Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi

Bu prosedürün genel amacı, klinik olarak anlamlı olan spontan metastatik renal hücreli karsinom oluşturmaktır. Bu, önce reka Luke hücrelerinin implantasyon için hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, ortotopik bir böbrek tümörü hücresi implantasyonu yapmaktır.

Daha sonra, tümör büyüdükten sonra, primer tümör bir nefrektomi yapılarak çıkarılır. Son adım, nefrektomi sonrası spontan metastaz ilerlemesini izlemek ve çeşitli yerlerdeki hastalık dağılımını değerlendirmektir. Sonuç olarak, bu protokol spontan metastatik renal hücreli karsinom hastalığının izlenmesine izin verir ve deneysel terapötiklerin etkinliğinin değerlendirilmesini standartlaştırmak için bir kılavuz sunar.

Bu tekniğin ektopik, genellikle yüzeysel veya deri altı tümör hücresi implantasyon yöntemleri gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, tümör hücrelerinin vücudun geri kalanına yayılma yeteneğini içeren hastalarda ortaya çıktığı gibi renal hücreli karsinomu veya RCC'yi özetlemesidir. Bu tekniğin etkileri, renal hücreli karsinomun tedavisine kadar uzanır, çünkü hastalarda mortalitenin asıl birincil nedeni olan sistematik dis metastatik hastalıktır. Fare modelleri tipik olarak bazen nefrektomiyi takip edebilen spontan metastatik hastalığı tedavi etmez.

Bu yöntem spontan metastatik RCC hastalığı hakkında bilgi sağlayabilir. Primer tümörün çıkarılmasının tipik olduğu ve mortalitenin ana nedeninin port cerrahi metastatik hastalık nüksü olduğu diğer kanser türlerine de uygulanabilir. Bu, diğerlerinin yanı sıra meme ve melanom modellerini içerir.

Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, ilk olarak, böbreği bulmanın ve tümör hücrelerinin implantasyon sırasında lokalize kalmasını ve sızıntı yapmamasını sağlamanın zorluğu nedeniyle mücadele edeceklerdir. İkincisi, ne etkinliği verimli bir şekilde gerçekleştirilir ve ameliyat sonrası iyileşmeye izin verir. Ortotopik implantasyondan önce, fare lusiferaz etiketli reca hücrelerini veya reka Luke hücrelerini, ortam santrifüjü içeren% 5 FBS'de tripsin, izasyon ve resusus süspansiyonunu takiben% 75 co akıcılığına tek tabaka olarak büyütün, hücreler PBS'de bir yıkama ile üç kez tekrarlanır, daha sonra hücreleri serum serbest ortamda, beş mikrolitre serum serbest ortam başına dördüncü renco Luke'a beş kez 10 ila dördüncü renco Luke konsantrasyonuna yeniden süspanse edin.

bağırsak deniz faresini %2 ila 3 oranında flor ile uyuşturduktan sonra, yeterli anestezi olup olmadığını kontrol etmek için bir ayağınızı sıkıştırın, kurumayı önlemek için gözlere veteriner merhemi uyguladıktan sonra, fareyi sağ lateral yaslanmış konuma getirin ve sol tarafı dört ve arka bacaklar arasında tıraş edin. Daha sonra sırt bel bölgesi boyunca alkol ve iyot uygulayın. Son kaburga ile kalça eklemi arasında uzunlamasına yönde bir santimetrelik bir cilt kesisi yapmak için cerrahi makas kullanın.

Daha sonra cilt altındaki bağ dokusunu gevşetmek için künt diseksiyon makası kullanın. Daha sonra, karın duvarında uzunlamasına yönde 0,5 santimetrelik bir kesi yapmak için cerrahi makas kullanın. Şimdi açık yaranın etrafını nazikçe aşağı itmek için kavisli forseps kullanın.

Bu, böbreğin dışını dıştan alır ve enjeksiyondan önce organın nazikçe hareketsiz hale getirilmesine izin verir. Yüzeysel bir subkapsüler implantasyon için hazırlanan hücre karışımından beş mikrolitre içeren bir Hamilton şırıngası yükleyin. İğneyi, eğimli kenarı yukarı bakacak şekilde uzunlamasına yönlendirilmiş böbreğe paralel tutun ve iğneyi böbrek kapsülünün altına, ancak parankimin üzerine yerleştirin.

İğne yerleştirildikten sonra, küçük beyaz bir kabarcık oluşana kadar tüm hücreleri enjekte edin. İğneyi kapsülden yavaşça çıkarın ve dahili bir subkapsüler implantasyon için enjeksiyon bölgesini bloke etmek için hemen steril bir pamuk uçlu aplikatör kullanın. İstenilen implantasyon bölgesinin karşısındaki böbreğin yanından başlayarak.

İğneyi eğimli kenarı yukarı ve içeri gelecek şekilde tutun. İğne görünene kadar böbreğin iç kısmından geçirin, ancak uzak taraftaki subkapsüler boşluğu delmeyin. Hücreleri beyaz bir kabarcık oluşana kadar enjekte edin ve herhangi bir sızıntıyı önlemek için enjeksiyon bölgesini temizleyin.

Böbreği yavaşça vücut boşluğuna geri koyun. Karın duvarını emilebilir 5.0 Vicryl sütür kullanarak kapatın. Tamamlandığında, cilt tabakasını bir arada tutun ve iyileşmeden önce iki ila üç yara klipsi yerleştirin.

