Name: Hızlı büyüyen Tümör üreten hücreleri tarafından salgılanan faktörler tarafından işe alınmış İzleme İşlevsellik ve vaskülatürüne morfolojisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Öğrenin matrigel plug assay yöntemiyle kanser hücrelerinin salgıladığı faktörlerin anjiyogenik potansiyelini fare modelinde değerlendirmeyi. Ultrason ve endomikroskopi ile kan damarı yoğunluğu ve morfolojisi analiz edilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Satchi-Fainaro araştırma laboratuvarı kısmen Uluslararası Kanser Araştırmaları Derneği (AICR), Alman-İsrail Vakfı (GIF), İSRAİL BİLİM VAKFI (Hibe No. 1309/10), İsviçre Köprüsü Ödülü ve İsrail Ulusal Nanoteknoloji Girişimi (INNI), Odak Teknoloji Alanı (FTA) programı: Kişiselleştirilmiş Teranostikler için Nanotıp ve Leona M. ve Harry B. Helmsley Nanoteknoloji Araştırma Fonu tarafından sağlanan hibelerle desteklenmektedir.

NOT: Tüm hayvan prosedürleri onaylanmış ve Tıp Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi Tel Aviv Üniversitesi Sackler Okulu (IACUC) standartlarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir. 1. Klima Medya Hazırlık <ol><li> Bir hacim içinde 10 cm&#39;lik bir kültür plakasına Tohum, 2 x 10 6 U 87 mg hücreler 8 mi Dulbecco tadil edilmiş Eagle ortamı,% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 1 penisilin / streptomisin / nistatin çözeltisi ile desteklenmiş (DMEM). </li><li> 37 ° C&#39;de inkübe hücreleri C °; 48 saat tam konfluense elde edilinceye kadar% 5 CO 2. </li><li> 10 ml&#39;lik bir şırınga kullanarak, 15 ml&#39;lik bir tüp içine 0.45 um&#39;lik bir filtre ile plaka tüm orta çekilme ve filtre edin. </li><li> Hücreler plakayı yıkayarak olmadan, 1 ml tripsin çözeltisi (% 0.25) ekleyin ve inkübe edilir. </li><li> Tüm hücreler müstakil zaman,% 10 FBS ile takviye edilmiş en az 5 ml DMEM kullanılarak tripsin inaktive etmek üzere ve bir hücre sayımı preform. </li><li<html> &gt; Bir hemositometre ya da diğer hücre-sayım aygıtı kullanılarak hücrelerin sayısını ve kullanılan sayım yöntemine göre hücre sayısını hesaplayın. NOT: Bu CM konsantrasyonunu normale için daha sonra kullanılacaktır. </li><li> Cam yuvarlak dipli bir şişeye CM aktarın ve yüksek vakum döner buharlaştırıcı ile konsantre edilmiştir. İstenirse sürecini hızlandırmak için, 37 ° C banyo sıcaklığı artar. CM macun-benzeri bir yapı elde kadar devam edin. </li><li> 400 ul tuzlu su içinde her kültür plaka CM süspanse. Birden fazla plaka kullanılırken, eşdeğer hacimde kullanılır. Örneğin, 2 kültür levhaları, 800 ul kullanın. 4 fare için her levha kullanın. </li><li> Farklı hücre hatları veya tedavileri karşılaştırmak amacıyla, adım 1.6 alınan hücre oranına göre ses seviyesini ayarlayın. Bir tabak 1.5x daha fazla hücre içeriyorsa, örneğin, önceden var olan 400 ul tuz çözeltisi 200 ul ilave edin. Bu düzeltilmiş CM olacak </li></ol>Fareler içine başlığı &quot;&gt; 2. ECM-mimik Jel Tak Aşılama <ol><li> Farelere ECM-mimik jel aşılayarak önce aşağıdaki malzemeleri hazırlayın: <ol><li> Büyüme faktörleri (buz üzerinde 4 ° C de, deney bir gün önce, bir gece boyunca çözülme) fenol içermeyen ECM mimik jel azaltmıştır. </li><li> Elektrikli tıraş makinesi. </li><li> Fareler uyutmak için ketamin ve ksilazin. </li><li> Buz soğuk 1.000 ul steril ipuçları. </li><li> Buz soğuk 1 ml şırınga ve 27 G iğne. </li></ol></li><li> Her fare için CM arındırılmış 80 ul içeren 1.5 ml&#39;lik Eppendorf tüp