Name: Insan serumundan küçük kodlayıcı olmayan RNAlar izolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Öğrenin, insan serumundan küçük kodlayıcı olmayan RNA izolasyonu için optimize edilmiş yöntemi. Protein kontaminasyonunu azaltarak yüksek kaliteli mikroRNA elde edin ve kanser araştırmalarında kullanın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Samantha Khoury ve Pamela Ajuyah Avustralyalı Lisansüstü Ödülü tarafından desteklenmektedir. Biz de Samantha Khoury kendi ek destek için Translational Cancer Research Network, Lowy Kanser Araştırma Merkezi, New South Wales Üniversitesi ve Kuzey Translational Cancer Research Unit kabul etmek istiyorum.

Not: Sağlıklı hastalarda ya da kanser hastaları İnsan serum örnekleri, Kraliyet Prens Alfred Hastanesi Sydney (Protokol numarası X10-0016 ve HREC/10/RPAH/24) ve Teknoloji Üniversitesi onaylanan insan etik protokolleri altında rıza ile elde edildi Sydney. Serum örnekleri çeşitli Sydney hastane ameliyatı önceki hastalar toplanmış ve -80 ° C &#39;de depolama yerleştirildi Serum 1. Küçük RNA İzolasyon Toplam RNA, Tri-Reagent LS protokolü RT modifiye edilmiş bir versiyonu kullanılarak insan serumundan hazırlandı. <ol><li> Buz üstünde dondurulmuş serum örnek çözülme ve daha sonra etiketli bir mikrosantrifüj tüpüne taze çözülmüş serumun 400 ul aktarın. </li><li> RNase H serbest 2 O, 100 ul serum seyreltilir ve 1 mg / ml &#39;lik bir konsantrasyonda, proteinaz K ekleyin. </li><li> Proteinaz K tarafından protein sindirimini izin vermek için 20 dakika boyunca 37 ° C&#39;de inkübe </li><li> To, tam çözülmesini sağlamak Tri-Reagent LS RT 1.5 misli hacim ve 4-bromoanisol 100 ul ilave edin. </li><li> Kısaca, ters Homojenat 5 saniye boyunca tekrar eden pipetleme gerçekleştirmek ve bir işaretlenmiş 2 mi Ağır Faz Kilitli tüp içine aktarın. </li><li> 4 ° C&#39;de 20 dakika boyunca 12,000 x g&#39;de Homojenat Spin </li><li> Dikkatli bir şekilde yeni DNA LoBind tüp içine edilen sulu çözeltinin en az 1 ml süzün. Organik ve fazlar arası Faz Kilitli borunun beyaz jel altında sıkışmış olmalıdır. </li><li> , Sulu çözeltiye glikojen 5.0 ul (5 mg / ml) ve% 100 izopropanol, 500 ul ters çevirme ile karıştırın ve -20 ° C&#39;de O / N inkübe </li><li> Aşağıdaki O / N inkübasyon 4 ° C santrifüj içinde 12,000 x g&#39;da 20 dakika boyunca santrifüj örneği. </li><li> Net Süpernatantı atın ve 4 ° C santrifüj 16.000 × g 2 dakika için bir &quot;flaş&quot; sıkma gerçekleştirin. </li><li> Dikkatle açık sol kaldırmakBir pipet kullanarak pelet çevreleyen ution. </li><li> 10 dakika boyunca 10,000 x g &#39;de% 70 etanol ve 1 ml santrifüj ile pelet yıkayın. Yıkama solüsyonu Durusu ve yıkama adımı tekrarlayın. </li></ol> Çözüm içine 2. RNA Tekrar Süspansiyonu <ol><li> Pelet tamamen çözülür sağlanması, RNase serbest H 2 O 10 ul pelet tekrar. RNA tamamen çözünebilir olduğundan emin olmak için, numune, 5 dakika boyunca 55 ° C&#39;ye kadar ısıtılabilir. Bu süre boyunca, tekrar pipetleme ile örnek karıştırın. Daha yüksek bir toplam RNA verimi için, aynı hastadan alınan iki RNA preparatları havuz. </li><li> UV-Vis spektrofotometre kullanılarak yeniden süspansiyon haline getirildi ve bir RNA miktarını belirlemek 2100 Bioanalyzer kullanılarak RNA kalitesini değerlendirmek. Alt uygulamalarında kullanılmak üzere -80 ° C&#39;de bir araya getirilmiş RNA örnekleri saklayın. </li></ol>

