Name: Farelerde Hızlı noninvaziv Lomber İntratekal enjeksiyon yoluyla Vivo siRNAnın Transfaksiyon ve Omurilik Gen demonte olarak (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 24 s
Description: Öğrenin farelerde lomber omurilikte siRNA transfeksiyonu için hızlı noninvaziv intratekal enjeksiyon tekniğini. Bu yöntem gen susturma ve nörobilim araştırmalarında gen terapisi uygulamaları için etkili bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Tüm hayvan kullanım prosedürleri yerel yönetim organı (Regierungspräsidium Karlsruhe, Karlsruhe, Almanya) tarafından belirlenen etik kurallara uygun idi. 1.. SiRNA / PEI Kompleksi hazırlanması SiRNA / PEI kompleks çözeltisi aşağıdaki gibi üreticinin talimatlarını kullanarak hazırlanır: <ol><li> Çözelti A: uç hacminin dörtte birine kadar steril su ile siRNA istenilen miktarda (eğer gerekli ise) seyreltin ve son hacminin yarısına% 10 glükoz çözeltisi ile daha da bu seyreltin. Vortex hafifçe yukarı veya aşağı pipetleme karıştırın. SiRNA optimal miktarı deneysel olarak tespit edilmesi gerekmektedir, ancak, hayvan başına 10 ul kompleksi çözeltisi içinde 1 | ig siRNA optimizasyonu için iyi bir başlangıç ​​noktasıdır. </li><li> Çözelti B: uç hacminin dörtte birine kadar steril su ile PEI reaktifinin gerekli hacmi seyreltin ve uç hacminin yarısına% 10 glükoz çözeltisi kadar bu daha fazla seyreltilir. Vortex gently veya aşağı yukarı pipetleme karıştırın. Not: PEI maddesi miktarı, transfeksiyon verimini etkilemektedir kompleks içindeki iyonik denge belirler. Aynı şekilde PEI solüsyonu optimal miktarı deneysel olarak tespit edilmelidir. Bizim ellerde, optimal miktarı 1 mikrogram siRNA&#39;nın başına PEI çözeltisinin 0.12 ul. </li><li> B çözeltisi ile çözüm A karıştırın seferde, vorteks nazikçe. </li><li> Kullanmadan önce, oda sıcaklığında 15 dakika boyunca karıştırılmış çözelti inkübe edin. Bu kompleks, 4 ° C&#39;de, oda sıcaklığında 2 saat boyunca ve 24 saat boyunca stabildir </li></ol> 2. Intratekal Enjeksiyon <ol><li> Bu refleksi hiçbir belirti gösterir kadar,% 3 izofluran ile fare anestezisi. Buna ek olarak, ayrıca anestezi sağlamak için devlet kuyruk ve / veya pençe tutam refleksi kontrol edin. </li><li> Iğne yerleştirilmesi sırasında daha iyi bir görüntü sağlamak için kuyruğun tabanına yakın hayvanın arka ucunda kürk yaklaşık 2 cm 2 tıraş. </li><li> Içinde fare yerleştirinişlem sırasında sürekli bir izofluran uygulanması için bir burun konisi,% 1.5 izofluran azaltmak ve göz yağ ile fare gözleri kapsamaktadır. </li><li> Iğne, bir 30 G 0.5 bağlanmış bir 25 ul Hamilton şırıngası kullanılarak siRNA karışık çözelti, kullanıma hazır hazırlayın. </li><li> En önemli biri ve hafifçe basarak bu alanı çevresinde omurgalı sütun düzeltmek gerekir L6 spinöz süreci bulun. </li><li> Dikkatli L5 ve L6 vertebra yiv arasında iğne yerleştirin ve bu işareti intradural uzayda iğnenin başarılı bir giriş anlaşılacağı gibi bir kuyruk hareketiyle gözleyin. İpucu: tırnağınızı kullanarak, bir de oluk bulmak gerekir. </li><li> Tail flick görülmektedir kez, hemen, ama dikkatle, tek elle iğne konumunu güvenli ve diğer taraftan yavaş yavaş ile maddenin istenilen hacmi enjekte. İpucu: 5-10 arasında bir hacim ul hacim en az 5 olarak optimal &amp;# 181; l güvenilmez ve 10 ul daha büyük bir hacim çok fazla baskı yol açar. </li><li> Enjeksiyonu yapılır sonra, anestezi kurtarmak için kafesine geri fareyi hareket ettirin. </li><li> Hedeflenen genin optimum infekte elde etmek için bu enjeksiyon en az 2 defa daha, her 24 saat tekrarlayın. </li></ol>

