Name: Mikroakışkan jeti kullanarak çift katlı lipid Vesikül Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 35 s
Description: Öğrenin, mikroakışkan jetleme ile çift katlı lipid veziküllerinin üretimini. Bu yöntem, membran asimetrisi ve protein dahil edilmesi üzerinde hassas kontrol sağlar. Biyofizik ve biyoteknoloji araştırmaları için tekrarlanabilir sonuçlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz microjetting parametreleri üzerinde tavsiye California, Berkeley Üniversitesi&#39;nde Fletcher Lab Mike Vahey teşekkür ederim. Bu çalışma NIH hibe DP2 HL117748-01 tarafından sponsor oldu.

1.. Infinity Odası Fabrikasyon <ol><li> Bir bilgisayar destekli tasarım (CAD) yazılımı kullanılarak (şekli adını) sonsuzluk odasını tasarlayın ve bir lazer kesici ile uyumlu şekilde dosyayı kaydedin. Lazer kesici ile açık olarak akrilik 1/8- 3/16 arasındaki bölmeyi kesme kriteri: 0.15 &#39;lik bir merkez-merkez mesafe ile de bu şekil, çapı 0,183 ayrı iki daire oluşturmak. Sonsuzluk şekli damlacık arayüzü iki tabakalı oluşumunu ve istikrar kolaylaştırır. </li><li> Sonsuzluk şeklindeki oyuğa akrilik odasının kenarı boyunca bir 1/16 bir delik delin. Karşı tarafta tekrarlayın. Makas ile bir 0.2 mm akrilik levha ya da bir alt oyuklara olarak hizmet etmek üzere bir lazer kesici küçük bir dikdörtgen kesin. </li><li> 0.2 mm akrilik bir tarafına çabuk kuruyan bir yapışkan ince fakat tam bir tabaka uygulanır ve odacığın dibine tutkal. Bölmenin tabanına sıkıca yerine 0.2 mm akrilik tutun ve dağıtmakTutkal, bir mühür oluşturmak ancak görüntüleme alanı kapsayan önlemek için izin vermek için ara-yapıştırıcı. Onun kenarı oda duvarının kenarı ile aynı hizada ve tamamen sonsuzluk odası kesme kapsar şekilde akrilik hizalamak için emin olun. Bu yeterli jet nüfuz etmesi için izin vermek ve kuyu sızmasını engeller. </li><li> Delinmiş delikleri kapatmak için doğal kauçuk iki küçük parçalar kesin. Deliğin etrafında çabuk kuruyan yapıştırıcı uygulayın. Sabitlemek için forseps bir çift ile tüm alanlarda delik ve basın üzerinde lastik yerleştirin. Her iki delinmiş delikler için tekrarlayın. Herhangi bir sızıntıyı önlemek amacıyla tüm yapıştırılmış bağlantıların tam mühürler emin olun. </li><li> Iğne, bir 23 G 1 kullanarak, piezoelektrik inkjet ucu sokulmasını kolaylaştırmak için bölmenin her iki yanında, doğal kauçuk bir delik açmak. </li></ol> 2. Deneysel Hazırlık -20 ° C derin dondurucuda kloroform Mağaza stok lipid çözüm. Bu çalışmada, 1,2-diphytano yail-sn-glisero-3-fosfokolin (DPhPC) veya 1,2-dioleoil-sn-glisero-3-fosfokolin (DOPC) kullanılmıştır. 2 ml 25 mg / ml lipid çözeltisi, tipik olarak, bu protokolde hazırlanır ve -20 ° C&#39;de saklandığında iki ay sürecektir <ol><li> N-dekan içinde lipid tekrar süspansiyon, önce küçük bir cam kavanoza bir stok şişesinden aktarmak ve argon veya azot altında hafifçe kurulayın. Lipid daha hızlı kurumasına izin gaza daha fazla yüzey alanı ortaya çıkarmak için kurutma sırasında bir açıyla kavanoz tutun. </li><li> Sadece biraz vidalanmış kavanozun kapağı ile kurutuldu, çözelti, 1-2 saat boyunca bir desikatör içinde vakum altında bekletin. Daha sonra 25 mg / ml &#39;de lipide resolubilize n-dekan ekleyin. Vortex lipid çözelti kısa bir süre için ve 15 dakika boyunca bir banyo sonikatörü içinde sonikasyon. -20 ° C&#39;de n-dekanda yeniden lipidin saklayın </li><li> Bir stok sakaroz çözeltisini hazırlayın. Bir 1.5 ml mikrosantrifüj tüpü içinde, 300 mM sukroz 900 ul ve 100 ul ekle% 1 metilselüloz (MC) içinde. Metilselüloz jeti yardımcıları çözeltinin viskozitesini arttırmak için eklenir. İsteğe bağlı adım: Sırasıyla, görüntülemede daha fazla kontrast veya floresan ödünç koyu renkli gıda boyası veya floresan boncuk, isteğe bağlı 1 ul ekleyin. Bu çözüm hücresel ozmolariteyi maç ve microjetting sırasında kontrast sağlamak için tasarlanmış bir 300 mOsm sakaroz çözümdür. </li><li> Bir tek 1 ml plastik şırıngaya çözüm çizin. Ucu yukarı bakacak şekilde şırınga tutarken, ucuna doğru kabarcıkları çıkarmak için tekrar tekrar mili fiske ve sıkışan havayı çıkarmak için pistonu itmek. O jeti sorumlu uygun piezoelektrik kasılması engel olacak şekilde, devam etmeden önce şırınga tüm havayı tahliye etmek için emin olun. </li><li> Şırınganın ucunda bir 0.22 um filtre takın. Filtrenin içinde kalmasını önlemek için hava, dikey olarak şırınga tutun ve bir damla ucu üzerinde oluşturulmuştur kadar