Name: Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: Öğrenin farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom modellemesi için ortotopik implantasyon ve nefrektomi yöntemlerini. Bu protokol metastaz ilerlemesini izlemek ve deneysel tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için standart bir kılavuz sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz bu prosedürün geliştirilmesinde teknik yardım ve uzmanlık için Dr Robert S. Kerbel (Toronto Üniversitesi, Sunnybrook Araştırma Enstitüsü, Toronto, Kanada) ve laboratuara minnettarız. Biz de Dr Sandra Sexton ve Laboratuar Hayvan Kaynakları Roswell Park Kanser Enstitüsü Bölümü&#39;ne teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma (JMLE için) Roswell Park Alliance Vakfı bir ödül tarafından desteklenmiştir.

1.. Ortotopik Böbrek Tümör İmplantasyonu <ol><li> Hücre Kültürü <ol><li> Önce kadavradan implantasyon için,% 75 confluency bir tek tabaka olarak fare renca LUC hücreleri büyür. </li><li> % 5 FBS ihtiva eden ortam, 1000 rpm&#39;de santrifüj hücreler, 5 dakika boyunca 4 ° C&#39;de, PBS içinde yıkamak için 3 kez tekrar, tripsinizasyon ve yeniden süspansiyona alınmasından sonra. Daha sonra, 5 x 10 4 renca LUC / 5 ul serum içermeyen ortam içinde bir konsantrasyona serumsuz ortam içinde tekrar süspansiyon hücreleri. Not: varyant veya kullanılan hücre çizgisi bağlı olarak hücreler, implantasyondan sonra oldukça agresif fare hücre büyümesini ve yayılmasını yavaş matrigel ve serum barındırmayan ortam içinde bir 1:1 oranında yeniden süspanse edilebilir. </li></ol></li><li> Cerrahi ve hücre implantasyonu Not: Tüm hayvan çalışmaları, bir Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) p uygun olarak gerçekleştirildi, deneysel son nokta bakım ve belirlenmesi de dahil olmak üzere, burada tarifotokol Roswell Park Kanser Enstitüsü tarafından onaylanmıştır. <ol><li> Izofluran (% 2-3) kullanılarak, bir Balb / C fare anestezisi. Ayak tutam ve yeterli anesthetization sağlamak refleksi kontrol edin. Kurumasını önlemek için gözlere veteriner merhem sürün. Sağ lateral pozisyonda fare yerleştirin ve ön ve hind-bacak arasında sol tarafını tıraş. Aseptik kesi alanı hazırlamak için dorsal lomber bölge boyunca alkol ve iyot uygulayın. </li><li> Son kaburga ve kalça eklem arasında uzunlamasına yönde bir 1 cm cilt insizyonu başlatmak için cerrahi makas kullanın. Bir künt diseksiyon makas kullanarak deri altında bağ dokusu gevşetin. Karın duvarında uzunlamasına yönde 0.5 cm kesi yapmak için cerrahi makas kullanın. Hafifçe açık yara etrafında aşağı itmek için kavisli bir forseps kullanın - bu böbrek exteriorize ve enjeksiyon öncesinde organ nazik immobilizasyonu için izin verecektir. </li><li> Hazırlanan hücre karışımı ile 5 ul Hamilton şırıngası yerleştirin. Sub-kapsül implantasyonu içinsürgünler, implantasyon iki yöntem kullanılabilir: <ol><li> Yüzeysel: eğimli kenar up ile böbrek kapsülü altında uzunlamasına odaklı böbrek, insert iğneye (ama parankimi yukarıda) paralel yayınlanıyor. Iğne yerleştirildikten sonra, küçük beyaz kabarcık formları kadar tüm hücreleri enjekte. Yavaş yavaş kapsül iğne çıkarılır ve derhal sızıntıyı emer ve hücre yayılmasını önlemek için steril pamuk uçlu bir aplikatör ile enjeksiyon üzerinde leke. </li><li> Dahili: iğne görünür (ama delinmesiyle değil) kadar eğimli kenar up ve son implantasyon sitesine böbrek karşısında yanından başlayan, böbreğin iç kısmından alt kapsül boşluk iğne takın. Beyaz kabarcık formları ve sürüntü enjeksiyon sitesi herhangi bir sızıntıyı önlemek için kadar tüm hücreleri enjekte edilir. </li></ol></li><li> Yavaşça vücut boşluğuna böbrek dönmek. Emilebilir 5-0 Vicryl dikiş kullanılarak karın vücut duvarı kapatın. Tamamlandığında, birlikte deri tabakası çekin ve w 2-3 koyunklipleri ound. Sağlamak klipleri sağlam ve eşit hiçbir yara pozlama sağlamak için aralıklı vardır. Önceki iyileşme için% 0.9 NaCl 500 ul ve deri altından, bir 25 G iğne kullanılarak Buprenorfin (0.01 mg / ml) 100 ul yönetmek. Rutin klip yerleştirme ve istikrar izlemek, ve 10 gün sonra kaldırın. </li></ol></li></ol> 2.. Nefrektomi / İlköğretim Tümör Temizleme <ol><li> Bölme (yukarıda) 1.2.1 ve 1.2.2 &#39;de tarif edildiği gibi fare Anestezi, hareketsizleştirme, kazıma, ve böbrek maruz için aynı protokol takip edin. </li><li> Yavaşça kuyruk ucundan bağlantı yağ dokusu ve böbrek kranial ucundan adrenal bezi kaldırarak böbrek izole etmek için forseps ikinci bir çift kullanın. Yavaşça böbrek tutmakta iken, bir üreter etrafında çift düğüm, renal arter ve ven yapmak için emilebilir 5-0 vicryl kullanın. Yavaş yavaş, güvenli ve daha sonra böbrek kaldırmak için düğüm yukarıdaki kesti. Hemen kan kaybı, ya da orada herhangi bir işaret yetersiz beklemeye riski iseüreter, arter ve ven sütür, sonra düğüm yukarıda kesmek için makas yerine cauterizer kullanın. </li><li> Böbrek çıkarıldıktan sonra, bağlı arterden herhangi bir kanama açısından dikkatle kontrol edin ve gerekirse cauterizer kullanın. 5-0 Vicryl kullanılarak abdominal gövde duvarını kapatın. Birlikte deri tabakası çekin ve 1.2.4 de tarif edildiği gibi, aşağıdaki önlemleri 2-3 yara klipleri yerleştirin. Yakından kanama sıkıntı belirtileri, ya da sınırlı hareketlilik cerrahisini takiben günlük hayvan izlemek. Güvenle hayvan için kurumsal yönergeleri izleyin. </li></ol> 3.. Endpoint de Metastatik Gelişmesini ve Yerelleştirme İzleme <ol><li> Metastatik hastalık ölçümü: biyoluminesen izleme <ol><li> Daha önce lusiferaz ile transfekte hücreler kullanılarak metastazı, izleme ve görüntüleme sistemi, Xenogen IVIS 11,12 kullanılarak nicelleştirilmiştir için Jüpiter açıklanan metodoloji bakınız. </li></ol></li><li> Metastatik dağılımını karşılaştırmalı değerlendirilmesi için görsel otopsi kılavuzution <ol><li> Vs sıkıntı belirtileri, zor nefes alma, kilo kaybı, gibi noktalar kullanılarak kurumsal kurallarına göre hayvanların Kurban Not: spontan metastatik hastalık son derece değişken ve hızlı olabilir gibi hayvanların yakın takibi önemlidir. </li><li> Alt çene için göğüs boşluğuna kadar devam üretranın üzerinde bir kesi başlatmak için cerrahi makas kullanın. Karın duvarının kas cilt ayırmak için kör uçlu makas kullanın. </li><li> Kollar ve bacaklar boyunca kesiler başlatın. Peel cilt uzakta. Yakından cilt fasya ve nodüller için karın duvarı incelemek, daha sonra yüzeysel lenf düğümleri: inguinal, brakiyal, aksiller ve yüzeysel servikal. </li><li> Karın duvarında bir kesi yapmak ve diyaframa kadar sağ ve sol yan kenarlarında kesilmiş. Bir yatay kesim ile iç organları çıplak karın duvarının ön kısmını kaldırın. </li><li> Iç organlar f rahatsız görünümünü inceleyinya fena halde önemli tümörler. Ayrıca, mide ve bağırsak içeriklerini not edin; onlar boş olup olmadığını, fare yemek mümkün olmayabilir. Içeriği karanlık ise, bu üst / alt gastrointestinal sistem kanaması kanıt gösterebilir. </li><li> Görsel olarak, her fare grubu için toplam puan tayin, tümör varlığında ya da yokluğunda her bir organ skoru (grup başına 4 hayvan Şekil 1D-i de örnek olarak kullanılmıştır.) Notlar: 1), lenf nodu büyümesi mutlaka bir tümör büyümesi olduğu anlamına gelmez; Bu, büyük ölçüde boyutlu, çok sağlam ve bir beyazımsı renkli ise, büyük olasılıkla bir metastatik nodül olduğunu. 