<ol><li>Hylden, J. L., Wilcox, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrathecal+morphine+in+mice%3A+a+new+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Intrathecal morphine in mice: a new technique.</a> Eur. J. Pharmacol. 67, 313-316 (1980).</li>
<li>Stokes, J. A., Corr, M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+tactile+allodynia+following+intrathecal+puncture+in+mouse%3A+contributions+of+Toll-like+receptor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Transient tactile allodynia following intrathecal puncture in mouse: contributions of Toll-like receptor signaling.</a> Neurosci. Lett. 504, 215-218 (2011).</li>
<li>Goula, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polyethylenimine-based+intravenous+delivery+of+transgenes+to+mouse+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Polyethylenimine-based intravenous delivery of transgenes to mouse lung.</a> Gene Ther. , 1291-1295 (1998).</li>
<li>Fairbanks, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+delivery+of+analgesics+in+experimental+models+of+pain+and+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug.+Deliv.+Rev%22%5BJournal%5D)">Spinal delivery of analgesics in experimental models of pain and analgesia.</a> Adv. Drug. Deliv. Rev. 55, 1007-1041 (2003).</li>
<li>Hohmann, A. G., Tsou, K., Walker, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannabinoid+modulation+of+wide+dynamic+range+neurons+in+the+lumbar+dorsal+horn+of+the+rat+by+spinally+administered+WIN55%2C212-2%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Cannabinoid modulation of wide dynamic range neurons in the lumbar dorsal horn of the rat by spinally administered WIN55,212-2.</a> Neurosci. Lett. 257, 119-122 (1998).</li>
<li>Song, Z. H., Takemori, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+spinal+kappa+opioid+receptors+in+the+antinociception+produced+by+intrathecally+administered+corticotropin-releasing+factor+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Involvement of spinal kappa opioid receptors in the antinociception produced by intrathecally administered corticotropin-releasing factor in mice.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 254, 363-368 (1990).</li>
<li>Trang, T., Sutak, M., Jhamandas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+cannabinoid+%28CB1%29-receptors+in+the+development+and+maintenance+of+opioid+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Involvement of cannabinoid (CB1)-receptors in the development and maintenance of opioid tolerance.</a> Neuroscience. , 1275-1288 (2007).</li>
<li>Yaksh, T. L., Rudy, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+catheterization+of+the+spinal+subarachnoid+space%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Chronic catheterization of the spinal subarachnoid space.</a> Physiol. Behav. 17, 1031-1036 (1976).</li>
<li>Tappe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+scaffolding+protein+Homer1a+protects+against+chronic+inflammatory+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Synaptic scaffolding protein Homer1a protects against chronic inflammatory pain.</a> Nat. Med. , 677-681 (2006).</li>
<li>Bourinet, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silencing+of+the+Cav3.2+T-type+calcium+channel+gene+in+sensory+neurons+demonstrates+its+major+role+in+nociception%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Silencing of the Cav3.2 T-type calcium channel gene in sensory neurons demonstrates its major role in nociception.</a> EMBO J. 24, 315-324 (2005).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+to+dorsal+root+ganglia+by+intrathecal+injection%3A+effects+on+regeneration+of+peripheral+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene transfer to dorsal root ganglia by intrathecal injection: effects on regeneration of peripheral nerves.</a> Mol. Ther. 12, 314-320 (2005).</li>
<li>Wigdor, S., Wilcox, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+and+systemic+morphine-induced+antinociception+in+mice%3A+contribution+of+descending+serotonergic+and+noradrenergic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Central and systemic morphine-induced antinociception in mice: contribution of descending serotonergic and noradrenergic pathways.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 242, 90-95 (1987).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkarlarını beyan.

