Name: Bir olarak Beyin Microslices arasında excitotoxic uyarılması In vitro İnme Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-04T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Öğrenin beyin mikro dilimlerinde eksitotoksisite uyarılması için in vitro inme modeli geliştirmeyi. Bu yöntem, olgun beyin dokusunu koruyarak hayvan kullanımını azaltır ve nöron devrelerini muhafaza eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Avustralya Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi, Hunter Tıbbi Araştırma Enstitüsü ve Newcastle Üniversitesi&#39;nden araştırma fonları tarafından desteklenmiştir.

Tüm prosedürler NSW Hayvancılık Araştırma Yasası, NSW Hayvancılık Araştırma Yönetmeliği ve Uygulama için Avustralya Kanunu dahil ilgili kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yanı sıra Newcastle Üniversitesi Hayvan Bakım ve Etik Komitesi onayı ile yapılır Bakım ve Bilimsel Amaçlı Hayvan kullanımı. 1.. Beyin Doku diseksiyonu <ol><li> Başları kesilerek on iki haftalık erkek fareleri kurban. Sıçanlar ya da çarpıcı ve başları kesilerek feda edilebilir ya da ilk izofluran (% 5 indüksiyon,% 1.5-2 bakım)% 70 N2 ve% 30 O2 ile anestezi edilmesi ve daha sonra başları kesildi. </li><li> Mümkün olduğunca hızlı kafatası beyin kaldırmak (ideal, bu az 2 dakika içinde yapılmalıdır). </li><li> Serbest el diseksiyon ile korteks kaldırmak. Mai şekilde diseksiyon mümkün beyne az hasar ile, mümkün olan en kısa sürede yapılmalıdırdilim bütünlüğünü ntain. </li><li> Herhangi bir artık deri kaldırmak için, vs kürk, kan, 37 ° C&#39;de Krebs tamponu (118 mM sodyum klorid, 4.7 mM potasyum klorür, 1.3 mM kalsiyum klorür, az miktarda (3-5 mi) içinde beyin batırmak 1.2 mM potasyum dihidrojen fosfat, 1.2 mM magnezyum sülfat, 25 mM sodyum hidrojen karbonat, 11.7 mM glikoz, 0.03 mM disodyum etilendiamin tetraasetik asit (EDTA),% 95 oksijen /% 5 karbon dioksit (karbojen), pH 7.4) ile dengelenmiştir. </li></ol> 2. Microslices hazırlanması <ol><li> Filtre kağıdı iki dilim yerleştirilir ve sıcak Krebs tamponu ile nemlendirilmiş hangi bir McIlwain helikopter sahnede beyin yerleştirin. Beyin ve sıcak Krebs tamponu ile ıslatılmış filtre kağıdı Ol, ama çok ıslak olmayan beyin etrafında kaymasına neden olabilir kağıdın yüzeyinde serbest sıvı olduğu. </li><li> 250 mikron koronal bölüme beyin dilimleyin. Besin, oksijen ve atık maddeler inci gibinormal olarak kan dolaşımı izole edilmiş sinir dokuda dokuyu saran bir sıvı ile değiştirilir ile değiştirilir de, dilimlerin büyüklüğü yeterli oksijen ve besin alışverişi yapılmasına izin vermek kalınlığı 400 um &#39;den fazla olmamalıdır. </li><li> McIlwain evre 90 ° çevirin. </li><li> 250 mikron sagital