Name: Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-23T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: Öğrenin farelerde heterotopik kalp nakli için mikrocerrahi teknikleri. Bu yöntem, donör kalp hasatlama ve alıcı damar anastomozu ile transplantasyon başarısını izlemeyi kapsar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Microsearch Avustralya Vakfı ve Myee Codrington Tıbbi Araştırma Vakfı tarafından tarafından, Avustralya Proje Grant 1029205 Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (NHMRC) tarafından desteklenmiştir.

Önceki deneyler başlamadan, planlanan deneyler için ilgili kurum Hayvan Bakım Etik Kurul onayı almak. Kurumunuzun gereklerine uygun olarak fareler koruyun. Aşağıdaki protokol Sydney Üniversitesi ve Kraliyet Prens Alfred Hastanesi komiteleri tarafından onaylandı. Önce ameliyat başlamadan, tüm araçlar iyice temizlenmeli ve% 80 etanol içinde iliklerine tarafından sterilize. Bazı kurumlar ancak bu uzun vadede ince mikrocerrahi aletleri zarar verebilir otoklavlanmayı şart. Mümkün kullanımlık steril tek kullanımlık ekipman. 1.. Anestezi <ol><li> Kapalı bir kapta izofluran ile fare anestezisi sonra hızlı anestezi burun konisi bağlayan bir işletim gemide onu sırtüstü yerleştirin. Hiçbir refleks olmadığından emin olmak için arka ayak kısma anestezi testi yeterliliği. </li><li> Bir cerrahi bıçak ile cilt ve tıraş% 80 etanol ile sterilize. Buna ek olarak,% 70 izopropil alkol içerisinde% 2 klorheksidin cilt sterilizasyon için kullanılabilir. Anestezi indüksiyonu sırasında izofluran konsantrasyonu% 3 olduğunu, ancak bakım için% 1-1,5 &#39;bu azaltabilir. Düzenli nefes alma ve kalp hızını korumak için bu konsantrasyon için küçük ayarlamalar yapın. Bir ısıtma pedi üzerinde hayvanın ısısını korumak. </li></ol> 2.. Donör Operasyonu <ol><li> Bir göğüs duvarı kanat oluşturması için xiphisternum seviyesinde enine bir kesik ile ve ardından koltuk altına nervür kenarından göğüs kafesinin her iki göğsü ile keserek ve kalp damarları ortaya çıkarmak için bir torakotomi yapın. Başın yanında bu kapağını kaldırın ve işletme kuruluna için pin. Kalp ve damarları maruz perikard yırttınız. </li><li> Bir elinde ve IVC&#39;da yoluyla kalbe diğer inject 1 ml soğuk heparinize tuzlu proksimal ile forseps ile inferior vena kava kaldırın, sonra önleme için IVC&#39;da küçük arter kelepçe koymakgeri iğne deliğinden perfüzyon çözümü t akışı. </li><li> Gazlı bez ve pamuk kullanarak, aorta ve pulmoner arter maruz aşağı kalp çekin. Aorta ve pulmoner arter demetine kanalı (enine sinüs) posterior aracılığıyla microscissors bir çiftin bir bıçak geçmek ve anastomoz için yeterli uzunluğa sağlayacak kadar distale mümkün olduğunca bir araya aorta ve pulmoner arter kesti. </li><li> Kravat ve IVC, sağ superior vena kava (SVK) bölün, 6-0 ipek iplik kullanılarak SVC ve pulmoner venlerin sol. Ayrı ayrı IVC ve sağ SVC kravat sonra pulmoner venler ile birlikte sol SVC kuşatmak ve onu bağlamak için kalbine bir tek iplik posterior yerleştirin. Transplantasyon kadar 4 ° C &#39;de soğuk bir steril tuzlu su içinde saklayın, sonra bağları uzak damarları keserek verici sitesinden kalp hasat. Bu kesilmesi ile donör ölümü ile sonuçlanır. </li></ol> 3.. Alıcı Operasyonu <ol><li> Uyutmak(Bölüm 1) yukarıdaki gibi alıcı. Dikkatle Ekartörleri şeklinde bükülmüş xiphisternum ve ataç kullanarak geri çekilmesi için pubis orta hat kesi ile laparotomi yapmak sonra, tahrişi önlemek için karın tıraş. Sıcak steril serum fizyolojik emdirilmiş gazlı bez bağırsak sarın ve karın sağ üst çekin. </li><li> Infra-renal aorta ve IVC göstermek için, koter cihazı kullanılarak lomber gemilerin onları bölerek iliak bifurkasyon sol renal arter ve ven aorta ve IVC birlikte kesimleri