pistonu itin. Not: A33 mm çaplı bir şırınga filtre ünitesi, en iyi olarak çalıştığı bulunan, ancak, 3 mm çapında bir şırınga filtresi kadar küçük alternatif filtresi ölü hacim azaltmak için kullanılabilir. </li><li> Inkjet dişi luer adaptörü sökün ve güvenli bir filtrenin ucuna yere basın. Yine, hava yakalama önlemek için sıvının püskürtülmesi. Inkjet üstüne vidalayın. Tamamen takıldıktan sonra sıvı mürekkep püskürtmeli ucuna alması gerekir. </li></ol> 3. Ekipman Readying <ol><li> V-kelepçe kullanarak, mikroskop sahnede şırınga monte. Inkjet kontrol için mürekkep püskürtmeli tel takın. Not: Özel bir sahne bu protokol için inşa edilmiş, sahne tasarımı kullanıcı tarafından tespit edilebilir iken, şırınga ve numune sahibinin xy kontrolünden bağımsız xyz kontrolünü olması önemlidir. </li><li> Istenen görüntüleme elde etmek için büyütme ve gerekli lens kombinasyonunu belirleyin. İşte 10X objektif ve 10X mercek kullanılır. </li&gt; <li> Jeti ve vezikül nesil görselleştirmek için yüksek hızlı bir kamera (≥ 1,000 fps) kullanın. Önce görüntüleme, gerekli kamera kalibrasyonu gerçekleştirin. Görüntü yakalama başlatmak için kamera yazılım içinde görüntü-tabanlı otomatik tetik yararlanın. </li><li> Mikroskop sahneye sonsuzluk odasını monte edin. Sahnede yerine Kaydettiğini tarafından odasına sabitleyin. </li><li> Dikkatle doğal kauçuk delinmiş delik (Şekil 1b bakınız) ile mürekkep püskürtmeli ucu hizalamak. Bunu yapmak odasına yakın inkjet getirmek ve göz tarafından konumunu ayarlamak için, daha sonra mikroskop merceğinden daha hassas ayarlamalar yapmak. Kaba hareketler inkjet ucu zarar verebilir gibi, dikkatle devam edin. </li><li> Inkjet hizalanmış sonra, kuyuların yükleme sırasında mürekkep püskürtmeli hasar görmesini önlemek için uzak odasından şırınga geri. Bu zar içindeki delik ile hizalanmış kalır, böylece mürekkep püskürtmeli hareket tek yönlü olduğundan emin olun. </li><li> Plun hafifçe basınMürekkep püskürtmeli meme küçük bir damlacık oluşana kadar şırınganın ger. Bu bazı ilk backpressure sağlayacaktır. </li><li> Girdi püskürtme parametreleri. Bir trapez bipolar dalga için, aşağıdaki parametreleri kullanın: 20 kHz darbe frekansı, 3 mikro saniye olduğu yükselme zamanı, 35 mikro-saniye darbe süresi, 3 mikro saniye olduğu düşme zamanı, 65 V gerilim uygulanmıştır (darbe genlik) ve tetik başına 100 jet bakliyat (darbe sayısı) . Bununla birlikte, uygulanan gerilim (darbe genlik) ve darbe sayısı (tetik başına jet darbeler) vezikül boyutunu kontrol etmek için de değiştiirlebilir. </li></ol> 4. Vezikül Üretimi <ol><li> Her ikisi de kuyu tüm yüzeyini kaplayan, sonsuz bölmeye n-dekanda süspansiyon 25-30 ul lipid çözeltisi ekleyin. </li><li> Bir de, pipetleme yavaş ve düzgün bir en dış kenarı (sakaroz çözeltisi ile aynı ozmotik basıncı) 25 ul glikoz eklenmektedir. Glükoz ve lipid çözeltisi karışmaz çünkü birikimi üzerine, glikoz, bir damla, oluşturmalıdır. Ekle başka 251, bir damla yapmak ve 5-10 dakika içinde bölmenin ortasında lipid iki katmanlı zar oluşturacak ters kuyu, glukoz l. </li><li> Doğal kauçuk sayesinde mürekkep püskürtmeli yerleştirin ve dikkatli bir damlacık arayüzü bilayeri doğru yol gösterir. Tanıtılan inkjet hacmi yerinden ve bilayeri kopma gibi, yavaş yavaş bilayeri yaklaşın. </li><li> İnkjet ~ 200 um içinde olduğunda, aşama 3.8 &#39;de tarif edilen ayarlarla jeti geçerlidir. Iki tabaka arasındaki mesafe, diğer değişkenler arasında, gerilim ve darbe sayısı ile ilgili olarak temel olarak değişebilir. Bu protokol yavaş ayarlarını (gerilim ve darbe sayısı) giderek artan ve bilayeri deformasyon gözlemleyerek önerir. </li></ol> 5. Ekipman Temizleme <ol><li> Mikroskop aşamasından şırınga ayırın ve 1 ml plastik şırınga ve filtre atmayın. </li><li> Inkjet temizlemek için, eriyik içindeki daldırma ucu ile sırayla aşağıdaki çözümleri aspiren 7-10x her: ılık su,% 70 etanol ve GKD 2 O.% 70 etanol,% 2 Neutrad çözüm Inkjet aspirasyon pipet üzerinde güvenli bir şekilde uymazsa, bir adaptör oluşturmak için bir pipet kesti. </li><li> Doku ile odası kurutun. 5-10 dakika süreyle% 2 v / v ılık suda Neutrad ve sonikasyon ile 250 ml çanak içinde sonsuz odası yerleştirin. Sonikasyon sonrasında, iyice sıkıştırılmış hava altında kuyu kurutun. Kuyularda nem, lipid iki katmanlı membran stabilitesini tehlikeye atabilir ve bu, odalar 15 dakika boyunca 60 ° C&#39;de bir fırına yerleştirilir önerilir. </li></ol>