dilimlere beynini dilimleyin. Burada, bu beyin kesitleri (değişken uzunlukta, 250 um x 250 um dilimleri dokusunun kalınlığına bağlı olarak) microslices olarak adlandırılır. </li><li> (El Krebs tampon miktarı doku miktarına bağlıdır) 10-15 ml 37 ° C Krebs tamponu ile bir yuvarlak tabanlı tüp içine microslices yerleştirin. </li></ol> 3. Microslices ekilibre <ol><li> Yavaşça bireysel microslices askıya kadar ajitasyon, ve sonra onları yerçekimi altında yerleşmek için izin verir. </li><li> Dikkatle nedeniyle askıya hücre enkaz bulutlu olacak, süpernatant kaldırmak ve taze 37 ° C 10 ml ekleyinKrebs tampon tüpüne. </li><li> Enkaz çoğunluğunun çıkarılması ile sonuçlanacaktır ki, bu yıkama işlemi dört kez tekrarlayın. </li><li> Bunu takiben, nazik sallama / ters ile, 37 ° C&#39;de dengeye microslices, ve Krebs, toplam 1 saat boyunca her 15 dakikada bir tampon değiştirin. </li><li> Bu anda, 2 ml taze 37 ° C Krebs tampon ekleyin ve düz dipli polistiren 15-20 microslices (microslice süspansiyonu 150 ul) aktarmak tarafından oluşturulabilir yumuşatılmış kenarları (ile ekstra geniş çaplı bir pipet kullanarak 5 ml tüpler P1000 ucunun ucundan ~ 2 mm kesme). Her microslice oksijenli atmosfere bir kaç milimetre daha fazla değildir, böylece, tek kat olarak borunun tabanı üzerinde eşit microslices yayın. </li></ol> 4. Excitotoxic Stimülasyon <ol><li> 37 ° C&#39;de inkübe microslices ve sürekli pozisyonu olan bir gaz hattı kullanarak, 150 ul microslice süspansiyon yüzeyi üzerine geçmek karbojensadece microslice süspansiyonuna (mekanik aksamasını önlemek için) yüzeyinin üstünde ed. </li><li> (: Nihai konsantrasyon 2.5 mM glutamat + 50 uM glisin eksitotoksik uyarıcı) ya da tek başına 150 ul Krebs tamponu (Stimülasyon kontrol) 150 ul 5 mM glutamat + 100 Krebs tamponu içerisinde uM glisin ile ya microslices tedavi. Çeşitli uyaranlara bu aşamada kullanılabilir (de dahil olmak üzere, ancak bunlarla sınırlı değildir, AMPA, NMDA + glisin, KCl depolarizasyon ve oksijen / glikoz yoksunluğu). </li><li> Çeşitli zamanlarda post-stimülasyonu (0, 30, 60, 90, 120 ve 300 saniye) de inkübasyon çözüm çıkarın ve buz soğukluğunda homojenizasyon tampon maddesi (30 mM Tris, pH 7.4, 1 mM etilen glikol içinde 300 ul ile değiştirin tetraasetik asit, 4 mM EDTA, 100 uM amonyum molibdat, 5 mM sodyum pirofosfat, 25 mM sodyum fluorür, 1 mM sodyum ortovanadat, 1 mM phenylmethanesulfonylfluoride, adet tam proteaz inhibitör kokteyli). </li><li> Bir cam-Teflon Dounce Homojenizatörü kullanılarak, buz üzerinde homojenize microslices(20 vuruş, 700 rpm). </li><li> Gibi -80 ° C arasında ve çeşitli sinyal verici moleküllere, ölüm moleküller saklayın homojen western blot ile ölçülebilir. </li></ol>

