Name: Dorsal Kök Potansiyel Kayıt By Farelerde Spinal Presinaptik Engellenme Ölçme In Vivo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Öğrenin farelerde dorsal kök potansiyel kaydı ile spinal presinaptik inhibisyonu ölçme yöntemini. Bu teknik, ağrı mekanizmaları ve spinal kord hastalıkları araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz yönteminin kurulması sırasında yararlı tartışmalar için Manfred Heckmann teşekkür ederim. Ayrıca, biz video üreten destek için teknik yardım ve Frank Schubert Claudia Sommer teşekkür ederim. 01EO1002 ve Jena Üniversitesi Hastanesi Klinik Araştırma Disiplinlerarası Merkezi (IZKF): iş Federal Eğitim ve Araştırma Bakanlığı (BMBF), Almanya, FKZ tarafından desteklenmiştir.

Aşağıdaki protokolde belirtilen tüm deneysel prosedürleri Thüringen devlet yetkilileri (Thüringer Landesamt für Verbraucherschutz, Reg.-Nr. 02-044/12) tarafından onaylanmıştır. 1.. Deney için hazırlıklar <ol><li> Emme elektrot İmalatı <ol><li> Örneğin bir standart yama elektrot bir mikropipet çektirmesi ile standart borosilikat cam kılcal kullanarak bir mikropipet çekin. </li><li> Fren bir elmas dosyasını kullanarak (dorsal kökler çapından biraz daha büyük) 0.5-1 mm çaplı ucuna elektrot. </li><li> Isı lehçe bu standart bir laboratuvar meşale içeri emilir zaman dorsal kök zarar olmayacak şekilde uç uygun olacaktır. </li><li> Negatif basınç uygulanabilir, üzerinden bir şırıngaya bağlanmış bir elektrod tutucuya cam filament monte edin. </li></ol></li><li> Çözeltilerin hazırlanması <ol><li> Fareler için enjeksiyon anestezi: 0.75 ml ketamin 10% karıştırın, 0.24 ml% 2 ksilazin and 5 ml% 0.9 tuzlu su. Çözeltinin 10 ul / g vücut ağırlığı (BW) (ip), periton içinden enjekte edilecektir. </li><li> Yapay beyin omurilik sıvısı (CSF), KCI 3, KH 2 PO 4 1.25, MgSO 4 • H2O 2, 3 25 NaHCO; CaCl2 2; D-NaCl 134: iki kere damıtılmış su içinde (mM olarak) şu tuzları seyreltin 10, glikoz. % 0.003 &#39;lik bir son konsantrasyona kadar, H 2 O 2 ekleyin. Her zaman taze hazırlanan solüsyonu kullanın. </li></ol></li><li> Kayıt kurulum hazırlanması (Şekil 2) <ol><li> Veri sayısallaştırma için bir PC arayüzü amplifikatörü bağlayın. </li><li> PC sabit disk üzerinde bir kare darbe uyarıcı ve veri toplama tetiklemek için bir PC-tabanlı bir program veya bir analog zamanlayıcı kullanın. </li><li> Stimülasyon ve kayıt için standart cam elektrot sahiplerine bağlanan Tekrar klorid silverwires kullanın. </li><li> Bir stere etrafında sırasıyla uyarım, kayıt ve referans elektrot için üç manipülatörler arayafareler için otactic çerçeve, tüm elektrotlar daha sonra hazırlanan omuriliğe erişimi böylece. </li><li> Negatif basınç uygulamak için elma olmak üzere elektrot sahiplerine borulama ve şırınga bağlayın. </li></ol></li></ol> 2. Hayvan Deneyleri ve Kayıt Prosedürü için Hayvan Hazırlanması için Genel Yorumlar <ol><li> Ilgili kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi kurallarına göre fareler kullanarak tüm deneyler. Hayvan acı minimize olmasını sağlamak derin anestezi altında ameliyat ve kayıtları gerçekleştirin. </li><li> (, Yukarıda tarif edildiği gibi hazırlanan solüsyonu 10 ul / g BW sırasıyla 125 mg ve ketamin ve ksilazin, g başına BW ila 8 mg), ketamin / ksilazin arasında ip enjeksiyonu ile hayvan anestezisi. Uzun süreli kayıtlar sırasında Gerekirse ilave enjeksiyonlar ip veya im yapılabilir Not: 0,05-0,1 arasında tekrarlayan im enjekte üst uyluk ketamin / ksilazin solüsyonu uygun olduğu kanıtlanmıştırkadar, 3 saat boyunca derin anestezi hayvanı korumak için. </li><li> Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem kullanın. </li><li> Bir stereotaktik çerçeve içinde hayvanın baş düzeltmek ve deney sırasında hayvanın vücut sıcaklığını kontrol etmek için rektal prob ve refleks