<ol><li>Liu, A. P., Fletcher, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+under+construction%3A+in+vitro+reconstitution+of+cellular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Biology under construction: in vitro reconstitution of cellular function.</a> Nature reviews. Mol. Cell Biol. 10, 644-650 (2009).</li>
<li>Yeh, B. J., Lim, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+biology%3A+lessons+from+the+history+of+synthetic+organic+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Synthetic biology: lessons from the history of synthetic organic chemistry.</a> Nat. Chem. Biol. 3, 521-525 (2007).</li>
<li>Richmond, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forming+giant+vesicles+with+controlled+membrane+composition%2C+asymmetry%2C+and+contents%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Soc.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Forming giant vesicles with controlled membrane composition, asymmetry, and contents.</a> Proc. Natl. Acad. Soc. U.S.A. 108, 9431-9436 (2011).</li>
<li>Liu, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane-induced+bundling+of+actin+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Phys%22%5BJournal%5D)">Membrane-induced bundling of actin filaments.</a> Nat. Phys. 4, 789-793 (2008).</li>
<li>Brown, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+tropicalis+egg+extracts+provide+insight+into+scaling+of+the+mitotic+spindle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Xenopus tropicalis egg extracts provide insight into scaling of the mitotic spindle.</a> J. Cell Biol. 176, 765-770 (2007).</li>
<li>Loose, M., Fischer-Friedrich, E., Ries, J., Kruse, K., Schwille, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+regulators+for+bacterial+cell+division+self-organize+into+surface+waves+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Spatial regulators for bacterial cell division self-organize into surface waves in vitro.</a> Science. 320, 789-792 (2008).</li>
<li>Angelova, M. I., Dimitrov, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome+electroformation%5BTitle%5D)+AND+%22Faraday+Disc.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Liposome electroformation.</a> Faraday Disc. Chem. Soc. 81, 301-311 (1986).</li>
<li>Bucher, P., Fischer, A., Luisi, L. P., Oberholzer, T., Walde, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+Vesicles+as+Biochemical+Compartments%3A+The+Use+of+Microinjection+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Giant Vesicles as Biochemical Compartments: The Use of Microinjection Techniques.</a> Langmuir. 14, 2712-2721 (1998).</li>
<li>Shum, H. C., Lee, D., Yoon, I., Kodger, T., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Double+emulsion+templated+monodisperse+phospholipid+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Double emulsion templated monodisperse phospholipid vesicles.</a> Langmuir. 24, 7651-7653 (2008).</li>
<li>Matosevic, S., Paegel, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stepwise+Synthesis+of+Giant+Unilamellar+Vesicles+on+a+Microfluidic+Assembly+Line%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Stepwise Synthesis of Giant Unilamellar Vesicles on a Microfluidic Assembly Line.</a> J. Am. Chem. Soc. 133, 2798-2800 (2011).</li>
<li>Hu, P. C. C., Li, S., Malmstadt, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+Fabrication+of+Asymmetric+Giant+Lipid+Vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl.+Mater.+Inter%22%5BJournal%5D)">Microfluidic Fabrication of Asymmetric Giant Lipid Vesicles.</a> ACS Appl. Mater. Inter. 3, 1434-1440 (1021).</li>
<li>Hwang, W. L., Chen, M., Cronin, B., Holden, M. A., Bayley, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+droplet+interface+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Asymmetric droplet interface bilayers.</a> J. Am. Chem. Soc. 130, 5878-5879 (2008).</li>
<li>Stachowiak, J. C., Richmond, D. L., Li, T. H., Brochard-Wyart, F., Fletcher, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inkjet+formation+of+unilamellar+lipid+vesicles+for+cell-like+encapsulation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Inkjet formation of unilamellar lipid vesicles for cell-like encapsulation.</a> Lab Chip. 9, 2003-2009 (2009).</li>
<li>Meleard, P., Bagatolli, L. A., Pott, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+unilamellar+vesicle+electroformation+from+lipid+mixtures+to+native+membranes+under+physiological+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Giant unilamellar vesicle electroformation from lipid mixtures to native membranes under physiological conditions.</a> Methods Enzymol. 465, 161-176 (2009).</li>
<li>Nishimura, K., Suzuki, H., Toyota, T., Yomo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+control+of+giant+unilamellar+vesicles+prepared+from+inverted+emulsion+droplets%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Colloid+Interface+Sci%22%5BJournal%5D)">Size control of giant unilamellar vesicles prepared from inverted emulsion droplets.</a> J. Colloid Interface Sci. 376, 119-125 (2012).</li>
<li>Teh, S. Y., Lin, R., Hung, L. H., Lee, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Droplet+Microfluidics%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Droplet Microfluidics.</a> Lab Chip. 8, 198-220 (2008).</li>
<li>Stachowiak, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilamellar+vesicle+formation+and+encapsulation+by+microfluidic+jetting%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Unilamellar vesicle formation and encapsulation by microfluidic jetting.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 4697-4702 (2008).</li>
<li>Osaki, T., Yoshizawa, S., Kawano, R., Sasaki, H., Takeuchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid-coated+microdroplet+array+for+in+vitro+protein+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Lipid-coated microdroplet array for in vitro protein synthesis.</a> Anal. Chem. 83, 3186-3191 (2011).</li>
<li>Liu, A. P., Fletcher, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+polymerization+serves+as+a+membrane+domain+switch+in+model+lipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Actin polymerization serves as a membrane domain switch in model lipid bilayers.</a> Biophys. J. 91, 4064-4070 (2006).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Birçok teknik electroformation, emülsiyon ve damlacık oluşturma 14-16 dahil olmak üzere, kabarcık üretimi için geliştirilmiştir. Ancak, yeni deneysel teknikler canlı sistemler için artan benzerliği olan biyolojik sistemlerin tasarımı için izin vermek için gereklidir. Özellikle mikroakışkan yöntemler yakın biyoloji kesecik modelleri getirerek, membran unilamellarity, büyüklüğü monodispersiteye ve iç içeriği 17,18 yöneten kontrol artan bir düzeyde teklif var. Ayrıca, mikroakışkan jeti kullanarak tanı...

