Name: İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:32:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Keşfedin, insan prostat kanseri dokularından kanser kök hücrelerinin FACS ile izolasyon yöntemini. Bu teknik, moleküler ve fonksiyonel karakterizasyon için güvenilir bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Hariri Ailesi Vakfı ve TJ Martell Vakfı tarafından desteklenmiştir.

1.. Hasat ve Cerrahi Örneklerinin İnsan Prostat Kanseri Doku İşleme <ol><li> Roswell Park Memorial Institute (RPMI),% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 1 penisilin / streptomisin ile takviye edilmiş 1640 kültür ortam maddesi içinde 15 ml içeren iki 50 ml konik polistiren tüpler hazırlayın. </li><li> Patoloji servis personeli protokolü onaylanan Kurumsal Değerlendirme Kurulu altında sırasıyla prostatektomi ve palyatif cerrahi örneklerinden primer ve metastatik prostat kanseri örnekleri, hasat. Metastatik örnekleri birincil, ameliyat sırasında lenf düğümü kesitlerden elde edilebilir, diğerleri arasında, bir metastatik lezyonların teşhis çıkarılması esnasında palyatif cerrahi gibi omurilik dekompresyon gibi işlemler, ve akciğer sırasında omur. <ol><li> Aşama 1.1 ilk 50 ml konik bir tüp içine polistiren Klinik teşhis için gerekli olmayan fazla toplu doku hasat ve 4 ° C &#39;de hemen depolamak Hasat edilird doku, en azından bir bölgede 4-5 cm 2 ve kalınlığı 1-2 cm boyutlarında olmalı. </li></ol></li><li> Laboratuvar personeli hücre süspansiyonları histolojik inceleme ve nesil için hazırlık patoloji servisinden alınan toplu doku işlemek. <ol><li> Kütle dokuların işlenmesi maksimum hücre canlılığı garanti etmek amacıyla cerrahi rezeksiyon 24 saat geçmemelidir. </li><li> Steril bir neşter ve forseps ile bir biyogüvenlik kabini içinde çalışmak, makroskopik tümör nodüller 2-4 mm kalınlığında yatay doku bölümleri alır. Hemen aşama 1.1 saniye 50 ml konik bir tüp içinde polistiren bölümleri saklayın. </li><li> Makroskopik nodüller prostatektomi örneklerinde görülmediği zaman, arka lob ve geçiş bölgesinden rastgele 2-4 mm kalınlığında yatay doku bölümleri toplamak. </li></ol></li><li> Steril bir bisturi bıçağını ve forsepsler kullanılarak cerrahi dokusunun bir kısmı ayrılır ve önce cinse% 10 formalin içinde tamirHücre süspansiyonları tion. Arşiv ve prostat kanseri dokusunun varlığını doğrulamak için bu malzeme histolojik analiz. </li></ol> 2. Doku bölümleri gelen hücre süspansiyonları Üretimi <ol><li> Steril bir biyo-güvenlik kabini içinde çalışan, steril 1 x fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) içinde 1 ml ihtiva eden bir 60 x 15 mm kültür çanağı için bir doku bölümü aktarın. <ol><li> Mekanik bir steril neşter ve forseps kullanarak örnek çiğnemek. </li><li> Hayır enzimatik sindirimler bu protokol vardır. </li></ol></li><li> Bir steril 50 ml konik bir tüp içine 1 ml süspansiyon aktarın. <ol><li> Kültür çanak 1 ml ekleyin ve doku bölümü tamamen genellikle 3-4x, ayrışmış kadar ezildikten adımı tekrarlayın. </li><li> Tüm doku bölümleri ayrışmış kadar seri olarak bu işlemi tekrarlayın. </li></ol></li><li> 5 ml&#39;lik bir serolojik pi ile 50 ml polistiren konik tüp içeriğini yeniden süspansepette ve 1 dakika boyunca maksimum hızda (yaklaşık 3,200 rpm) vorteks. </li><li> 35 mikron hücre