Name: Ardışık In vivo Kırık Onarım sırasında Osteojenik Kök / Progenitör Hücrelerinin Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Keşfedin intravital mikroskopi kullanarak kemik kırığı onarımı sırasında endojen osteojenik kök/progenitör hücrelerinin göç, proliferasyon ve farklılaşmasını izleme yöntemini. Bu teknik tekrarlayan görüntüleme sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz el yazması okumak için C. Park teşekkür ederim. Bu çalışma Ödül sayısı K01AR061434 ve DP&#39;ye bir Lösemi ve Lenfoma Derneği Bursu Ödülü (5127-09) altında NIAMS tarafından desteklenen ve içeriği CPL ve DTS için Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe değil sadece yazarların sorumluluğundadır ve yok edildi mutlaka Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

1.. Fareler ve Önkoşullama Not: Tüm fareler patojen-serbest koşullarda muhafaza ve tüm protokolleri Massachusetts Genel Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Tüm cerrahi otoklava steril ekipman kullanılarak steril koşullarda yapılmalıdır. MX1-Cre 15, Rosa26-loxp-stop-loxp-EYFP (Rosa-YFP), ve Rosa26-loxp-stop-loxp-tdTomato (Rosa-Domates) idi Jackson Laboratories&#39;den satın alınmıştır. Osteokalsin-GFP farenin Henry Kronenberg tarafından temin edildi. In vivo OSPC göç ve çoğalması kantitatif analiz için, MX1-Cre + Rosa-YFP + (tek renk-muhabir) fareler kullanıldı. Osteokalsin + olgun osteoblast onların farklılaşma daha ayrıntılı izleme için, kullanılan trigenic MX1-Cre + Rosa-Domates + Ocn-GFP +fareler. <ol><li> , In vivo MX1 + hücreleri etiketlemek steril PBS çözeltisi içinde Poliinosinik-polisitidilik asit (PIPC, 2.5 mg / ml) hazırlamak ve 20 MX1-Cre + raportör fare g intraperitonal kez 10 gün boyunca her gün için 200 ul enjekte etmek için. </li><li> Ikamet MX1 + hematopoietik hücrelerin ortadan kaldırılması için, 9.5 Gy tek bir doz ile ışın tedavisi fareler. Intravenöz 16 ışınlama, transplant vahşi tip kemik iliği hücreleri (1x10 6 hücre / fare) 24 saat sonra. Not: MX1-uyarılabilir hücreler hematopoietik hücrelerin ve hematopoietik türetilmiş osteoklastlar, MX1 + hematopoietik hücrelerin ortadan kaldırılması MX1 + osteojenik hücrelerin görüntü kalitesini geliştirir ve kantitatif içerir beri. </li><li> Kemik iliği nakli sonrasında donör iliği hücrelerinin başarılı iskânından elde edilmesi amacıyla 4-6 hafta boyunca hayvanlar monitör. </li></ol> 2. Mohazirligi kullanın <ol><li> , IACUC onaylı bir prosedür kullanılarak, ketamin / ksilazin (100 mg / kg, xylazine 12 mg / kg vücut ağırlığı), 50 ul intraperitonal enjeksiyon ile fare anestezisi. Not: Etki süresi, ketamin / ksilazin ek bir doz ile uzatılabilir. </li><li> Fare tam ayak ve / veya kuyruk tutam yanıt eksikliği ile anestezi olup olmadığını belirleyin. Fare anestezi zaman (İsteğe bağlı), bantlama ile burun üzerinde izofluran gaz maskesi güvenli. Hayvan tam sedasyon sağlamak için