özgür. Koter doğru sıcaklıkta ve damar uçları bölmek ve mühür yeterli bir süre için kullanılan ilgilenir. </li><li> Aorta ve proksimalde VKİ bölümlerine küçük atravmatik damar kelepçeleri uygulayın. Önce bir 30 G iğne ile bir delik delinmesi ile aort ön duvarında bir insizyon yapın; sonra donör aort boyutuna uyacak microscissors dikey bir kesi kesti. Herhangi bir bl kaldırmak için heparinli serum fizyolojik ile aorta lümen yıkayınood pıhtıları. </li><li> Soğuk tuzlu su ile ıslatılmış gazlı bez ile kaplı alıcı siteye donör kalbi getirin ve karnın sağ tarafına yerleştirin. Donör aort alıcı aort ve sonraki alıcıya IVC konumlandırılmış donör pulmoner arter üzerinde yanındaki kesi yerleştirildiğinden emin olun. </li><li> Hayvan 180 ° döndürülür sahne hangi uzak köşesine ulaşarak kadar önce sol tarafında yakın köşe ve sütür başlayarak 10-0 naylon sütürlerinin kullanarak alıcı aorta donör aorta uç-yan anastomoz. Yavaşça aort sağ tarafını ortaya çıkarmak ve yakın ucuna en uzak ucundan itibaren aort çeperinin sağ tarafı boyunca dikilmesi devam karnın sol tarafına donör kalbi hareket ettirin. Aort anastomoz kapatmadan önce, yavaşça herhangi bir pıhtı ve havayı çıkarmak için heparinli serum fizyolojik ile lümen yıkayın. </li><li> Alıcı IVC ile donör pulmoner arter (PA) uç-yan anastomoz. Bir kesi ver olunolarak yanmalıdır arter anastomoz uygun bir yerinde IVC ön duvarında microscissors. IVC lümeni içinde sol duvarının uzak ucundan başlayarak 10-0 naylon dikiş çalışan alıcı IVC için donör PA anastomoz. Proksimal ucu ulaştıktan sonra, anastomoz tamamlamak için uzak ucuna kadar ön sağ yan duvar boyunca dikiş devam etmektedir. Anastomoz kapatmadan önce, yavaşça pıhtılar ve havayı çıkarmak için lümen yıkayın. </li><li> Hemostaz elde edilene kadar bir pamuk aplikatör ile gemi kelepçeler, anastomoz siteleri etrafında Gelfoam yeri parçaları ve uygulamak hafif bir baskı bırakmadan önce. Revaskülarizasyon zamanda, yakın kelepçe ardından, ilk olarak uzak kelepçe bırakın. </li><li> Revaskülarizasyon sonra da iyileşme yardımcı olmak için harici olarak greft 37 ° C&#39;de sıcak bir tuzlu su uygulanır. Greft genellikle hemen fibrilasyon başlar ve birkaç dakika içinde sinüs ritmine kendiliğinden döner. Sıcak 0.6 ml enjektealıcının hidrasyon korumak için tuzlu su deri altından. Ameliyat öncesinde tamamlanması için analjezi için buprenorfin deri altına enjekte </li><li> Her iki tabaka için, bir 5-0 emilebilen sütür ile çalışan karın yara kapatın. Iç tabaka tamamlayarak başlatın ve cilt boyunca devam eder. </li></ol> 4.. Kurtarma ve Greft İzleme <ol><li> Enfeksiyonun önlenmesi için ampisilin enjekte edilir ve geri kazanılması için 37 ° C &#39;de bir ısıtma pedi üzerine alıcı yerleştirin. Çoğu hayvanlar hızla kurtarmak ve genellikle içme ve genellikle 3 saat içinde yiyorsun. Fare sıkıntı belirtileri gösteriyorsa, nedenini belirlemek için yakından inceleyin. Hiçbir belirgin nedeni ise, buprenorfin ile tedavi ve yakından izlenmesi. Belirtiler şiddetli ya da 8 saatten fazla devam ederse bir veteriner hekimin ve ötenazi düşünün. Gerekirse, belirtileri gidermek kadar Buprenorfinin 12 saatlik enjeksiyonları devam verir. Fare sıkıntı belirtileri gösteriyorsa 8 saat sonra, devam eden 12 verBuprenorfinin saatlik enjeksiyonları onlar çözene kadar. Belirtiler fazla 48 saat boyunca devam eder ve gerekirse euthanize eğer veteriner danışın. </li><li> Direkt batın palpasyonla greft kalp atışlarını izlemek ve + + + + gibi sağlıklı nedeniyle ileri reddedilmesine zayıf dövmek için + &#39;ya greft ve için beat gücünü kaydetmek - greft reddini tamamlanması nedeniyle sigara dayak gibi. Deneyin süresi boyunca haftada 3x daha sonra ilk 10 gün için, günde fareler izleyin. </li></ol>