süzgecinden elde edilen süspansiyon filtre edilir ve ikinci bir steril 50 ml konik tüp içine polistiren toplar. </li><li> 10 dakika boyunca 450 x g&#39;de santrifüj ile pelet oluşturur. </li><li> , Süpernatant atılır alyuvar lisiz tamponu, 5 ml pelet tekrar süspansiyon ve oda sıcaklığında 5 dakika için çözelti inkübe edin. Oda sıcaklığında 450 x g&#39;de 5 dakika boyunca santrifüj ile kırmızı kan hücre parçalama tamponunu çıkarın. </li><li> , Süpernatant atılır,% 5 FBS ile desteklenmiş 1 x PBS içinde tekrar süspansiyon pelet ve bir hemasitometre veya otomatik hücre sayacı kullanılarak uygulanabilir (tripan mavi-negatif) hücrelerin sayısını ölçmek. Bir 1x10 6 hücre / ml süspansiyon oluşturmak ve artık 1 saat daha buz üzerinde saklayın. <ol><li> Canlılık ve hücre verim tümör örnekleri arasında önemli ölçüde değişebilir. Prostatektomi ortamda, canlılığı 45-70 ve% fi arasında değişebilirBir makroskopik tümör nodül kalın yatay doku kesitleri yaklaşık 3x10 6 canlı hücreler elde bekleniyor olabilir 2-4 mm ettik. </li></ol></li></ol> 3. FACS için Hücrelerinin antikor boyama <ol><li> Aşağıda gösterildiği gibi beş 15 ml polistiren konik tüpler etiketleyin. Sırasıyla, hematopoetik ve endotelial elemanları hariç CD45 ve CD31 antijeni etiketleme kullanın. <ol><li> Lekesiz </li><li> IgG 2a κ-PE + IgG 1 κ-FITC </li><li> HLAI-PE + IgG 1 κ-FITC </li><li> IgG 2a κ-PE + CD31 + CD45-FITC-FITC </li><li> HLAI-PE + CD45 + CD31-FITC-FITC </li></ol></li><li> Adım 3.1 &#39;de beş tüplere önceki bölümde (adım 2.7) den sayısallaştırılmış hücre süspansiyonu dağıtın. 1:250 seyreltide antikor ekleyin ve 30 dakika boyunca buz üzerinde inkübe hücre süspansiyonları. </li><li> 4 ° C&#39;de 3 dakika boyunca 450 x g&#39;de santrifüj hücreleri ve süpernatantlar atın. </li&gt; <li> Steril 1x PBS ile her bir topağın tekrar askıda bırakılmasıyla hücreleri yıkanır, 4 ° C&#39;de 3 dakika boyunca 450 x g&#39;de santrifüj ile ve ardından,% 10 FBS ile takviye edilmiş </li><li> 10 ug / ml &#39;lik bir konsantrasyonda 4 1x PBS ihtiva eden bir çözelti, 1 ml&#39; ,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) &#39;de tekrar süspansiyon hücreleri. </li><li> 12 mm x 75 mm polistiren tüpler içine 35 um süzgeç kapaklar aracılığıyla nihai çözüm Filtre. </li></ol> 4. FACS ile Prostat CSCS izolasyonu <ol><li> Hücre sıralama için bir flowsitometri yararlanın. </li><li> Tüplerden # 1, # 2, # 3 hücreleri kullanılarak tazminat kontrolleri ayarlayın, ve 4.. </li><li> Ileri ve yan dağılım parametreleri kullanarak enkaz ve hücre kümeleri hariç kapıları oluşturun. </li><li> Sırasıyla, tüp # 3 ve # boru 4 süspansiyonlar kullanılarak FITC ve PE kapıları oluşturulması. </li><li> Pasifik mavi-A kanalı kullanılarak kapı canlı (DAPI-negatif) hücreler. </li><li> Tüp # 5 ıskarta CD31-pozitif ve CD45-pozitif hücreler kullanılarak veRPMI içinde 2 ml% 10 FBS ile takviye içeren steril 15 ml konik polistiren tüpler içine de HLAI-negatif ve pozitif HLAI popülasyonları toplar. </li><li> Santrifüj 5 dakika boyunca 450 x g&#39;de hücre süspansiyonları sıralanmış ve daha sonra% 10 FBS ile takviye edilmiş RPMI içinde 200-500 ul pelet tekrar süspansiyon. </li><li> Hemasitometre ya da otomatik hücre sayıcı kullanarak canlı (trypan mavi-negatif) hücrelerini ölçmek. </li></ol>