<html> Bu hücre biyolojisi moleküllerin hücrelere anlayışımızı entegre içeren çok-ölçekli bir sorun olduğunu giderek daha açık hale gelmiştir. Sonuç olarak, moleküller tek tek çalışmak nasıl tam bilmeden kompleks hücresel davranışları anlamak için yeterli değildir. Bu 5 özü Xenopus lipid iki katmanlı kesecikler 4, mitotik iğ takımı ile aktin ağ etkileşim yeniden oluşturulması ile örneklendiği gibi, kısmen çok bileşenli sistemlerin ortaya çıkan davranış varlığına ve bakteriyel hücre bölünmesi makine 6 mekânsal dinamiği. Canlı sistemlerin moleküler süreçleri diseksiyon indirgemeci yaklaşımını tamamlamak için tek yolu, biyolojik bileşenlerin en az bir dizi kullanarak hücresel davranışları yeniden yapılandırma tersi bir yaklaşım almaktır. Bu yaklaşımın önemli bir parçası, bir kapalı hacim içinde biyomoleküllerin güvenilir kapsülleme, bir hücrenin önemli bir özelliği içerir. e_content &quot;&gt; birkaç strateji biomimetik sistemlerin çalışılması için biyomoleküllerin kapsülleyici için vardır. biyolojik olarak en uygun sistem, hücrenin plazma zarının tarafından uygulanan biyokimyasal ve fiziksel kısıtlamaları taklit eder. electroformation 7 tarafından dev tek katmanlı veziküller (GUVs) oluşturulması lipid iki katmanlı membranlar, olduğu, saflaştırılmış proteinler ile çalışmak için bir sorun olabilir GUV nesil 14 için en yaygın kullanılan tekniklerden biri, tipik olarak yüksek tuz tamponu 8 ile uyumsuzluk nedeniyle kötü kapsülleme verim vardır. Electroformation de büyük örnek hacimleri gerektirir (&gt; 100 ul), ve verimsiz yakın aralıklı lipid tabakaları arasında difüzyon zorluğu nedeniyle büyük molekülleri kapsar. lipid veziküllerin üretilmesi için çeşitli yaklaşımlar mikroakışkan. W / O (katmanlar, su-yağ-su arasında iki arayüzleri üzerinden geçiş bileşeni çift emülsiyon yöntemleri geliştirilmiştir / W), bir vo buharlaşması dayanırlipid iki katmanlı oluşum 9 sürücüye latile solvent. Diğer lipid iki katmanlı veziküller 10 ya da iki bağımsız adımda 11 içinde sürekli bir akış üreten bir mikroakışkan montaj hattı kullanılmıştır. Biz hızla kontrollü boyutu, kompozisyon ve kapsülleme GUVs üretmek için bir damlacık arayüz çift-katlı 12 karşı sıvı darbeleri uygulamadan dayalı alternatif bir teknik geliştirdiler. Microfluidic jeti olarak bilinen bizim yaklaşım, biyolojik sorunları çeşitli araştırılması için fonksiyonel biyomoleküler sistemleri yaratmak için bir yaklaşım sağlayarak, mevcut birkaç vezikül üretim teknikleri kombine avantajlar sunuyor.