izofluran seviyesini ayarlayın. </li><li> Bir elektrik düzenleyici veya küçük makas kullanarak saçınızı Clip. Saç parçaları çıkarın ve% 70 alkollü pamukla maruz kalan cildi sterilize. Kornea dehidratasyonu önlemek için göz yaşartıcı jeli uygulayın. </li></ol> 3.. Mikrokırık Yaralanma <ol><li> Hayvan tam sedasyon sağlandıktan sonra, kafa derisi cilt açmak için bir tek ters L şeklinde bir kesi yapmak. Kısaca, bir birinci enine bir kesi (en az 1 cm) starti yapmakBaşka kulağına bir kulaktan ng. 60 ° ~ ~ açın ve uzak burnundan 2-3 mm kadar burun doğru kesilirken devam ediyor. Not: Bu kesi yansıması için, alanı üzerinde yara dokularının oluşmasını önler. </li><li> Forseps ile yanlara doğru çekerek cilt kapaklarını ayırın. Her iki frontal kemik ve sagital ve koronal sütür kesişme açıkça maruz olmalıdır. </li><li> Kalan tüm kıllar ortadan kalkıncaya kadar steril PBS ve steril gazlı bez ya da pamuklu çubukla hafifçe silinerek ile temizlenerek açık yüzeyini temizleyin. </li><li> Kalvaryumda mikro çatlaklar oluşturmak için, bir elinizle fare kafası ve başka bir el ile bir 30 G iğne tutun. Hafif basınç ile 30 G iğne ucu takarak ve hareket bükerek sagital ve koronal sütür kavşak yakınında sol frontal kemik üzerinde bir mikro-delinme (&lt;1 mm derinlikte ~ 0.2 mm çapında bir yara) olun. Dikkat: Böylece, bleedi en aza indirmek, beyin içine nüfuz iğne önlemek için çok önemlidirng ve doku hasarı. </li><li> Daha büyük bir iğne (20 veya 25 G) moduna geçmek ve iğne (~ 0.5 mm çap) çevirerek lastik deliği genişletmek. </li><li> Kontralateral frontal kemik ikinci patlağı oluşturmak için adım 3,3-3,5 tekrarlayın. </li><li> Kanama durana kadar PBS sürekli düşmesi ile yaralanan noktalar silin. Not: kırık sitelerinde Kanama uygun görüntüleme ile engel ve skar oluşumu neden olacaktır. </li><li> Kurumasını önlemek için kafatası üzerinde steril fizyolojik tuzlu su çözeltisi ya da% 2 METHOCEL bir damla uygulanır. Not: görüntü netliğini azaltacak, kafatası yüzey kurumasına izin vermeyin. Bu alanı kapsayacak şekilde jel veya tuz yeterli bir miktarda kullanmak önemlidir. </li></ol> 4. Intravital Görüntüleme <ol><li> (İsteğe bağlı) görüntüleme önce, bir farenin kan damarları görselleştirmek için bir damar boya ile enjekte edilir. Uygun olmayan bir Qtracker 705 80 m seyreltildi (50 mM borat tamponu içinde 2 uM çözelti) ile 20 ul, retro-orbital enjektePBS l. Reaktif atıkları en aza indirmek için bir insülin şırınga kullanın. Sinyal yeterince parlak değilse, ilave miktarlarda gerekli olabilir. </li><li> Tarayıcı açın. Not: Bir çokgen tabanlı lazer tarayıcı bir video hızında eşzamanlı çoklu kanal görüntü alma (saniyede 30 kare) sağlar. Video hız tarama canlı hayvan görüntüleme için çok önemlidir. </li><li> (: Safir lazer Femto saniye titanyum) çoklu foton lazer açın. 880 nm dalga boyunu ayarlayın ve kemiğin ikinci harmonik nesil görüntüleme (440 nm) için