<ol><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cancer%3A+the+next+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li>
<li>Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+impact%2C+heterogeneity%2C+and+uncertainty%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty.</a> Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).</li>
<li>Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+an+evolving+concept%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: an evolving concept.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 133-143 (2012).</li>
<li>Valent, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cell+definitions+and+terminology%3A+the+devil+is+in+the+details%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cell definitions and terminology: the devil is in the details.</a> Nat. Rev. Cancer. 12, 767-775 (2012).</li>
<li>Visvader, J. E., Lindeman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells%3A+current+status+and+evolving+complexities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells: current status and evolving complexities.</a> Cell Stem Cell. 10, 717-728 (2012).</li>
<li>Lapidot, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367, 645-648 (1994).</li>
<li>Al-Hajj, M., Wicha, M. S., Benito-Hernandez, A., Morrison, S. J., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 3983-3988 (2003).</li>
<li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li>
<li>Collins, A. T., Berry, P. A., Hyde, C., Stower, M. J., Maitland, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+tumorigenic+prostate+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of tumorigenic prostate cancer stem cells.</a> Cancer Res. 65, 10946-10951 (2005).</li>
<li>Domingo-Domenech, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+acquired+docetaxel+resistance+in+prostate+cancer+through+depletion+of+notch-+and+hedgehog-dependent+tumor-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Suppression of acquired docetaxel resistance in prostate cancer through depletion of notch- and hedgehog-dependent tumor-initiating cells.</a> Cancer Cell. 22, 373-388 (2012).</li>
<li>Patrawala, L., Calhoun-Davis, T., Schneider-Broussard, R., Tang, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hierarchical+organization+of+prostate+cancer+cells+in+xenograft+tumors%3A+the+CD44%2Balpha2beta1%2B+cell+population+is+enriched+in+tumor-initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Hierarchical organization of prostate cancer cells in xenograft tumors: the CD44+alpha2beta1+ cell population is enriched in tumor-initiating cells.</a> Cancer Res. 67, 6796-6805 (2007).</li>
<li>Qin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PSA%28-%2Flo%29+prostate+cancer+cell+population+harbors+self-renewing+long-term+tumor-propagating+cells+that+resist+castration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">The PSA(-/lo) prostate cancer cell population harbors self-renewing long-term tumor-propagating cells that resist castration.</a> Cell Stem Cell. 10, 556-569 (2012).</li>
<li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2013%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2013.</a> CA Cancer J. Clin. 63, 11-30 (2013).</li>
<li>Patrawala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+purified+CD44%2B+prostate+cancer+cells+from+xenograft+human+tumors+are+enriched+in+tumorigenic+and+metastatic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Highly purified CD44+ prostate cancer cells from xenograft human tumors are enriched in tumorigenic and metastatic progenitor cells.</a> Oncogene. 25, 1696-1708 (2006).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu protokol, taze insan prostat kanseri dokulardan CSCS izolasyonunu tarif eder. Birçok önemli hususlar bu protokolün başarılı sonucunu etkiler. Uygun bir prostat kanseri hücrelerinin yüksek sayıda geri kazanım Cerrahi numunelerin dikkat brüt değerlendirmesine bağlıdır. Makroskopik tümör nodüller gözlendi ve 10 işlendiğinde bizim deneyim, tümörijenik prostat hücrelerinin başarılı izolasyonu iyi sağlanır. Bununla birlikte, prostatektomi örneklerden elde...