<table><tbody><tr><td>Piezoelektrik Mürekkep Püskürtmeli</td><td>MicroFab Technologies</td><td>MJ-AL-01-xxx</td><td>xxx, mikron cinsinden delik çapını belirtir</td></tr><tr><td>Jet Drive III Denetleyici</td><td>MicroFab Technologies</td><td>CT-M3-02</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek hızlı kamera</td><td>Vizyon Araştırması</td><td>MiroEX2</td><td></td></tr><tr><td>DPhPC lipid kloroform</td><td>Avanti</td><td>850356C</td><td>içinde 33 mm PVDF şişelerde küçük alikotlar halinde sipariş edilir</td></tr><tr><td> filtreler, 0.2 ve mikro; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGV033RS</td><td></td></tr><tr><td>1 ml Şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>14823434</td><td></td></tr><tr><td>n-Decane</td><td>Acros Organics</td><td>111871000</td><td></td></tr><tr><td>Glukoz</td><td>Acros Organics</td><td>410950010</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7903-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Metilselüloz</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9084958</td><td></td></tr><tr><td>1/8 inç Akrilik</td><td>McMaster Carr</td><td>8560K239</td><td>Sonsuzluk şeklindeki oda için CAD tasarımları istek üzerine temin edilebilir</td></tr><tr><td>0,2 mm Akrilik Astra</td><td>Ürünleri</td><td>Clarex clear 001</td><td></td></tr><tr><td>Akrilik Çimento</td><td>TAP Plastikler</td><td>10693</td><td></td></tr><tr><td>Loctite 495 Süper Yapıştırıcı</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9011323</td><td></td></tr><tr><td>Loctite 3494 UV Güçlendirici Yapıştırıcı</td><td>Strobeller Tedarik</td><td>30765</td><td></td></tr><tr><td>Doğal kauçuk</td><td>McMaster Carr</td><td>85995K14</td><td></td></tr><tr><td>Özel sahne</td><td>ev yapımı</td><td>N/A</td><td>CAD tasarımları istek üzerine temin edilebilir</td></tr></tbody></table>

