Zebrafish Üretimi ve Embriyo Yönetimi
Zebrafish (zebra balığı), küçük ancak güçlü bir model sistemdir. Bu üretken balıklar, haftada yüzlerce ve yaşam süreleri boyunca binlerce yavru üretebilirler. Hızlı eksternal gelişimleri ve şeffaf vücutları, embriyoları çeşitli uygulamalar için ideal kılar. Bu video, zebrafish embriyolarından yararlanan güncel araştırma yöntemlerini açıklamadan önce, embriyo toplamanın ve işlem yapmanın temel esaslarını ele alacaktır.
Embriyo üretmek için, zebra balığının çiftleşme davranışı hakkında biraz bilgi sahibi olmak faydalıdır.
Zebra balıkları eşeyli üreme gerçekleştirir, bu nedenle yetiştirme işlemi hem erkek hem de dişi balık gerektirir. Erkekler, hafif kırmızımtırak renkli daha ince gövdelere sahipken; dişeler, yumurtalarla dolu daha büyük, gümüş rengi karınlara sahiptir.
Periyodik çiftleşme yumurtaların sağlıklı kalmasını sağlar, ancak tüm bu yumurtaları üretmek çok fazla enerji gerektirdiğinden, münferit dişiler haftada yalnızca bir kez çiftleştirilmelidir.
Son olarak, diğer birçok hayvan gibi, balıklarda da çiftleşme davranışı duyusal süreçler tarafından yönlendirilir.
Erkeğin koku sinyalleri, dişi arkadaşının yumurtlamaya hazırlanmasına yardımcı olurken, hafif bir ambiyans aydınlatması her ikisini de harekete geçirir.
Erkek ve dişi balıkların nasıl ayırt edileceğini öğrendikten sonra, artık bir çaprazlama kurma zamanı geldi.
Zebra balığı üretimi için araştırmacılar, özellikle çiftleşme için tasarlanmış tanklar kullanırlar. Üretim tankları genellikle yumurtaların aşağı düşmesini sağlayan delikli, çıkarılabilir bir ara bölmeye sahiptir. Bu özellik, yumurtaların aç yetişkin balıklar tarafından yenmesini önler.
Başlamak için, yetişkin balıkları öğleden sonra veya akşam saatlerinde üretim tanklarında bir araya getirin. Erken evre embriyoları ertesi sabah toplamak için, deneyle başlamaya hazır olana kadar çiftleşmelerini engelleyen bir ayırıcı ile erkek ve dişi balıkları birbirinden ayırın. Balıkların dışarı sıçramasını önlemek için üretim tankını bir kapakla kapattığınızdan emin olun. Ardından, balıkları gece boyunca birbirlerine alışmaları için bırakın.
Bir gece boyunca çiftleştirme tankında birlikte kaldıktan sonra, balıklar ertesi sabah çiftleşecektir.
Sabah yapılacak ilk adım, yumurtlamayı başlatmak için erkek ve dişi balıklar arasındaki bölücü paneli çıkarmaktır. Bölücü panel kullanılmamışsa, balıklar ışıklar açıldıktan kısa bir süre sonra yumurta bırakacaktır.
Erkekler tank boyunca dişileri kovalarken, döllenme için suya sperm salarak yumurtaların dökülmesini stimüle ederler. Balıklara çiftleşme zamanı tanımak için bölücü panel kaldırıldıktan sonra yaklaşık 15 - 30 dakika bekleyin. Ardından, yetişkin balıkları bir ağ kullanarak veya tank ekini kaldırıp balıkları başka bir tanka aktararak tanktan çıkarın.
Sonraki adımda, toplama işlemi için suyu ve embriyoları metal bir süzgeçten geçirin. Ardından, "yumurta suyu" kullanarak embriyoları süzgeçten bir petri kabına yıkayın. Kap başına 50 - 100 adetlik optimal bir yoğunluk elde etmek için embriyoları kaplar arasında aktarmak gerekebilir. Gelişimin normal hızda ilerlemesini sağlamak için kapları 28.5 °C'deki bir inkübatöre yerleştirin.
Embriyolarınızı elde ettikten sonra onlara dikkatle yaklaşın. Deneyleriniz için çok önemliler! Bazı ipuçlarının üzerinden geçelim.