hazırlayın ve buz üzerinde tutmak. </li><li> Her bir tüpe, 600 ul buz gibi soğuk büyüme faktörlerinin buz üzerinde 4 ° C&#39;de gece boyunca çözülmüş azaltılmış fenol içermeyen ECM mimik jel ekleyin. ECM mimik Jel 4 ° C&#39;de sıvı olan ve vücut sıcaklığında katılaşan; katılaşan ECM-mimik jel önlemek için, buz gibi soğuk 1.000 ul ipuçlarını kullanın. Dikkatle kabarcıklar oluşturan olmadan tüpleri karıştırın ve buz üzerinde tutmak. </li><li> 6 haftalık B uyutmakKetamin (100 mg / kg) ve ksilazin (12 mg / kg) ile ALB / c farelerinde indüklenmiştir. Önce deney başlamadan kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi, yani göre uygun anestezi onaylayın. Artık bir firma ayak tutam yanıt zaman hayvanlar anestezi onların doğru uçağı ulaştı. </li><li> Farelerin karın bölgesi Tıraş ve cerrahi fırçalayın / alkol kullanarak dezenfekte. </li><li> Eppendorf tüp subkutan içeriğini enjekte etmek soğuk 1 ml şırınga ve bir 27 G iğne kullanın. Kabarcık oluşmasmı önlemek üzere çok yavaş enjeksiyon yapın. Tüm ses uygulanır sonra katılaşma oluşuncaya kadar, birkaç dakika için iğne çıkarma yok. </li></ol> Ultrason kullanma 3. Değerlendirme ECM-mimik Jel Tak damarlanma NOT: protokol bu bölümü ultrason görüntüleme sistemi, veya yetkili teknisyen yardımı yapan önceki bilgi gerektirir. <ol><li> Başlamadan önce, f varmalzemeleri ve aletleri hazır ollowing: <ol><li> Elektrikli tıraş makinesi. </li><li> Tüy Dökücü Krem. </li><li> Fareler uyutmak için ketamin ve ksilazin. </li><li> Microbubbles olmayan hedefli. </li><li> Aktivasyon cihazı. </li><li> 55 MHz 708 prob ve 3D edinme mikromanipülatör dahil olmak üzere ABD görüntüleme sistemi. </li></ol></li><li> Fişler aşılamadan sonrası üç hafta içinde vaskülarizasyonunu ölçün: Not: A-87 MG-tabanlı bir hayvan modelinde, 3 hafta görüntüleme için ideal bir zaman noktasını temsil bulunmuştur. Farklı ayarlar altında, fişlerin aşılamayı takip eden birkaç gün başlayan vaskülarizasyon kinetik kalibre. <ol><li> Ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (ug / kg 12 mg) kullanılarak fareler anestezi. Önce deney başlamadan kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi, yani göre uygun anestezi onaylayın. Artık bir firma ayak tutam yanıt zaman hayvanlar anestezi onların doğru uçağı ulaştı. </li><li> Tıraşfarelerin karın bölgesi ve tüy dökücü krem ​​ile tedavi. </li><li> Mikro-manipülatör sahnede supinely fareler Fix. </li><li> 1 ml şırınga içeren tuzlu su ve 30 G iğne kullanarak, kuyruk ven içine iğne yerleştirin sıkıca iğne düzeltmek ve şırınga gevşetin. </li><li> Kontrast 3D modu görüntü elde etme oturumu için ayarlama: <ol><li> Basın &quot;3D&quot; 3D Motor sahne başlatmak ve istenen tarama alanının ortasında dönüştürücüyü yerleştirmek için. </li><li> Basın &quot;3D&quot; ve giriş tarama mesafe ve adım boyutu, daha sonra &quot;Scan&quot; tuşuna basın. </li><li> Tüm fiş görüntülenen 3D görüntü verileri tarandı emin olun. Değilse, tüm fiş tarama ve tekrar adım 3.5.2 görünür, böylece dönüştürücüyü ayarlayın. </li><li> Basın &quot;Kontrast&quot; ve zaman kazancı tazminat itin (TGC) Görüntüyü koyulaştırmak için sola kontrol eder. </li></ol></li><li> Desi bir şişe bir mikser kullanılarak mikro-kabarcıkları etkinleştirme45 saniye için mikro-kabarcıkların aktivasyonu için gnated. </li><li> 1 ml 50 ul serum fizyolojik ile kabarcıkların 50 ul şırınga içinde karıştırın. </li><li> Aktive mikrokabarcıkların içeren bir şırınga ile tuzlu içeren gevşek şırınga değiştirin. 