mikroakışkan jeti kullanarak çift katlı lipid vesikül Üretimi

Lipid Bilayer Vesicle Generation Using Microfluidic Jetting

Aşağıdan yukarıya sentetik biyoloji potansiyel biyokimyasal sistemleri ve, minimal organizmalar soruşturma ve yeniden yapılandırmak için yeni bir yaklaşım sunuyor. Bu gelişmekte olan bir alan aşağıdan yukarıya karmaşık, işleyen sistemlere temel biyolojik bileşenlerini tasarlamak ve oluşturmak için mühendisleri, kimyagerler, biyologlar, ve fizikçileri yürütmektedir. Bu gibi alt-up sistemleri temel biyolojik öğrenmek ve yeni tedavilerin 1,2 yapay hücre gelişimine neden olabilir. Dev tek tabakalı veziküller (GUVs) nedeniyle hücre benzeri zar yapısı ve boyutu sentetik biyoloji için bir model platform olarak hizmet edebilir. Mikroakışkan jeti veya microjetting, kontrollü boyutu, zar kompozisyonu, transmembran protein dahil edilmesi, ve kapsülleme 3 GUVs üretimi sağlayan bir tekniktir. Bu yöntemin temel ilkesi, bir süspansiyon haline l deforme edilmesi için bir piezo-mürekkep püskürtme çalıştırılan cihazı tarafından oluşturulan birden çok, yüksek frekanslı darbe sıvı kullanılmasıdırBir GUV içine IPID iki tabakalı. Süreç bir sabun filmden sabun baloncukları üfleme benzer. Jeti çözeltisi kapsayan çözeltisinin kompozisyon ve / veya bileşenlerin bileşimi değiştirilerek ikili katmanın dahil, araştırmacılar özelleştirilmiş vezikülleri oluşturmak için bu tekniği uygulayabilir. Bu kağıt microjetting bir damlacık arayüzü bilayeri basit veziküller oluşturmak için prosedürü açıklar.

Bu makine parçaları ve manuel mikrometreden monte özel bir kademe (Şekil 1) ile, geleneksel bir ters flüoresan mikroskop üzerinde bir mikro-akışkan püskürtme kurulum toplandı. Inkjet karakterizasyonu kese oluşturma işlemi içgörü sağlar. Mürekkep püskürtmeli meme ve lipid çift katlı arasındaki mesafeyi değiştirilmesi kuvvet, zarı deformasyonuna neden olmak için uygulanan etkiler. Çift-katlı yakınlık jet akışı odaklanır ve uzak vezikül kuşağın alanına enerji dağıtıcı gelen membran engeller. Girdap seyahat...