<ol><li>Babu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+extraction+efficiency+of+small+RNAs+with+the+Agilent+2100+Bioanalyzer+and+the+Small+RNA+Kit%5BTitle%5D)+AND+%22Agilent+Application+Note%22%5BJournal%5D)">Monitoring extraction efficiency of small RNAs with the Agilent 2100 Bioanalyzer and the Small RNA Kit.</a> Agilent Application Note. , (2010).</li>
<li>Tran, N., Hutvagner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biogenesis+and+the+regulation+of+the+maturation+of+miRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Essays+Biochem%22%5BJournal%5D)">Biogenesis and the regulation of the maturation of miRNAs.</a> Essays Biochem. 54, 17-28 (2013).</li>
<li>Chim, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+characterization+of+placental+microRNAs+in+maternal+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Detection and characterization of placental microRNAs in maternal plasma.</a> Clin. Chem. 54, 482-490 (2008).</li>
<li>Lodes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+cancer+with+serum+miRNAs+on+an+oligonucleotide+microarray%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Detection of cancer with serum miRNAs on an oligonucleotide microarray.</a> PLoS One. 4, (2009).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+microRNAs+in+serum%3A+a+novel+class+of+biomarkers+for+diagnosis+of+cancer+and+other+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of microRNAs in serum: a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases.</a> Cell Res. 18, 997-1006 (2008).</li>
<li>Burgos, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+extracellular+miRNA+in+human+cerebrospinal+fluid+by+next-generation+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Identification of extracellular miRNA in human cerebrospinal fluid by next-generation sequencing.</a> RNA. 19, 712-722 (2013).</li>
<li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidinium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.</a> Anal. Biochem. 162, 156-159 (1987).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+miRNA+processing+and+expression+in+pleomorphic+adenomas+of+the+salivary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Alterations in miRNA processing and expression in pleomorphic adenomas of the salivary gland.</a> Int. J. Cancer. 124, 2855-2863 (2009).</li>
<li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidinium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction%3A+twenty-something+years+on%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on.</a> Nat. Protoc. 1, 581-585 (2006).</li>
<li>Kirschner, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haemolysis+during+sample+preparation+alters+microRNA+content+of+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Haemolysis during sample preparation alters microRNA content of plasma.</a> PLoS One. 6, (2011).</li>
<li>Murphy, N. R., Hellwig, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+nucleic+acid+organic+extraction+through+use+of+a+unique+gel+barrier+material%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Improved nucleic acid organic extraction through use of a unique gel barrier material.</a> Biotechniques. 21, 934-936 (1996).</li>
<li>Taylor, C. J., Satoor, S. N., Ranjan, A. K., Pereira e Cotta, M. V., Joglekar, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+measurement+of+noncoding+RNA+in+human+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Diabetes+Research%22%5BJournal%5D)">A protocol for measurement of noncoding RNA in human serum.</a> Experimental Diabetes Research. 2012, (2012).</li>
<li>Ichikawa, M., Akiyama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Combination+of+Extraction+Reagent+and+DNA+Microarray+That+Allows+for+the+Detection+of+Global+MiRNA+Profiles+from+Serum%2FPlasma%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">A Combination of Extraction Reagent and DNA Microarray That Allows for the Detection of Global MiRNA Profiles from Serum/Plasma.</a> Methods Mol. Biol. 1024, 247-253 (2013).</li>
<li>Fromm, B., Harris, P. D., Bachmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+preparations+from+individual+monogenean+Gyrodactylus+salaris-a+comparison+of+six+commercially+available+totalRNA+extraction+kits%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res.+Notes%22%5BJournal%5D)">MicroRNA preparations from individual monogenean Gyrodactylus salaris-a comparison of six commercially available totalRNA extraction kits.</a> BMC Res. Notes. 4, 217 (2011).</li>
<li>Li, Y., Kowdley, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+microRNA+isolation+from+clinical+serum+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Method for microRNA isolation from clinical serum samples.</a> Anal. Biochem. 431, 69-75 (2012).</li>
<li>McAlexander, M. A., Phillips, M. J., Witwer, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Methods+for+miRNA+Extraction+from+Plasma+and+Quantitative+Recovery+of+RNA+from+Cerebrospinal+Fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Comparison of Methods for miRNA Extraction from Plasma and Quantitative Recovery of RNA from Cerebrospinal Fluid.</a> Frontiers in Genetics. 4, 83 (2013).</li>
<li>Kim, Y. K., Yeo, J., Kim, B., Ha, M., Kim, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+structured+RNAs+with+low+GC+content+are+selectively+lost+during+extraction+from+a+small+number+of+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Short structured RNAs with low GC content are selectively lost during extraction from a small number of cells.</a> Mol. Cell. 46, 893-895 (2012).</li>
</ol>