Bu nedenle, iğne intratekal enjeksiyonlar yukarıda tarif edilen teknik, etkili, hızlı, spesifik olarak lokalize edilmiş ve geri dönüşlü bir. Teknik olarak, bu prosedür, en kritik yönü oluk içine iğne sokulması noktasıdır. Bu prosedür çok sakin elleri ve sabır ile yapılır önemlidir. Birçok cerrahi işlemler gibi, eğitim başarılı enjeksiyon oranını artırır. Gerçek bir deney sırasında, bu teknik, doğrudan enjeksiyon başarılı olup olmadığını teyit etmek için açık bir göstergesi sağlamaz, çünkü bu da önemlidir. Doğru iğne yer...

Omurilik işleme ve ağrılı (nosiseptif) girişlerine 4-7 iletim dahil kilit biyolojik süreçler ve fizyolojik fonksiyonları, çeşitli çok önemli bir merkezdir. Çeşitli deneysel teknikler, intratekal kateter 8 kronik implantasyonu, omurilik mikroenjeksiyon ve intratekal enjeksiyon iğne 9 ile omurilik, farmakolojik modülasyonuna kolaylaştırmak için geliştirilmiştir. Her teknik kendine özgü avantajları ve dezavantajları vardır, ve deney paradigma bağlı olarak bir teknik diğerlerine göre daha uygun olabilir. Intratekal kateter kronik implantasyonu sıçanda kolayca mümkün olduğu iken, bu yöntem, boyut kısıtlamaları göz önüne alındığında, fare çok zordur. Başarı oranı çok düşüktür ve motor açıkları nedeniyle sık sık fare ciddi sınırlı subdural alanda bir kateterin büyük varlığı nedeniyle meydana gelir. Ayrıca, ilaçların uzun süreli teslimat nedeniyle sık pıhtılaşma işlenirkronik kateter yerleştirildi. Son olarak, bağışıklık reaksiyonları yaygındır. Bu sorunlar, farelerde omurilik için ilaç ve reaktiflerin hızlı ve anatomik olarak sınırlı uygulama sağlayan bir preimplanted kateter yokluğunda bir iğne vasıtasıyla, akut intratekal enjeksiyon yöntemi kullanılarak atlatılabilir. Bu yöntem, tam olarak böyle spinal düşük dozajları ve sınır yan etkileri izin modülasyonu, hem de maddelerin yok sunmak için yeteneği özgüllük gibi diğer sistemik tatbikat yolları (örneğin, oral, intravenöz, intraperitonal vs) üzerinden teslim intratekal yararlarını muhafaza intratekal enjeksiyon sırasında iğne dura mater ve omurilik arasına sokulur olduğundan, normal olarak kan-beyin bariyerinden geçmezler. Önemli olarak, ancak, intratekal teslimat diğer yöntemlere kıyasla, intratekal enjeksiyon iğne yöntem olup, çok sayıda uygulama sağlayan, en az invazivHerhangi bir ciddi doku hasarına neden veya bağlı yabancı madde implantasyonuna bağışıklık reaksiyonunu çağrıştıran olmadan aynı hayvan. Ancak, bu etkinlik için izin iğnenin çok hassas hedefleme için teknik beceri gerektirir. Burada, özellikle görsel olarak lumbar spinal kordon hedeflenmesi için bir başarı oranı elde etmek için uygun bir yöntem göstermektedir. Bu deneyde seçilmiş enjeksiyonu site L5 ve omurga zarar olasılığını en aza indirmek için, spinal kordon uçları yere yakın L6 omurgalı kolonu arasındaki oluktur. Ayrıca, siRNA&#39;lar kullanarak omurilikte genleri yıkmak için bu tekniğin kullanımını göstermektedir.