3D edinimi motoru kullanarak, bir kararlı duruma ulaşması ve ardından fiş 3D kontrastlı sine döngü elde etmek baloncuklar için birkaç saniye bekleyin, farelerin kuyruk damar içine enjekte seyreltilmiş mikrokabarcıkları: <ol><li> Basın &quot;3D&quot; ve 3D kontrastlı görüntüler elde ve daha sonra görüntü verilerini kaydetmek için &quot;Cine deposu&quot; basın &quot;Scan&quot; seçeneğini seçin. </li><li> Basın &quot;3D&quot; ve tıklayın mikrokabarcıkları imha etmek &quot;3D yok&quot;. </li><li> Basın &quot;3D&quot; Tekrar ve daha sonra, bir post-imha sine döngü elde &quot;Cine Mağaza&quot; basın &quot;Scan&quot; seçeneğini seçin. </li></ol></li><li> Görüntü çerçeveleri öncesi bindirme ve mikrokabarcıkların sonrası imha oluşturun: <ol><li> In &amp;# 8220; Referans Ayarları &quot;Referans oluştur&quot; Ekranın sol tarafındaki tıklayın &quot;. </li><li> Basın &quot;Çalışma Yönetimi&quot; kazanılmış öncesi imha sine döngü açmak için. </li><li> Daha sonra &quot;3D içine Load&quot; tıklayın, yeşil kontrast bindirme oluşturmak için &quot;Süreç Cine&quot; tıklayın. </li></ol></li><li> Fişler içinde kan hacmi için ortaya çıkan 3D görüntü ölçmek amacıyla ABD görüntüleme yazılımı kullanın: <ol><li> Basın &quot;Tarama / Freeze&quot; ve ardından &quot;Mod ayarları&quot; tuşuna basın. </li><li> &quot;Volume&quot; tıklayın ve &quot;Paralel&quot; seçeneğini seçin. </li><li> Konturları bir dizi segmentlere hedef doku 3D birimi oluşturun. </li><li> Segmentasyonu tamamlamak için &quot;Finish&quot; tıklayınız. NOT: kontrast madde hacmi ekranın sol alt tarafında görüntülenir. </li></ol></li><li> Prosedürün sonunda, uzak bir sıcak, temiz, kuru, sessiz bir ortamda fareler yerleştirindiğer hayvanlar. Kemirgen 12-14 santim uzakta yerleştirilmiş bir piyasadan temin cerrahi ısıtma pedi ya da akkor lamba (50-75 watt) kullanarak sıcaklık sağlayın. Dik duruş korumak ve normal yürüme kadar sürekli fareler izleyin. </li></ol></li></ol> Fibered Konfokal endomikroskopi Kullanılması 4. Değerlendirme ECM-mimik Jel Tak damarları Morfoloji NOT: protokolün bu kısmı hemen ardından ABD görüntüleme yapılır ve lifli konfokal endomikroskopi görüntüleme sistemi, veya yetkili teknisyen yardımı yapan önceki bilgi gerektirir. <ol><li> Başlamadan önce, aşağıdaki malzemeler ve aletler hazır bulundurun: <ol><li> Forseps, makas ve emilebilir dikiş iplikleri gibi Cerrahi aletler. </li><li> FITC ile konjüge edilmiş dekstran (70 Kda). </li><li> Kalibrasyon çözeltiler (üç tüp, her biri hidrojen peroksit, su ya da floresan çözeltisi). </li><li> görüntüleme sistemi veÜreticiye göre, kan damarlarının görüntüleme için uygun prob. </li></ol></li><li> Ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (ug / kg 12 mg) kullanılarak fareler anestezi. </li><li> , Kuyruk damarından, 10 mg / ml FITC-işaretli dekstran 200 ul iv uygulayın. </li><li> Cerrahi bodur / alkol kullanarak karın bölgesi dezenfekte ve fiş yaklaşık 1 cm küçük bir kesi uygulanır. </li><li> Sağlam fiş tutarken yavaşça tıkacın üstüne yerleştirilmesini endomikroskopi sonda yerleştirin. </li><li> Toplama: <ol><li> Prob fiş üzerinde ayarlandıktan sonra, basın ayak pedalını kullanarak &quot;lazer başlat&quot;. floresan ekranda gösterilir edilmelidir. </li><li> Ekranda &#39;Record&#39; tuşuna basarak veya ayak pedalı ile &#39;Seç&#39; tarafından (30 sn kadar) kısa film Edinme. </li><li> Filmler arasında, bir tüp içeren su ucu yerleştirerek prob yıkayın. </li><li> Bittiğinde, sonda kaldırmak ve bir pamuk uçlu ucu temizleyin. </li></ol></li><li> Ortalama A.