Ifşa hiçbir şey yok.

MicroRNA nüfusu serumda bulunan toplam RNA&#39;nın yaklaşık olarak% 0.4-0.5 oluşturmaktadır. Bundan başka, insan serumunda bulunan, yüksek protein içeriği de vardır. RNA ve protein geliştirmek ve fenol hem azaltmak için biz birkaç adımda eklenmesi ile geleneksel bir yaklaşım Chomczynski 9 olarak var kirlenmektedir. Laboratuvarımızda gerçekleştirildiğinde Toplam RNA, standart Tri-Reagent LS RT-(Molecular Research Centre) kullanarak serumdan izole edilmiştir, ancak, bu yöntem, çeşit...

Son yıllarda, insan hastalıklarının erken teşhisi için yeni biyomarkerler keşfetmek için büyüyen bir itme olmuştur. Çok dikkat potansiyel belirteçleri gibi microRNA 2 (miRNAs veya Mirs) gibi küçük RNA&#39;lar kullanılarak odaklanmıştır. Bu küçük RNA&#39;lar gibi serum ve çalışmaları gibi vücut sıvılarında bulunan bu bozunmaya esnek ve değişen çevre koşulları 3&#39;ün bir aralığı üzerinde kararlı olduğunu göstermiştir. Bu özellikler, serum veya dolaşımdaki miRNA&#39;ların İdeal biyobelirtecin 4, 5 göz önüne alındığında. Şu anda biyolojik sıvılardan küçük RNA izolasyonu için iki temel yaklaşım vardır. İkinci yaklaşım fenol ve guadinyum tiosianat reaktifler 7 ile uzun soluklu protokolü kullanan ise ilk yaklaşım, küçük RNA&#39;lar 6 bağlamak ve eluteye sütun tabanlı teknoloji kullanır. Biz insan serumu küçük RNA&#39;lar izole etmek için basit, etkili, kolonsuz protokol geliştirdik. İzole edilen RNA derhal olduğuDNA oligonükleotid diziler ve RNA sıralanması gibi aşağı uygulamalarda rilmesi kullanılabilir. Serumdan RNA izole etmek için fenol-tabanlı yöntemler kullanarak zaman biz çeşitli konularda karşı karşıya, çünkü bu protokol geliştirildi. Geleneksel Chomczynski yaklaşım, sıklıkla bir çok ticari satıcılardan temin edilebilir tepkin bir dizi ile en laboratuarlarda kullanılmaktadır. Bununla birlikte yaygın kullanımları göz önüne alındığında, sıkı kurallar sürekli olarak belirli bir kan ya da serum içinde, vücut sıvıları yüksek kaliteli RNA&#39;yı üretmek için geliştirilmiş edilmemiştir. Serum RNA izole edilmesi ile bağlantılı ortak sorunlar düşük verimler ve RNA izolasyonu, özellikle fenol sırasında kullanılan reaktifleri ile kontaminasyonu içerir. Bizim yaklaşım, kantitatif PCR (qPCR) ve RNA sıralanması gibi alt analizi için yüksek kaliteli RNA sağlamak için bu fenol kirleticileri ortadan kaldırır. Biz daha miRNA dizileri bu RNA test ettik.