<ol><li>Lo, E. H., Dalkara, T., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms%2C+challenges+and+opportunities+in+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms, challenges and opportunities in stroke.</a> Nat. Rev. Neurosci. 4, 399-415 (2003).</li>
<li>Wang, Y., Qin, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+mechanisms+of+excitotoxic+neuronal+death%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular mechanisms of excitotoxic neuronal death.</a> Apoptosis. 15, 1382-1402 (2010).</li>
<li>Vogt Weisenhorn, D. M., Roback, L. J., Kwon, J. H., Wainer, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+of+cAMP%2FPKA+and+MAPK+signaling+in+neuronal+cells+is+dependent+on+developmental+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Coupling of cAMP/PKA and MAPK signaling in neuronal cells is dependent on developmental stage.</a> Exp. Neurol. 169 (1), 44-55 (2001).</li>
<li>Kharlamov, E., Cagnoli, C. M., Atabay, C., Ikonomovic, S., Grayson, D. R., Manev, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opposite+effect+of+protein+synthesis+inhibitors+on+potassium+deficiency-induced+apoptotic+cell+death+in+immature+and+mature+neuronal+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Opposite effect of protein synthesis inhibitors on potassium deficiency-induced apoptotic cell death in immature and mature neuronal cultures.</a> J. Neurochem. 65 (3), 1395-1398 (1995).</li>
<li>Kristensen, B. W., Noraberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+excitotoxic+profiles+of+ATPA%2C+AMPA%2C+KA+and+NMDA+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of excitotoxic profiles of ATPA, AMPA, KA and NMDA in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Brain Res. 917 (1), 21-44 (2001).</li>
<li>Lecrux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneously+hypertensive+rats+are+highly+vulnerable+to+AMPA-induced+brain+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Spontaneously hypertensive rats are highly vulnerable to AMPA-induced brain lesions.</a> Stroke. 38, 3007-3015 (2007).</li>
<li>Sattler, R., Charlton, M. P., Hafner, M., Tymianski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+influx+pathways%2C+not+calcium+load%2C+determine+neuronal+vulnerability+to+calcium+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Distinct influx pathways, not calcium load, determine neuronal vulnerability to calcium neurotoxicity.</a> J. Neurochem. 71, 2349-2364 (1998).</li>
<li>Morrison, B. 3rd, Saatman, K. E., Meaney, D. F., McIntosh, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+central+nervous+system+models+of+mechanically+induced+trauma%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">In vitro central nervous system models of mechanically induced trauma: a review.</a> J. Neurotrauma. 15, 911-928 (1998).</li>
<li>McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practical+Neurochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Practical Neurochemistry.</a> , Churchill Livingstone. London. (1975).</li>
<li>Skelding, K. A., Spratt, N. J., Fluechter, L., Dickson, P. W., Rostas, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((alpha+CaMKII+is+differentially+regulated+in+brain+regions+that+exhibit+differing+sensitivities+to+ischemia+and+excitotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">alpha CaMKII is differentially regulated in brain regions that exhibit differing sensitivities to ischemia and excitotoxicity.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 32 (12), 2181-2192 (2012).</li>
<li>Kavanagh, J. M., Dodd, P. R., Rostas, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3H%5DMK-801+binding+in+immature+and+mature+chicken+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">3H]MK-801 binding in immature and mature chicken forebrain.</a> Neurosci. Lett. 134 (1), 83-87 (1991).</li>
<li>Kavanagh, J. M., Bunn, S. J., Boyd, T. L., Rostas, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+glutamate+receptor+stimulated+inositol+phospholipid+metabolism+and+45Ca%282%2B%29-accumulation+in+posthatch+chicken+forebrain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in glutamate receptor stimulated inositol phospholipid metabolism and 45Ca(2+)-accumulation in posthatch chicken forebrain.</a> Neurosci. Lett. 194 (3), 161-164 (1995).</li>
<li>Sharps, E. S., McCarl, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+performance+liquid+chromatographic+method+to+measure+32P+incorporation+into+phosphorylated+metabolites+in+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">A high performance liquid chromatographic method to measure 32P incorporation into phosphorylated metabolites in cultured cells.</a> Anal. Biochem. 124, 421-424 (1982).</li>
<li>Bradbury, D. A., Simmons, T. D., Slater, K. J., Crouch, S. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurment+of+the+ADP%3AATP+ratio+in+human+leukaemic+cell+lines+can+be+used+as+an+indicator+of+cell+viability%2C+necrosis+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Measurment of the ADP:ATP ratio in human leukaemic cell lines can be used as an indicator of cell viability, necrosis and apoptosis.</a> J. Immunol. Methods. 240 (1-2), 1-2 (2000).</li>
<li>Rodnight, R., McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+in+tissue+metabolism%3A+3.+Study+of+tissue+fragments+with+little+or+no+added+aqueous+phase%2C+and+in+oils%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+J%22%5BJournal%5D)">Techniques in tissue metabolism: 3. Study of tissue fragments with little or no added aqueous phase, and in oils.</a> Biochem. J. 57, 649-661 (1954).</li>
<li>Shelanski, M. L., Gaskin, F., Cantor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubule+assembly+in+the+absence+of+added+nucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Microtubule assembly in the absence of added nucleotides.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 70 (3), 765-768 (1973).</li>
</ol>