halkası olan bir ısıtma yastığı kullanın. Bir stereotaksik çerçeveye omurilik sabitleme gerekli değildir. </li><li> Hazırlık başlamadan önce, farelerin ayak parmakları arasında eyeblink refleks ve seğirmesi tarafından narkoz derinliğini kontrol edin. Refleksler ortadan kaldırılmalıdır. </li><li> Bir neşter kullanılarak açık bir operasyonel alanını elde etmek için bel bölgeleri alt üst torakal seviyeden omurilik üzerinde orta hat boyunca cildi açın. Cilt kesiler yapmak için makas kullanmayınız. Dikkatlice altta uzanan doku arasındaki gevşek deri. Sonraki adımlar% 0,9 tuz ile nemlendirilmiş yara tutmak sırasında. </li><li> Neşter ve makas kullanırken tendonları ve torakal seviyelere lomber vertebra iki tarafında bağ dokusu kesti. </li&gt; <li> Küçük bir cımbız kullanarak omurları etrafında spinöz süreçleri ve bağ dokusu dayanağını çıkarın. </li><li> Dikkatlice kıskaç bir mikroskop altında lomber düzeylerde (L4/L5) başlayarak ile vertebra çatlak. Vertebra ve omurilik arasındaki boşlukta çenenin ucu kıpırdamak ve dışında kemik parçaları kaldırın. Dura zarar ve omuriliğe basınç önlemek etmeyin. Hem başarısı için kritik öneme sahiptir. Bütün işlem sırasında ıslatılmış omurilik tutun. Orta torakal seviyelere devam. </li></ol> 3. Sırt Kökler ve DRP Kaydı ayıran (Şekil 2) <ol><li> Dikkatli bir bükülmüş ucu ile ince bir iğne (30 G) kullanılarak dura mater açın. Artık nemlendirilmesi için aCSF kullanın. </li><li> Ölçer kullanarak mümkün olduğunca dorsal kökleri ayırmak ve mümkün olduğunca uzak iki komşu kökleri kesmek. Güçlü ayrılması sırasında kökleri üzerinde çekme deneyi başarısını etkiler. </li><li> Do emme elektrot aşağı indirinkökleri rsal. Sıvı dorsal köklerde emmek olur mümkün olduğunca omuriliğe kadar aCSF ekleyin. </li><li> , Bir şırınga aracılığıyla negatif basınç uygulanarak bir cam pipet içine bir dorsal kök, kesilen ucu em. Gerekirse, ince bir iğne kullanılarak elektrot açıklığın önünde dorsal kök hareket ettirin. </li><li> Dorsal kök emme elektrodu içinde kuru seyrederse pipet yeterince doldurulur aCSF kadar dikkatlice emerken, ucu için bir aCSF ekleyin. </li><li> Dorsal kök emilir sonra, omurilikten elektrot ucunu yükseltmek. Özen pipet ve omurilik kısa devre kayıt / stimülasyon elektrot arasında &quot;su köprüsü&quot;. </li><li> Tekrar bir taraf bitişik kök için 3,3-3,6 adımları. </li><li> Dorsal köklerine mümkün olduğunca yakın referans elektrodu yerleştirin ve aCSF uygulayarak nemli tutmak. </li><li> Kayıt kurulum kurarak, bir kök önceden uyarılması için seçilir,Kayıt için. Ikinci dorsal kök kayıt mevcut kelepçe modunda yapılır iken gerilim adım adım artırın. Bir DRP temsil yavaş, uzun süreli yukarı sapma tarafından takip edilir kısa aşağı doğru eğilmeye fark edebilirsiniz. </li><li> (- 0.1 Hz&#39;de 30 süpürür / dorsal kök, 0,3 Hz-3 kHz arasında filtre en az 20) düzeyleri supramaksimal ve kaç silme kaydetmek için uyarıcı voltajını ayarlayın. </li><li> DRP zaman-bağımlı toplamı hakkında bilgi almak için üç uyaranlara (100 Hz) kısa trenler kaydedin. </li><li> Ek taraf kayıtlar için kayıt ve stimülasyon siteyi açın. </li><li> Hayvanlar prosedür hayatta kalmak için amaçlanmamıştır. Iken hala derin anestezi altında (ketamin / ksilizin, yukarıda bakınız 2.2 adım) başı kesilerek son kayıttan sonra hayvanlar kurban. </li></ol> 4. Veri Analizi <ol><li> Analiz programı veri aktarmak (örneğin Sigma Plot, Igor Pro veya MATLAB). </li><li> Ortalama izleri fr hesaplayınom 20-30 süpürür. </li><li> Daha fazla analiz için (Şekil 3), (DRP tepe genlik başlangıca) Voltaj sapma maksimum genliği al. </li><li> Daha sonra potansiyellerinin zamana bağlı olarak toplanır bir ölçü elde etmek için üç bakliyat ve tek bir akım sonrasında DRP zirve amplitüdünün oranını hesaplar. </li></ol>