Bir damlacık arayüz lipid ikili tabakasına karşı mikroakışkan jeti zar asimetri, zar proteinlerinin dahil edilmesi, ve malzeme kapsülleme üzerinde kontrol ve veziküllerin üretilmesi için güvenilir bir yöntem sağlar. Bu teknik, bölümlere biyomoleküllerin istenen biyolojik sistemlerin çeşitli çalışma uygulanabilir.

Mikroakışkan jeti kullanarak çift katlı lipid Vesikül Üretimi

Bottom-up synthetic biology presents a novel approach for investigating and reconstituting biochemical systems and, potentially, minimal organisms. This ...

Bu prosedürün genel amacı; membran, lümen, molarite, monodispersite ve iç içerik üzerinde artırılmış kontrolle fosfolipid çift katmanlı veziküller oluşturmaktır. CAD kullanılarak, akrilik levhalar ve doğal kauçuktan bir hazne imal edilir. Haznenin lipidler ve solüsyonla doldurulmasıyla askıda bir lipid çift katmanı üretilir.Ardından, enkapsüle edilecek çözeltiyi içeren bir inkjet, püskürtme düzeneği ile birlikte kurulur. Uygun ayarlar belirlendikten sonra, püskürtülen sıvı darbeleri lipid çift katmanlı veziküller oluşturacaktır. Sonuç olarak, mikroakışkan püskürtme yöntemi, tekrarlanabilir monodispers çift katmanlı veziküller sağlar.Bu tekniğin elektro formasyon, emülsiyon veya damlacık üretimi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı; membran, tek taraflı molarite, monodispersite ve iç içeriklerin kontrol düzeyinin artırılmış olmasıdır. Prosedürü, bir laboratuvarda lisansüstü öğrencisi olan Johanna Harrow gerçekleştirecek ve lisans öğrencisi Kara Patel ona yardımcı olacaktır. CAD yazılımı kullanarak, lazer kesici ile akrilikten üretilebilecek bir hazne şekli çizin; ardından, monte edilmiş akrilik haznenin her iki yanına 1/16 inç çapında delikler açın. Bu delikler sonsuzluk şekli

lipid-bilayer-vesicle-generation-using-microfluidic-jetting

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu protokol, homojen bir yüksek derecede mikronaltı boyutlarda lipid kesecikler hazırlanması için bir çekme yöntemi açıklar. Bu yöntem, lipozom preparatı için kontrollü bir nitrojen akışı hızları ile bir basınç kontrol sistemi kullanır. Lipid...

Nano ölçekli Lipid Vesiküller Hazırlanması için Sabit Basınç kontrollü Ekstrüzyon Yöntemi

Desteklenen ikili lipid tabakalarıdır ve doğal zar parçacıkları hücre zarlarının özelliklerini yaklaşık ve analitik çeşitli stratejiler dahil edilmesi uygun sistemlerdir. Burada destekli lipid iki katmanlı kaplı SiO 2 boncuklar, fosfolipid vezikülleri ya da doğal zar parçacıklarının oluşan mikrodizileri hazırlanması için bir yöntemi göstermektedir.

Bir Çekçek tabanlı Meclisi Yöntemi ile Biomembrane Mikroarray&#39;ler oluşumu

Desteklenen lipid çift katmanlarının hazırlanması ve atomik kuvvet mikroskobu ve kuvvet spektroskopisi kullanılarak karakterizasyonu için bir protokol açıklıyoruz.

Atomik Kuvvet Mikroskobu Görüntüleme ve Desteklenen Lipid Bilayers Kuvvet Spektroskopisi

Protein fonksiyonelleştirilmiş düzlemsel cam destekli lipid çift katmanlarının hazırlanması, içindeki protein hareketliliğinin belirlenmesi ve protein yoğunluklarının ölçülmesi burada gösterilmiştir. Yüksek uzay-zamansal çözünürlüğe sahip tek çift katmanlı yerleşik florokromların görselleştirilmesine olanak tanıyan, gürültüsü azaltılmış bir Toplam İç Yansıma mikroskobu oluşturmak için bir yol haritası özetlenmiştir.

