Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi Drosophila melanogaster

Bu prosedürün genel amacı, meyve sineklerinin spontan lokomotor aktivitesini ölçmektir. Bu, önce deneysel sineklerin toplanması ve yaşlandırılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, sıcaklık kontrollü bir inkübatörde popülasyon monitörlerini kurmak ve uygun yazılımı indirmektir.

Daha sonra, sinekler cam eğelere aktarılır ve daha sonra aktivite monitörlerinin çalıştırıldığı popülasyon monitörlerinin içine yerleştirilir. Son adım, verileri analiz etmektir. Sonuçta, sineklerin spontan fiziksel aktivitesindeki farklılıkları göstermek için popülasyon monitörleri kullanılır.

Bu tekniğin negatif coğrafi eksen gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, birden fazla sinek popülasyonunun spontan fiziksel aktivitesinin basit, güvenilir ve objektif sürekli kaydına izin vermesidir. Bu yöntem, farklı manipülasyonların sinekleri nasıl etkilediğini belirlememize yardımcı olabilir. Prosedürü gösteren spontan fiziksel aktivite, bir laboratuvardan laboratuvar asistanı olan Suzanne Kowski olacaktır Başlamak için, ekteki metin protokolünde listelenen adımlara göre yiyecek hazırlayın ve sıcak bir plaka üzerinde sürekli karıştırarak soğumaya bırakın.

Her dar cam şişeye beş mililitre yiyecek koyun, yiyecek miktarının popülasyonun en düşük halkasının altında olduğundan emin olun. Yiyecekler oda sıcaklığına soğuduktan sonra izleyin. Şişeleri sünger tapalarla örtün ve iki haftaya kadar dört santigrat derecede tutun.

Kullanmadan önce şişeleri oda sıcaklığına ısıtın. Bir sonraki büyüme: Canton S, standart laboratuvar gıdaları ile plastik şişelerde uçar. Şişeleri, 12 saatlik açık karanlık bir döngüde 25 santigrat derecede nemlendirilmiş sıcaklık kontrollü bir odada tutun.

Sabahları şişelerden berrak yetişkin sinekler. Daha sonra, dişi sineklerin bakire olduğundan emin olmak için, yeni kapatılan sinekleri, welo'dan sonraki sekiz saat içinde bir karbondioksit pedi üzerinde cinsiyete göre ayırın. Beş ila 10 günlük bakire erkek ve dişi yerleştirerek 10 şişe ebeveyn sineği hazırlayın.

Birkaç maya tanesi ile standart bir gıda şişesinde uçar. Sinekleri iki gün boyunca 12 saatlik açık karanlık bir döngü ile 25 santigrat derecede bir kuluçka makinesinde tutun. Sinekleri her gün yeni bir plastik şişeye geçirin ve elde edilen yumurtalarla birlikte şişeleri 25 santigrat derecede bir kuluçka makinesinde tutun.

Daha sonra ilk gün boyunca kapattığı sinekleri temizleyin ve atın ve ikinci gün daha senkronize bir sinek popülasyonu toplamak için şişeleri kuluçka makinesine geri koyun. Daha sonra, bir karbondioksit pedi üzerinde, 24 saat içinde metal bir kaşıkla flakon başına 25 erkek ve 25 dişi sinek toplayın. Şişenin üzerine ELO gününü yazın.

Her biri en az beş Replicate şişesi birleştirin. Deney ve kontrol grupları için. Şişeleri, 12 saatlik açık karanlık döngü ile 25 santigrat derecede sıcaklık kontrollü çevre odalarında tutun.

Sinekleri 10 gün boyunca her gün yeni bir plastik şişeye geçirin. Bir huni kullanarak, popülasyon monitörlerini sıcaklık kontrollü bir inkübatöre yerleştirin. Ardından, her monitörü dört telli bir telefon kablosuyla beş bir ayırıcı aracılığıyla güç kaynağı arabirim birimine veya PSIU'ya bağlayın.