Embriyoların sağlıklı kalması için petri kaplarındaki suyun temiz ve kalıntılardan arındırılmış olduğundan emin olun. Ölü embriyolar opak görünecektir ve her gün temizlenmelidir. Ayrıca, mantar gelişimini önlemek için suya metilen mavisi eklenebilir.
Embriyoları bir kaptan diğerine taşımanız gerektiğinde transfer pipeti kullanın. Kabı dairesel hareketlerle sallayarak embriyoları plak merkezinde toplayabilir ve pipetleme işlemini kolaylaştırabilirsiniz.
Bazı protokoller, embriyo bakımı için birkaç ek adım gerektirir. Yaşamlarının ilk üç günü boyunca zebrafish embriyoları, embriyonun manipülasyonunu engelleyebilen bir korion içinde gelişirler. Korion, proteolitik enzim pronase ile işleme tabi tutularak veya pens kullanılarak manuel olarak çıkarılabilir. Ayrıca zebrafishler, buradaki zebrafish larvasında görüldüğü üzere, 24. saat itibarıyla pigment geliştirmeye başlarlar ve bu durum mikroskobik incelemeleri etkileyebilir. Bu sorunu aşmak için bilim insanları, melanin pigmentinin üretimini inhibe eden PTU ile embriyo suyunu desteklerler.
Zebrafish embriyolarının nasıl elde edileceğini ve bakımlarının nasıl yapılacağını öğrendiğinize göre, araştırmacıların bunları bilimsel keşifler için kullandıkları bazı yöntemleri inceleyelim.
Zebrafish embriyolarının dış gelişimi; DNA, RNA veya gen susturma reaktiflerinin mikroenjeksiyon yoluyla genetik manipülasyonuna olanak tanır. Bu yöntem, enjekte edilen materyalin embriyo boyunca homojen dağılımını sağlar ve bir proteinin aşırı ekspresyonu veya kaybı sonucunda ortaya çıkan görünür fenotipler oluşturabilir. Aynı teknik, belirli yapıların floresan proteinlerin ekspresyonu ile işaretlendiği transgenik balıklar üretmek için de kullanılabilir.
Ayrıca, zebrafish embriyolarının ve larvalarının küçük boyutları, onları fenotipik kimyasal taramalar için ideal kılar. Bu işlemde embriyolar 96 kuyucuklu plakalara yerleştirilir ve ardından kimyasalların suya eklenmesiyle küçük molekül kütüphaneleri ile muamele edilir. Daha sonra, bu balık plakaları, burada gösterilen anormal gelişim gibi morfolojik defektler açısından taranır.
Son olarak, zebrafish embriyolarının şeffaflığı onları mikroskopi için oldukça uygun hale getirir. Belirli hücre tiplerinde floresan proteinler eksprese eden canlı embriyolar, konfokal mikroskopi ile sabitlenip görselleştirilebilir; bu da araştırmacıların gelişmekte olan dokulardaki hücre hareketlerini zaman içinde incelemelerine olanak tanır.
Zebrafish üretimi ve embriyo işlemleri hakkındaki JoVE videosunu izlediniz. Bu videoda; çiftleştirmenin temellerini, üretim tanklarının kurulumunu ve embriyo işlemlerini ele aldık. Ayrıca, bu güçlü küçük embriyonun avantajlarından yararlanan bazı araştırma yöntemlerini tartıştık. İzlediğiniz için teşekkürler!
Zebrafish (Danio rerio), özellikle gelişim biyolojisi araştırmaları için oldukça değerli olan önemli bir model organizmadır. Zebrafishler son derece ü…
Zebrafish (zebra balığı), küçük ancak güçlü bir model sistemdir. Bu üretken balıklar, haftada yüzlerce ve yaşam süreleri boyunca binlerce yavru üretebilirler. Hızlı eksternal gelişimleri ve şeffaf vücutları, embriyoları çeşitli uygulamalar için ideal kılar. Bu video, zebrafish embriyolarından yararlanan güncel araştırma yöntemlerini açıklamadan önce, embriyo toplamanın ve işlem yapmanın temel esaslarını ele alacaktır.
Embriyo üretmek için, zebra balığının çiftleşme davranışı hakkında biraz bilgi sahibi olmak faydalıdır.