<table><tbody><tr><td>Tri-Reaktif RT LS</td><td>Moleküler Araştırma Merkezi, ABD</td><td>TR 118</td><td></td></tr><tr><td>RNaz içermeyen H2O</td><td>GIBCO Invitrogen</td><td>10977-023</td><td></td></tr><tr><td>Proteinaz K</td><td>Finnzymes, Finlandiya</td><td>EO0491</td><td></td></tr><tr><td>Ağır Faz Kilit tüpü</td><td>5PRIME</td><td>2302830</td><td>2 ml kapasiteli</td></tr><tr><td>DNA Lobind tüpü</td><td>Eppendorf</td><td>0030 108.078</td><td>1.5 ml kapasite</td></tr><tr><td>Glikojen</td><td>Invitrogen, ABD</td><td>10814-010</td><td>5 mg / ml</td></tr><tr><td>RNA sınıfı izopropanol</td><td>Sigma Aldrich, ABD</td><td>I9516</td>% <td>100</td></tr> <tr><td>Soğutmalı santrifüj</td><td>John Morris</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop UV-Vis spektrofotometre</td><td>Thermo Fisher Scientific, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNA sınıfı etanol</td><td>Sigma Aldrich, ABD</td><td>E7023</td><td>%70</td></tr><tr><td>Agilent 2100 Biyoanalizör</td><td>Agilent, Amerika Birleşik Devletleri</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

insan serumundan küçük kodlayıcı olmayan rna&#39;lar izolasyonu

Isolation of Small Noncoding RNAs from Human Serum

RNA ve ifade analizi, çok laboratuvarda ortak bir özelliktir. Önemi memeli hücrelerinde bulunan mikroRNA&#39;lar, gibi küçük RNA&#39;lar çıkmasıdır. Bu küçük RNA&#39;lar gibi büyüme, gelişme ve ölüm ve çok ilgi gibi hayati yollar kontrol güçlü gen düzenleyiciler vücut sıvılarında kendi ifadesi yönelik olmuştur vardır. Bu, kanser ve serum biyolojik olarak potansiyel uygulama gibi insan hastalıklarında da bozukluğunun kaynaklanmaktadır. Ancak, serum miRNA ifade analizi, sorunlu olabilir. Çoğu durumda, serum miktarı sınırlayıcı ve serum küçük RNA&#39;lar tek 0,4-0,5% 1 teşkil eden toplam RNA düşük miktarda içerir. Böylece serumdan kaliteli RNA yeterli miktarda izolasyon araştırmacılar için büyük bir meydan okuma bugün. Bu teknik yazıda, DNA dizileri veya qPCR analizi ya için yeterli RNA elde etmek insan serumu sadece 400 ul kullanan bir yöntem ortaya koymaktadır. BirBu yöntemin dvantages sadeliği ve kaliteli RNA verim yeteneği vardır. Bu küçük RNA&#39;lar saflaştırılması için hiçbir özel sütunları gerektirir ve ortak laboratuvarlarda bulunan genel reaktifler ve donanım kullanır. Önerilen yöntem, aynı zamanda, yüksek kaliteli RNA netice verirken, fenol kirlenmeyi elimine etmek için, bir faz kilit Jel kullanır. Ayrıca, daha da izolasyon aşaması esnasında tüm kirleri çıkarmak için ek bir adım tanıtmak. Bu protokol, serumdan kadar 100 ng / ul toplam RNA izole verim çok etkili değil, aynı zamanda diğer biyolojik dokular için uyarlanabilir.

Şekil 1, serumdan izole edilmiş RNA tipik bir UV / Vis spektrumunu göstermektedir. Bu profil itibaren biz, sırasıyla her iki 270 nm ve 230 nm &#39;de fenol ve organik kirletici maddeler ile 280 nm&#39;de protein kontaminasyonu kaydetti. Kalıntı, guanidinyum tiosiyanat da 260 nm&#39;de tespit edilmiştir. Kirletici maddeleri azaltmak için, optimizasyon adımları bir dizi standart Tri-Reagent LS RT-prosedürü için yapılmıştır. Biz, total RNA verimi artırmak ve hem de bulaşma (siyah çizgi, Şekil 1A)</...

