsitive tek iplikli RNA molekülü. Bu nedenle, kızamık ve OG ve CHIKV hem RNA virüslerinin büyük bir paneli engellemek için büyük bir şansı önleyici bileşiklerin tamamen ilgisiz olduğunu. Yapısal proteinler, transkripsiyon ve bir alt genomik mRNA molekülü tarafından kodlanan çeviri oysa CHIKV yapısal olmayan proteinleri, doğrudan viral genomundan çevrilir. CHIKV yönelik in vitro deney çoğaltma NSP3 ve NSP4 dizileri 26 (Şekil 2B) arasındaki raportör geninin bir sokma yoluyla yapısal olmayan poliproteinin bir parçası olarak yarılmış Renilla lusiferaz enzimi ifade CHIKV / Ren adı verilen bir rekombinant soyu dayanmaktadır. Renilla lusiferaz etkinliğinin ölçüsü CHIKV yaşam döngüsünün erken aşamasında viral replikasyonun izlenmesine olanak sağlar. Bu yüksek hızlı verimlilik protokol 10000 Molec ticari bir kütüphanede geniş spektrumlu antiviraller için uygun bir profili olan bileşiklerin belirlenmesi için kullanılmıştırModüller kimyasal çeşitliliği için zenginleştirilmiş. Bileşikler, esas olarak 250 ila 600 daltona kadar değişen molekül ağırlıkları olan, beş Lipinski kuralı ardından, 5 &#39;in altında ve D değerleri log edilmiştir., Bu moleküllerin pek çoğu, diğer ticari kütüphanelerde mevcut olmayan yeni bir kimyasal maddeler edildi.

<table><tbody><tr><td>Freedom EVO platformu</td><td>TECAN</td><td></td><td>Robotik platform</td></tr><tr><td>96 oyuklu polistiren hücre kültürü mikroplakaları, beyaz</td><td>Greiner Bio One 655083</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CellTiter-Glo Lüminesan Hücre Canlılık Testi</td><td>Promega</td><td>G7570</td><td>Luciferaz bazlı canlılık testi</td></tr><tr><td>Bright-Glo Luciferase Test Sistemi</td><td>Promega</td><td>E2610</td><td>Ateşböceği lusiferaz içeren reaktif substrat</td></tr><tr><td>Renilla-Glo lusiferaz Test Sistemi</td><td>Promega</td><td>E2710</td><td>Renilla lusiferaz substratı içeren reaktif</td></tr><tr><td>Britelite artı Reporter Gen Test Sistemi</td><td>Perkin-Elmer</td><td>6016761</td><td>Firefly lusiferaz substratı içeren Reaktif. Lusiferaz aktivitesini belirlemek için Brigh-Glo reaktifine alternatif olarak kullanılabilir.</td></tr></tbody></table>

rna virüslerinin geniş spektrumlu kimyasal Önleyicileri için yüksek verimli tarama

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

RNA virüsleri gibi grip, bronşit, dang, Hepatit C ya da kızamık gibi önemli insan hastalıkları sorumludur. Ayrıca, çünkü daha doğal ekosistemlerin nüfuz artan dünya çapında değişim ve insan nüfusu yükselen bir tehdit oluşturuyor. Böyle yükselen bir duruma iyi bir örnek Hint Okyanusu&#39;nda 2005-2006 arasında chikungunya virüsü salgın olduğunu. Viral replikasyonu kontrol hücresel yolların anlayışımızda son gelişmeler konakçı hücre fonksiyonlarını hedefleme bileşikleri, daha doğrusu virüsün kendisinden daha, RNA virüsleri büyük bir panel inhibe olabileceğini düşündürmektedir. Bazı geniş spektrumlu antiviral bileşikler, ana hedef odaklı deneyleri ile tespit edilmiştir. Ancak, hücre kültürlerinde viral replikasyonun inhibisyonunu ölçen bir gösterge olarak sitopatik etkileri azaltma kullanarak yine çok önemli bir tarama stratejisi temsil eder. Bu gibi fonksiyonel ekranlar çok raportör ifade eden rekombinant virüslerin geliştirilmesi yolu ile iyileştirilmiştir ca enzimlerilüsiferaz gibi bio-ışıldamanın palpe edilebilir. Bu raporda, ayrıntılı bir geniş spektrumlu anti-viral profili olan bileşikleri tespit etmek, yeniden birleştirici kızamık ve hücre canlılığı deneyleri ile Chikungunya virüs birleştiren bir yüksek verimli tarama boru hattı.