2) Karında aşırı sütlü veya bulanık sıvı assit gösterir. Asit, özellikle karaciğer ve mide lob arasındaki karın organları üzerinde katı madde birikimleri içerebilir. 3) gibi akciğer gibi organlar için, birden fazla nodül (örneğin 13 bakınız) mevcut ve bireysel hayvanlar arasındaki karşılaştırmalar için sayılır olabilir. </li><li> Dikkatli bir fışkırtma şişeden çıkarmadan ve PBS ile yıkama yoluyla karaciğer, dalak, böbrekler ve pankreas: Bireysel karın organlarının brüt tümörler veya anormallikleri tespit. </li><li> Karın organları çıkarıldıktan sonra, lomber, sakral, renal ve mezenterik lenf nodu dahil abdominal lenf düğümleri, inceleyin. </li><li> Metastatik yayılım delil diyafram değerlendirin. Not: diyafram geniş yaymak yorucu veya nefes kaybı yol açan, onun kasılma kaybetmesine neden olabilir. </li><li> Diyaframı çıkarın ve akciğer ve kalp maruz ön kısmını kaldırarak, göğüs boşluğunda iki yanal kesiler yapmak. </li><li> Nazikçe tutup kaldırma yemek borusu ve kalp üzerinde trakea keserek akciğer ve kalp çıkarın. Nodüller için dokuları değerlendirin. Kalbini sıkıştırın. Yaylı tutarlılık eksikliği tümör mevcut gösterebilir. </li><li> Kafatası ile doğrusal olarak kesmek için, cerrahi makas kullanın. Yavaşça t kadar kafatası küçük parçalarını çıkartıno bütün beyin maruz kalmaktadır. Görünür nodül veya anormallikleri renklenmeler için beyin boyunca bakın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li>
<li>Souza, B. M., Chaves, K. B., Chammas, R., Schor, N., Bellini, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endostatin+neoadjuvant+gene+therapy+extends+survival+in+an+orthotopic+metastatic+mouse+model+of+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Endostatin neoadjuvant gene therapy extends survival in an orthotopic metastatic mouse model of renal cell carcinoma.</a> Biomed. Pharmacother. 66, 237-241 (2012).</li>
<li>Amagai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+of+interleukin-2+and+sorafenib+improves+survival+benefits+and+prevents+spontaneous+pulmonary+metastasis+in+murine+renal+cell+carcinoma+models%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn.+J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Combination therapy of interleukin-2 and sorafenib improves survival benefits and prevents spontaneous pulmonary metastasis in murine renal cell carcinoma models.</a> Jpn. J. Clin. Oncol. 40, 503-507 (2010).</li>
<li>Steeg, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Drug+Development+Must+Consider+the+Impact+on+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Preclinical Drug Development Must Consider the Impact on Metastasis.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4529-4530 (2009).</li>
<li>Guerin, E., Man, S., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+postsurgical+advanced+metastatic+breast+cancer+more+accurately+replicates+the+clinical+efficacy+of+antiangiogenic+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A model of postsurgical advanced metastatic breast cancer more accurately replicates the clinical efficacy of antiangiogenic drugs.</a> Cancer Res. 73, 2743-2748 (2013).</li>
<li>Day, C. P., Carter, J., Bonomi, C., Hollingshead, M., Merlino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+therapeutic+response+of+residual+metastatic+disease+is+distinct+from+its+primary+tumor+of+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Preclinical therapeutic response of residual metastatic disease is distinct from its primary tumor of origin.</a> Int. J. Cancer. 130, 190-199 (2012).</li>
<li>Ebos, J. M., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy%3A+impact+on+invasion%2C+disease+progression%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy: impact on invasion, disease progression, and metastasis.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 210-221 (2011).</li>
<li>Naito, S., Walker, S. M., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+selection+of+human+renal+cell+carcinoma+cells+with+high+metastatic+potential+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">In vivo selection of human renal cell carcinoma cells with high metastatic potential in nude mice.</a> Clin. Exp. Metastasis. 7, 381-389 (1989).</li>
<li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+implantation+in+essential+for+the+selection%2C+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic implantation in essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 9, 145-165 (1990).</li>
<li>Saiki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+invasive+and+metastatic+phenotype+in+human+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Characterization of the invasive and metastatic phenotype in human renal cell carcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 9, 551-566 (1991).</li>
<li>Mohanty, S., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+metastasis+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental metastasis assay.</a> J. Vis. Exp. 42 (1942), (2010).</li>
<li>Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+serous+ovarian+cancer+in+immunocompetent+mice+for+in+vivo+tumor+imaging+and+monitoring+of+tumor+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses.</a> J. Vis. Exp. (45), (2010).</li>
<li>Ebos, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+metastasis+after+short-term+treatment+with+a+potent+inhibitor+of+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis.</a> Cancer Cell. 15, 232-239 (2009).</li>
<li>Yang, O. C., Maxwell, P. H., Pollard, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+cell+carcinoma%3A+translational+aspects+of+metabolism+and+therapeutic+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Renal cell carcinoma: translational aspects of metabolism and therapeutic consequences.</a> Kidney Int. 84 (4), 667-681 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu protokolün amacı, implantasyon / rezeksiyon teknikleri tanımlamak için bir sinjeneik tümör fare modeli kullanılarak klinik olarak ilgili spontan metastatik hastalık değerlendirmektir. Şu anda, yeni deneysel tedaviler değerlendiren klinik öncesi çalışmaların çoğunluğu metastatik hastalık çalışma dahil değildir ve sadece birkaç primer tümör büyümesi, cerrahi rezeksiyon ve nihai spontan metastatik yayılma aşamaları özetlemek. Bugüne kadar, genetiği fare modelleri (GEMMs) spontan renal hücreli hastalığın ilerlemesini (öz...