<ol><li>Eccles, J. C., Eccles, R. M., Magni, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+inhibitory+action+attributable+to+presynaptic+depolarization+produced+by+muscle+afferent+volleys%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Central inhibitory action attributable to presynaptic depolarization produced by muscle afferent volleys.</a> J. Physiol. 159, 147-166 (1961).</li>
<li>Levy, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+gaba+in+primary+afferent+depolarization%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The role of gaba in primary afferent depolarization.</a> Prog. Neurobiol. 9, 211-267 (1977).</li>
<li>Eccles, J. C., Magni, F., Willis, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Depolarization+of+central+terminals+of+Group+I+afferent+fibres+from+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Depolarization of central terminals of Group I afferent fibres from muscle.</a> J. Physiol. 160, 62-93 (1962).</li>
<li>Eccles, J. C., Schmidt, R., Willis, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+Studies+on+Presynaptic+Inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological Studies on Presynaptic Inhibition.</a> J. Physiol. 168, 500-530 (1963).</li>
<li>Maxwell, D. J., Bannatyne, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+of+muscle+spindle+afferent+terminations+in+lamina+VI+of+the+cat+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure of muscle spindle afferent terminations in lamina VI of the cat spinal cord.</a> Brain Res. 288, 297-301 (1983).</li>
<li>Barber, R. P., Vaughn, J. E., Saito, K., McLaughlin, B. J., Roberts, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABAergic+terminals+are+presynaptic+to+primary+afferent+terminals+in+the+substantia+gelatinosa+of+the+rat+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">GABAergic terminals are presynaptic to primary afferent terminals in the substantia gelatinosa of the rat spinal cord.</a> Brain Res. 141, 35-55 (1978).</li>
<li>Wall, P. D., Lidierth, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five+sources+of+a+dorsal+root+potential%3A+their+interactions+and+origins+in+the+superficial+dorsal+horn%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Five sources of a dorsal root potential: their interactions and origins in the superficial dorsal horn.</a> J. Neurophysiol. 78, 860-871 (1997).</li>
<li>Rudomin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+search+of+lost+presynaptic+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">In search of lost presynaptic inhibition.</a> Exp. Brain Res. 196, 139-151 (2009).</li>
<li>Rudomin, P., Schmidt, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+inhibition+in+the+vertebrate+spinal+cord+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Presynaptic inhibition in the vertebrate spinal cord revisited.</a> Exp. Brain Res. 129, 1-37 (1999).</li>
<li>Kullmann, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic%2C+extrasynaptic+and+axonal+GABAA+receptors+in+the+CNS%3A+where+and+why%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Biophys.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Presynaptic, extrasynaptic and axonal GABAA receptors in the CNS: where and why?</a> Prog. Biophys. Mol. Biol. 87, 33-46 (2005).</li>
<li>Hochman, S., Shreckengost, J., Kimura, H., Quevedo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+inhibition+of+primary+afferents+by+depolarization%3A+observations+supporting+nontraditional+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Presynaptic inhibition of primary afferents by depolarization: observations supporting nontraditional mechanisms.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 1198, 140-152 (2010).</li>
<li>Thompson, S. W., Wall, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+GABA+and+5-HT+receptor+antagonists+on+rat+dorsal+root+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">The effect of GABA and 5-HT receptor antagonists on rat dorsal root potentials.</a> Neurosci. Lett. 217, 153-156 (1996).</li>