Zebra balıkları eşeyli üreme gerçekleştirir, bu nedenle yetiştirme işlemi hem erkek hem de dişi balık gerektirir. Erkekler, hafif kırmızımtırak renkli daha ince gövdelere sahipken; dişeler, yumurtalarla dolu daha büyük, gümüş rengi karınlara sahiptir.
Periyodik çiftleşme yumurtaların sağlıklı kalmasını sağlar, ancak tüm bu yumurtaları üretmek çok fazla enerji gerektirdiğinden, münferit dişiler haftada yalnızca bir kez çiftleştirilmelidir.
Son olarak, diğer birçok hayvan gibi, balıklarda da çiftleşme davranışı duyusal süreçler tarafından yönlendirilir.
Erkeğin koku sinyalleri, dişi arkadaşının yumurtlamaya hazırlanmasına yardımcı olurken, hafif bir ambiyans aydınlatması her ikisini de harekete geçirir.
Erkek ve dişi balıkların nasıl ayırt edileceğini öğrendikten sonra, artık bir çaprazlama kurma zamanı geldi.
Zebra balığı üretimi için araştırmacılar, özellikle çiftleşme için tasarlanmış tanklar kullanırlar. Üretim tankları genellikle yumurtaların aşağı düşmesini sağlayan delikli, çıkarılabilir bir ara bölmeye sahiptir. Bu özellik, yumurtaların aç yetişkin balıklar tarafından yenmesini önler.
Başlamak için, yetişkin balıkları öğleden sonra veya akşam saatlerinde üretim tanklarında bir araya getirin. Erken evre embriyoları ertesi sabah toplamak için, deneyle başlamaya hazır olana kadar çiftleşmelerini engelleyen bir ayırıcı ile erkek ve dişi balıkları birbirinden ayırın. Balıkların dışarı sıçramasını önlemek için üretim tankını bir kapakla kapattığınızdan emin olun. Ardından, balıkları gece boyunca birbirlerine alışmaları için bırakın.
Bir gece boyunca çiftleştirme tankında birlikte kaldıktan sonra, balıklar ertesi sabah çiftleşecektir.
Sabah yapılacak ilk adım, yumurtlamayı başlatmak için erkek ve dişi balıklar arasındaki bölücü paneli çıkarmaktır. Bölücü panel kullanılmamışsa, balıklar ışıklar açıldıktan kısa bir süre sonra yumurta bırakacaktır.
Erkekler tank boyunca dişileri kovalarken, döllenme için suya sperm salarak yumurtaların dökülmesini stimüle ederler. Balıklara çiftleşme zamanı tanımak için bölücü panel kaldırıldıktan sonra yaklaşık 15 - 30 dakika bekleyin. Ardından, yetişkin balıkları bir ağ kullanarak veya tank ekini kaldırıp balıkları başka bir tanka aktararak tanktan çıkarın.
Sonraki adımda, toplama işlemi için suyu ve embriyoları metal bir süzgeçten geçirin. Ardından, "yumurta suyu" kullanarak embriyoları süzgeçten bir petri kabına yıkayın. Kap başına 50 - 100 adetlik optimal bir yoğunluk elde etmek için embriyoları kaplar arasında aktarmak gerekebilir. Gelişimin normal hızda ilerlemesini sağlamak için kapları 28.5 °C'deki bir inkübatöre yerleştirin.
Embriyolarınızı elde ettikten sonra onlara dikkatle yaklaşın. Deneyleriniz için çok önemliler! Bazı ipuçlarının üzerinden geçelim.
Embriyoların sağlıklı kalması için petri kaplarındaki suyun temiz ve kalıntılardan arındırılmış olduğundan emin olun. Ölü embriyolar opak görünecektir ve her gün temizlenmelidir. Ayrıca, mantar gelişimini önlemek için suya metilen mavisi eklenebilir.
Embriyoları bir kaptan diğerine taşımanız gerektiğinde transfer pipeti kullanın. Kabı dairesel hareketlerle sallayarak embriyoları plak merkezinde toplayabilir ve pipetleme işlemini kolaylaştırabilirsiniz.