Renal hücreli karsinom (RCC) olan hastalarda mortalitenin önemli nedeni genellikle böbrek büyüyen bir primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması sonrası ortaya sistemik metastatik hastalıktır. Bununla birlikte, farelerde deneysel terapötik değerlendirilmesi, çok az klinik öncesi modellerde tümör metastatik hastalığı, ve daha az hala sadakatle lokalize bir büyüme, cerrahi ve spontan mikro metastatik başlaması ve ilerlemesi 1-3 klinik aşamaları özetlemek. Test Bu boşluk bazen hayvan modellerinde görülen çarpıcı bir anti-tümör etkileri her zaman hastaların 4 benzer başarılı tedavisi tercüme değil, yeni tedavilerin değerlendirilmesinde giderek daha önemli hale gelmiştir. Sonuçlarında tür farklılıklar lokalize ektopik veya kadavradan primer tümör modelleri ve geç evre metastatik hastalık 5-7 arasında ayırıcı ilaç etkilerlere kaynaklanıyor olabilir. RCC durumunda, sadece bir kaç çalışma kurulmuş istihdam var, birgenellikle tümör taşıyan böbrekleri vardı taklit eden hastalar tamamen veya kısmen 2,3 kaldırıldı spontan tekrarlayan hastalığı vardır Nimal protokolleri. Fare modeli test Bu eksiklik için nedenleri değişir. İlk olarak, yüksek maliyet ve hayvan tümör hücre seçimi ve metastaz potansiyeli doğal değişkenlik vardır. (Örneğin, bir insan hücre hattı türetme 8-10 açıklamasına bakınız), örneğin, insan böbrek hücre çizgileri nadiren metastaz eğilimindedir ve ortotopik primer implantasyon ve sürekli olarak yaymak ve uzak bir lezyon meydana türevlerini elde etmek için metastatik seçimi birden fazla tur seçilmelidir . Tersine, bağışıklığı yeterli bir model fare hücreleri agresif olarak davranma eğilimi gösterirler, ve düşük hücre sayıları hemen sistemik yayılmasını 3 azaltmak için Matrigel ile enjekte edilmelidir. İkincisi, teknik doğru implantasyonu, cerrahi rezeksiyon (nefrektomi) performans ve izleme güçlüğü (ve miktarlarının ayarlanması) spontan metastatic büyüme zor olabilir ve (ayrıntılar için Tartışma) Bu tekniğin uygulanması sırasında birçok kritik değişkenler dikkate gerekir. Bu protokolün amacı ortotopik implantasyon, rezeksiyon (nefrektomi), ve spontan metastatik RCC hastalığın izlenmesi temel adımları (yanı sıra potansiyel tuzaklar) tanımlamak ve standart (ve daha yaygın) için bir rehber sunmak için bilimsel laboratuvarlar arasında kullanmaktır Bu deneysel terapötik etkinliğini değerlendirmek.