gücünü ayarlamak. GFP ve tdTomato uyarma, 491 nm ve 561 nm katı hal lazerleri açın. </li><li> PMT Her bir sinyal için (photomultiplier tüp) dedektörleri açın (ikinci harmonik üretimi için 435 ± 20 nm band geçiren filtre, GFP için 528 ± 19 nm band geçiren filtre ve tdTomato için 590 ± 20.) (İsteğe bağlı) Qtracker 705 sinyalini algılamak için bir 695 ± 27.5 nm bant geçiren filtre ile 638 nm helyum-neon lazer ve bir PMT kullanın. </li><li> PlacBir XYZ-eksen motorize mikroskop sahnede hayvan e. (Bu hayvan kaybı riskini azaltır) vücut ısısını korumaya yardımcı bir elektrikli ısıtma pedi ile en rahat pozisyonda fare tutun. Görüntüleme sırasında hareketini en aza indirmek ve mümkün olduğunca yatay görüntülü alan tutmak için fare tutmak için bant kullanın. </li><li> Kurumasını önlemek için kafatası sıcak% 2 metilselüloz jel ya da fizyolojik tuzlu su çözeltisi içinde bir damla uygulanır. Görüntüleme alanında bir cam kapak koyun. Calvaria taramak için (0.9 NA ile 30x su daldırma objektif) bir düşük büyütme lensi kullanın. </li><li> XYZ-eksen kontrolörü kullanarak kemiklerden SHG sinyalini algılayarak calvaria yüzeyini bulmak ve bu sagital sütür ve koronal sütür arasındaki kesişme gibi çok önemli bir dönüm noktası konumunu tanımlamak. Jlalınır ve XYZ koordinatlarını kaydetmek. </li><li> SHG ve floresan sinyallerini gözlemleyerek yaralanma konumu aramak için devam ediyor. </li><li> Yaralanma siteler veya bölge o zamanf ilgi bulunan, ilgi konusu hücrelerden SHG ve floresan sinyalleri içeren en iyi odak düzlemi, bir görüntü elde. Kaydet XYZ koordinatları ve sagital ve koronal sütür kesiştiği için mesafe görüntüleme sonraki tur için kendi hassas konum tanımlamak için. </li><li> Kırığı yaralanma 3D hücresel ve kemik yapıları toplamak için Z-yığınlar tarafından görüntü kaydı - Endosteal kemik yüzeyinden ~ 100 mikron derinliğinde (2 5 mikron aralığı). Yaralanma bir tarafının görüntüleme tamamlanmasından sonra, bir sonraki yaralanma siteleri için görüntüleme işlemini tekrarlayın. </li></ol> 5.. Mesaj Operasyon Prosedürleri <ol><li> Görüntüleme sonra kafatası metilselüloz jel kaldırmak için steril tuz çözeltisi ile görüntüleme sitesi yıkayın. Steril pamuklu çubuk kullanarak, yüzeyde üçlü antibiyotik merhem küçük bir miktar uygulanır. Deri kanatlar örtün ve cerrahi sütür tekniği ile saç derisini yeniden kapatın. Bu bir hipoalerjenik dikiş ipliği (emilebilir Polyglactin su ile yapılabilirTure) ve 5-0 boy dikiş iğnesi. Dikkat: İyi dikiş tekniği skar oluşumunu en aza indirir. </li><li> / Kg buprenorfin, 48 saat boyunca her 12 saatte ameliyat sonrası 0.05-0.1 mg IP enjeksiyonu ile tüm hayvanları tedavi. Onlar yeterli bilince geri kazanana kadar sıcak bir kurtarma odasına hayvanları tutmak. 3 ila 5 gün sonra, dikiş yeniden ve kırık iyileşmesi sırasında hücresel değişiklik izlemek için Intravital görüntüleme adımları tekrarlayın. </li></ol>