Bu tarama hattı PD çoğalmasını önleyen bileşiklerin seçimi ilk dayanır ve önemli bir hücresel toksisite (Şekil 1, birinci ekranı) göstermezler. Bu, hücre toksisitesi ve viral replikasyonun inhibisyonunu belirlemek üzere lusiferaz bazlı deneylerde yararlanır. Tüm adımlar, pipetleme ve veri toplama bir robot platform ile, bir yüksek verimli bir ortamda gerçekleştirilebilir. Bileşiklerin hücresel toksisite, metabolik olarak aktif hücrelerin karşılık mevcut ATP, ve nicelenmesine...

Virüs çoğaltma ölçmek için in vitro deneylerinde önemli ölçüde lusiferaz veya biyolüminesans edebilen diğer enzimleri ifade eden rekombinant RNA virüslerinin geliştirilmesi yolu ile iyileştirilmiştir. Burada ayrıntılı kızamık ve kimyasal kütüphanelerden geniş spektrumlu antiviral izole etmek Chikungunya virüsler, rekombinant suşlar birleştiren bir yüksek verimli tarama hattını.

RNA Virüslerinin geniş spektrumlu Kimyasal Önleyicileri için yüksek verimli tarama

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

Bu prosedürün genel amacı, in vitro hücre tabanlı analizlerin bir kombinasyonunu kullanarak kimyasal kütüphanelerden geniş spektrumlu antiviraller izole etmektir. Bu işlem, öncelikle reporter olarak lusiferaz kodlayan rekombinant bir kızamık virüsü suşunun in vitro replikasyonunu inhibe eden bileşiklerin seçilmesiyle gerçekleştirilir. Buna paralel olarak, bileşiğin toksisitesi lusiferaz tabanlı bir viabilite analizi kullanılarak tahmin edilir.Her iki deneyden elde edilenle birleştirilmiş fenotipik veriler, HIT moleküllerini izole etmek için kullanılır. Son adımlar, HIT bileşiklerinin kızamık ve chikungunya virüsü inhibisyonu için doz yanıt replikasyonunu yeniden test etmek ve in vitro toksisiteyi daha doğru bir şekilde ölçmektir. Sonuç olarak, tarama ile geniş spektrumlu antiviral bileşikler tanımlanır ve doğrulanır.Bu tekniğin, sitopatik etkilere dayalı standart virüs replikasyon analizleri gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, okuma yöntemi olarak lüminesansı kullanması ve raporlayıcı olarak lusiferaz eksprese eden iki oldukça farklı virüsü birleştirmesidir. Prosedürü, Helene Munier-Lehmann'ın ekibinden teknisyen Olivier Helynck ve Frédéric Tangy'nin araştırma biriminde ben

high-throughput-screening-for-broad-spectrum-chemical-inhibitors-rna

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Viral enfeksiyon katılan Roman konakçı faktörleri fonksiyonu RNAi tarama hücre tabanlı genom zarara tespit edilebilir.

RNAi Tarama için ilgilendim Ana Faktörler Vaccinia Virüs Enfeksiyonu Drosophila Hücre

Sitopatik etki (CPE)-bazlı analiz, doz-yanıt tahlil ve Time-of-adisyonu (TOA) deneyi de dahil olmak üzere üç deneyleri yanı sıra, gelişmiş optimize edilmiş, doğrulanmış ve Bluetongue virüsüne karşı yeni antiviraller (BTV) tanımlamak için kullanılmıştır yeni tespit antiviraller için olası Mekanizması-of-Eylem (MoA) belirlemek gibi.