Bazı protokoller, embriyo bakımı için birkaç ek adım gerektirir. Yaşamlarının ilk üç günü boyunca zebrafish embriyoları, embriyonun manipülasyonunu engelleyebilen bir korion içinde gelişirler. Korion, proteolitik enzim pronase ile işleme tabi tutularak veya pens kullanılarak manuel olarak çıkarılabilir. Ayrıca zebrafishler, buradaki zebrafish larvasında görüldüğü üzere, 24. saat itibarıyla pigment geliştirmeye başlarlar ve bu durum mikroskobik incelemeleri etkileyebilir. Bu sorunu aşmak için bilim insanları, melanin pigmentinin üretimini inhibe eden PTU ile embriyo suyunu desteklerler.
Zebrafish embriyolarının nasıl elde edileceğini ve bakımlarının nasıl yapılacağını öğrendiğinize göre, araştırmacıların bunları bilimsel keşifler için kullandıkları bazı yöntemleri inceleyelim.
Zebrafish embriyolarının dış gelişimi; DNA, RNA veya gen susturma reaktiflerinin mikroenjeksiyon yoluyla genetik manipülasyonuna olanak tanır. Bu yöntem, enjekte edilen materyalin embriyo boyunca homojen dağılımını sağlar ve bir proteinin aşırı ekspresyonu veya kaybı sonucunda ortaya çıkan görünür fenotipler oluşturabilir. Aynı teknik, belirli yapıların floresan proteinlerin ekspresyonu ile işaretlendiği transgenik balıklar üretmek için de kullanılabilir.
Ayrıca, zebrafish embriyolarının ve larvalarının küçük boyutları, onları fenotipik kimyasal taramalar için ideal kılar. Bu işlemde embriyolar 96 kuyucuklu plakalara yerleştirilir ve ardından kimyasalların suya eklenmesiyle küçük molekül kütüphaneleri ile muamele edilir. Daha sonra, bu balık plakaları, burada gösterilen anormal gelişim gibi morfolojik defektler açısından taranır.
Son olarak, zebrafish embriyolarının şeffaflığı onları mikroskopi için oldukça uygun hale getirir. Belirli hücre tiplerinde floresan proteinler eksprese eden canlı embriyolar, konfokal mikroskopi ile sabitlenip görselleştirilebilir; bu da araştırmacıların gelişmekte olan dokulardaki hücre hareketlerini zaman içinde incelemelerine olanak tanır.
Zebrafish üretimi ve embriyo işlemleri hakkındaki JoVE videosunu izlediniz. Bu videoda; çiftleştirmenin temellerini, üretim tanklarının kurulumunu ve embriyo işlemlerini ele aldık. Ayrıca, bu güçlü küçük embriyonun avantajlarından yararlanan bazı araştırma yöntemlerini tartıştık. İzlediğiniz için teşekkürler!
Zebrafish (zebra balığı), küçük ancak güçlü bir model sistemdir. Bu üretken balıklar, haftada yüzlerce ve yaşam süreleri boyunca binlerce yavru üretebilirler. Hızlı eksternal gelişimleri ve şeffaf vücutları, embriyoları çeşitli uygulamalar için ideal kılar. Bu video, zebrafish embriyolarından yararlanan güncel araştırma yöntemlerini açıklamadan önce, embriyo toplamanın ve işlem yapmanın temel esaslarını ele alacaktır.
Embriyo üretmek için, zebra balığının çiftleşme davranışı hakkında biraz bilgi sahibi olmak faydalıdır.
Zebra balıkları eşeyli üreme gerçekleştirir, bu nedenle yetiştirme işlemi hem erkek hem de dişi balık gerektirir. Erkekler, hafif kırmızımtırak renkli daha ince gövdelere sahipken; dişeler, yumurtalarla dolu daha büyük, gümüş rengi karınlara sahiptir.
Periyodik çiftleşme yumurtaların sağlıklı kalmasını sağlar, ancak tüm bu yumurtaları üretmek çok fazla enerji gerektirdiğinden, münferit dişiler haftada yalnızca bir kez çiftleştirilmelidir.
Son olarak, diğer birçok hayvan gibi, balıklarda da çiftleşme davranışı duyusal süreçler tarafından yönlendirilir.
Erkeğin koku sinyalleri, dişi arkadaşının yumurtlamaya hazırlanmasına yardımcı olurken, hafif bir ambiyans aydınlatması her ikisini de harekete geçirir.
Erkek ve dişi balıkların nasıl ayırt edileceğini öğrendikten sonra, artık bir çaprazlama kurma zamanı geldi.
