Fonksiyonel Performans değerlendirilmesi Mdx Fare Modeli

Bu prosedürlerin genel amacı, zararlı olmayan birkaç fonksiyonel test vasıtasıyla kas işlevselliğini belirlemektir. Dört uzuvun kuvveti, kavrama kuvveti testi ile değerlendirilebilir, denge koordinasyonu ve kas durumu iki uzuv ve dört uzuv asma testlerinde değerlendirilebilir. Rotor çubuğu ayrıca denge, koordinasyon ve durumu değerlendirmek için de kullanılır.

Zorla koşu bandı koşusu, hastalığın ilerlemesini şiddetlendirmek için veya fareleri tüketmek için fonksiyonel bir testten önce kullanılabilir. Bu fonksiyonel testler, genetiğin rolünü ve potansiyel terapötik bileşiklerin kas performansı üzerindeki etkisini güvenilir bir şekilde değerlendirmek için kullanılabilir. Gösterilecek ilk test, dört uzuv kavrama gücü testidir.

Kuvvet dönüştürücü ayarının çekme için tepe gerilim modunda olduğundan emin olun ve ünite her kaydın başında sayacı sıfırlarken gram kullanın. Her farenin arka arkaya üç kez çekmesine izin verin. Fareyi kuyruğundan tutun ve yatay olarak ızgaraya doğru hareket ettirin.

Farenin ızgarayı her iki dört pençesiyle sıkıca kavradığını kontrol edin ve kavrayışını kırmak için çekin. Şebekeye uygulanan en yüksek kuvvet, manuel veya otomatik olarak kaydedilebilen transdüser ekranında gösterilecektir. Farenin yalnızca bir, dört PA veya arka bacakları kullandığı veya kutup sırasında döndüğü veya direğe açıkça direnç göstermediği herhangi bir denemeyi reddedin.

Fare üç kez çektikten sonra, en az bir dakikalık bir dinlenme süresi boyunca kafese geri koyun. Ardından, farenin her biri kısa bir dinlenme süresi izleyen dört dizi anket yapmasına izin verin. Bu sayede mouse toplamda 15 kez çeker.

İki uzuv asma testi için aparat, bantla bir rafa sıkıca tutturulmuş iki milimetre kalınlığında metal bir elbise askısıdır. Hangarı, fareyi kuyruğundan tutarak bir yatak tabakasının 37 santimetre üzerinde tutun. Telin yanına getirin.

Farenin teli sadece iki dört pençe ile kavramasına izin verin ve arka bacakları, fare sadece iki dört pençe ile tel üzerinde asılı kalacak şekilde indirin. Fare serbest bırakılır bırakılmaz zamanlayıcıyı başlatın. Serbest bırakıldıktan sonra, güçlü bir fare, dört uzuv ve izin verilen kuyruk ile teli yakalamaya çalışacaktır.

Bir fare, kablo üzerinde dengeleme veya kasıtlı olarak kablodan atlama gibi uygunsuz davranışlar gösterdiğinde, zamanlayıcıyı durdurmadan fareyi hemen kablonun üzerine yerleştirin. Fareler 600 saniye boyunca asılı kaldıklarında, onları telden çıkarın ve kafese geri koyun. Fareler telden düştüğünde, zamanlayıcıyı durdurun ve asılı kalma süresini doğrudan kaydedin.

Bu fareleri en fazla iki kez daha tekrar test edin. Dört uzuv asma testi için, farelerin düştüklerinde kendilerine zarar vermelerini önlemek ve aynı zamanda farelerin kasıtlı olarak ızgaradan atlamasını caydırmak için bir sıçan kafesinin kapağını yumuşak yatakların 25 santimetre üzerine yerleştirin. Ardından, fareyi dört pençesiyle ızgarayı kavrayacak şekilde ızgaranın üzerine yerleştirin.

Ardından, fare asılı kalacak şekilde ızgarayı ters çevirin ve zamanlayıcıyı hemen başlatın. Bir fare 600 saniye boyunca asılı kalabilirse, doğrudan kafesine geri koyun. 600 saniyeden önce şebekeden düşen fareleri rotor çubuğu için en fazla iki kez daha tekrar test edin.

Test edin, başlangıç hızını beş RPM'ye ayarlayın. Ardından, yavaşça dönerken tüpün üzerine beş adede kadar fare yerleştirin. Tüm fareler yerleştirildikten sonra, tüpün hızını 15 saniye boyunca beşten 45 RPM'ye yükseltin.