Bluetongue Virüs karşı Roman Antiviraller belirlenmesi için Tahliller

Burada tarif ve hücresel sitotoksisitesi bileşiklerin hızlı ve doğru tarama için izin tek tur enfekte edebilirlik analizleri, kendi hücresel sitotoksisiteye (CC 50) tespit etmek ve WT ve ilaç dirençli HIV-1 karşı IC50 değerleri.

HIV ters transkriptaz ve integraz inhibitörleri hızlı taranması

Burada, yeni antiviral ajanları tanımlamak ve değerlendirmek için viral girişin belirli adımlarını inceleyen bir protokol sunuyoruz.

Erken Viral Giriş Tespiti için Tahliller ve Antiviral Bileşiklerin Değerlendirilmesi

HIV-1 replikasyon döngüsünün entegrasyon sonrası adımlarını hedefleyen RNA moleküllerinin etkinliğini ve toksisitesini değerlendirme yöntemleri açıklanmıştır. Bu yöntemler, yeni molekülleri taramak ve mevcut moleküllerin formatını optimize etmek için kullanışlıdır.

Bir gen ya da ilaç terapisinde kullanım için, HIV-1 üretim yapan RNA&#39;lar etkinlik ve toksisite Değerlendirilmesi

Burada bir iletişim kuralı açıklamak yüksek üretilen iş RNAi tarama oncolytic virüs tedavisi geliştirmek için manipüle edilebilir ana hedefleri ortaya çıkarmak için istihdam için özellikle rhabodvirus ve vaksinia virüs tedavisi, ama -ebilmek var olmak diğer oncolytic için kolayca adapte virüs platformlar veya virüs çoğaltma genellikle modüle ana bilgisayar genler keşfetmek için.

Tedavi Oncolytic virusu modüle ana faktörleri tanımlamak için genom çapında RNAi tarama

HIV-1 füzyon yoluyla üzerinde akış sitometresi veya floresan mikroskopi tarafından algılanabilir yeşil flüoresan proteinin ifade bildirmek için bir hücre tabanlı tahlil açıklar. İnhibitörleri (füzyon aşamada özellikle) viral girdisinin boş hücre ve hücre-hücre enfeksiyonu sistemlerinde test etmek için kullanılabilir.

Bir yüksek-den geçerek Cre-Lox Viral membran Fusion tahlil inhibitörleri HIV-1 Viral membran füzyon tanımlamak için aktive

Burada, Abdovirüs çoğaltma ve Abdovirüs çoğaltma kısıtlamak 2) ökaryotik ana faktörler teşvik 1) virüs kodlanmış immunomodulators tanımlamak için protokolleri mevcut. Floresan ve ışıldama dayalı yöntemlerin araştırmacılar hızla düşük sinyal noise oranları ile basit deneyleri Abdovirüs çoğaltma nicel veriler elde etmek için izin verir.

Araçlar Viral Immunomodulators ve ana bilgisayar Antiviral faktörler tanımlanması için eleme olarak Abdovirüs enfeksiyonlar

Bu çalışmada, Zika virüsü replikasyonunun inhibitörlerini yüksek verimli bir tarama formatında taramak için replikon bazlı ve viral enzim bazlı tahlillerde kullanılan protokolleri açıklıyoruz.

Zika Virüs Replikasyonunun inhibitörlerini taramak için yüksek verimli Antiviral Tahliller

Bu yöntem, yüksek hassasiyet enfekte olmuş fareler bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısında H1N1 tespiti için Kızılötesi boya temelli görüntüleme sisteminin kullanımı açıklanmaktadır. Bu metodoloji, bir 96 veya plaka 384-iyi, test malzemesi &lt;10 ul hacmi gerektirir ve birden fazla patojenlerin eşzamanlı tarama için bir potansiyele sahiptir.

Gribi için yüksek verimlilik Tespit Yöntemi

Öğrenin, kızamık ve chikungunya virüsleri için yüksek verimli tarama ile geniş spektrumlu antiviral bileşikleri nasıl izole edeceğinizi. Luciferaz tabanlı ölçümlerle replikasyon ve toksisite değerlendirmesi yapın.

RNA Virüslerinin geniş spektrumlu Kimyasal Önleyicileri için yüksek verimli tarama

Daha fazla video keşfet