Ardından telefon kablosunu PSIU'ya bağlayın. PSIU'yu 100 ila 240 voltluk bir elektrik prizine bağlayın ve güç kaynağı çıkış konektörünü PSIU eşleşen jax'lardan birine takın. Ardından, bilgisayar programı ile PSIU ve etkinlik monitörleri arasında bir veri bağlantısı sentezlemek için PSIU tarafından kullanılan USB yazılımını indirin.

Programı başlatın. Ardından tercihler altında. Macintosh için PSIU seri bağlantı noktasını seçin.

Ardından okuma aralığını seçin. Ardından, monitörleri benzersiz üretici numaralarına göre seçin. Monitörlere verilen numaralara karşılık gelen monitör aralığını seçin.

Yeşil ışığı arayarak tüm monitörlerin doğru şekilde bağlandığından emin olun. Kırmızı ışık, bağlantının kesildiğini gösterir. Kara kutu, sistemin kapalı olduğunu veya USB bağlantısının düzgün yapılmadığını gösterir.

Aynı yaştaki ayrı erkek ve dişi sinekler. Bir karbondioksit pedi üzerine 10 erkek ve 10 dişi sineği ayrı oda sıcaklığına yerleştirin. Cam vi.

Her deney ve kontrol hattı için en az üç şişe kullanın ve her bir sinek cinsiyeti için, sineklerin yiyeceğe sıkışmadıklarından emin olmak için sinekler karbondioksitten kurtulana kadar şişeleri yanlarında tutun. Karbon oksitten kurtulmak için oda sıcaklığında iki saat bekletin. Ardından şişeleri popülasyonun içine yerleştirin.

İnkübatörlerde bulunan monitörler. Yiyeceklerin kurumasını önlemek için sinekleri üç veya dört gün sonra yeni şişelere geçirin. Deneyin sonunda, yinelenen okumaları ortadan kaldırmak ve kayıtların eksiksiz olduğundan emin olmak için verileri tarayın.

Dosya taraması 110 x'i kullanarak, veri toplama aralığını seçin ve seçilen zaman diliminde ilk 24 saat içinde toplanan verileri atın. Program, her monitör için mevcut toplam sayımı bilgisayara gönderecek ve sıfırdan tekrar saymaya başlayacaktır. Ardından, deneysel bir ad seçin ve verileri kaydetmek için dosyaları bilgisayar verileri klasöründen kopyalayın.

Metin dosyalarında toplanan verileri Excel elektronik tablolarının sütunlarına dikkatlice kopyalayarak veri analizine başlayın. Ardından, üç farklı kızılötesi ışın yüksekliğinde toplanan etkinliğin toplamını temsil eden her monitör için istenen bir süre içindeki toplam etkinliği hesaplayın. Son olarak, iki kuyruklu öğrenci T-testini kullanarak üç biyolojik kopyayı temsil eden üç monitör arasındaki ortalama lokomotor aktiviteyi ve standart sapmayı belirleyin.

Drosophila'daki spontan lokomotor aktivite, sineğin cinsiyetine ve açık karanlık döngüye bağlıdır. Erkek ve dişi sineklerin ortalama aktivitesinin bu grafiğinde gösterildiği gibi, ok aydınlıktan karanlığa geçişi işaretler. Aktivitede bir azalma görüldüğünde, 20 günlük erkek sineklerin toplam aktivitesi, yüksek kalorili bir diyetteki sineklerin aktivitesinin azalmasına kıyasla, düşük kalorili bir diyette sineklere standart gıda miktarının yarısı verildiğinde artar.

Bu videoyu izledikten sonra, drosophila'nın spontan fiziksel aktivitesini nasıl belirleyeceğinizi iyi anlamalısınız. Bu yöntem, farklı genetik veya çevresel manipülasyonların sineklerin aktivitesini nasıl etkilediğini belirlemeye yardımcı olur.