Yazarlar bu yazının kapsamında yürütülen çalışmaların herhangi bir ilgili herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederim.

Burada, sağlam olgun beyin dokusunda eksitotoksisite ve iskemiye bağlı hücre ölümü ile ilgili moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılabilir microslices üretilmesi için bir in vitro bir teknik tarif edilmektedir. Bu teknik, uygun bir doku (Şekil 1-3), yani daha büyük bir Organotipik dilimleri 15 metabolik benzer üretir. Ayrıca, bu microslice modeli yakından vivo 10 eksitotoksisite kaynaklı beyin hasarı aşağıdaki gözlenen tepki karşılık gelir. AMPA,...

Inme en sık görülen serebral kan damarı tıkalı olduğunda oluşur iskemik inme, olduğunu. Kan akımının kesilmesinden kaynaklanan doku iskemisi membran depolarizasyonunu yaygın uyancı nörotransmitter salınımına neden olur ve hücre ölümünün aktivasyonuna yol açan hücre içi kalsiyum, sürekli yükseklik 1 yollar yer alır. Bu işlem, &quot;eksitotoksisite&quot; olarak geçecek olan ve inme 2 de dahil olmak üzere, çeşitli patolojilerin tarafından üretilen nöronal ölümle ilgili yaygın bir yoludur edilmiştir. Eksitotoksisite ve diğer nöronal hücre ölümü kaskadı dahil olan sinyal yollarının önlenmesi, inme sonrası nöronal hasarı sınırlandırmak için cazip bir yaklaşımdır. Bütün hayvan sistemlerini kullanırken eksitotoksisite ve iskemik inme dahil kesin moleküler mekanizmaları belirlenmesi zor olabilir. Gibi, primer embriyonik ve &#39;nöronal-benzeri&#39; (örn. neuroblasto olarakma ve adenokarsinom ölümsüzleştirdi hatları) hücre kültürü sistemleri sıklıkla kullanılır. Bu modellerin temel avantajları, nispeten düşük maliyetli manipüle edilmesi kolaydır ve hücre ölümü kolayca ölçülerek kantifiye edilebilir bulunmaktadır. Ancak, sinyal yolları kültürleme 3,4 kullanılan koşullar ve olgunlaşmamış nöronlar tarafından değiştirilmiş ve çizgileri farklı reseptörleri ifade ve beyni 5-8 olgun kıyasla sinyal molekülleri olabilir ölümsüzleştirdi edilebilir. (A kokültürü sistem kullanılırsa, ya da iki) olduğu gibi beyin dokusu birbirleri ile etkileşim hücre tipleri çeşitli içeren, heterojen ise Ayrıca, kültürlü nöronlar, sadece bir hücre tipinin bir inceleme sağlar. Organotipik kesit kültürü sistemleri (beyin dokusu ince dokusu) da kullanılabilir ve bunlar, in vivo olarak bulunanlar gibi bu modeller, heterojen hücre popülasyonlarının çalışma sağlar. Bu tekniği kullanarak, ancak, bir doku sadece sınırlı bir miktarda dilimleri, her hayvandan şekilde elde edilebilirSürece ölümsüzleştirilmiş hücre çizgileri olarak için kültürlenebilir, ve uzun süreli kültürde orta dilim yollarının ve reseptörler ve sinyal değişikliklere neden olabilir değildir. Olgun beyin Organotipik dilimleri üretmek için kullanılabilir iken, olgunlaşmamış beyninden dilim kültüre daha uygun olan ve daha yaygın olarak kullanılmaktadır. Nöronal sinyal yolları incelenebilir hangi kullanımı kolay olan sağlam olgun beyin, temsil eder ya da taklit eden modeller geliştirmek için bir ihtiyaç vardır. Burada, bir eksitotoksik veya iskemik zedelenmeden sonra, hücre ölümü ile ilgili moleküler mekanizmaları aydınlatmak için kullanılabilir sağlam sinir dokusu dahil, bir in vitro bir teknik tarif edilmektedir. Bu teknik, bir deney gerçekleştirmek için gerekli hayvan sayısını azaltır, tekrarlanabilir olduğunu, ve daha büyük Organotipik dilimleri için metabolik olarak benzer şekilde davranır canlı doku üretir. Buna ek olarak, nöronal devre, hücre etkileşimleri ve postsinaptik compartment kısmen bozulmadan kalır. Kullanılan fizyolojik tampon hücre &#39;tekrar kapatılması&#39; için membranların ve sağlayan hücreler kendi özgün membran direncini 9 kurtarmak için olanak sağlar. Bu beyin dilim modeli sadakatle eksitotoksikliği bağlı beyin yaralanmaları 10 aşağıdaki gözlenen tepkiler taklit edebilir, ve inme dahil moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Giyotin</td><td></td><td></td><td>Hayvan kafasını kesmek için kullanılır</td></tr><tr><td>Cerrahi ekipman</td><td></td><td></td><td>Forseps, makas, cımbız, etc., beyin çıkarma ve diseksiyon için</td></tr><tr><td>McIlwain helikopterleri McIlwain</td><td>helikopterleri, Mickle Engineering, Harvard Apparatus, Campden Instruments ve Ted Pella dahil olmak üzere bir dizi şirket tarafından üretilir / dağıtılır.</td><td></td><td>100-400 &#181 oluşturmak için kullanılır; m beyin bölümleri.</td></tr><tr><td>Yuvarlak tabanlı plastik tüpler</td><td>Greiner</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu</td><td></td><td></td><td>Dokuyu 37 ° C'de tutmak için; C</td></tr><tr><td>Nemlendirici/havalandırma aparatı</td><td></td><td></td><td>Mikro dilimleri nemlendirilmiş, oksijenli bir ortamda tutmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Düz tabanlı polistiren tüpler</td><td>Nunc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dounce Homojenizatör</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bir olarak beyin microslices arasında excitotoxic uyarılması<em&gt; in vitro</em&gt; İnme model