<li>Enriquez-Denton, M., Manjarrez, E., Rudomin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+PAD+and+presynaptic+inhibition+of+muscle+spindle+afferents+after+peripheral+nerve+crush%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Persistence of PAD and presynaptic inhibition of muscle spindle afferents after peripheral nerve crush.</a> Brain Res. 1027, 179-187 (2004).</li>
<li>Wall, P. D., Devor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+peripheral+nerve+injury+on+dorsal+root+potentials+and+on+transmission+of+afferent+signals+into+the+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of peripheral nerve injury on dorsal root potentials and on transmission of afferent signals into the spinal cord.</a> Brain Res. 209, 95-111 (1981).</li>
<li>Witschi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+%CE%B12-GABAA+Receptors+in+Primary+Afferent+Depolarization+and+Spinal+Pain+Control%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Presynaptic α2-GABAA Receptors in Primary Afferent Depolarization and Spinal Pain Control.</a> J. Neurosci. 31, 8134-8142 (2011).</li>
<li>Calancie, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+alterations+in+presynaptic+inhibition+contribute+to+segmental+hypo-+and+hyperexcitability+after+spinal+cord+injury+in%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Evidence that alterations in presynaptic inhibition contribute to segmental hypo- and hyperexcitability after spinal cord injury in.</a> 89, 177-186 (1993).</li>
<li>Geis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stiff+person+syndrome-associated+autoantibodies+to+amphiphysin+mediate+reduced+GABAergic+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Stiff person syndrome-associated autoantibodies to amphiphysin mediate reduced GABAergic inhibition.</a> Brain. 133, 3166-3180 (2010).</li>
<li>Geis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+IgG+directed+against+amphiphysin+induces+anxiety+behavior+in+a+rat+model+after+intrathecal+passive+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neural+Transm%22%5BJournal%5D)">Human IgG directed against amphiphysin induces anxiety behavior in a rat model after intrathecal passive transfer.</a> J. Neural Transm. 119 (8), 981-985 (2012).</li>
<li>Barron, D. H., Matthews, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interpretation+of+potential+changes+in+the+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The interpretation of potential changes in the spinal cord.</a> J. Physiol. 92, 276-321 (1938).</li>
<li>Schmidt, R. F., Trautwein, W., Zimmermann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal+root+potentials+evoked+by+natural+stimulation+of+cutaneous+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dorsal root potentials evoked by natural stimulation of cutaneous afferents.</a> Nature. 212, 522-523 (1966).</li>
<li>Eccles, J. C., Schmidt, R. F., Willis, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+inhibition+of+the+spinal+monosynaptic+reflex+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Presynaptic inhibition of the spinal monosynaptic reflex pathway.</a> J. Physiol. 161, 282-297 (1962).</li>
<li>Manjarrez, E., Rojas-Piloni, J. G., Jimenez, I., Rudomin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+synaptic+transmission+from+segmental+afferents+by+spontaneous+activity+of+dorsal+horn+spinal+neurones+in+the+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of synaptic transmission from segmental afferents by spontaneous activity of dorsal horn spinal neurones in the cat.</a> J. Physiol. 529 Pt 2, 445-460 (2000).</li>
<li>Geis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Stiff-Person+Syndrome+IgG+Induces+Anxious+Behavior+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human Stiff-Person Syndrome IgG Induces Anxious Behavior in Rats.</a> PLoS One. 6, e16775(2011).</li>
<li>Martinez-Gomez, J., Lopez-Garcia, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+and+pharmacological+characterisation+of+ascending+anterolateral+axons+in+the+in+vitro+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological and pharmacological characterisation of ascending anterolateral axons in the in vitro mouse spinal cord.</a> J. Neurosci. Methods. 146, 84-90 (2005).</li>
</ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkarlarını beyan.