Zebra balığı üretimi için araştırmacılar, özellikle çiftleşme için tasarlanmış tanklar kullanırlar. Üretim tankları genellikle yumurtaların aşağı düşmesini sağlayan delikli, çıkarılabilir bir ara bölmeye sahiptir. Bu özellik, yumurtaların aç yetişkin balıklar tarafından yenmesini önler.
Başlamak için, yetişkin balıkları öğleden sonra veya akşam saatlerinde üretim tanklarında bir araya getirin. Erken evre embriyoları ertesi sabah toplamak için, deneyle başlamaya hazır olana kadar çiftleşmelerini engelleyen bir ayırıcı ile erkek ve dişi balıkları birbirinden ayırın. Balıkların dışarı sıçramasını önlemek için üretim tankını bir kapakla kapattığınızdan emin olun. Ardından, balıkları gece boyunca birbirlerine alışmaları için bırakın.
Bir gece boyunca çiftleştirme tankında birlikte kaldıktan sonra, balıklar ertesi sabah çiftleşecektir.
Sabah yapılacak ilk adım, yumurtlamayı başlatmak için erkek ve dişi balıklar arasındaki bölücü paneli çıkarmaktır. Bölücü panel kullanılmamışsa, balıklar ışıklar açıldıktan kısa bir süre sonra yumurta bırakacaktır.
Erkekler tank boyunca dişileri kovalarken, döllenme için suya sperm salarak yumurtaların dökülmesini stimüle ederler. Balıklara çiftleşme zamanı tanımak için bölücü panel kaldırıldıktan sonra yaklaşık 15 - 30 dakika bekleyin. Ardından, yetişkin balıkları bir ağ kullanarak veya tank ekini kaldırıp balıkları başka bir tanka aktararak tanktan çıkarın.
Sonraki adımda, toplama işlemi için suyu ve embriyoları metal bir süzgeçten geçirin. Ardından, "yumurta suyu" kullanarak embriyoları süzgeçten bir petri kabına yıkayın. Kap başına 50 - 100 adetlik optimal bir yoğunluk elde etmek için embriyoları kaplar arasında aktarmak gerekebilir. Gelişimin normal hızda ilerlemesini sağlamak için kapları 28.5 °C'deki bir inkübatöre yerleştirin.
Embriyolarınızı elde ettikten sonra onlara dikkatle yaklaşın. Deneyleriniz için çok önemliler! Bazı ipuçlarının üzerinden geçelim.
Embriyoların sağlıklı kalması için petri kaplarındaki suyun temiz ve kalıntılardan arındırılmış olduğundan emin olun. Ölü embriyolar opak görünecektir ve her gün temizlenmelidir. Ayrıca, mantar gelişimini önlemek için suya metilen mavisi eklenebilir.
Embriyoları bir kaptan diğerine taşımanız gerektiğinde transfer pipeti kullanın. Kabı dairesel hareketlerle sallayarak embriyoları plak merkezinde toplayabilir ve pipetleme işlemini kolaylaştırabilirsiniz.
Bazı protokoller, embriyo bakımı için birkaç ek adım gerektirir. Yaşamlarının ilk üç günü boyunca zebrafish embriyoları, embriyonun manipülasyonunu engelleyebilen bir korion içinde gelişirler. Korion, proteolitik enzim pronase ile işleme tabi tutularak veya pens kullanılarak manuel olarak çıkarılabilir. Ayrıca zebrafishler, buradaki zebrafish larvasında görüldüğü üzere, 24. saat itibarıyla pigment geliştirmeye başlarlar ve bu durum mikroskobik incelemeleri etkileyebilir. Bu sorunu aşmak için bilim insanları, melanin pigmentinin üretimini inhibe eden PTU ile embriyo suyunu desteklerler.
Zebrafish embriyolarının nasıl elde edileceğini ve bakımlarının nasıl yapılacağını öğrendiğinize göre, araştırmacıların bunları bilimsel keşifler için kullandıkları bazı yöntemleri inceleyelim.
Zebrafish embriyolarının dış gelişimi; DNA, RNA veya gen susturma reaktiflerinin mikroenjeksiyon yoluyla genetik manipülasyonuna olanak tanır. Bu yöntem, enjekte edilen materyalin embriyo boyunca homojen dağılımını sağlar ve bir proteinin aşırı ekspresyonu veya kaybı sonucunda ortaya çıkan görünür fenotipler oluşturabilir. Aynı teknik, belirli yapıların floresan proteinlerin ekspresyonu ile işaretlendiği transgenik balıklar üretmek için de kullanılabilir.