<ol><li>Harada, S., Rodan, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+osteoblast+function+and+regulation+of+bone+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Control of osteoblast function and regulation of bone mass.</a> Nature. 423, 349-355 (2003).</li>
<li>Manolagas, S. C., Parfitt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+old+means+to+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">What old means to bone.</a> Trends Endocrinol Metab. 21, 369-374 (2010).</li>
<li>Khosla, S., Riggs, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+age-related+bone+loss+and+osteoporosis%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinol+Metab+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of age-related bone loss and osteoporosis.</a> Endocrinol Metab Clin North Am. 34, 1015-1030 (2005).</li>
<li>Friedenstein, A. J., Chailakhyan, R. K., Latsinik, N. V., Panasyuk, A. F., Keiliss-Borok, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cells+responsible+for+transferring+the+microenvironment+of+the+hemopoietic+tissues.+Cloning+in+vitro+and+retransplantation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Stromal cells responsible for transferring the microenvironment of the hemopoietic tissues. Cloning in vitro and retransplantation in vivo.</a> Transplantation. 17, 331-340 (1974).</li>
<li>Mendez-Ferrer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+and+haematopoietic+stem+cells+form+a+unique+bone+marrow+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal and haematopoietic stem cells form a unique bone marrow niche.</a> Nature. 466, 829-834 (2010).</li>
<li>Park, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+Bone+Marrow+MSCs+Are+Dynamic%2C+Fate-Restricted+Participants+in+Bone+Maintenance+and+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Endogenous Bone Marrow MSCs Are Dynamic, Fate-Restricted Participants in Bone Maintenance and Regeneration.</a> Cell Stem Cell. 10, 259-272 (2012).</li>
<li>Schindeler, A., McDonald, M. M., Bokko, P., Little, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+remodeling+during+fracture+repair%3A+The+cellular+picture%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Bone remodeling during fracture repair: The cellular picture.</a> Semin Cell Dev Biol. 19, 459-466 (2008).</li>
<li>Holstein, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+affects+early+fracture+healing+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Rapamycin affects early fracture healing in mice.</a> Br J Pharmacol. 154, 1055-1062 (2008).</li>
<li>Maes, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblast+precursors%2C+but+not+mature+osteoblasts%2C+move+into+developing+and+fractured+bones+along+with+invading+blood+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Osteoblast precursors, but not mature osteoblasts, move into developing and fractured bones along with invading blood vessels.</a> Dev Cell. 19, 329-344 (2010).</li>
<li>Grcevic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+fate+mapping+identifies+mesenchymal+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">In vivo fate mapping identifies mesenchymal progenitor cells.</a> Stem Cells. 30, 187-196 (2012).</li>
<li>O'Neill, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-computed+tomography+assessment+of+the+progression+of+fracture+healing+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Micro-computed tomography assessment of the progression of fracture healing in mice.</a> Bone. 50, 1357-1367 (2012).</li>
<li>Kovar, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared-labeled+tetracycline+derivative+is+an+effective+marker+of+bone+deposition+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Near-infrared-labeled tetracycline derivative is an effective marker of bone deposition in mice.</a> Anal Biochem. 416, 167-173 (2011).</li>
<li>Mayer-Kuckuk, P., Boskey, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+promotes+progress+in+orthopedic+research%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging promotes progress in orthopedic research.</a> Bone. 39, 965-977 (2006).</li>
<li>Lo Celso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+tracking+of+individual+haematopoietic+stem%2Fprogenitor+cells+in+their+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche.</a> Nature. 457, 92-96 (2009).</li>
<li>Kuhn, R., Schwenk, F., Aguet, M., Rajewsky, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+gene+targeting+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Inducible gene targeting in mice.</a> Science. 269, 1427-1429 (1995).</li>
<li>Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+bone+marrow+transplantation+%28BMT%29%3A+providing+optimal+veterinary+and+husbandry+care+to+irradiated+mice+in+BMT+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%3A+JAALAS%22%5BJournal%5D)">Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 48, 11-22 (2009).</li>
<li>Tu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osterix+overexpression+in+mesenchymal+stem+cells+stimulates+healing+of+critical-sized+defects+in+murine+calvarial+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Osterix overexpression in mesenchymal stem cells stimulates healing of critical-sized defects in murine calvarial bone.</a> Tissue Eng. 13, 2431-2440 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali İlgi olmadığını beyan ederim.