<ol><li>Aramaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-10+but+not+transforming+growth+factor-beta+is+essential+for+generation+and+suppressor+function+of+regulatory+cells+induced+by+intratracheal+delivery+of+alloantigen%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interleukin-10 but not transforming growth factor-beta is essential for generation and suppressor function of regulatory cells induced by intratracheal delivery of alloantigen.</a> Transplantation. 79, 568-576 (2005).</li>
<li>Chen, R. H., Bushell, A., Fuggle, S. V., Wood, K. J., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+granzyme+A+and+perforin+in+mouse+heart+transplants+immunosuppressed+with+donor-specific+transfusion+and+anti-CD4+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Expression of granzyme A and perforin in mouse heart transplants immunosuppressed with donor-specific transfusion and anti-CD4 monoclonal antibody.</a> Transplantation. 61, 625-629 (1996).</li>
<li>Poulin, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-9+promotes+eosinophilic+rejection+of+mouse+heart+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interleukin-9 promotes eosinophilic rejection of mouse heart allografts.</a> Transplantation. 76, 572-577 (2003).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Thorac.+Cardiovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 57, 225-229 (1969).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+heart+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of heart in mice.</a> Transplantation. 16, 343-350 (1973).</li>
<li>Larsen, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-gp39+interactions+play+a+critical+role+during+allograft+rejection.+Suppression+of+allograft+rejection+by+blockade+of+the+CD40-gp39+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">CD40-gp39 interactions play a critical role during allograft rejection. Suppression of allograft rejection by blockade of the CD40-gp39 pathway.</a> Transplantation. 61, 4-9 (1996).</li>
<li>Saitovitch, D., Bushell, A., Mabbs, D. W., Morris, P. J., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+induction+of+transplantation+tolerance+with+a+nondepleting+anti-Cd4+monoclonal+antibody+and+donor-specific+transfusion+before+transplantation.+A+critical+period+of+time+is+required+for+development+of+immunological+unresponsiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Kinetics of induction of transplantation tolerance with a nondepleting anti-Cd4 monoclonal antibody and donor-specific transfusion before transplantation. A critical period of time is required for development of immunological unresponsiveness.</a> Transplantation. 61, 1642-1647 (1996).</li>
<li>Callaghan, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+allograft+survival+by+inhibitory+FcgammaRIIb+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulation of allograft survival by inhibitory FcgammaRIIb signaling.</a> J. Immunol. 189, 5694-5702 (2012).</li>
<li>Qian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+donor+MHC+Class+I+or+Class+II+antigen+deficiency+on+first-+and+second-set+rejection+of+mouse+heart+or+liver+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Impact of donor MHC Class I or Class II antigen deficiency on first- and second-set rejection of mouse heart or liver allografts.</a> Immunology. 88, 124-129 (1996).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+acceptance+of+mouse+kidney+allografts+is+associated+with+increased+Foxp3+expression+and+differences+in+the+B+and+T+cell+compartments%5BTitle%5D)+AND+%22Transpl.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Spontaneous acceptance of mouse kidney allografts is associated with increased Foxp3 expression and differences in the B and T cell compartments.</a> Transpl. Immunol. 24, 149-156 (2011).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+Heart+Transplantation+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Heterotopic Heart Transplantation in Mice.</a> J. Vis. Exp. , (2007).</li>
<li>Mottram, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrocardiographic+monitoring+of+cardiac+transplants+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Electrocardiographic monitoring of cardiac transplants in mice.</a> Cardiovasc. Res. 22, 315-321 (1988).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Fare kalp nakli master önemli cerrahi beceri gerektiren zorlu bir mikrocerrahi yöntemidir. En zor özelliği, kapların küçük çapıdır. Buna ek olarak, bu işlem zaman alıcı ve kanama sınırlamak için gereklidir. Fare kalp nakli için teknik ilk Corry ve diğerleri tarafından tarif edilmiştir. 1973 içinde ve daha sonra Mottram ve ark 12 ile. Bizim modifikasyonlar aşağıdaki noktaları içerir. Öncelikle, kısa bir süre sonra perfüzyon aort ve pulmoner arter demetinin torakotomi ve kesisi sonrası soğuk h...