Tümör içine heterojenlik kanser 1 ayırt edici bir özelliği olarak kabul edilir. Gerçekten de, tümör heterojenite çeşitli mekanizmalar genetik mutasyon ve mikro etkileşimler de dahil olmak üzere tarif edilmiştir. Buna ek olarak, bazı kanser türleri seri nakli deneylerinde 2-5 tümör başlatıcı kapasitesi ve kendini yenileme özelliklerini sergileyen kanser kök hücreleri (rulmanları) bir alt popülasyonunun bir hücresel hiyerarşisi içerebilir. Başlangıçta hematolojik 6, meme 7, 8 ve beyin habis de tarif CSCS aynı zamanda prostat kanseri 9-12 hem de diğer tümör tipleri 2-5 incelenmiştir. CSCS genellikle oluşan heterojen bir topluluk içinde 2-5 hücresel fraksiyon olarak kabul edilir. Bu nedenle, CSCS fonksiyonel ve moleküler karakterizasyonu toplu nüfus onların zenginleşmesine şarta. Buna göre, son iki yılda çeşitli buluştuCSC zenginleştirme hodologies tipik olarak akış sitometrisi ile işaretlenmiş popülasyonlarının ayrılmasını içerir ki tasarlanmıştır. Buna ek olarak, CSCS çalışmada önemli bir husustur insan dokularının hiyerarşik organizasyonu, kültür veya bağışıklık yetersizliği olan farelerde seri pasaj olarak deneysel manipülasyonlar tarafından kesintiye edilebilir olmasıdır. Sonuç olarak, insan dokularından CSCS doğrudan izolasyon CSC alanda önemli bir yöntem olarak ortaya çıkmıştır. Prostat kanseri kanser morbidite ve Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde ve dünya çapında 13 ölüm önde gelen bir nedenidir. Bu nedenle, prostat CSCS izolasyonu ve biyolojik karakterizasyonu önemli ilgi konusudur. Prostat CSCS önce hücre hatları, hasta türetilmiş ksenograftlarının ve düşük geçiş hasta süspansiyon kültürlerinden türetilmiş 9,10,12,14 ikinci zenginleştirilmiştir. Biz son zamanlarda direkt olarak insan cerrahi s prostat CSCS izolasyonuna bildirdiOnların HLAI-negatif hücre yüzey fenotip 10 sayesinde depas&#39;lar. Burada ayrıntılı bu hücrelerin izolasyonu için uygulanan prosedürler WE. Prostat tümörler cerrahi örneklerden hasat edildi ve hücre süspansiyonları içine yapılır. Hücreler daha sonra HLAI karşı antikorlar hem de stromal ve canlılığı belirteçleri kullanılarak lekelenmektedir, CSCS ve floresan aktive hücre sıralama (FACS) ile izole edilir. İzole CSCS sonra yaşayabilir hücreler gerektiren deneyleri için de kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Gibco Yaşam Teknolojileri</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Gibco Yaşam Teknolojileri</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin Streptomisin</td><td>Gibco Yaşam Teknolojileri</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning Hücre Gro</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>60 mm, 15 mm Hücre kültürü kabı</td><td>Corning</td><td>3295</td><td></td></tr><tr><td>35 & mikro; m Hücre Süzgeci</td><td>BD Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>50 ml konik tüp</td><td>Crystalgen</td><td>23-2263</td><td></td></tr><tr><td>15 ml konik tüp</td><td>Crystalgen</td><td>23-2265</td><td></td></tr><tr><td>Kırmızı kan hücresi parçalama tamponu</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>HLA sınıf I (W6 / 32) PE antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab43545</td><td></td></tr><tr><td>CD31 FITC antikoru</td><td>eBioscience</td><td>11-0319-42</td><td></td></tr><tr><td>CD45 FITC antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab27287</td><td></td></tr><tr><td>IgG2a&kappa; PE antikoru</td><td>BD Eczacızojen</td><td>555574</td><td></td></tr><tr><td>IgG1&kappa; FITC antikoru</td><td>BD Pharminogen</td><td>551954</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>d3571</td><td></td></tr><tr><td>12 mm x 75 mm Hücre süzgeç kapaklı polistiren tüpler</td><td>BD Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Vorteks Karıştırıcı</td><td>Crystalgen</td><td>CG-BV1000</td><td></td></tr><tr><td>%10 Nötr Tampon Formalin</td><td>Fisher</td><td>RBBP-0480</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan prostat kanseri Örneklerinden kanser kök hücreleri İzolasyon

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Kanser kök hücre (CSC) modeli ölçüde son iki yılda yeniden gözden geçirilmiştir. Bu süre boyunca CSCS tanımlanır ve doğrudan insan dokularından izole edilmiş ve seri olarak, tipik olarak akış sitometrisi ile hücrelerin ve fraksiyonlama alt grupları antikor etiketleme yoluyla, bağışıklık yetersizliği olan farelerde yayılır edilmiştir. Bununla birlikte, prostat kanseri benzersiz klinik özellikleri önemli ölçüde taze insan tümör örneklerinden prostat CSCS olan çalışma sınırlıdır. Yakın zamanda, HLA sınıf I (HLAI)-negatif fenotipi nedeniyle, doğrudan insan dokularından prostat CSCS izolasyonunu bildirdi. Prostat kanser hücreleri cerrahi örneklerden hasat edilir ve mekanik olarak ayrıştırılırlar. Bir hücre süspansiyonu üretilir ve floresan konjuge HLAI ve stromal antikorlar ile etiketlenir. HLAI-negatif hücrelerin alt grubu son olarak bir akış sitometrisi kullanılarak izole edilmiştir. Bu protokolün başlıca sınırlaması sık mikroskobik ve multifokal doğaprostatektomi örneklerinde primer kanser. Bununla birlikte, izole edilmiş canlı prostat CSCS bağışıklık yetersizliği olan farelerde nakli ile moleküler karakterizasyonu ve fonksiyonel doğrulama için uygundur.