<table><tbody><tr><td>Pir ile DMEM-yüksek glikoz. Ve L-Glutamin</td><td>Corning</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>%0.25 Tripsin EDTA</td><td>Corning</td><td>25-053-CL</td><td></td></tr><tr><td>1x Kalsiyum ve Kalsiyum içermeyen DPBS Magnezyum</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>354234</td><td>buz üzerinde tutulmalıdır</td></tr><tr><td>Yapay gözyaşı kayganlaştırıcı oftalmik merhem</td><td>Akorn Hayvan Sağlığı</td><td>17478-162-35</td><td></td></tr><tr><td>Cep yanlısı evcil hayvan düzeltici</td><td>Braintree bilimsel</td><td>CLP9931B</td><td></td></tr><tr><td>Alkollü çubuk</td><td>VWR</td><td>326895</td><td></td></tr><tr><td>Betadine çözelti çubuğu</td><td>VWR</td><td>67618-152-01</td><td></td></tr><tr><td>MİKRO DİREKSİYON sisörleri düz, künt - 25 mm bıçaklar - 4.5"&nbsp;</td><td>Southpointe cerrahi</td><td>RS-5982</td><td></td></tr><tr><td>İris Forseps, tırtıklı, kavisli, 10 cm uzunluğunda</td><td>Kent bilimsel</td><td>INS15915</td> bu 10 <td></td></tr><tr><td>& mikrodan ikisine ihtiyaç duyar; l Hamilton şırınga</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>30 G, 45 derece, RN iğnesi</td><td>Hamilton</td><td>7803-07</td><td></td></tr><tr><td>Steril pamuk uçlu aplike VWR</td><td></td><td>10805-144</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek sıcaklık koter kiti</td><td>Kent scientific</td><td>INS500392</td><td></td></tr><tr><td>5-0 kaplamalı Vicryl, konvansiyonel kesme iğnesi&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>J834</td><td></td></tr><tr><td>7 mm klipsler için refleks klips uygulayıcısı</td><td>Kent scientific</td><td>INS500343</td><td></td></tr><tr><td>Refleks klipsleri, 7 mm, steril olmayan</td><td>Kent bilimsel</td><td>INS500344</td> Forseps çıkarma, 12 cm uzunluğunda Kent bilimsel INS500347 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>%0,9 Sodyum Klorür</td><td>Baxter Healthcare</td><td>2B1322</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin 0.01 mg/ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>25 G 5/8" iğne</td><td>VWR</td><td>BD305122</td><td></td></tr><tr><td>1 ml iğnesiz şırınga</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>Altın Biyo teknolojisi</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (mrcc) modelleme ardından nefrektomi