Organ nakli hayvan modelleri klinik transplant hastalarının tedavisini geliştirmek için değerli bilgiler sağlayabilir. Fare Modelleri Genetik olarak modifiye edilmiş fareler ve diğer hayvan modelleri 1-3 için geçerli değildir fareler için özel reaktiflerin geniş organ nakli reddi veya kabul bağışıklık mekanizmasını çalışmak için özellikle yararlıdır. Transplantasyonu fare modelleri ile bir meydan okuma tatmin edici sonuçlara ulaşmak için önemli teknik beceri gerektirir donör ve alıcı küçük boyutudur. Bir teknik, ilk olarak daha sonra Corry ve arkadaşları tarafından 5 Fare kalp nakli için uyarlanmıştır sıçanlarda 4 kalplerin heterotopik nakli için tarif edilmiştir. Bu teknik, önce verici işlemi için alıcı ve transplante veya t hayatta tehlikeye sokabilecek her ikisi de donör kalbi, hiçbir perfüzyon hazırlanması dahilo alıcı. Ilk olarak transplant reddi ve tolerans 6-8 mekanizmalarını incelemek için anlatılan prosedür, yaygın olarak kullanılmaktadır. Diğerleri farelerde 9,10 kalp nakli için Ono ve Lindsey orijinal sıçan kalp nakli prosedürü adapte var. Daha yakın zamanlarda, bir teknik Corry et al 11&#39;in yöntemi ile ilişkili sorunların üstesinden bir fare kalp nakli için yayınlanmıştır. Protokol, burada tarif edilen dahil Mottram ve ark 12 yöntemine dayalı değişiklikler, içerir: in situ perfüzyon soğuk heparinize tuzlu su ile hemen torakotomi sonra alıcı işlem süresini en aza indirmek için, alıcı işlemi için önce verici işlemi yapılması. Buna ek olarak, biz küçük atravmatik damar kelepçeler yerine 6-0 ipek bağları kullanabilirsiniz. Damar kelepçeler daha fazla yer alma dezavantajı olmasına rağmen onlar çok sıkı veya gevşek olmamalı, hangi bağları daha kontrol etmek daha kolaydırve kelepçeler daha çıkarmak için daha az açıktır. İlk öğrenme alternatif bir sütür düzgünlüğü sağlamak ve böylece anastomoz açıklığı için yakın ve uzak köşelerinde kalmak sütür kullanmak için sahneliyor rağmen bizim yöntem, damar anastomoz için çalışan tek bir dikiş kullanır.

<table><tbody><tr><td>Ameliyat mikroskobu&nbsp;</td><td>Leica, Heerbrugg, İsviçre</td><td>M651</td><td>10-25X büyütmeli Anestezik</td></tr><tr><td>makinesi&nbsp;</td><td>Vet Quip Pty Ltd, Sidney, Avustralya</td><td>Vett3</td><td>Havada izofluran ve oksijen karışımı sağlayabilen&nbsp;</td></tr><tr><td>Ameliyat panosu&nbsp;</td><td>Hırdavatçı veya ofis tedarikçisi</td><td></td><td>Pim alabilen yoğun mantar veya sentetik</td></tr><tr><td>Heparinize salin (5 U/ml, 4 &°; C)</td> <td>Pfizer, ABD</td><td>FW25</td><td>Buz üzerinde 23 G iğne ile 1 ml şırıngada</td></tr><tr><td>Normal salin (37 &°; C)</td> <td>AstraZeneca Pty Ltd, Avustralya</td><td>4538</td><td>Sıcak ped üzerinde 23 G iğne ile 1 ml şırıngada</td></tr><tr><td>Sütürler 10- naylon, 5-0 Vicryl</td><td>Ethicon, Inc. NJ, ABD</td><td>2870G/J421H</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin (0.1 ml salin içinde 0.05 mg/kg)</td><td>Reckitt Benckiser, Sidney, Avustralya</td><td></td><td>Buz üzerinde 23 G iğneli 1 ml şırıngada</td></tr><tr><td>Ampcillin (0.1 ml salin içinde 5 mg / kg)</td> <td>Aspen, Sidney, Avustralya</td><td></td><td>1 ml'lik şırıngada 23 G iğne ile buz üzerinde</td></tr><tr><td>Jel Köpük</td><td>Pharmacia & Upjohn Co. ABD</td><td>801289304</td><td>Küçük parçalar halinde kesin</td></tr><tr><td>Yüksek sıcaklık koter cihazı</td><td>Medtronic, ABD</td><td>8444000</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma Yastığı / Sağ Sıcaklık</td><td>Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Mikrocerrahi aletleri: < / güçlü ></td> <td>Shanghai Medical Instruments Co. Ltd., &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikro iğne</td><td>tutucular Şangay, Çin</td><td>WT2020</td><td></td></tr><tr><td>Mikro makas</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>WT1020</td><td></td></tr><tr><td>Microforceps (düz uç)</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>WA3010</td><td></td></tr><tr><td>Microforceps (kavisli uç)</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>WA3020</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosivrisinek kelepçeleri (1 çift)</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>W40350</td><td></td></tr><tr><td>Mikro damar atravmatik klempler (1 çift)</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>W40130/W40150</td><td></td></tr></tbody></table>