<img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51332/51332fig1.jpg" /> Şekil 1. İnsan prostat kanseri tümörü hasat ve bir insan prostat kanseri belirli popülasyonlarının arsa görüntüleyen akış sitometrisi. (A) Tümör nodülleri bir hücre süspansiyonu üretmek için hasat edilir. Işlenmiş örnek Tümör içeriği, geleneksel hematoksilen ve eozin boyama ile teyit edilir. DAPI için pozitif boyanan <st...

Doğrudan insan dokularından kanser kök hücreler (rulmanları) izolasyonu biyolojik karakterizasyonu için bir koşuldur. Ayrıca zor sorun giderme adımları konusunda ipuçları sağlarken Bu makale, insan dokularından prostat CSCS izolasyonu için bir yöntem anlatılmaktadır.

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Bu prosedürün genel amacı, insan dokusundan prostat kanseri kök hücrelerinin FACS ile izolasyonunu açıklamaktır. Bu işlem, öncelikle cerrahi örneklerden elde edilen prostat kanseri dokusunun işlenmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, doku kesitlerinden bir hücre süspansiyonu oluşturulur ve hücreler floresan antikorlar ile işaretlenir.Son adımda, prostat kanseri kök hücreleri faktörlere göre ayrıştırılır. Nihayetinde, izole edilen hücrelerin moleküler ve fonksiyonel öznitelikleri, ksenotransplantasyon ve gen ekspresyon profillemesi ile karakterize edilebilir. Bu yöntem, insan örneklerinden elde edilen kanser kök hücrelerinin moleküler ve fonksiyonel karakterizasyonunu kolaylaştırarak prostat kanseri alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Prosedürü, MD PhD öğrencisi Samuel Vidal, yüksek lisans öğrencisi Aiden Quinn ve Jania uygulamalı olarak göstereceklerdir. Araştırmamız laboratuvarda başlamaktadır; klinik tanı için gerekli olmayan kanser örneklerinden fazla bulk dokuyu, 15 mL besiyeri içeren 50 mL'lik konik bir tüpe toplayarak başlayın. Tüpü, rezeksiyon sonrası 24 saat içinde işlemek üzere derhal 4 °C'de saklayın ve ardından steril bir bistüri ve pens kullan

isolation-of-cancer-stem-cells-from-human-prostate-cancer-samples

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kanser kök hücreleri (CSCS) malignitelerin çok sayıda tespit edilmiştir. Bu protokolde, aldehit dehidrogenaz aktivitesi ve CD44 ve CD24 ifade kullanan bir insan pankreas adenokarsinomu xenografts CSCS yalıtmak için akım sitometri yöntemi açıklar. Bu canlı hücreler, sonra fonksiyonel ve analitik çalışmalar kullanılabilir.

İnsan Pankreas Kanseri Xenografts Kök Hücre İzolasyonu

Bu yazıda, tümör infiltre lökositlerin oldukça saflaştırılmış nüfusu izole edilmesi için bir protokol tanımlamaktadır. Bu protokol, karmaşık tümör doku hücreleri izole edilmesi için, verim ve saflıkta geliştirmek için Miltenyi Biotech protokolü uyarlanmıştır.

Primer Tümörler gelen Bağışıklık Hücre İzolasyonu

Bu makalede, insan pankreas duktal adenokarsinomu (PDAC) dokusundan pankreas kanseri kök hücrelerinin (CSC'ler) izole edilmesi tekniği açıklanmaktadır. Bu CSC'ler, daha etkili kanser tedavileri geliştirmek için ilaç tedavisinin CSC'lerin in vitro kendini yenileme kapasitesi üzerindeki fonksiyonel etkilerini incelemek için kullanılır.

PDAC Kök Hücre İzolasyonu: Kanser Kök Hücrelerini Pankreas Tümörlerinden İzole Etmek İçin Bir Yöntem

Pankreas kanseri kök hücreleri (CSC'ler), CSC biyolojisini incelemek için güçlü bir araç olan ve yeni CSC hedefleme tedavileri geliştirmek için ilk adım olarak hizmet edebilen ankrajdan bağımsız küre kültürü tekniği kullanılarak in vitro olarak genişletilebilir. Burada pankreatik CSC'lerin genişletilmesi, analizi ve hedeflenmesi için metodoloji sağlanmaktadır.