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

Renal hücreli karsinom (RCC) yeni deneysel tedavilerin gelişmiş test için önemli zorluklardan biri sadakatle erken ve geç evre metastatik hastalık ilerlemesini özetlemek modellerinin geliştirilmesidir. Tipik tümör implantasyonu modelleri ektopik veya kadavradan primer tümör implantasyonu kullanmak, ancak birkaç klinik ayarını taklit sistemik spontan metastatik hastalığı vardır. Bu protokol RCC hastalığın ilerlemesi hastalara benzer aşamaları geliştirmek için önemli adımlar açıklanır. İlk olarak, ortotopik tümör hücre implantasyonu göstermek için bir genetik olarak özdeş bir modelde yüksek düzeyde metastatik fare tümör hücre hattı kullanır. Yöntem sızıntı ve erken yayılmasını önlemek için Matrigel ile birlikte hücreler ile alt kapsül boşluğa yüzeysel ve iç implantasyonu içerir. Sonraki kritik öncesi ve ameliyat sonrası bakım ile fare, tümör taşıyan böbrek (nefrektomi) eksizyonu için prosedürler açıklanmaktadır. Son olarak, izlemek ve değerlendirmek için gerekli adımları özetliyorMikro-ve de biyolüminesens görüntüleme dahil olmak üzere makro-metastatik hastalık ilerlemesi, sistemik hastalık dağılımı puan için ayrıntılı görsel otopsi kılavuzu sağlar. Bu protokol açıklamanın amacı, gelecekteki tedavi test öngörü değerini artırmak için klinik olarak ilgili metastatik RCC modelleri yaygın kullanımını kolaylaştırmaktır.

Şekil 1A, bu protokol, özetle detaylı olarak açıklanan yöntemi gösteren bir şematik göstermektedir. Birçok önemli faktör, her adım için kabul edilmelidir. Örneğin, basamak 1&#39;de bu böbrek içine alt kapsül tümör hücre implantasyonu için iki yöntem gösterilmektedir. Tümör hücreleri iğne dikkatli çıkarılması ve swabbing fazla kaçan sıvı (Şekil 1B-i) ile önlenir sızıntı ile hücrelerin lokalize yerleşimini teyit küçük beyaz kabarcık ile alt kapsül alana implante edilebilir. Sızıntıyı önle...

Spontan metastatik renal hücre karsinomu (RCC), hastalığın ilerlemesine modelleri klinik olarak anlamlı bir ortamda tedavi değerlendirmek için de kullanılabilir. Bu protokol, kadavradan böbrek tümör hücre implantasyonu, uygun nefrektomi için farklı prosedürler gösterir ve nihayet metastatik yükü ve lokalizasyon görsel ve biyolüminesens puanlama için bir otopsi rehber özetliyor.

Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Bu prosedürün genel amacı, klinik olarak anlamlı, spontan metastatik renal hücreli karsinom oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle reka Luke hücrelerinin implantasyon için hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise ortotopik böbrek tümör hücresi implantasyonu yapmaktır.Ardından, tümör büyüdükten sonra, nefrektomi yapılarak primer tümör çıkarılır. Son adım, nefrektomi sonrası spontan metastaz ilerlemesini izlemek ve çeşitli bölgelerdeki hastalık dağılımını değerlendirmektir. Sonuç olarak bu protokol, spontan metastatik renal hücreli karsinom hastalığının izlenmesine olanak tanır ve deneysel terapötiklerin etkinliğinin değerlendirilmesinin standartlaştırılması için bir kılavuz sunar.Bu tekniğin, ektopik, genellikle yüzeysel veya deri altına yapılan tümör hücresi implantasyonu yöntemleri gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, tümör hücrelerinin vücudun geri kalanına yayılma yeteneğini de içerecek şekilde, renal hücreli karsinomu veya RCC'yi hastalarda görüldüğü biçimiyle yeniden oluşturmasıdır. Bu tekniğin çıkarımları, renal hücreli karsinomun tedavisine kadar uzanmaktadır; çünkü hastalardaki temel ölüm nedeni aslında sistemik metastatik hastalıktır. Fare modelleri tipik olarak, nefrektomiyi bazen takip edebilen spontan metastatik hastalığı tedavi etmez.Bu yöntem, spontan metastatik RCC hastalığına dair içgörü sağlayabilse de, primer tümörün çıkarılmasının tipik olduğu ve temel mortalite nedeninin cerrahi sonrası metastatik hastalık nüksetmesi olan diğer kanser türlerine de uygulanabilir. Bu, diğerlerinin yanı sıra meme ve melanoma modellerini de kapsamaktadır.Genel olarak, bu yöntemde yeni olan bireyler, ilk olarak böbreğin bulunmasındaki zorluk ve implantasyon sırasında tümör hücrelerinin lokalize kalmasını sağlayıp sızmalarını önleme konusu nedeniyle zorlanacaklardır. İkinci olarak ise, işlemin etkili bir şekilde gerçekleştirilmesi ve cerrahi sonrası iyileşmeye olanak tanınması gerekliliği söz konusudur. Ortotopik implantasyon öncesinde, fare lusiferaz etiketli reca hücrelerini veya reka Luke hücrelerini, tripsinizasyon sonrası %5 FBS içeren medyada resüspansiyon yaparak %75 konfluens düzeyinde bir monokatman olarak büyütün; hücreleri PBS ile yıkayarak üç kez santrifüjleyin ve ardından hücreleri serumsuz medyada, 5 µL serumsuz medya başına 5 × 10⁴ renco Luke konsantrasyonuna gelecek şekilde yeniden süspande edin.Bir bowel deniz faresini %2 ile %3 isoflurane ile anestezi ettikten sonra, kurumayı önlemek için gözlere veteriner merhemi uygulayıp yeterli anestezi sağlanıp sağlanmadığını kontrol etmek için bir ayağı sıkın; ardından fareyi sağ lateral rekumban pozisyona getirin ve ön ve arka üyeler arasındaki sol tarafı tıraş edin. Daha sonra dorsal lomber bölge boyunca alkol ve iyot uygulayın. Son kaburga ile kalça eklemi arasında boyuna yönde bir santimetrelik bir cilt insizyonu yapmak için cerrahi makas kullanın.Ardından, deri altındaki bağ dokusunu gevşetmek için künt diseksiyon makası kullanın. Sonra, karın duvarında boylamsal yönde 0.5 santimetre uzunluğunda bir insizyon yapmak için cerrahi makas kullanın. Şimdi, açık yara çevresini nazikçe aşağı itmek için eğri pens kullanın.Bu işlem böbreği dışarı çıkarır ve enjeksiyondan önce organın nazikçe immobilize edilmesine olanak tanır. Yüzeysel subkapsüler implantasyon için bir Hamilton şırıngasına hazırlanan hücre karışımından beş µL doldurun. İğneyi, eğimli kenarı yukarı bakacak şekilde boylamsal yönelimli böbreğe paralel tutun ve iğneyi böbrek kapsülünün altına ancak parankimin üzerine yerleştirin.İğne yerleştirildikten sonra, küçük beyaz bir kabarcık oluşana kadar hücrelerin tamamını enjekte edin. İğneyi kapsülden yavaşça çıkarın ve dahili subkapsüler implantasyon için enjeksiyon bölgesini steril pamuklu bir aplikatör kullanarak hemen kapatın. Böbreğin, istenen implantasyon bölgesinin karşı tarafındaki kısmından başlayın.