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Bütün hayvan sistemlerini kullanırken, iskemik inme gibi nöropatolojik koşullarında yer moleküler mekanizmaları, incelenmesi, zor olabilir. Örneğin, birincil ya da &quot;nöronal benzeri &#39;hücre kültür sistemleri yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu sistemler, çalışma için nispeten kolay olan ve (örneğin, hücre ölümü gibi) çeşitli işlevsel sonuçlar kolayca belirlenebilir hangi faydalı model sistemleri (örneğin, eksitotoksisite aracılı hücre ölümü yollar gibi) kültürlenmiş olgunlaşmamış nöronlarda muayene sonuçları ve yollar iken zorunlu olgun beyinde gözlenen aynı veya sağlam doku değildir. Bu nedenle, olgun sinir dokuda hücresel mekanizmalar incelenebilir hangi modeller geliştirmek için bir ihtiyaç vardır. Bu sağlam sinir dokusunda moleküler yollarının çeşitli araştırmak için kullanılan bir in vitro teknik geliştirdik. Bu tarifnamede tarif edilen teknik, sıçan kortikal doku kullanır, ancak bu teknik doku kullanmak için adapte edilebilirya da beyin bölgelerinde (örneğin, hipokampus, striatum, vb) (örneğin, fare, tavşan, kobay ve tavuk gibi) türlerin çeşitli. Buna ek olarak, uyarılar / çeşitli tedaviler (örneğin, eksitotoksik, inhibitörlerinin uygulanması, vs) kullanılabilir. Sonuç olarak, burada tarif edilen beyin kesit modeli eksitotoksisite kaynaklı beyin hasarı dahil moleküler çeşitli mekanizmalar incelemek için kullanılabilir.