In vivo nöronal aktivite ve sinaptik potansiyellerin Ekstra ve intraselüler elektrofizyolojik kayıtlar MSS nöronal fonksiyonları ve fizyopatolojisi araştıran sanat teknikleri devlet vardır. Spinal entegrasyon motor işlev, örneğin bacak hareketi ve multimodal duyusal algı için çok önemlidir. Presinaptik inhibisyon duyusal girdilerin uygun tepkiler sağlanması bu hesap işleminde bir kritik mekanizmadır. Ia lifinden üzerinde GABAerjik sinapslar PAD motonöronlann uyarılmasını engeller. In vivo dors...

Presinaptik inhibisyon omurilik en güçlü önleyici mekanizmalarından biridir. Bu postsinaptik zar potansiyeli ve motor nöronlar 1-3 uyarılabilirliğini değiştirmeden monosynaptically heyecan motonöronları uyancı postsinaptik potansiyeller (EPSP) inhibe eder. Duyusal presinaptik liflerin üzerine GABAerjik axo-aksonal sinaps tarafından uyarılan primer afferent depolarization (PAD) altta yatan mekanizma 4-7 (ayrıca Figure1A bakınız). Bu sinapsların GABA A ve GABA B-reseptörleri (GABA A R ve GABA B R) içerir. GABA A R aktivitesi nedeniyle lokal iyon dağılımına PAD ortaya çıkarır klorür iletkenlik bir artışa yol açar. Bu depolarizasyon bloklar akson terminalleri içine aksiyon potansiyelleri yayılma ve azalmış Ca 2 lider güçlerini azaltır +-akını ve verici serbest bir azalma. GABA B reseptörlerinin aktivasyonu yok not PAD katkıda ama bu şekilde presinaptik olarak önlenmesini artırmak Ca 2 +-akışı bir azalmaya yol açar. GABA A R&#39;nin kısa süreli aktivasyon inhibisyonu dahil olmak olmakla birlikte, GABA B R, uzun vadeli modülasyonu 8-10 katılmaktadırlar. PAD ve presinaptik inhibisyonunun önemli bir bölümünü oluşturur GABA, ek olarak, diğer vericiler sistemleri de modüle olabilir ve bu mekanizma 11,12 katkıda bulunur. Presinaptik inhibisyon patolojik değişiklikler, kusurlu GABAerjik transmisyon 17 tarafından aracılık edilen motorlu hiper-ile-çevresel iltihap ve nöropatik ağrıya 13,14 yanı sıra anormal merkezi ağrı işlem 15, omurilik yaralanması 16, ve merkezi sinir sistemi hastalıkları, örneğin, birkaç hastalık durumu çok önemli görünmektedir 18. Böylece, presinaptik inhibisyonu tahmin in vivo omurilik düzeyinde deneysel patolojik koşulları araştırmak için faydalıdır </em&gt;. PAD, omurilikte presinaptik inhibisyon doğrudan bir ölçümünü sağlayan birim gerçekleştirilen potansiyellerine neden olur. Bu potansiyelleri dorsal kök potansiyelleri (DRP) olarak adlandırılır ve komşu dorsal kökler 7 uyarılmasından sonra omurilik dorsal köklerinden ölçülebilir. DRP ilk ölçümleri kedi ve kurbağalar 19 rapor edilmiştir ve yoğun 1970&#39;lerin başında 3,4,20,21 yılında Eccles, Schmidt ve diğerleri tarafından kedilerde çalışıldı. Kedi ve 22 farelerde 23 DRP in vivo kayıtları yaygın olarak kullanılmış olsa da, farelerde ölçümleri hemen hemen tamamen izole edilmiş ex vivo omurilik preparasyonlar 15,24 gerçekleştirilmiştir. Burada, sağlam organizmada presinaptik inhibisyon doğrudan bir ölçümünü sağlayan in vivo olarak, anestezi uygulanmış farelerde DRP kaydetmek için bir yöntem tarif eder.