Planar on Tek Molekül Floresans Mikroskopi bilayers Desteklenen

Bir depolanabilir, taşınabilir lipit iki katmanlı oluşum sistemi göstermektedir. Dondurulmuş bir membran ön-madde çevre sıcaklığına getirildiğinde bir lipid iki-tabakalı zar üzerinden% 80 başarı oranı ile 1 saat içinde oluşturulabilmektedir. Bu sistem iyon kanalları ile ilişkili zahmetli süreçler ve uzmanlık azaltacaktır.

Bir polidimetilsiloksan İnce Film Kullanarak Otomatik çift katlı lipid Membran Oluşumu

Burada, pH modülasyonuna dayalı etiketsiz bir yöntem kullanarak protein-fosfoinositid etkileşimlerini incelemek için bir mikroakışkan platform bağlamında desteklenen bir lipid çift katmanı sunmaktayız.

PIP-on-a-chip: Protein-fosfoinositid Etkileşimlerinin Etiketsiz Bir Çalışması

Bu protokolde tek lipid ve multi-lipid vesicles, desteklenen lipid bilayerler ve askıda lipid bilayerleri taklit eden hücre oluşumu açıklanmaktadır. Bu in vitro modeller çeşitli lipit tiplerini içerecek şekilde uyarlanabilir ve çeşitli molekül ve makromolekül etkileşimlerini araştırmak için kullanılabilir.

Moleküler Etkileşimlerin Çalışması için Desteklenen ve Askıya Alınan Lipid Bilayer Modellerinin Hücre Taklit Montajı

Burada, tek moleküllü toplam iç yansıma floresan (smTIRF) mikroskobu kullanılarak yapay kalabalık lipit membranları üzerindeki tek moleküllerin bağlanma, hareketlilik ve montajını gerçekleştirmek ve analiz etmek için bir protokol sunulmaktadır.

Tek Moleküllü Difüzyon ve Polimer Kalabalık Lipid Membranlara Montaj

Mevcut protokol, biyouyumlu lipozomlar üretmek için mikroakışkan bir teknik olan oktanol yardımlı lipozom montajını (OLA) tanımlamaktadır. OLA, verimli kapsülleme ile monodispersed, mikron boyutunda lipozomlar üretir ve anında çip üzerinde deneylere izin verir. Bu protokolün sentetik biyoloji ve sentetik hücre araştırmaları için özellikle uygun olması beklenmektedir.

Biyomühendislik için On-Chip Oktanol Destekli Lipozom Montajı

Yağda su emülsiyonlarında (tapalar) kombinatoryal kütüphanelerin üretimi için polidimetilsiloksan (PDMS) bazlı iki katmanlı bir cihazın imalatı burada sunulmaktadır. Fiş üretimini otomatikleştirmek için gerekli donanım ve yazılım protokolde detaylandırılmıştır ve kantitatif bir floresan fiş kütüphanesinin üretimi de gösterilmiştir.

Kombinatoryal Fiş Üretimi için İki Katmanlı Mikroakışkan Cihaz

Bu makale, iç, halka ve dış bölgelerde özelleştirilmiş elektriksel iletkenliğe sahip, vezikül içinde vezikül yapısına sahip bileşik Dev Unilamellar Veziküllerin (cGUV'ler) hazırlanması için bir yöntem sunar. Elektroformasyon, ozmotik şok yoluyla stomatositlere ve cGUV'lara dönüştürülen basit GUV'leri sentezler ve çekirdekli hücrelerin biyofiziğini incelemek için değerli bir model sağlar.

Bileşik Dev Unilamellar Veziküllerin Sentezi: Çekirdek Hücrelerin Biyomimetik Bir Modeli

Öğrenin, mikroakışkan jetleme ile çift katlı lipid veziküllerinin üretimini. Bu yöntem, membran asimetrisi ve protein dahil edilmesi üzerinde hassas kontrol sağlar. Biyofizik ve biyoteknoloji araştırmaları için tekrarlanabilir sonuçlar sunar.

Mikroakışkan jeti kullanarak çift katlı lipid Vesikül Üretimi

Daha fazla video keşfet