Bu protokol, insan serumundan küçük RNA&#39;ların ekstre edilmesi için bir yöntem tarif eder. Biz DNA dizileri kullanmak için kanser serumdan microRNA izole ve aynı zamanda singleplex kantitatif PCR için bu yöntemi kullandık. Protokol yüksek kalitede RNA elde edildi modifikasyonlarla fenol ve guanidinyum tiosiyanat reaktifler kullanır.

Insan serumundan küçük kodlayıcı olmayan RNA&#39;lar izolasyonu

The analysis of RNA and its expression is a common feature in many laboratories. Of significance is the emergence of small RNAs like microRNAs, which are ...

Bu prosedürün genel amacı, serum örneklerinden yüksek kaliteli RNA izole etmektir. Bu işlem, yaygın olarak kullanılan MRC try reagent RTLS protokolünün optimize edilmiş versiyonu kullanılarak gerçekleştirilir. Bu işlem, öncelikle protein kontaminasyonunu azaltmak için serumun nükleaz içermeyen su ile bire beş oranında seyreltilmesiyle sağlanır.İkinci adım, ilk santrifüj aşaması için iki mililitrelik faz kilitleme tüplerinin kullanılmasıdır. Bu işlem, fenol ve proteinler gibi kontaminanların çoğunu organik fazda hapseder. Ardından, üçüncü ve son optimizasyon adımı, etanol yıkamaları öncesinde RNA peletindeki tüm kalıntı kontaminasyonları uzaklaştıran 12.000 g hızındaki hızlı santrifüjleme işlemidir.Daha yüksek bir toplam RNA verimi gerekiyorsa, son adım aynı hastadan elde edilen iki modifiye RNA preparasyonunu birleştirmektir. Nihayetinde, serumu nükleazsız su içinde çözerek ana kontaminantları hapsetmek için bir phase lock tüpü kullanan ve hızlı santrifüj (flash spin) işlemi ekleyen bu modifiye yöntemi kullanarak, serumdan yapılan bir RNA izolasyonunda küçük kodlamayan RNA'ların geri kazanımını maksimize etmenin mümkün olduğunu gösteriyoruz.Bu tekniğin standart triol RNA izolasyon

isolation-of-small-noncoding-rnas-from-human-serum

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu kağıt, izolasyon, saflaştırma ve exosomes tespiti, moleküler içerik analizi teknikleri gibi yöntemleri gösteriyor. Bu yöntemler, hücre kültürü medya ve biyolojik sıvılarda exosome izolasyonu için uyarlanabilir ve moleküler içerik analizi ötesinde işlevsel çalışmalarda da yararlı olabilir.

RNA İçeren Exosomes İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Mitokondriyal proteinleri kodlayan birçok mRNA'lar mitokondri dış membran ile ilişkilidir. Biz ilişkili mRNA'lardan ve ribozomlarla maya mitokondri izolasyonu amaçlayan bir hücre altı bölme prosedürü tarif. Bu protokol, mRNA lokalizasyonu mekanizmaları ve mitokondri yakın olarak lokalize çeviri ortaya çıkarmak için çeşitli koşullar altında yetiştirilen hücreler uygulanabilir.

Lokalize Çeviri Mekanizmaları Eğitim için Maya Mitokondri ile mRNAlarının Associated İzolasyonu

Bu el yazması, ökaryotik hücrelerde oluşan seçilmiş akraba RNP'leri spesifik bir oligonükleotid yönelimli zenginleştirme yoluyla izole etmek için bir yaklaşımı açıklar. Bu yaklaşımın uygulanabilirliğini, DHX9/RNA helikaz A'dan oluşan retroviral 5' çevrilmemiş bölgeye bağlı bir akraba RNP'yi izole ederek gösteriyoruz.