Iskelet kök hücrelerin düzenlenmesi kemik rejenerasyonu elde etmek için daha iyi yöntemler tanımlanması için büyük önem olabilir. Hücresel düzeyde nicel ve sıralı görüntüleme teknik açıdan zorlayıcı olmuştur. Fare uzun kemik kırığı modeli yaygın olarak kullanılan ve biyomekanik çalışmalar 17 için uygun olmasına rağmen, derin doku konumu, düzensiz kırık boyutu, yumuşak doku hasarı ve stabilize fiksatör uygulama sıralı Intravital görüntüleme sınırlıdır. Burada, konfokal / iki foton intravital mikroskopi ve bir ...

Dejeneratif kemik hastalıkları ve osteoporotik kırık riski yüksek yol yaşa bağlı kemik kaybı halk sağlığı 1 önemli bir sorun haline gelmiştir. Kemik bakım kemik oluşturucu osteoblastlar ve kemik erimesi ile ilgili osteoklastı tarafından kontrol edilir. Kemik oluşturan hücreler kusurlar, yaşa bağlı kemik kaybı, dejeneratif kemik hastalıkları 2,3 bir ana nedenidir. Kapsamlı araştırma kırık iyileşme iyileştirilmesi odaklanmış olsa da, güvenilir ilaçların keşfi dejeneratif kemik hastalıkları tedavi ve osteoporotik kırıkların zayıflığını tersine çevirmek için önemli bir sorun olmaya devam etmek. Böylece, kemik rejenerasyonu ve onarımı, kemik oluşturan hücreler ve onların denetim mekanizmalarının kaynağını inceleyerek iskelet yenilenmesini artırmak ve kemik kaybı hastalıkları tersine çevirmek için yeni bir fikir verir. Kemik iliğinde multipotent mezenkimal hücrelerin varlığı clonogenic popülasyonlarının tanımlanması göre önerilmiştir ki farklı olabilirOsteogenik içine sokularak, adipogenic ve kondrojenik soylar ex vivo 4.. Son zamanlarda birçok çalışma iskelet / mezenkimal kök hücreler (DGM / MKH) osteoblast bir doğal kaynaktır ve kemik döngüsü, yeniden ve kırık onarımı 5,6 için kritik olduğunu bildirdi . Buna ek olarak, bizim soy izleme çalışması olgun osteoblastlar beklenmedik bir şekilde kısa yarı ömrü (~ 60 gün) var ve sürekli olarak normal homeostatik ve kırık tamiri koşullarda 6 hem kendi kök / progenitör hücreler tarafından doldurulan olduğunu ortaya çıkardı. Bununla birlikte, in vivo kök hücre kimliği ve ne kadar bu gibi hücreler yaralanma parçalanması ve kemik oluşturan hücreler, belirsiz arz tepki. Bu nedenle, fizyolojik şartlar altında göç, çoğalmasını ve endojen DGM&#39;ler / MKH&#39;lerin farklılaşmasını analiz edebilir bir yöntem geliştirmek için önemlidir. Kırık onarımı karmaşık bir dizi ile düzenlenen bir çok selüler ve dinamik bir süreçtirsitokinler ve büyüme faktörleri 7. Kırık çalışmaları için en popüler yaklaşım, uzun kemik kırığı olan bir hayvan modeli kullanmak ve kemik kesit ve imünoflöresan teknikleri 8-10 tarafından kemikleri analiz etmektir. Bu onarım işlemi mikro CT 11, yakın kızıl ötesi floresan 12 ve 13 kemilüminesans görüntüleme de dahil olmak üzere birden fazla görüntüleme teknikleri ile izlenebilir. Bununla birlikte, her bir teknik belirli sınırlamaları vardır ve in vivo olarak hücresel düzeyde DGM / MSC fonksiyonu izlemek için etkili bir yolu olmuştur. Son zamanlarda, konfokal / iki foton İntra vital mikroskopik geliştirilen ve hayvanlara 14, canlı da tek hücreli çözünürlükte kemik iliği mikro-bağlamında nakledilen kanser hücreleri ve hematopoietik kök hücreleri tespit etmek için kullanılmıştır. Soy izleme modelleri bir dizi ile bu teknolojiyi birleştirerek, osteojenik kök / progenitör hücreler genetik geçici ac ile işaretlenmiş olabilir tanımlamak başardıkmyxovirus direnç -1 (MX1) promoteri ve MX1 kaynaklı progenitörlerin tivasyon zaman içinde olgun osteoblastların çoğunluğu koruyabilir ama yetişkin fare 6 kondrositlerin nesil katılmazlar. Buna ek olarak, MX1 etiketli OSPCs kırık iyileşmesi 6 yeni osteoblastların çoğunluğu kaynağı olduğunu gösterdi. Burada, osteo-dizi izleme modelleri ve intravital mikroskopi kullanılarak, bir protokol kırık onarımında MX1 + osteojenik kök / projenitör hücrelerin in vivo kinetiklerini belirlemek için sağlanır. Bu protokol kırık siteleri içine osteojenik kök / atalarıdır tehcir ve erken onarım süreci osteoprogenitör genişleme kantitatif ölçümünü izlemek için sıralı görüntüleme sunar. Bu yaklaşım, kemik onarım iyileştirmek için tedavi adayların değerlendirilmesi dahil olmak üzere birden bağlamlarda yararlı olabilir.