heterotopik fare kalp naklİ için modifiye yöntem

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Fareler nedeniyle sık sık mevcut transgenik fareler ve reaktiflerin geniş transplant immünoloji çalışmalarda kalp nakli verici ve alıcı olarak kullanılır. Bir zorluk nedeniyle hayvanın küçük boyutu ve kalp nakli dahil mikrocerrahi önemli teknik sorunlar sunulmaktadır. Özellikle, erken transplantasyon sonrası teknik başarısızlık oranının yüksek alıcı ve ölüm gibi arka ekstremite felci ya da olmayan bir kalpte post-operatif komplikasyonlar oluşabilir. Burada, heterotopik fare kalp nakli için tam teknik bir alıcı fare içine donör kalp ve sonraki implantasyonu hasat içeren gösterilmiştir. Donör kalp derhal çıkan aort ve pulmoner arter soğuk heparinli serum fizyolojik ve kesisi ile in situ perfüzyon takip hasat edilir. Alıcı işlemi takiben, abdominal aorta ve vena kava (IVC) hazırlanmasını gerektirirçalışan tek 10-0 mikrodikiş ve alıcı VKİ ile donör pulmoner arter benzer bir anastomoz kullanarak alıcı aort ile aort donör uç-yan anastomoz. Ameliyattan sonra hayvanlar, 0.6 ml normal tuzlu su, deri altından enjekte edildi ve 37 ° C bir ısıtma pedi üzerine geri bırakılır. 227 fare kalp nakli gelen sonuçlar% 86.8 48 saatte bir başarı oranı ile özetlenmiştir. 15 (% 6.6) 48 saat içinde ölürken, 48 saat içinde% 13.2 arızaları, 5 (% 2.2), iskemik yaralanma ve / veya trombozu greft nedeniyle olmayan bir dayak kalbi vardı arka bacak felci, 10 (% 4.4) deneyimli .

Ilk eğitim döneminden sonra, bizim grup fare heterotopik kalp nakli 227 olgu incelendi. Ilk 24 saat içinde başarı oranı% 90.3 idi ve 48 saat sonra% 86.8 idi. 48 saat içinde 30 (% 13.2) arızaları, 5 (% 2.2) arka bacak felci deneyimli ve ötenazi gerekiyordu, 10 (% 4.4) ise 15, nedeniyle greft iskemi yaralanma ve / veya tromboz olmayan bir dayak kalbi vardı (% 6.6) 48 saat içinde ölmüştür. Bazı deneysel greft sağkalım gerginlik kombinasyonlar çeşitli Tablo 1&#39;de gösterilmiştir. Özdeş olmayan suşları ara...