<table><tbody><tr><td>In Vivo-jetPEI</td><td>Polyplus</td><td>201-10G</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>WAVE1 siRNA</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-36832</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kontrol siRNA-A</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-37007</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-&szlig;-Tubulin III antikoru</td><td>Sigma</td><td>T2200</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-WAVE1 antikoru</td><td>R& D Sistemleri</td><td>AF5514</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Hızlı yeşil boya</td><td>Sigma</td><td>F-7252</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Baxter</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>İzofluran kurulumu</td><td>Dr&auml; ger L&uuml; beck</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Tıraş makinesi</td><td>Wella</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Hamilton şırınga Gastight 1702</td><td>Hamilton</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>30 G 1/2 inç 13 mm İğne</td><td>BD Microlance</td><td>304000</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Mikroskop Leica MS5</td><td>Leica</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>qRT-PCR Sigma</td><td></td><td></td><td>cacagagcctcaggacagg</td>için</tr><tr><td>WAVE1 ileri astar qRT-PCR</td><td>Sigma</td><td></td><td>cttttcaccaacggcatctt</td></tr><tr><td>FastStart Essential DNA Green Master</td><td>Roche</td><td>6402712001</td><td>&nbsp;</td></tr></tbody></table>

farelerde hızlı noninvaziv lomber İntratekal enjeksiyon yoluyla vivo sirna&#39;nın transfaksiyon ve omurilik gen demonte olarak

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

Bu rapor, non-invaziv bir şekilde akut intratekal iğne enjeksiyon tekniği, kateter implantasyonu yani bağımsız bir adım-adım kılavuz açıklanır. Bu cerrahi tekniğin teknik sınırlama ellerin incelik yatıyor. Enjeksiyon, özellikle eğitimli bir deneyci için, hızlı, ve bu teknikle doku bozulma az olduğundan, tekrarlanan enjeksiyonlar mümkündür; yabancı araçlara ayrıca bağışıklık reaksiyonu (. Örneğin kateter) oluşmaz, böylece daha iyi ve daha spesifik dışarı oku verme spinal kord modülasyon. Maddenin uygulanması büyük ölçüde omurilik hedef bölge ile sınırlı olduğu için, ilaçlar büyük dozlarda uygulanması gerekmez ve diğer dokusu üzerinde istenmeyen etkileri daha da önemlisi, bir sistemik uygulama ile gözlemlendiği üzere, 1 aşılabilir 2. Ayrıca, polyethylenim yardımıyla nükleik asidin in vivo transfeksiyonu ile bu teknik kombineine (PEI) farmakolojik maddelerin teslimi hem de gen, RNA ve protein modülatörleri ile spinal fonksiyonlarını incelemek için büyük bir çok yönlü ve çok reaktif 3.,.

Başarılı bir enjeksiyon örnekle açıklamak için, erişkin C57BL6 farelerde hızlı yeşil boya FCF (yaş, 8-10 haftalık) kullanarak bu tekniği uygulandı. Hayvan boya yayılmış ve daha sonra CO2 bir dozu ile öldürülmüş için yeterli zamanı sağlamak üzere enjeksiyon sonrası birkaç dakika geri bırakıldı. Daha sonra, omurgalı kolon kesitlere ayrılmıştır ve omurilik ortaya çıkmıştır. Dağınık boya karşılık gelen Mavi puncta, enjeksiyon yerinde oldu. Omurilik yaralanma izi yok, bu tekniğin (Şekil 1A) minima...

Bu rapor, kısa süreli hafif anestezi altında fare lumbar spinal kordda siRNA yerelleştirilmiş transfeksiyonu için intratekal iğne giriş basit ve hızlı bir yöntem açıklanır.

Farelerde Hızlı noninvaziv Lomber İntratekal enjeksiyon yoluyla Vivo siRNA&#39;nın Transfaksiyon ve Omurilik Gen demonte olarak

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter ...