Bu prosedür kullanılarak üretilen Microslices uygun olan ve çeşitli türlerin (örneğin, sıçan, fare ve tavuk) microslices üretmek için kullanılabilir. Canlılığı üç bağımsız tedbirler faydalanılmıştır: solunum oranı (Şekil 1), adenin nükleotid oranları (Şekil 2), ve doku potasyum içeriği (Şekil 3). Bu önlemleri kullanarak, microslices en az 2 saat sonrası kuşak için geçerli kalır ortaya konmuştur. Brain microslices uyaranların çeşitli sonra, ç...

Biz eksitotoksisite kaynaklı beyin hasarı dahil moleküler mekanizmaları incelemek için kullanılabilecek bir beyin kesit modeli geliştirdik. Bu teknik açıdan olgun beyin dokusunu oluşturur ve kısmen sağlam nöronal devreleri, hücresel etkileşimleri ve postsinaptik bölmeleri korurken, deney için gerekli olan hayvan sayısı azalır.

Bir olarak Beyin Microslices arasında excitotoxic uyarılması<em&gt; In vitro</em&gt; İnme Model

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Bu prosedürün genel amacı, in vitro bir inme modeli oluşturmak için beyin mikro dilimlerinele sitotoksik stimülasyon uygulamaktır. Bu işlem, öncelikle taze izole edilmiş bir beyinden mikro dilimlerin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise mikro dilimlerin hafif bir ajitasyon ile dengeye getirilmesidir.Dengelenme sağlandıktan sonra, mikro dilimler çeşitli deneysel manipülasyonlara hazır hale gelir. Sonuçlar, mikro dilimlerin oluşturulduktan sonra en az iki saat boyunca canlı kaldığını göstermektedir. Tekniğimizin primer embriyonik nöronal kültürler gibi mevcut diğer tekniklere göre temel avantajı, birden fazla hücre tipi içeren ve bu nedenle sağlam beyin dokusunu daha iyi temsil eden olgun beyin dokusu dilimlerini kullanmasıdır.İlk adım, taze beyin dokusu elde etmektir. Beyni az miktarda ılık Krebs tamponuna daldırın. Kalan deri, tüy veya kan kalıntılarını temizlemek için, ılık Krebs tamponu ile nemlendirilmiş iki adet filtre kağıdı ile macle wain doğrayıcıyı hazırlayın.Hazır olduğunda, beyni chopper tablasına yerleştirin. Beynin kaymasını önlemek için çalışma sırasında beyni ve filtre kağıdını sıcak Crebs tamponu ile nemli tutun. Yüzeyde çok fazla sıvı birikmesine izin v

excitotoxic-stimulation-brain-microslices-as-an-vitro-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Fototromboz son derece tekrarlanabilir bir şekilde ilgi alanları küçük ve iyi ayrılmış enfarktüsü uyaran için hızlı, minimal invaziv bir tekniktir. Bu transgenik farelerde beyin plastisitesi oluşturan hücresel ve moleküler okuyan cevapları için özellikle uygundur.

Photothrombotic İskemi: Fare İnme Araştırmalar bir Minimal İnvaziv ve tekrarlanabilir fotokimyasal Kortikal Lezyon Model

Iskemik beyin hasarı birçok açıdan üreyen veriyor entorhino-hipokampal organotipik dilim kültürleri için bir protokol, sunulmuştur. Nöronlarda değişikliklere ek olarak neurovasculature değişiklikleri inceleyerek, bu protokol yaralanma sonrası nöral dokuda plastik değişiklikleri incelemek için çok yönlü bir araçtır.

Içinde Neurovascular Yaptırma Analizi Entorhino-hipokampal Organotipik Dilim Kültürler

Burada, geri dönüşümsüz bir endotelyal nitrik oksit sentaz (eNOS) inhibitörünün (L-Nio) lokal enjeksiyonu ile murin beyaz cevherinde fokal inme üretimi için metodoloji sunuyoruz. Bu tekniğin potansiyel uygulamalarını genişleten iki stereotaktik varyasyon, retrograd nöronal izleme ve taze doku etiketleme ve diseksiyon sunulmaktadır.