Farelerde kalplerin heterotopik nakli için mikrocerrahi prosedür için, donör toplama ve alıcı damar anastomozu için basitleştirilmiş yöntemler de dahil olmak üzere bir teknik gösterilmiştir.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Bu prosedürün genel amacı, donör bir fareden alıcı bir fareye kalp nakli yapmaktır. Bu işlem, öncelikle kalbin donör toraksından çıkarılıp soğuk salin içerisinde saklanmasıyla gerçekleştirilir. Sonraki adımlar, kalbin alıcının abdomenine nakledilmesi ve ardından nakledilen kalbin atışlarının izlenmesidir.Son olarak, transplant reddi görsel inceleme ve patoloji analizi ile doğrulanır. Nihayetinde sonuçlar, birbiriyle ilişkisiz fare soyları arasında transplant edilen kalplerin reddedildiğini, aynı soydaki fareler arasında transplant edilen kalplerin ise kabul edildiğini göstermektedir. Bu ölçümün uzun vadeli video gösterimi, donör ve alıcı hayvanların çok küçük boyutları nedeniyle öğrenilmesi zor olan mikrocerrahi adımında kritik öneme sahiptir.Söz konusu karmaşık cerrahi prosedür ile alıcı operasyonlarının gerçekleştirilmesindeki doğruluğun ve hızın artırılmasına duyulan ihtiyaç nedeniyle, tüm aletlerin %80 etanol banyosunda tamamen temizlendiğinden ve sterilize edildiğinden daima emin olun. Tek kullanımlık steril ekipman kullanımı şiddetle tavsiye edilir. Donör fare, izoflorin odasında anestezi uygulandıktan sonra operasyon tahtasına sırtüstü pozisyonda yerleştirilir.Ardından, anestezik vererek burun konisini hızla bağlayın. Arka ayağa sıkıştırma yaparak anestezinin kalitesini test ettiğinizden emin olun. Eğer irkilme tepkisi yoksa, cerrahi bir bıçak kullanarak cildi tıraş etmeye başlayın.Ardından, cerrahi işlem boyunca cildi %70 izopropil alkol içeren %2 Klorheksidin ile üç kez ardışık silmelerle sterilize edin. Hayvanın solunumunu ve kalp atışını görsel olarak takip edin. İzofluran verilmesini buna göre ayarlayın.Kalbi ve damarları açığa çıkarmak için bir torakotomi yaparak başlayın; göğüs kafesinin her iki tarafından göğsü açın. Kaburga kenarından aksillaya doğru ve transvers olarak xiphoid sternum hizasında kesin. Bu işlem bir göğüs duvarı flebi oluşturur.Kapağı baş kısmına yakın bir noktadan operasyon tahtasına sabitleyin. Ardından kalbin etrafındaki perikardiyumu çıkarın. İnferior vena CVA'yı pensetle kaldırın ve kalbe proksimaldeki IVC'ye bir mililitre soğuk heparinli salin enjekte edin.Ardından, çözeltinin iğne deliğinden geri akmasını önlemek için IVC'ye küçük bir arter klempi takın ve gazlı bez ile pamuklu aplikatör kullanın. Aort ve pulmoner arteri açığa çıkarmak için kalbi aşağıya doğru kaydırın. Transvers sinüs, aort ve pulmoner arter demetinin arkasında yer alan kanaldır.Ardından, anastomoz için damar uzunluğunu maksimize etmek amacıyla aort ve pulmoner arteri mümkün olduğunca distalden kesin. Şimdi vena cava inferior'u (VCI), sağ vena cava superior'u (VCS), sol vena cava superior'u ve pulmoner venleri kesin. Her biri 6.0 ipek dikiş ipi kullanılarak ayrı ayrı bağlanmalıdır.Öncelikle, IVC ve sağ SVC bağlanır. Ardından sol SVC ve pulmoner venler bağlanır. Şimdi, bağların distalindeki tüm damarlar kesilerek kalp çıkarılır.Kalbi, transplantasyona kadar dört derece santigrat sıcaklıkta, soğuk ve steril salin içerisinde saklayın. Hayvanı, donör için tarif edildiği şekilde cerrahiye hazırladıktan sonra, laparotomi yaparak başlayın. Pubis ile zaphy sternum arasındaki orta hattı kesin.Retraktör olarak bükülmüş ataçlar kullanın. Karın boşluğunu açın, bağırsakları ılık salinle ıslatılmış gazlı bezle sarın ve karnın sağ üst kısmına doğru geri çekin. Ardından, iliak bifurkasyon ile sol renal arter ve ven arasındaki infrarenal aortayı ve Vena Cava Inferior'u (VCI) açığa çıkarın.Aorta ve VCI'nın (inferior vena cava) birleşik segmentini serbest bırakın. Ardından, kalibre edilmiş bir koter cihazı ile aorta ve VCI'yı lomber damarlardan ayırın. Serbest bırakılan aorta VCI segmentinin proksimal ve distal uçlarına küçük atraumatik klempler uygulayın.30 gauge bir iğne kullanarak, dikey olarak kesilen delikten aortanın ön duvarına, donör aortasının boyutunda bir delik açın. Bu aşamada, heparinli salin ile