Bu prosedürün genel amacı, intratekal uygulama yoluyla spinal korda lokal olarak IRNA uygulamaktır. Bu işlem, öncelikle optimal I-R-N-A-P-E-I kompleks reaktifi hazırlanarak gerçekleştirilir. İkinci adım ise fareyi intratekal enjeksiyona hazırlamaktır.En az 15 dakikalık inkübasyon süresinin ardından, SI RNA karışım çözeltisi bir Hamilton şırıngasına çekilir. Son adım, optimal downregülasyonu sağlamak için enjeksiyonları her 24 saatte bir tekrarlayarak intratekal enjeksiyonu dikkatlice gerçekleştirmektir. Nihai olarak immünoblotlama ve kantitatif gerçek zamanlı PCR yapılır.INA transfeksiyonundan kaynaklanan protein ve mRNA seviyelerindeki başarılı aşağı düzenlemeyi göstermek için PCR kullanılır. Bu tekniğin temel avantajı, intrakateter veya omurilik enjeksiyonuna göre daha az invaziv olmasıdır. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişilerin, omuriliğe zarar vermeden vertebralar arasındaki küçük boşluktan enjeksiyon yapabilmek için gerekli olan hassasiyeti kazanmak üzere çalışmaları gerekir.SIR A çözeltisini hazırlamak için, istenen miktardaki SIR A'yı steril su ile seyrelterek başlayın. Ardından, pipetle aşağı yukarı hareket ettirerek karıştırarak %10 glukoz çözeltisi ile daha fazla s

in-vivo-sirna-transfection-gene-knockdown-spinal-cord-via-rapid

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Fare spinal kolon stabilize ve tekrarlayan gerçekleştirmek için minimal invaziv bir...

Fare Omurilik İki foton Mikroskop kullanarak in vivo Görüntüleme

Kaynak: Tadokoro, T., et al. Yetişkin Farelerde Subpial Adeno İlişkili Virüs 9 (AAV9) Vektör Dağıtımı. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, farelerde omuriliğe gen iletimi için bir subpial enjeksiyon tekniğini göstermektedir. Prosedür, dura materyalin açığa çıkarılmasını, pia materyalin delinmesini ve floresan protein eksprese eden bir gen taşıyan rekombinant adeno-ilişkili bir virüsün (rAAV) subpial boşluğa enjekte edilmesini içerir. Enjeksiyon ve geri kazanımı takiben virüs, omurilik hücrelerinde gen...

Gen Ekspresyonunu Değerlendirmek için Fare Omuriliğinde Subpial Gen İletimi

Kaynak: Li, D., et al. Yetişkin Farelerde Rekombinant Adeno İlişkili Virüslerin Doğrudan İntratekal Enjeksiyonu. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, adeno-ilişkili virüslerin (AAV) uyanık bir farenin beyin omurilik sıvısına (BOS) intratekal enjeksiyonu için şırınga hazırlığı, omurga hizalaması ve hassas iğne yerleştirmeyi kapsayan prosedürü göstermektedir. Bu yöntem, CNS tedavileri için potansiyelini destekleyerek hedeflenen gen iletimini doğrular.

Merkezi Sinir Sistemi Hastalıklarının Tedavisi için Bir Fare Modelinde Virüslerin İntratekal Verilmesi

Viral vektörler hedefli gen manipülasyonu için izin verir. Bu arka boynuzu içine, bir viral vektör stereotaksik enjeksiyon, birincil somatosensoriyel afferentleri ve merkezi sinir sistemi nöronları arasındaki sinaptik bir temas önemli yer kullanılarak, koşullu gen ekspresyonu ya da fare omurilik ablasyonu için bir yöntem göstermektedir.

Fare Omurilik Koşullu Gen Manipülasyon için bir Viral Vector Stereotaksik Enjeksiyon

Burada, kemirgen siyatik sinirindeki Schwann hücrelerine (SC'ler) gen transferi için in vivo bir teknik sunuyoruz. Bu basit teknik, miyelinizan SK'lerin geliştirilmesi ve sürdürülmesinde yer alan sinyalleme mekanizmalarını araştırmak için kullanışlıdır.