Ardından, koşunun geri kalanı için 45 RPM'de bırakın. Test boyunca çalıştırmayı izlemeye devam edin. Çalışma süresi yazılım tarafından sürekli olarak kaydedilir ve bir fare tüpten düştüğünde otomatik olarak durur.

Bu, tüpün altında bulunan zaman çubuğunu etkinleştirir. Dönen tüpü durdurmadan koşarken dönen fareleri yeniden konumlandırın. 500 saniye çalışabilen fareler için test oturumunu sonlandırın ve bu fareleri kafeslerine geri koyun.

Daha erken düşen fareler verin. Çalışma sürelerini iyileştirmelerine izin vermek için en fazla iki deneme daha yapın. Koşu bandı egzersiz testi için fareleri yatay bir koşu bandına yerleştirin.

Koşu bandını dakikada 12 metre koşu hızında başlatın. İlk seans sırasında, fareleri kemerin sonuna yaklaştıklarında hafifçe iterek koşmaya teşvik edin. Fareler 30 dakika çalıştıktan sonra, ya hemen iki uzuv asma testinde test edin ya da kafeslerine geri koyun.

Dokuz haftalık dişi MDX farelerinin dört uzuv kavrama kuvveti, burada gösterildiği gibi vahşi tip farelere kıyasla bozulmuştur. Bununla birlikte, ortalama yorgunluk %10'dan azdı ve haftada bir kez gerçekleştirilen iki uzuv asma Testindeki suşlar arasında farklılık göstermedi. Hem erkek MDX hem de vahşi tip fareler, testin ilk birkaç haftasında bir öğrenme eğrisi gösterdi.

Bununla birlikte, MDX farelerinin performansı, vahşi tip farelere kıyasla tüm zaman noktalarında daha kötüydü. İzin verilen maksimum 600 saniyelik asma süresi noktalı çizgi ile gösterilir. Dört. Uzuv asma performansı, erkek MDX ve vahşi tip farelerde haftada bir kez değerlendirildi.

Zamanla, MDX fareleri, vahşi tip farelerden daha kısa süreler boyunca asılı kaldı. Rotor çubuğu çalışma süreleri, 30 dakika boyunca bir koşu bandında koştuktan hemen sonra genç erkek MDX ve vahşi tip fareler arasında farklılık göstermedi. Dişi fareler iki uzuv asma testi ile test edilirken, tüm vahşi tip fareler izin verilen maksimum süreye kadar asılı kaldı.

Tüm MDX fareleri daha önce telden düştü. Membran hasarının varlığı, membrandaki yırtıklar yoluyla kas liflerinden sızan serum kreatin kinaz seviyeleri değerlendirilerek belirlendi. Kreatin kinaz seviyeleri, egzersiz öncesi MDX farelerde vahşi tip farelere kıyasla daha yüksekti ve koşu bandı egzersizi, MDX farelerinde seviyeleri artırırken, vahşi tip farelerde düşük kalmıştır.

MDX farelerinin kasları koşu bandı egzersizine karşı çok savunmasızdır. Patolojisi birkaç hafta sonra yaygın olarak kötüleşen bu h ve e boyaları 16 haftalık kuadrisepslerde egzersiz yapılmadan ve koşu bandında egzersiz yapılmamıştır. MDX fareleri, geniş fibroz ve nekrozun geliştiğini, aynı çalışma protokolüne tabi tutulan vahşi tip farelerin kaslarının etkilenmediğini göstermektedir.

Genetik arka plandaki farklılıklar fonksiyonel performansı etkiler, iki uzuv asma testi performansı, MDX farelerinin iki suşu arasında önemli ölçüde farklılık göstermiştir. Dört uzuv asma testi sonuçları karışık arka planda biraz daha yüksekti. MDX fareler.

Rotor çubuğu çalışma süreleri de suşlar arasında biraz farklıydı. Bu prosedürü denerken, her zaman karşılık gelen genetik geçmişe sahip, yeterince güçlü yaş ve cinsiyet uyumlu fare gruplarını kullanmayı unutmamak önemlidir. Ayrıca deney koşullarını mümkün olduğunca standart tutun.

Örneğin, günün ve haftanın aynı saatini, aynı odayı ve aynı deneyciyi kullanın.