<table><tbody><tr><td>C57BL / 6J (H-2B)</td> <td>Jackson Laboratuvarları (Bar Harbor, ME)</td> <td>000664</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin Hidroklorür Enjeksiyonu</td><td>Bionichepharma</td><td>67457-001-10</td> <td>&nbsp; Flakon boyutu: 10 ml (50 mg / ml)</td></tr> <tr><td>Ksilazin Steril Çözelti</td><td>Lloyd Inc.</td><td>NADA # 139-236</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin Hl</td><td>BEDFORD LAB</td><td>NDC 55390-100-10</td><td>Şişe: 0.3 mg / ml, Dozlar: 0.05-0.1 mg / kg</td></tr><tr><td>DPBS, 1X</td><td>CORNING cellgro</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Alkol Hazırlama Pedleri (%70 İzopropil alkol)</td><td>Kendall WEBCOL</td><td>5110</td><td></td></tr><tr><td>İnce Cerrahi Makas</td><td>FST</td><td>14568-09</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra ince Forseps</td><td>FST</td><td>11150-10</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL*Plus Sütür</td><td>Ethicon</td><td>VCP490G</td><td></td></tr><tr><td>Qtracker 705 hedeflenmemiş kuantum nokta</td><td>Invitrogen</td><td>Q21061</td><td></td></tr><tr><td>Methocel %</td><td>2OmmiVision</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pIpC (Poliinosinik-polisitidlik asit)&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P0913-50MG</td><td>100 & mu; l (PBS'de 2,5 mg / ml) 10 g fare için</td></tr><tr><td>Mai Tai Ayarlanabilir Ultra Hızlı Lazerler</td><td>Spectra Fizik Çift</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Calypso 491 + 532 nm DPSS lazer</td><td>Cobolt AB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Radius-635 HeNe lazer</td><td>Tutarlı</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ardışık<em&gt; in vivo</em&gt; kırık onarım sırasında osteojenik kök / progenitör hücrelerinin görüntüleme

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Kemik sürekli devrediyor ve yüksek rejeneratif yaralanma takip ediyor. Osteojenik kök / progenitor hücreler uzun zaman var olduğu öne sürülmüştür, ancak bu hücrelerin in vivo gösteri ancak son zamanlarda elde edilmiştir. Burada, in vivo görüntüleme teknikleri, endojen osteojenik kök / progenitör hücrelerin rolünü (OSPCs) ve kemik tamir kendi soyu araştırmak için temin edilmiştir. Modelleri ve kalvarial kemik uyarılan mesafeli mikro Intravital görüntüleme izleme osteo-soy hücre kullanarak, OSPCs doğrudan erken onarım sürecinde kritik olaylar meydana geldiği yaralanma sonrası ilk birkaç gün boyunca görülebilir. Yaralanma siteleri sırayla OSPCs, yaralanma taşınmaya sayısındaki artış ve kemik oluşturan osteoblastlar farklılaştığı ortaya görüntülü olabilir. Bu yöntemler kemik rejenerasyonu ve onarımı için kök hücre-içsel ve dışsal moleküler düzenleyicilerin rolünü araştıran bir araç sunuyoruz.