İğneyi, eğimli ucu yukarıya ve içe bakacak şekilde tutun. İğne görünür hale gelene kadar böbreğin iç kısmından yerleştirin, ancak karşı taraftaki subkapsüler boşluğu delmemeye dikkat edin. Beyaz bir kabarcık oluşana kadar hücreleri enjekte edin ve herhangi bir sızıntıyı önlemek için enjeksiyon bölgesini tamponla silin.Böbreği nazikçe vücut boşluğuna geri yerleştirin. Karın duvarını emilebilir 5.0 Vicryl sütür kullanarak kapatın. İşlem tamamlandığında, deri tabakasını bir arada tutun ve iyileşme öncesinde iki ila üç yara klipsi yerleştirin.500 µL %0,9 sodyum klorür ve 100 µL buprenorfin deri altına uygulayın. İmplantasyondan 26 ila 30 gün sonra, hayvanı anestezi altına alın ve böbreği daha önce yapıldığı gibi açığa çıkarın. Ardından, pens kullanarak böbreğin kaudal ucundaki bağlantı yağ dokusunu nazikçe temizleyin ve adrenal bezi kranial uçtan çıkarın.Böbreği nazikçe kavramak için pens kullanın ve ardından emilebilir 5.0 Vicryl sütürü üreter, renal arter ve renal venin etrafından geçirin. Ardından, iplikleri hemostatlarla kıstırdıktan sonra yavaşça çift düğüm atın. Düğümün üzerinden kesmek için makas kullanın ve böbreği çıkarın.Böbrek çıkarıldıktan sonra, vena cava ve arterden herhangi bir kanama olup olmadığını dikkatlice kontrol edin ve gerekirse koterize edin. Karın vücut duvarını 5.0 Vicryl kullanarak diktikten sonra, cildi kapatmak için yara klipsleri kullanın. Hayvanı her gün distres, kanama veya sınırlı mobilite belirtileri açısından izleyin.Hayvan ötanazi edildikten sonra, üretra üzerinden başlayıp toraks boşluğu boyunca alt mandibula'ya kadar devam eden bir insizyon yapmak için cerrahi makas kullanın. Karın duvarı kaslarını deriden ayırmak için küt uçlu makas kullanın. Ardından, deriyi kollar ve bacaklar boyunca kesin ve deriyi yavaşça soyun.Deri fasyasını ve karın duvarını nodüller açısından yakından inceleyin. Ardından yüzeysel lenf düğümlerini muayene edin. Karın duvarında bir insizyon yapın ve diyaframa kadar sol ve sağ lateral yanlar boyunca kesin.Tek bir yatay kesi ile abdominal duvarın ön kısmını kaldırarak viseral organları açığa çıkarın. Makroskobik olarak belirgin tümörler olup olmadığını anlamak için viseral organların bozulmamış görünümünü inceleyin.Ayrıca, gıda veya kanama belirtileri için mide ve bağırsakların içeriğini not edin. 22 bölgeden oluşan bir kontrol listesi üzerinden çalışarak, her organı tümör varlığı veya yokluğu açısından görsel olarak puanlayın; hastalık dağılımını karşılaştırmak için belirli bir gruptaki hayvanların puanları tablo haline getirilir. Şimdi karaciğeri dikkatlice çıkarın ve PBS ile yıkayın.Ardından, örneği makroskobik tümörler veya anomaliler açısından inceleyin ve daha önce olduğu gibi skorlayın. Daha sonra dalak, böbrek ve pankreası çıkarıp skorlayarak devam edin. Sonra; lomber sakral, renal ve mezenterik lenf düğümlerini içeren abdominal lenf düğümlerini inceleyin.Diyafram metastatik yayılım belirtileri açısından değerlendirildikten sonra, diyaframı çıkarın ve torasik boşlukta iki lateral insizyon yaparak akciğerleri ve kalbi açığa çıkarmak için frontal kısmı uzaklaştırın, özofagusu nazikçe kaldırın ve trakeayı kalbin üzerinden kesin. Akciğerler ve kalp çıkarıldıktan sonra, dokuları nodül varlığı açısından değerlendirin. Ardından, kalbi sıkıştırmak için pens kullanın.Esneklik tutarsızlığı, bir tümörün varlığına işaret edebilir. Son olarak, kafatasını doğrusal şekilde kesmek için cerrahi makas kullanın. Tüm beyin açığa çıkana kadar kafatasından küçük parçaları nazikçe çıkarın.Beş farklı hayvan grubundaki hastalığın dağılımını ve şiddetini değerlendirmek için görsel bir skorlama sistemi kullanılmıştır. Bu gruplar, hastalığın farklı derecelerde yayılım ve şiddet göstermiştir. Mikro ve makro metastatik lezyonları nicel olarak değerlendirmek için sakrifikasyonu takiben hemen biyolüminesans görüntülemeden oluşan ek bir ölçüm kullanılmıştır.İmplantasyon hem uzmanlaşıldığında, düzgün bir şekilde yapıldığı takdirde hayvan başına nefrektomi veya nekropsi beş ila 10 dakika içinde tamamlanabilir. Metastatik tümör hücresi türleri arasında tedavi yanıtlarının farklılık gösterip göstermeyeceğini incelemek amacıyla metastatik renal hücreli karsinom hücreleri kullanılmıştır.Geliştirildikten sonra, lokal ve metastatik hastalık büyümesini değerlendirmek amacıyla, hastadan alınan dokular şu anda doğrudan hayvanlara implante edilmektedir. Bu teknik, RCC alanındaki araştırmacıların klinik olarak ilgili hastalık ilerlemesini ve tedaviye verilen yanıtları keşfetmelerinin yolunu açmıştır. Özellikle, bu yanıtların primer lokalize hastalığa veya spontan metastatik büyümeye bağlı olarak farklılık gösterip göstermediği incelenmektedir.Birden fazla cerrahi operasyon geçiren küçük hayvanlarla çalışmanın, kurumsal hayvan protokolü kılavuzlarına ve steril koşullara sıkı sıkıya bağlı kalmayı gerektirdiğini unutmayın. Hayvan konforu ve iyileşme süreci, bu prosedürün düzgün bir şekilde gerçekleştirilebilmesi için kritik değişkenlerdir.