Ş. analiz etmekSSEL çapı: <ol><li> Damar algılama modülü penceresini açmak için üst paneldeki &quot;mikrodamarlar algıla&quot; ikonuna tıklayın. </li><li> &quot;Tercihler&quot; tıklayın ve &quot;ilgi İstatistiğin&quot; ve &quot;Ekran&quot; modunda &quot;Ekran histogram barlarda&quot; in &quot;damar çapı ortalama&quot; işaretleyin. </li><li> Tıklayın Seçilen ölçümleri görüntülemek için &quot;Algılama&quot;. </li></ol></li><li> Kan damarlarının bitişik alanlarda floresan sinyal yoğunluğunu analiz için: <ol><li> Sol panelde &quot;daire yatırım getirisi oluştur&quot; üzerine tıklayın ve ilgi alanındaki bir daire oluşturun. </li><li> Bu bölgeye ilişkin değerlerini hesaplamak için &quot;ROI içinde Compute histogramı&quot; tıklayın. </li></ol></li></ol> Farelerin 5. Post-prosedürel Tedavi <ol><li> Her görüntüleme prosedürü sonunda, diğer hayvanlardan uzakta sıcak, temiz, kuru, sessiz bir ortamda fareler yerleştirin. Ticari-a kullanarak sıcaklık sağlayınullanılabilir cerrahi ısıtma yastığı veya akkor lamba (50-75 W), kemirgen uzak içinde 12-14 yerleştirilir. Dik duruş korumak ve normal yürüme kadar sürekli fareler izleyin. </li><li> Ek zaman noktalarında fişler &#39;damarlanma daha fazla analiz için, aşağıdaki kurtarma koşulları geçerlidir: <ol><li> Emilebilir sütürler kullanılarak küçük bir kesi sütür. </li><li> Deri altından gibi buprenorfin (1 mg / kg) olarak farenin ağrı kesiciler ve tek tek kafeslere geri döner. </li><li> Daha fazla analjezik tedavi gereklidir ve olup olmadığını belirlemek için tüm hayvanları gözlemlemek izlemek ve sıkıntı değerlendirmek için günlük yeniden değerlendirmek. </li></ol></li><li> Deneyin son noktada, sonra servikal dislokasyon yapılmıştır, ilk uygulama izofloran ile fare, euthanize. </li><li> Ek görüntüleme ilk görüntüleme adımları izleyerek haftalarda yapılacak ise, tüm işlemler mümkün olduğunca steril tutulmalıdır. Bir cerrahi cilt fırçalama yapılmalıdır, steril waTer ve steril pamuk ip uçları endomikroskopi probu temizlemek için kullanılmalıdır ve prob steril su kullanılarak her bir hayvan arasında dezenfekte edilmelidir. </li></ol>

<ol><li>Kibbey, M. C., Grant, D. S., Kleinman, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+SIKVAV+site+of+laminin+in+promotion+of+angiogenesis+and+tumor+growth%3A+an+in+vivo+Matrigel+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Role of the SIKVAV site of laminin in promotion of angiogenesis and tumor growth: an in vivo Matrigel model.</a> J Natl Cancer Inst. 84, 1633-1638 (1992).</li>
<li>Passaniti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+quantitative+method+for+assessing+angiogenesis+and+antiangiogenic+agents+using+reconstituted+basement+membrane%2C+heparin%2C+and+fibroblast+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">A simple, quantitative method for assessing angiogenesis and antiangiogenic agents using reconstituted basement membrane, heparin, and fibroblast growth factor.</a> Lab Invest. 67, 519-528 (1992).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+models+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo models of angiogenesis.</a> J Cell Mol Med. 10, 588-612 (2006).</li>