Aksonal Dejenerasyon ve Beyaz Cevher Nörobiyoloji Çalışması Çok Yönlü Fare Modeli subkortikal beyaz madde İnme

Biz daha fazla ateş altında yatan erken etkinlik kazandırabileceğini kurulan eski-vivo beyin tekniğine dayalı bir yöntemini in vivo ve in vitro deneyler avantajlarını birleştiren mevcut. Ayrıca, tedavi ve tedavi edilmezse grubun aynı anatomik düzlemde doğrudan karşılaştırma için eşsiz bir fırsat temsil eder.

Ateş Ex Vivo sıçan beyin dilimleri kullanarak birincil olayları incelemek için alternatif bir yaklaşım

Microglia, yerleşik bağışıklık hücreleri beynin, çabuk morfolojik değişiklikler ile çevrenin değişiklikler cevap. Bu protokol iki fotonlu mikroskobu serotonin veya ATP doğru mikroglial süreçlerinde fareler dilim akut beyin cazibe çalışmak için nasıl kullanılacağını açıklar.

Mikroglial süreçleri cazibe ATP veya Serotonin akut beyin dilimleri içinde doğru iki fotonlu görüntüleme

Burada, renal korteks-hipokampus organotipik dilimlerin hazırlanmasını anlatıyoruz. Serumun kademeli ve kontrollü yoksunluğu altında, bu dilimler gelişen epileptik benzeri olayları tasvir eder ve epileptogenezin ex vivo modeli olarak kabul edilebilir. Bu sistem, spontan aktivitenin dinamiklerini izlemek ve epileptogenez boyunca nöroinflamatuar özelliklerin ilerlemesini değerlendirmek için mükemmel bir aracı temsil eder.

Renal Korteks-Hipokampus Organotipik Dilim Kültürlerinde Epileptogenez Modeli

Burada açıklanan fototrombotik inme modeli, bir inmenin, ışığa duyarlı bir boyanın kullanılmasından sonra lazer aydınlatma kullanılarak kalıcı mikrovasküler tıkanıklık indüklenerek sağlam kafatasından üretildiği yerdir.

Farelerde Modelleme İnme: Fototomboz ile Fokal Kortikal Lezyonlar

Protokol, moyamoya dışı akut iskemik inmenin tedavisi için ensefalomiyosinanjiyozis-iskemik beyin dokusunun pial yüzeyine vasküler temporalis kas flebinin greftlenmesi için yöntemler sağlamayı amaçlamaktadır. Yaklaşımın anjiyogenezi arttırmadaki etkinliği, farelerde geçici bir orta serebral arter tıkanıklığı modeli kullanılarak değerlendirilir.

Farelerde Orta Serebral Arter Oklüzyonu Kaynaklı İnme Sonrası Ensefalomiyosinanjiyoz Tedavisi İçin Bir Model

Bu protokol, floresan polistiren mikrosferler kullanılarak in vivo iki foton mikroskopi görüntüleme için optimize edilmiş kronik kraniyal pencere ve mikrovasküler embolizm fare fare modeli için adım adım yaklaşımın ayrıntılı bir açıklamasını içerir.

Floresan Polistiren Mikrosferleri Kullanarak In Vivo İki Foton Mikroskopi İçin Mikrovasküler Embolizm Fare Modeli

Kanıt yoktur birikmektedir, bu iskemik ön (PC) - beyne olmayan bir zarar iskemik meydan okuma - bir sonraki zarar iskemik hasara geçici bir koruma bahşeder. Biz C57Bl6 / J farelerde geçici fokal serebral iskemi (orta serebral arter tıkanıklığı, MCAO neden olduğu) için erken iskemik tolerans (IT) ikna etmek için bir ön hazırlık uyarıcı olarak ikili karotis arter tıkanıklığı (BCCAO) kurdu.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

Öğrenin beyin mikro dilimlerinde eksitotoksisite uyarılması için in vitro inme modeli geliştirmeyi. Bu yöntem, olgun beyin dokusunu koruyarak hayvan kullanımını azaltır ve nöron devrelerini muhafaza eder.

Bir olarak Beyin Microslices arasında excitotoxic uyarılması

Daha fazla video keşfet