Pankreas Kanseri Yeni Tedavi Stratejileri Geliştirme Hücre Özellikleri Kök incelenmesi

Bu makale, dolaşımdaki tümör hücrelerinden (CTC'ler) prostat kanseri hastasından türetilen ksenogreftler (PDX'ler) oluşturmak için kullanılan bir yöntemi detaylandırmaktadır. CTC'lerden PDX modellerinin oluşturulması, prostat kanserini incelemek için alternatif bir deneysel model sağlar; En sık teşhis edilen tümör ve erkeklerde kanserden sık görülen bir ölüm nedenidir.

Prostat Kanseri Hasta Üretimi Tümör Hücreleri Sirkülasyon gelen Xenograftlarında Modeller Türetilmiş

Kemik sarkomlarda kanser kök hücrelerinin varlığı (rulmanları) son zamanlarda onların patogenezi ile bağlantılı olmuştur. Bu makalede, yapışmayan koşullarda büyümeye CSCS yeteneğini kullanılarak geleneksel osteosarkoma (OS) insan biyopsilerinden elde edilen birincil hücre kültürlerinden CSCS izole sunulmuştur.

Kanser kurulması İnsan Konvansiyonel Osteosarkom Hücre Kültürleri Kök

Kanser kök benzeri hücrelerin tümör nüksü ve tedavilere dirençteki rolünü anlamak son on yılda büyük ilgi gören bir konu haline gelmiştir. Bu makale, baş ve boyun skuamöz karsinom hücre hatlarından (HNSCC) kanser kök benzeri hücrelerin alt popülasyonunun izolasyonunu ve karakterizasyonunu açıklamaktadır.

Bir Baş-Boyun Skuamöz Hücre Karsinomu subpopülasyonu olması Kök Hücre Özellikleri İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Bu metodolojinin amacı, kanser hücre hatlarındaki kanser kök hücrelerini (CSC) ve primer insan tümör örneklerini küre oluşturma protokolü ile sağlam bir şekilde, fonksiyonel tahliller ve akış sitometrisi ve Batı ile henotypik karakterizasyon kullanarak tanımlamaktır. Leke.

Jinekolojik ve Meme Kanseri Tümörlerinden Kanser Kök Hücre Kürelerinin Alınması

İnsan primer prostat epitel hücreleri kullanarak, kök benzeri hücrelerin küresel tabanlı etiket tutma testi ile fonksiyonel karakterizasyonu için yeni bir biyomarker-free yöntemi ni rapor ediyoruz. BrdU, CFSE veya Far Red 2D hücre etiketlemesi için adım adım bir protokol tanımlanır; üç boyutlu küresel oluşum; immünositokimya ile etiket tutucu kök benzeri hücre tanımlama; ve FACS tarafından izolasyon.

3 Boyutlu Spheroid Kültürlerden Kök Benzeri Hücrelerin İzolasyon

Bu deneysel protokol, BCSC'lerin meme kanseri hücre ve doku örneklerinden izolasyonunun yanı sıra BCSC fenotipini ve fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılabilecek in vitro ve in vivo testleri tanımlamaktadır.

İnsan Meme Kanseri Kök Hücrelerinin Hücre ve Doku Örneklerinden İzolasyonu ve Fonksiyonel Değerlendirmesi

Bu protokol, radikal prostatektomilerden fibroblastları izole etmek, genişletmek ve ölümsüzleştirmek için kapsamlı bir prosedür sağlar. Ayrıca, fibroblast-tümör hücresi karışmasının fonksiyonel etkilerini değerlendirmek için geliştirilen, hem şartlandırılmış ortamla tedaviden hem de birlikte kültürlemeden yararlanan tahlilleri açıklar.

Prostat Kanseri ile İlişkili Fibroblastların İzolasyonu, Kültürü ve Karakterizasyonu

Keşfedin, insan prostat kanseri dokularından kanser kök hücrelerinin FACS ile izolasyon yöntemini. Bu teknik, moleküler ve fonksiyonel karakterizasyon için güvenilir bir araç sunar.

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

Daha fazla video keşfet