Elektroporasyon tarafından Kemirgen Siyatik Sinir Schwann Hücreleri için Vivo Gen Transferi

Recombinase bağımlı rekombinant adeno ilişkili virüs (rAAV) kesici enjeksiyon herhangi bir genetik olarak etiketli hücre tipi spinal kord işlemek için kullanılabilir. Burada biz lomber spinal kord dorsal boynuz nöronlarda transduce anlatan. Bu teknik işlenmiş nöron alt türündeki fonksiyonel sorgulama sağlar.

Omurilik genetik olarak tanımlanmış nöronlar Adeno ilişkili virüs-aracılı Transgene ifade

Burada %1 lidokain hidroklorür viral bir çözümde küçük hayvanlar için verimli adeno ilişkili virüs teslim edilmesini sağlamak ve iletim verimliliği merkezi tahmin etmek için bir skorlama sistemi kurmak için bir doğrudan intratekal enjeksiyon tekniği mevcut sinir sistemi geçici zayıflık lidokain tarafından indüklenen derecesine göre.

Rekombinant Adeno ilişkili virüs yetişkin farelerde doğrudan intratekal enjeksiyon

Burada, omurganın lomber intratekal uzayına bir kateter yerleştirerek sıçan merkezi sinir sistemine ilaç teslim etmek için bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem diğer terapötik yöntemlerin de teslimi için uygun olsa da, antisense oligonükleotidlerin teslimatına odaklanıyoruz.

Sıçan Merkezi Sinir Sisteminde Antisense Oligonükleotidlerin İntinal Teslimi

Genç sıçanın bel sarnıcına enjeksiyon yapmak için cerrahi bir prosedür tarif edilmiştir. Bu yaklaşım, gen terapisi vektörlerinin intratekal verilmesi için kullanılmıştır, ancak bu yaklaşımın hücreler ve ilaçlar dahil olmak üzere çeşitli terapötikler için kullanılabileceği tahmin edilmektedir.

Juvenil Sıçanlarda Lomber Sarnıç Enjeksiyonu ile İntratekal Vektör Verilmesi

Lomber intratekal enjeksiyon, gen terapisini merkezi sinir sistemine iletmek için translasyonel olarak ilgili bir uygulama yolunu temsil eder. Yenidoğan, juvenil ve yetişkin farelerde ve sıçanlarda lomber intratekal enjeksiyonlar için bu kapsamlı standartlaştırılmış protokol, araştırmacılara klinik öncesi gen tedavisi çalışmaları için bu tekniği benimsemede rehberlik etmeyi amaçlamaktadır.

Farelerde ve Sıçanlarda Merkezi Sinir Sistemi Hedeflemesi için Gen Tedavisi Vektörlerinin Lomber İntratekal Enjeksiyonu

Bu makale, yetişkin farelerde CNS hedefli tedaviler için intratekal teslimat yöntemlerini detaylandırır; protokol hassasiyetine odaklanır ve tekrar enjeksiyonu mümkün kılar. Makale, antisens oligonukleotidlerin SOD1-ALS model farelerinde mutant SOD1 ekspresyonunu azalttığı bir doğrulama çalışmasından elde edilen bulguları içeriyor ve bu yaklaşımın nörodejeneratif hastalıklar üzerine preklinik araştırmalarda faydasını desteklemektedir.

İnsan SOD1-G93A ALS farelerinde hassas CNS hedefleme ve öngörücü etkinlik için SOD1-ASO'ların bel intratekal enjeksiyonu

Öğrenin farelerde lomber omurilikte siRNA transfeksiyonu için hızlı noninvaziv intratekal enjeksiyon tekniğini. Bu yöntem gen susturma ve nörobilim araştırmalarında gen terapisi uygulamaları için etkili bir araç sunar.

Farelerde Hızlı noninvaziv Lomber İntratekal enjeksiyon yoluyla Vivo siRNA'nın Transfaksiyon ve Omurilik Gen demonte olarak

Daha fazla video keşfet