Ayrıca, zebrafish embriyolarının ve larvalarının küçük boyutları, onları fenotipik kimyasal taramalar için ideal kılar. Bu işlemde embriyolar 96 kuyucuklu plakalara yerleştirilir ve ardından kimyasalların suya eklenmesiyle küçük molekül kütüphaneleri ile muamele edilir. Daha sonra, bu balık plakaları, burada gösterilen anormal gelişim gibi morfolojik defektler açısından taranır.
Son olarak, zebrafish embriyolarının şeffaflığı onları mikroskopi için oldukça uygun hale getirir. Belirli hücre tiplerinde floresan proteinler eksprese eden canlı embriyolar, konfokal mikroskopi ile sabitlenip görselleştirilebilir; bu da araştırmacıların gelişmekte olan dokulardaki hücre hareketlerini zaman içinde incelemelerine olanak tanır.
Zebrafish üretimi ve embriyo işlemleri hakkındaki JoVE videosunu izlediniz. Bu videoda; çiftleştirmenin temellerini, üretim tanklarının kurulumunu ve embriyo işlemlerini ele aldık. Ayrıca, bu güçlü küçük embriyonun avantajlarından yararlanan bazı araştırma yöntemlerini tartıştık. İzlediğiniz için teşekkürler!
View the full transcript and gain access to JoVE Science Education videos
Q1: How do you identify male and female zebrafish for breeding?
Male zebrafish have slimmer bodies with a slightly red hue, while females have bigger, silver bellies full of eggs. Recognizing these physical differences is essential for setting up successful breeding crosses. Periodic mating keeps eggs healthy, but individual females should only be mated once per week to ensure their wellbeing.
Q2: What is the purpose of a removable insert in zebrafish breeding tanks?
Breeding tanks feature a removable insert with holes that allow eggs to fall through, protecting embryos from being eaten by adult fish. This design is critical for successful embryo collection. The insert can be lifted to remove adults after spawning, making the entire breeding process more efficient and reliable.
Q3: How long should you wait after removing the divider before collecting zebrafish embryos?
Wait approximately 15 to 30 minutes after pulling the divider to give the fish time to mate and spawn. During this period, males chase females around the tank, stimulating spawning while releasing sperm for fertilization. After this time, remove the adults and collect embryos by pouring water and embryos through a mesh tea strainer.
Q4: What is PTU and why is it used in zebrafish embryo culture?
PTU is a chemical that inhibits production of the pigment melanin in zebrafish embryos. Zebrafish begin developing pigment by 24 hours, which can interfere with microscopy observations. By supplementing embryo water with PTU, researchers can maintain transparency and improve visualization of developmental processes during live imaging studies.
Q5: What is dechorionation and when is it necessary for zebrafish embryos?
Dechorionation is the removal of the chorion, a shell-like membrane surrounding the embryo that can impede manipulation. For the first three days of life, zebrafish embryos develop inside this protective chorion. The chorion can be removed using the proteolytic enzyme pronase or manually with forceps, depending on experimental requirements.
Q6: How can zebrafish embryos be used for genetic manipulation in research?
The external development and transparency of zebrafish embryos allow for genetic manipulation through introduction microinjection early zebrafish embryos of DNA, RNA, or gene knockdown reagents. This method produces uniform distribution of injected material and can generate visible phenotypes from protein overexpression or loss. Transgenic fish with fluorescent protein markers can also be created for cell-type-specific visualization.
Q7: What daily care practices keep zebrafish embryos healthy in the laboratory?
Keep water in petri dishes clean and free of debris, and remove dead opaque embryos daily. Methylene blue can be added to prevent fungal growth. Maintain optimal embryo density at 50 to 100 per dish, and place dishes in an incubator at 28.5 degrees Celsius. Use a transfer pipet to move embryos between dishes, swirling the dish first to concentrate them in the center.
Bu videodaki bölümler
0:00
Overview
0:44
Zebrafish Mating Basics
1:42
Setting up Crosses
2:41
Embryo Collection
4:01
Working with Embryos
5:34
Applications
7:17
Summary