modeling-spontaneous-metastatic-renal-cell-carcinoma-mrcc-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Çekum üzerine bir kanser hücre süspansiyonu çekal duvar subkutan tümörün bir parçasının veya transplantasyon içine enjeksiyon: İki teknikleri bu modeli kurmak için kullanılan olabilir. Bu model, kolorektal kanseri doğal bir ilerleme eğitim ve kolorektal kansere karşı yeni tedavi ajanları test için yararlıdır.

Kolorektal Kanser Ortotopik Fare Modeli

Bu videoda, kolorektal kanser hastadan türetilmiş ksenogreftlerin veya PDX'lerin spontan metastaz fare modelini oluşturmak için kullanılan protokol açıklanmaktadır. Bu ksenogreft modelleri, insan karsinomlarının özelliklerini kısmen taklit eder ve invazyon ve metastaz dahil olmak üzere insan malignitelerinin kritik yönlerini anlar.

Spontan Metastaz Fare Modelleri: Ortototopik Olarak Enjekte Edilen Kolorektal Kanser Hücrelerinin Metastatik Potansiyelini İncelemek İçin Bir Platform

Bu videoda, renal hücreli karsinomun ortotopik bir fare modelini geliştiriyoruz. Bu model, enjekte edilen böbrekte tekrarlanabilir primer tümörler ve akciğerde metastatik tümörler ile sonuçlanır ve hastalığın ilerlemesinin ve tedavisinin değerlendirilmesine olanak tanır.

Renal Hücreli Karsinom Modelinin Oluşturulması: Kanser Hücrelerinin İntrarenal İmplantasyonu ile Ortotopik RCC Murin Modeli Geliştirme Protokolü

Insan prostat kanser ortotopik bir model akciğer tümör hücreleri ve farklı metastaz oluşumu dolaşan tümör boyutu ölçümü sağlar. Hücreler birincil organı kaçmak gerekir gibi, kan dolaşımına girerek, ve bir ikincil site içine implant, bu modeli etkin insanlarda senaryo tartışıldı.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Prostat kanseri, Amerika Birleşik Devletleri'nde kansere bağlı ölümlerin en sık ikinci nedenidir. Ortotopik bir kanser modeli, prostat kanserinin biyolojisini anlamak ve terapötik rejimlerin etkinliğini değerlendirmek için yararlı bir yaklaşım sağlar. Bu protokol, ortotopik bir prostat kanseri fare modeli oluşturmak için gerekli ayrıntılı adımları açıklar.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

İmünokompetan farelerde böbrek hücreli karsinom ortotopik bir model uygulanması Araştırmacı aynı hayvanda bir primer böbrek tümörü, akciğer metastazların varlığı ile tanımlanan bir klinik açıdan ilgili bir sistem elde edilir. Bu sistem, klinik öncesi, in vivo olarak tedaviler çeşitli test etmek için de kullanılabilir.

Preklinik Tedaviler Nicel ve Boyuna Değerlendirme A sinjeneik Fare Modeli Yapmış Bir Renal Hücreli Karsinom

Biz bir fare orthotopic meme kanseri modeli ve radikal mastektomi modeli insan meme kanseri ilerleme taklit etmek için tümör yükünü ölçmek için bioluminescence teknolojisi ile tanıtmak.

Fare Orthotopic metastatik meme kanseri Model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme

Bu protokol, yüksek dereceli ürosityal Hücre Karsinomu hücrelerinin intra-vesically instilling veya intra-rektal enjekte kolorektal kanser hücreleri olmayan obez diyabetik/şiddetli kombine tarafından hasta türeyen ortootopik xenograft modellerinin oluşturulması açıklanmaktadır immüneksikliği (NOD/SCıD) primer tümör büyümesi için fareler ve lenf nodu stromal hücrelerin etkisi altında spontan metastaz, hangi insan metastatik hastalıkların ilerlemesini taklit.

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Klinik olarak ilgili kolorektal kanser karaciğer metastazları (CRLM) tümör modeli ve karaciğer iskemi reperfüzyonunun (I/R) tümör büyümesi ve metastazdaki etkisini ayrıntılı olarak açıklıyoruz. Bu model daha iyi karaciğer metastatik büyüme cerrahi kaynaklı promosyon altında yatan mekanizmaları anlamak için yardımcı olabilir.

İskemi Reperfüzyon Hasarı Ayarında Metastatik Karaciğer Tümörlerinin Murine Modeli

Metastatik berrak hücreli renal hücreli karsinom kapsamlı bir klinik öncesi araştırma için kapsamlı bir hayvan modeli olmayan bir hastalıktır. Bu protokol hastalık için iki yeni hayvan modelini göstermektedir: ortonik olarak implante edilmiş fare modeli ve tavuk koryoallantoik membran modeli, her ikisi de klinik olgulara benzeyen akciğer metastazı göstermektedir.

Fare Böbreği ve Tavuk Koryoallantoik Membranda Kurulan Metastatik Berrak Hücreli Renal Hücreli Karsinom Modelinin Karşılaştırılması

Öğrenin farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom modellemesi için ortotopik implantasyon ve nefrektomi yöntemlerini. Bu protokol metastaz ilerlemesini izlemek ve deneysel tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için standart bir kılavuz sunar.

Farelerde spontan metastatik renal hücreli karsinom (MRCC) modelleme ardından nefrektomi

Daha fazla video keşfet