<table><tbody><tr><td>Cam boru (iç çap 1,16 mm)</td><td>Science Products (Hofheim, Almanya)</td><td>GB200F-10</td><td>Diğer cam borular da uygun olabilir</td></tr><tr><td>Süperfüzyon çözeltisi (steril, %0,9 NaCl)</td><td>Braun Melsungen AG</td><td>3570350</td><td></td></tr><tr><td>Rompun 2% (Xylazine)</td><td>Bayer Animal Health GmbH (Leverkusen, Almanya)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamine 10%</td><td>Medistar GmbH (Ascheberg, Almanya)</td><td>KETAMIN 10%</td><td></td></tr><tr><td>30 G Mikroiğne / Sterican</td><td>Braun Melsungen AG</td><td>4656300</td><td></td></tr><tr><td>aCSF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Diverse</td><td></td></tr><tr><td>S88 Çift Çıkışlı Kare Darbeli</td><td>Çim Teknolojileri için Tuzlar (Warwick, ABD)</td><td>S88X</td><td></td></tr><tr><td>SIU5 RF Trafo İzolasyon Ünitesi</td><td>Çim Teknolojileri (Warwick, ABD)</td><td>SIU-V</td><td></td></tr><tr><td>InstruTECH LIH 8+8</td><td>HEKA ( Lambrecht, Deutschland)</td><td>LIH 8+8 + Patchmaster yazılımı</td><td></td></tr><tr><td>Evrensel amplifikatör</td><td>NPI (Tamm, Deutschland)</td><td>ELC-03X</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipet çektirme Sutter</td><td>Aletleri (Novato, ABD)</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Olympus (Tokyo, Japonya)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Sutter Aletleri (Novato, ABD)</td><td>MPC-200/MPC-325</td><td>Mekanik mikromanipülatörler de mümkündür</td></tr><tr><td>Homeotermik Battaniye Sistemi</td><td>Çalma (Wood Dale, ABD)</td><td>50300V</td><td></td></tr><tr><td>Hücre içi/hücre dışı kayıt elektrot tutucusu</td><td>Harvard Aparatı (Holliston, ABD)</td><td>641227</td><td></td></tr></tbody></table>

dorsal kök potansiyel kayıt by farelerde spinal presinaptik engellenme Ölçme<em&gt; in vivo</em

Measuring Spinal Presynaptic Inhibition in Mice By Dorsal Root Potential Recording In Vivo

Presinaptik inhibisyon omurilik en güçlü önleyici mekanizmalarından biridir. Bunun altında yatan fizyolojik mekanizma GABAerjik axo-aksonal sinaps (birincil aferent depolarizasyon) tarafından aracılık edilen primer afferent liflerin bir depolarizasyon. Birincil aferent depolarizasyon gücü dorsal kök (dorsal kök potansiyelleri, DRP), hacimli-yürütülen potansiyelleri kayıt ile ölçülebilir. Presinaptik inhibisyon patolojik değişiklikler, bazı ağrı koşullarının anormal merkezi işleme ve motor hipereksitabilitenin bazı hastalıklarda çok önemlidir. Burada, farelerde in vivo olarak kayıt DRP için bir yöntem tarif eder. , Anestezi verilen hayvanın ve emme elektrodu kullanarak kayıt prosedürü omurilik dorsal kök preparasyonu açıklanmıştır. Bu yöntem, GABAerjik DRP ölçme ve böylece canlı fare omurilik presinaptik olarak önlenmesini tahmin sağlar. Transgenik fare modelleri ile birlikte, DRP kayıt olabilir sehastalıkla ilişkili spinal patofizyolojiye araştırmak için güçlü bir araç olarak rve. in vivo kayıt örneğin eşzamanlı kayıt ya da supraspinal ağları ve periferik sinirlerin uyarılması ile DRP indüksiyon manipülasyon olasılığı ex vivo izole spinal kord hazırlıkları kıyasla birçok avantajı vardır.

Tipik DRP izleri, Şekil 3 &#39;de gösterilmiştir. Belirgin stimülasyon dışlayıcı genellikle kısa aşağıya doğru bükülmesiyle takip edilmektedir. Daha sonra DRP temsil yavaş, uzun süreli yukarı sapma, açık bir şekilde ayırt edilebilir. Kayıtların bir altkümesinde, dorsal kök refleksleri DRP üstünde küçük sivri olarak görebilir. Stimülasyon voltaj fazla olduğu zaman, normal, vahşi tip farelerde, dorsal kök reflekslerin en çok görünür. Dorsal kök refleksleri bu hazırlık yüksek tekrarlanabilirlik ile ortaya ...