durulama yaparak aorta lümenindeki tüm kan pıhtılarını temizleyin. Ardından, donör kalbini soğuk salin içerisinde yerleştirin.Donör kalbi, alıcının aortasındaki insizyonun yanına yerleştirin. Donör pulmoner arteri, 10-0 sürekli naylon sütürler kullanarak alıcının IVC'sinin yanına yerleştirin. Aortaları uçtan yana (end to side) anastomozlayın.Proksimal köşeden başlayın ve sol taraf boyunca distal köşeye kadar dikin. Ardından hayvanı 180 derece döndürün. Sonra kalbi kenara çekin ve dikişlere aort duvarının sağ tarafında distalden proksimale doğru devam edin.Anastomozu kapatmadan önce, pıhtıları ve havayı uzaklaştırmak için lümeni heparinli serum fizyolojik ile nazikçe yıkayın. Ardından dikiş işlemini tamamlayın. Sonrasında, akciğer arterinin anastomozlanacağı Vena Cava Inferior'un (IVC) ön duvarına dikey bir insizyon yapın.İkinci olarak, anastomoz için 10-0 sürekli sütürler kullanın. Damarlar, proksimal uçta IVC lümeni içindeki sol duvarın distal ucundan başlar. Ön sağ yan duvar boyunca devam edin ve distal uca kadar sütüre edin. İşlemi tekrarlayın.Anastomozu tamamlamadan önce lümeni iyice yıkayın. Ardından, anastomozun etrafına jel köpük parçaları yerleştirin. Pamuk aplikatörlerle hafifçe baskı uygulayarak hemostaz sağlayın.Alıcıyı revaskülarize etmek için. Önce distal klempi, ardından proksimal klempi serbest bırakın. Alıcı operasyonu sırasında, cerrahinin doğruluğunu ve hızını optimize etmek hayati önem taşır.Bu nedenle kros klempleme süresinin ideal olarak 30 dakikadan kısa olması gerekir. İyileşmeyi desteklemek için greft bölgesine 37 °C sıcaklığında serum fizyolojik uygulayın. Fibrilasyon hemen gerçekleşmeli ve birkaç dakika içinde kendiliğinden sinüs ritmine dönmelidir.Cerrahi bölge kapatılmadan önce, intramüsküler olarak buprenorfin enjeksiyonu yapılmalıdır. Tüm doku katmanları için 5-0 absorbabl sürekli sütürle yarayı kapatarak operasyonu tamamlayın. Cerrahi yara kapatıldıktan sonra, alıcı hayvana ampicillin ve 0,6 ml salinle deri altına enjeksiyon yapın.Hidrasyona yardımcı olmak için, hayvan bilinci yerine gelene kadar 37 °C'ye ayarlanmış bir ısıtma pedi üzerine yerleştirin. Çoğu hayvan, cerrahiden sonraki üç saat içinde su içmeye ve hatta yemek yemeye başlar. Sekiz saat sonra fare hâlâ distress belirtileri gösteriyorsa, semptomlar düzelene kadar her 12 saatte bir buprenorfin enjeksiyonları yapın.Fare 48 saatten fazla süre boyunca stres altında kalmaya devam ederse, ameliyat sonrası ilk 10 gün boyunca bir veteriner hekime başvurun. Greft kalp atışını abdominal palpasyonla doğrudan izleyin. Günlük olarak, atış gücünü sağlıklı bir greft için dört artıdan, ileri derece reddine bağlı zayıf bir atış için bir artıya kadar kaydedin.10 gün sonra greftin tamamen reddedilmesi nedeniyle, atmayan bir grefti negatif olarak kaydedin. 227 heterotopik kalp transplantasyonundan sonra, %90,3'ü 24 saat boyunca ve %86,8'i 48 saat boyunca başarılı olmuş olup greftlenen kalp nabzını haftada üç kez izlemeye devam edin. Başarısızlık durumları arasında arka bacak felci, greft kaynaklı atmayan kalp, iskemik hasar ve/veya tromboz yer almış ve greft sağkalanları kataloglanmıştır.Kalp nakli başarısızlıklarının nedeni patoloji ile belirlenmiştir. Burada okla işaretlenmiş nakledilen kalbin analizinde, kalp dokusunun tromboz ve enfarktüsü bu greft kalbin başarısızlığının nedeni olarak görülmüştür; C 57 Black six donör ve alıcı suş kombinasyonunda hiçbir kalp reddedilmemiş ve nakledilen kalpler 100 günden fazla yaşamıştır. Bu vakada, kalp, yaşam destekleyici durumun kaybına ikincil olarak gelişen kas atrofisi nedeniyle boyutunda hafif bir azalma göstermiştir.Buna karşılık, DBA 2 donörden C 57 Black 6 alıcısına yapılan reddeden suş kombinasyonunda, nakledilen bu kalp yedinci güne kadar atmayı bırakmış ve 100. güne kadar reddedilme belirtileri göstermiştir. Aynı kalp, piyasaya sürüldüğünde tamamen fibrotik hale gelmiş ve küçülmüştür. Bu teknik, doğru şekilde uygulandığında 90 milyonda bir veya daha az sürede gerçekleştirilebilir ve SF₆ gazıyla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın.Anestezik gaz geri kazanım sisteminin kullanımı şiddetle önerilir.