Deri altına 500 mikrolitre %0.9 sodyum klorür ve 100 mikrolitre buprenorfin uygulayın. İmplantasyondan 26 ila 30 gün sonra, hayvanı uyuşturun ve böbreği daha önce olduğu gibi açığa çıkarın. Daha sonra, bağlantı yağ dokusunu böbreğin kucak ucundan nazikçe çıkarmak için forseps kullanın ve adrenal bezi kraniyal uçtan çıkarın.

Böbreği nazikçe kavramak için forseps kullanın ve ardından emilebilir bir 5.0 Vicryl sütürü üreter, renal arter ve renal ven etrafında kaydırın. Daha sonra, iplikleri kanama durdurucularla sıkıştırdıktan sonra yavaşça çift düğüm atın. Düğümün üstünü kesmek ve böbreği çıkarmak için makas kullanın.

Böbrek çıkarıldıktan sonra, gelgit, arterden herhangi bir kanama olup olmadığını dikkatlice kontrol edin ve gerekirse koterize edin. Karın vücut duvarını 5.0 Vicryl kullanarak diktikten sonra, cildi kapatmak için yara klipsleri kullanın. Hayvanı sıkıntı, kanama veya sınırlı hareketlilik belirtileri açısından günlük olarak izleyin.

Hayvanı ötenazi yaptıktan sonra, üretranın üstünden başlayan ve göğüs boşluğundan alt çeneye kadar devam eden bir kesi yapmak için cerrahi makas kullanın. Cildi karın duvarının kasından ayırmak için künt uçlu makas kullanın. Daha sonra, cildi kollar ve bacaklar boyunca kesin ve cildi yavaşça soyun.

Cilt fasyasını ve karın duvarını nodüller açısından yakından inceleyin. Sonra yüzeysel lenf düğümlerini inceleyin. Karın duvarında bir kesi yapın ve sol ve sağ yan taraflar boyunca diyaframa kadar kesin.

Bir yatay kesim ile. İç organları ortaya çıkarmak için karın duvarının ön kısmını çıkarın. Büyük ölçüde dikkate değer tümörler için iç organların bozulmamış görünümünü inceleyin.

Ayrıca, yiyecek veya kanama kanıtı için mide ve bağırsakların içeriğini not edin. Her organı tümör varlığı veya yokluğu için görsel olarak puanlayın 22 bölgeden oluşan bir kontrol listesinden çalışarak, hastalık dağılımını karşılaştırmak için belirli bir gruptaki hayvanlar için puanlar tablo haline getirilir. Şimdi karaciğeri dikkatlice çıkarın ve PBS ile yıkayın.

Daha sonra brüt tümörler veya anormallikler için inceleyin ve daha önce olduğu gibi puanlayın. Ardından dalak, böbrek ve pankreası çıkarmaya ve puanlamaya devam edin. Ardından, lomber sakral, renal ve mezenterik lenf düğümleri dahil olmak üzere abdominal lenf düğümlerini inceleyin.

Diyaframı metastatik yayılma kanıtı açısından değerlendirdikten sonra, diyaframı çıkarın ve göğüs boşluğunda iki lateral kesi yapın, akciğerleri ve kalbi ortaya çıkarmak için ön kısmı çıkarın, yemek borusunu nazikçe kaldırın ve trakeayı kalbin üzerinde kesin. Akciğerleri ve kalbi çıkardıktan sonra, dokuları nodüller açısından değerlendirin. Sonra, kalbi sıkmak için forseps kullanın.

Yaylanma tutarlılığının olmaması, bir tümörün varlığını gösterebilir. Son olarak, kafatasını doğrusal olarak kesmek için cerrahi makas kullanın. Tüm beyin açığa çıkana kadar küçük kafatası parçalarını nazikçe çıkarın.

Beş farklı hayvan grubunda hastalığı, dağılımı ve hastalığın şiddetini değerlendirmek için görsel bir puanlama sistemi kullanıldı. Bu gruplar farklı kapsam ve şiddette hastalık gösterdi. Mikro ve makro metastatik lezyonları kantitatif olarak değerlendirmek için kurban edildikten hemen sonra biyolüminesan görüntülemeden oluşan ek bir ölçüm kullanıldı.

Her iki implantasyona da hakim olduktan sonra, nefrektomi veya nekropsi, uygun şekilde yapılırsa hayvan başına beş ila 10 dakika içinde yapılabilir. Tedavi yanıtlarının metastatik tümör hücrelerinin tipleri arasında farklılık gösterip göstermeyeceğini incelemek. Metastatik renal hücreli karsinomdan hücreler.

Hastalar şu anda, gelişiminden sonra lokal ve metastatik hastalık büyümesini değerlendirmek için doğrudan hayvanlara implante etmek için kullanılmaktadır. Bu teknik, RCC alanındaki araştırmacıların klinik olarak anlamlı hastalık ilerlemesini ve tedaviye yanıtları keşfetmelerinin yolunu açtı. Özellikle, bu yanıtların primer lokalize hastalığa veya spontan metastatik büyümeye bağlı olarak farklılık gösterip göstermediği.

Birden fazla ameliyat geçiren küçük hayvanlarla çalışmanın, kurumsal hayvan protokolü yönergelerine ve steril koşullara sıkı sıkıya bağlı kalmayı gerektirdiğini unutmayın. Hayvan konforu ve iyileşmesi, bu prosedürün düzgün bir şekilde gerçekleştirilmesi için kritik değişkenlerdir.