GABAerjik presinaptik inhibisyonu motor ve omurilik ağlarında duyusal sinyal entegrasyon için önemli omurilikteki güçlü bir önleyici mekanizmadır. Altta yatan primer afferent depolarizasyon dorsal kök potansiyelleri (DRP) kaydı ile ölçülebilir. Burada farelerde DRP in vivo kayıt için bir yöntem ortaya koymaktadır.

Dorsal Kök Potansiyel Kayıt By Farelerde Spinal Presinaptik Engellenme Ölçme<em&gt; In Vivo</em

Presynaptic inhibition is one of the most powerful inhibitory mechanisms in the spinal cord. The underlying physiological mechanism is a depolarization of ...

Presinaptik inhibisyon, omurilikteki en güçlü inhibitör mekanizmalardan biridir. Presinaptik inhibisyondaki patolojik değişiklikler, birçok hastalık mekanizmasında önemlidir. Örneğin; nöropatik ve enflamatuar ağrının yanı sıra anormal santral ağrı işleme süreçlerinde rol oynar.Omurilik yaralanmalarında ve motor hipereksitabilite ile seyreden merkezi sinir sistemi bozukluklarında bu durum önem taşımaktadır. Bu nedenle, söz konusu bozuklukların hayvan modelleri incelendiğinde, presinaptik inhibisyonun gücünün bilinmesi önemli bilgiler sağlayacaktır. Burada, bir fare modelinde presinaptik inhibisyonun nasıl değerlendirileceğine dair bir yöntemi sunmaktayız.In vivo presinaptik inhibisyon, duyusal presinaptik lifler üzerindeki GABAerjik akso-aksonal sinapslar tarafından indüklenen primer afferentlerin depolarizasyonu ile gerçekleşir. GABAA reseptör aktivitesi, klorür iletkenliğinde bir artışa yol açar ve bu durum, lokal iyon konsantrasyon dağılımı nedeniyle primer afferent depolarizasyonunu tetikler. Bu depolarizasyon, aksiyon potansiyellerinin akson terminallerine yayılımını engeller ve şiddetlerini azaltarak kalsiyum girişinin azalmasına ve nörotransmitter salınımının düşmesine neden

measuring-spinal-presynaptic-inhibition-mice-dorsal-root-potential

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Rizotomi sonra Dorsal Kök Aksonlar Canlı Görüntüleme

Alt-mikrometre mekansal ve alt milisaniyelik zamansal çözünürlüğe sahip membran potansiyeli değişiklikleri izleme için bir görüntüleme tekniği tarif edilmiştir. Gerilim karşı hassas boyaların lazer uyarma göre yöntem, aksonların ve akson kollateral, terminal dendritik dalları, ve bireysel dendritik omurga sinyallerin ölçümleri sağlar.

Aksonlar, Dendrit ve Beyin Dilimleri Bireysel Nöron Dendritik Spine kaynaklanan voltaj duyarlı Boya Kaydı

Kaynak: Shannonhouse, J.,  et al. İn Vivo Sağlam dorsal kök gangliyonlarındaki primer duyusal nöron ağlarındaki nöronal toplulukların kalsiyum görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2023). Video, transgenik bir farenin dorsal kök gangliyonlarındaki (DRG) nöronal aktiviteyi izlemek için in vivo bir kalsiyum görüntüleme tekniğini göstermektedir. DRG nöronları, kalsiyuma bağlandıktan sonra floresan yoğunluğunu artıran bir kalsiyum indikatörünü ifade eder. Bir arka pençeye uygulanan mekanik veya termal...

Bir farenin sağlam dorsal kök gangliyonlarındaki nöronal toplulukların in vivo kalsiyum görüntülemesi

Kaynak: Lai, J., et al. Kemirgen beyninde inhibitör ajanların eşzamanlı elektrofizyolojik kaydı ve mikro enjeksiyonları. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, sıçan superior colliculus'ta eşzamanlı nöronal kayıt ve inhibisyon için mikroenjeksiyon tabanlı bir tekniği göstermektedir. Prosedür, stereotaksik hedeflemeyi, kafatası delmeyi ve nöronal aktiviteyi kaydederken inhibe edici bir nörotransmitter sağlayan bir injectrodun yerleştirilmesini içerir. Işık stimülasyonu aksiyon potansiyellerini...