a-modified-method-for-heterotopic-mouse-heart-transplantion

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Fare heterotopik kalp transplantasyonu modeli ret ve immün yanıt mekanizmaları eğitim için önemli bir yöntem olduğu birçok araştırmacı tarafından kanıtlanmıştır. Ancak, söz konusu teknikleri hala zorlu. Standart teknikler değiştirerek 1000 nakli ile daha fazla başarı elde ettiler.

Farelerde Heterotopik Kalp Nakli

Sıçangil modeli servikal kalp nakli immünolojik hem de iskemi reperfüzyon yaralanması çalışmasından için uygundur. Biz olmayan bir dikiş manşet tekniği kullanılarak prosedür değiştirilmiş ve bu yaklaşım ile 1.000 'den fazla başarılı nakli gerçekleştirildi.  Burada, videoyu tamamlamak için bu tekniğin ek ayrıntıları.

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

El yazması fare heterotopik kalp nakli gerçekleştirmek için gereken adımları açıklar.

Mürin Heterotopik Kalp Nakli Tekniği

Manşet tekniği, küçük damarların teknik olarak zorlayıcı sütür anastomozlarından kaçınarak farelerde heterotopik servikal kalp nakli modelini kısaltır ve kolaylaştırır. Bu video makalesinde gösterilen teknik ayrıntılar, araştırmacıların bu modeli laboratuvarlarında kurmalarına izin vermelidir.

Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli

Biz manşet üzerinde evert yardımcı olmak için fare servikal heterotopik kalp nakli için manşet tekniği bir iç tüp yaklaşım tanıtmak. İki deneyimli cerrah arasındaki işbirliğinin ameliyat süresini belirgin bir şekilde kısalttAdığını gördük.

Murin Kalp Nakli için Manşet Tekniğinin Optimizasyonu

Heterotopik abdominal fare kalp nakli modelinde kan devresi rekonstrüksiyonu için yeni bir teknik gösterilmiştir.

Abdominal Fare Kalp Nakli Modelinde Kan Devresi Rekonstrüksiyonu

Bu protokolde, kardiyak allogreft rejeksiyon mekanizmasını araştırmak için bir fare kalp nakli modeli kullanılmıştır. Bu heterotopik kalp nakli modelinde, modifiye Manşet tekniği kullanılarak kalp implantasyonunun servikal uçtan uca anastomozu ile operasyon etkinliği artırılır ve kalp greftlerinin sağkalımı sağlanır.

Fare Servikal Heterotopik Kalp Transplantasyon Modeli için Modifiye Manşet Tekniği

Fare kardiyak transplantasyon modelleri, transplantasyon immünolojisini incelemek için değerli araştırma araçlarını temsil etmektedir. Mevcut protokol, laminer kan akışına izin vermek için alıcının ortak karotis arterine ve donörün pulmoner arter gövdesine manşetlerin yerleştirilmesini içeren fare heterotopik servikal kardiyak transplantasyonunu detaylandırmaktadır.

Vasküler Manşetler Kullanılarak Fare Heterotopik Servikal Kardiyak Transplantasyonu

Bu yazıda heterotopik vaskülarize kardiyak transplantasyon için modifiye edilmiş bir teknik, güncel aseptik teknik, analjezi ve anestezi anlatılmaktadır.

Çağdaş Aseptik Teknik, Anestezi ve Analjezi Standartlarına Uygun Modifiye Murin Heterotopik Kalp Nakli Protokolü

Bu protokol, sare servikal kalp nakli için basitleştirilmiş ve uçtan yana dikiş anastomozu tekniği sunarak nakil immünolojisini incelemek için sağlam ve tekrarlanabilir bir model sunar.

Nakil İmmünolojisini Çalışmak İçin Uçtan Yana Anastomoz Tekniği Kullanılarak Servikal Heterotopik Fare Kalp Nakli

Öğrenin farelerde heterotopik kalp nakli için mikrocerrahi teknikleri. Bu yöntem, donör kalp hasatlama ve alıcı damar anastomozu ile transplantasyon başarısını izlemeyi kapsar.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

Daha fazla video keşfet