Oligonükleotid yönelik elüsyon kullanılarak Hücreler Aynı Kökenli RNA-protein kompleksleri izolasyonu

RNA-protein etkileşimleri birçok hücresel sürecin merkezinde yer alır. Burada, spesifik RNA'yı izole etmek ve onunla ilişkili yeni proteinleri tanımlamak için in vivo bir yöntemi açıklıyoruz. Bu, RNA'ların hücrede nasıl düzenlendiğine yeni bir ışık tutabilir.

Rapid Metodoloji tarafından Roman RNA Bağlayıcı Proteinler İzolasyon

Bu protokol, yüksek yoğunluklu lipoprotein küçük RNA'ların izolasyonunu ve miktar tayinini açıklar.

Küçük RNA miktarının belirlenmesi Sigara kodlama için yüksek yoğunluklu lipoproteinler izolasyonu

Endogenously kurulan mRNA-protein kompleksleri kurtarılması için bir tandem RNA izolasyon yordam (seyahat) açıklanmıştır. Özellikle, çapraz vivo içindeRNA-protein kompleksleri vardır, poliadenile RNA'ların özleri ile oligo(dT) boncuk etkilenmezsiniz ve belirli mRNA'ların değiştirilmiş RNA antianlamlı oligonucleotides ile yakalanır. MRNA'ların için bağlı proteinler immunoblot analizi ile tespit edilir.

Ökaryotik mRNA-Protein kompleksleri kurtarmak için bir Tandem oligonükleotid tabanlı RNA izolasyon yordamı

Bu iletişim kuralı, hücre kültür ortamından küçük RNA Kütüphane inşaat ve sonraki nesil sıralama ekstraselüler mikroRNA'lar arındırmak gösterilmiştir. Çeşitli kalite kontrol denetim noktaları ne exRNAs gibi düşük giriş örnekleri ile çalışırken olacağını anlamak okuyucuların izin açıklanmıştır.

İzole, sıralama ve insan Mezenkimal Kök hücreleri ekstrasellüler mikroRNA'lar analiz

Burada, küçük RNA'ları yalıtmak, mikroRNA'lar için zenginleştirmek ve yüksek iş elde etme sıralaması için numune hazırlamak için adım adım bir strateji tanımlıyoruz. Daha sonra açık kaynak araçlarını kullanarak sıra okumaları nasıl işleyip mikroRNA'lara hizalayan açıklarız.

MikroRNA'ları Yalıtmak ve Sıralamak ve Açık Kaynak Araçlarını Kullanarak Analiz Etmek Için Komple Bir Boru Hattı

Dairesel RNA'lar (circRNA'lar), transkripsiyonel düzenlemede ve proteinler arasındaki iletişimlerde rol alabilecek kodlamayan RNA'lardır. CircRNA sıralama kütüphanelerinin inşası için farklı parametrelerin değerlendirilmesinin ardından, RNase R ön arıtma ile mahsur kalan toplam RNA kitaplığı hazırlığı kullanılarak bir protokol derlenmiş ve burada sunulmuştur.

RNA Sıralaması Kullanılarak Dairesel RNA'ların Tanımlanması

Mevcut protokol, mikroRNA'ların kene tükürük bezlerinden ve saflaştırılmış hücre dışı veziküllerden izolasyonunu tanımlamaktadır. Bu, yaygın olarak kullanılan reaktifleri ve sarf malzemelerini birleştiren evrensel bir prosedürdür. Yöntem aynı zamanda az sayıda kene kullanımına izin verir, bu da kolayca sıralanabilen kaliteli mikroRNA'larla sonuçlanır.

MikroRNA'ların Kene Ex Vivo Tükürük Bezi Kültürlerinden ve Hücre Dışı Veziküllerden İzolasyonu

Öğrenin, insan serumundan küçük kodlayıcı olmayan RNA izolasyonu için optimize edilmiş yöntemi. Protein kontaminasyonunu azaltarak yüksek kaliteli mikroRNA elde edin ve kanser araştırmalarında kullanın.

Insan serumundan küçük kodlayıcı olmayan RNA'lar izolasyonu

Daha fazla video keşfet