<html> Stabilize uzun kemik kırığı modeli kırık çalışmalarda popüler olmuştur. Ancak, uzun kemik kırığı veya büyük modeller birden fazla doku hasarına neden olabilir ve bu nedenle, kemik hücre fonksiyonu kantitatif ölçümü bir sınırlama var. Biz iğne delme (Şekil 1A-1C) ile kalvarial frontal kemiklerin üzerinde bir minimal invaziv yaralanma (dura mater içine az veya hiç işgali ile en az 1 mm çap) geliştirdi. Bu kemik (diğer dokuların müdahalesi olmadan net yaralı kemik görüntüleme, kemik hücreleri ve dama...

Kırık iyileşmesi kemik progenitör fonksiyonunun kantitatif ölçümü yüksek çözünürlüklü seri görüntüleme teknolojisini gerektirir. Burada, protokoller görseli sırayla ve kemik kırığı tamir sürecinde endojen osteojenik kök / progenitör hücrelerin hareketi, çoğalması ve farklılaşması ölçmek için intravital mikroskopisi ve osteo-dizi izleme kullanarak verilmiştir.

Ardışık<em&gt; In vivo</em&gt; Kırık Onarım sırasında Osteojenik Kök / Progenitör Hücrelerinin Görüntüleme

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Bu prosedürün genel amacı, kemik kırığı onarımında endojen osteojenik kök ve progenitör hücrelerin migrasyonunu, proliferasyonunu ve diferansiyasyonunu ardışık olarak izlemek ve nicelleştirmektir. Bu işlem, öncelikle polisinosik polisitilik asit enjeksiyonu ile in vivo olarak miksovirüs, influenza virüs direnci veya MX1 pozitif hücrelerin işaretlenmesi ve ardından yerleşik MX1 pozitif hematopoetik hücrelerin radyasyonla ortadan kaldırılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, yaban tipi kemik iliği hücreleri ışınlanmış farelere sistematik olarak uygulanır.Ardından, iğne ile delme işlemi uygulanarak farenin Cal bölgesinde mikro kırıklar oluşturulur. Son olarak, mikro kırık onarımının ardışık intravital görüntülemesi gerçekleştirilir. Nihayetinde, bu intravital görüntüler, osteojenik kök ve progenitör hücrelerin kırık bölgelerine akış ve genişleme dinamiklerini değerlendirmek için kullanılabilir.Bu tekniğin temel avantajı, kırık iyileşmesi sürecinde osteojenik kök ve progenitör hücrelerin in vivo tekrarlayan görüntülemesine olanak tanımasıdır. Bu tekniğin uygulama alanı, kırık iyileştirme ve osteoporoz tedavilerine kadar uzanmaktadır. Çünkü bu yöntem, kemik rejenerasyonu ve onarımınd

sequential-vivo-imaging-osteogenic-stemprogenitor-cells-during

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

İnsan perivasküler kök hücreler (PSC'ler) mezenkimal kök hücreler (MKH) benzer iskelet doku yenilenmesine yönelik yeni bir kök hücre sınıfı vardır. PSC'ler standart bir yağ emme prosedürleri sırasında temin adipoz dokusu FACS (floresans aktive hücre ayırma) yoluyla izole edilebilir, ardından kemik oluşumunu sağlamak için bir osteoendüktif iskelesi ile...

Kemik Rejenerasyon için İnsan perivasküler Kök Hücre kullanın

Bu makale, modifiye İlizarov yimi uygulamaya dayanır uzun kemik kırığı stabilize edilmesi için bir yöntemi...