Bir Sıçanda Nöronal Aktivitenin İnhibisyonu ve Elektrofizyoloji Kullanılarak Tespiti

In vivo sinir iletim özelliklerinin ölçümleri nöromüsküler hastalıkların çeşitli hayvan modelleri karakterize etmek için güçlü bir araç örneklemektedir. Burada, biz anestezi farelerin siyatik sinirlerin elektrofizyolojik analizi yapılabilir hangi ile kolay ve güvenilir bir protokol mevcut.

Fare Siyatik Sinir Vivo elektrofizyolojik ölçümlerde

Biz genç farelerde omurilik eğik dilim nasıl hazırlanacağını göstermektedir. Bu preparat, ventral köklerin uyarılması için izin verir.

Ventral Kök Stimulation için eğik Omurilik Dilimleri hazırlanması

Sinir iletim ölçümü ateş fare modelleri değerlendirmek için yararlı bir araçtır ama sık sık öyle yalnızca hindlimbs siyatik sinir uyarmak için geçerlidir. Burada, bileşik kas aksiyon potansiyeli (CMAP) vivo brakiyal pleksus tarafından innervated fare forelimb kaslarda ölçmek için bir teknik açıklayın.

Vivo Bileşik kas aksiyon potansiyeli Motor nöron hastalığı, fare modellerinde ön ayakları üzerinden elektrofizyolojik ölçümü

Tek lifli kayıt, merkezi ve periferik sinir sistemleri için geçerli olan etkili bir elektrofizyolojik tekniktir. Bağlı siyatik sinir ile bozulmamış DRG hazırlanması ile birlikte, iletim yetmezliği mekanizması incelenir. Her iki protokol de periferik sinir sisteminin ağrı ile ilişkisini geliştirmek.

İletim Yetmezliği Mekanizmasını İncelemek Için Bağlı Siyatik Sinir ile In Vivo Tek Lifli Kayıt ve Bozulmamış Dorsal Kök Ganglion Kullanımı

Bu protokol, eşzamanlı trans-spinal doğru akım stimülasyonu ile sıçan lomber motoneurons in vivo hücre içi kayıt açıklar. Bu yöntem, omuriliğin anodal veya kahodal polarizasyonuöncesinde, sırasında ve sonrasında motononların ritmik ateşlemesini kaydetmemizi sağlar.

Trans-Spinal Doğrudan Akım Stimülasyonu Sırasında Tip-Tanımlanmış Sıçan Spinal Motoneurons In Vivo Hücre İçi Kayıt

Mevcut protokol, lomber-6 DRG nöron topluluklarının somatik ve viseral uyaranlara tepkilerini ölçmek için in vivo kalsiyum görüntülemeyi ana hatlarıyla belirtir. Farklı uyaranlara yanıt veren nöronlar arasında kapsamlı karşılaştırmalar yapılabilir. Bu protokol, akupunktur gibi viseral ağrı ve somatik stimülasyon mekanizmalarını araştırmak için değerlidir.

In vivo (İn canlı) Dorsal Kök Gangliyon Nöronlarının Somatik ve Viseral Uyaranlara Yanıtının Kalsiyum Görüntülemesi

Bu çalışma, senkron EKG kayıtları ile birlikte in vivo kalsiyum görüntüleme için anestezi uygulanmış farelerde T-DRG'yi ortaya çıkarmak için cerrahi bir manipülasyon sunmaktadır. Bu yöntem, periferik elektriksel sinir stimülasyonu ve torasik viseral organ girdilerinin yanı sıra bunların birincil duyusal düzeydeki etkileşimlerini incelemek için son teknoloji bir araçtır.

Periferik Sinir Stimülasyonunu İncelemek için İn Vivo Torasik Dorsal Kök Gangliyonları (DRG) Kalsiyum Görüntüleme ve EKG Kaydı

Öğrenin farelerde dorsal kök potansiyel kaydı ile spinal presinaptik inhibisyonu ölçme yöntemini. Bu teknik, ağrı mekanizmaları ve spinal kord hastalıkları araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

Dorsal Kök Potansiyel Kayıt By Farelerde Spinal Presinaptik Engellenme Ölçme

Daha fazla video keşfet