Distraksiyon Osteogenezi, ya da Eleştirel Ölçekli Kusurların Şifa, Intramembranous kemikleşme değerlendirilmesi için Kademe Stabilize Kırıklar oluşturma

Hematopoietik kök ve projenitör hücreler (HSPCs) ve kemik iliği niş arasındaki etkileşimin doğası tam olarak anlaşılamamıştır. Özel donanım modifikasyonları ve çok adımlı bir satın alma protokolü ex vivo görüntünün kemik iliği alanları içinde bağlantılı etiketli HSPCs, izleme etkileşimleri ve hareket için iki-foton ve konfokal mikroskopi kullanımına izin verir.

Yetişkin Fare Kalvaryal Kemik İliği içinde Hematopoietik kök hücrelerin Vivo 4-Boyutlu Takip

Bu protokol, gama sintigrafisi kullanarak hücre sağkalımını ve doku dağılımını belirlemek için at mezenkimal kök hücrelerinin radyo-etiketlenmesini ve bunların attaki tendon yaralanmalarına implantasyonunu açıklar.

Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip

Endochondral kemik iyileşme sırasında kırık Kallus dokusu geliştirme değerlendirilmesi iyileşme süreci izlemek için önemlidir. Burada, bir manyetik rezonans görüntüleme (MRG) kullanımı raporu-uyumlu eksternal fiksatör fare uyluk için MRG izin farelerde kemik rejenerasyon sırasında tarar.

Vivo Fare uyluk için bir MRI uyumlu Osteosentez aygıtı kullanma farelerde kemik iyileşme sırasında kırık Kallus gelişimi değerlendirme

Fare kapalı femur kırığı kırık iyileşmesi eğitim için güçlü bir platform ve kemik rejenerasyon hızlandırmak için yeni tedavi stratejileri modelidir. Cerrahi bu iletişim kuralı tek taraflı kapalı femur kırık uyluk kemiği stabil İntramedüller çelik çubuk kullanarak farelerde oluşturmak için hedeftir.

Farelerde kapalı femur kırığı nesil: kemik şifa çalışması için bir Model

Kemik hücre dışı Matriks (BEM) modeli osteosarkom (OS) için de kurulan ve gösterilen işte. Bu uygun bir iskele birincil tümör büyüme vitro taklit ve OS histolojik ve cytogenic heterojenlik eğitim için ideal bir model sağlamak için kullanılabilir.

Üç boyutlu kemik hücre dışı matriks modeli osteosarkom için

Bu protokol, canlı hayvan intravital mikroskopisi kullanılarak CCL5 aracılı periosteal iskelet kök hücre göçünün gerçek zamanlı olarak saptanmasıdır.

Farelerde Periosteal İskelet Kök Hücrelerinin CCL5 Kaynaklı Göçünün Gerçek Zamanlı Görüntülenmesi

Bu protokol, kırık iyileşme çalışmaları için intramedüller tel ile stabilize edilen farelerin uyluk kemiğinde diyafiz kırığı oluşturulması için cerrahi bir prosedürü açıklar.

Farelerde Diafiz Femur Kırığı Modelinin Kurulması

Murin kemik iliği yaralanması modeli, intramembranöz ossifikasyon yoluyla doğum sonrası osteogenezi incelemek için yararlı bir araçtır. Bu basitleştirilmiş cerrahi protokol, yaralanma sonrası yeni kemik oluşumunun ve hücresel yanıtların aşağı akış değerlendirmesi için kemik iliği ablasyon prosedürünü tanımlar.

Bir Murin Kemik İliği Yaralanması Modelinde İntramembranöz Ossifikasyon Yoluyla Postnatal Osteogenezi İncelemek için Geliştirilmiş Metodoloji

Keşfedin intravital mikroskopi kullanarak kemik kırığı onarımı sırasında endojen osteojenik kök/progenitör hücrelerinin göç, proliferasyon ve farklılaşmasını izleme yöntemini. Bu teknik tekrarlayan görüntüleme sağlar.

Ardışık

Daha fazla video keşfet