<li>Auerbach, R., Lewis, R., Shinners, B., Kubai, L., Akhtar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+assays%3A+a+critical+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis assays: a critical overview.</a> Clin Chem. 49, 32-40 (2003).</li>
<li>Johns, A., Freay, A. D., Fraser, W., Korach, K. S., Rubanyi, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+estrogen+receptor+gene+prevents+17+beta+estradiol-induced+angiogenesis+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Disruption of estrogen receptor gene prevents 17 beta estradiol-induced angiogenesis in transgenic mice.</a> Endocrinology. 137, 4511-4513 (1996).</li>
<li>Adini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrigel+cytometry%3A+a+novel+method+for+quantifying+angiogenesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Matrigel cytometry: a novel method for quantifying angiogenesis in vivo.</a> J Immunol Methods. 342, 78-81 (2009).</li>
<li>Matsumura, Y., Maeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+concept+for+macromolecular+therapeutics+in+cancer+chemotherapy%3A+mechanism+of+tumoritropic+accumulation+of+proteins+and+the+antitumor+agent+smancs%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A new concept for macromolecular therapeutics in cancer chemotherapy: mechanism of tumoritropic accumulation of proteins and the antitumor agent smancs.</a> Cancer Res. 46, 6387-6392 (1986).</li>
<li>Lindner, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbubbles+in+medical+imaging%3A+current+applications+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Microbubbles in medical imaging: current applications and future directions.</a> Nat Rev Drug Discov. 3, 527-532 (2004).</li>
<li>Kuliszewski, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+of+endothelial+progenitor+cell+engraftment+using+contrast-enhanced+ultrasound+and+targeted+microbubbles%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging of endothelial progenitor cell engraftment using contrast-enhanced ultrasound and targeted microbubbles.</a> Cardiovasc Res. 83, 653-662 (2009).</li>
<li>Stieger, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+assessment+of+angiogenesis+in+a+matrigel+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Ultrasound assessment of angiogenesis in a matrigel model in rats.</a> Ultrasound Med Biol. 32, 673-681 (2006).</li>
<li>Erez, N., Truitt, M., Olson, P., Arron, S. T., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-Associated+Fibroblasts+Are+Activated+in+Incipient+Neoplasia+to+Orchestrate+Tumor-Promoting+Inflammation+in+an+NF-kappaB-Dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Manner.+Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Cancer-Associated Fibroblasts Are Activated in Incipient Neoplasia to Orchestrate Tumor-Promoting Inflammation in an NF-kappaB-Dependent.</a> Manner. Cancer Cell. 17, 135-147 (2010).</li>
<li>Segal, E., Satchi-Fainaro, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+development+of+polymer+conjugates+as+anti-angiogenic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Design and development of polymer conjugates as anti-angiogenic agents.</a> Adv Drug Deliv Rev. 61, 1159-1176 (2009).</li>
<li>Satchi-Fainaro, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+identification+of+glioblastoma+cells+generating+dormant+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Prospective identification of glioblastoma cells generating dormant tumors.</a> PLoS One. 7, 44395(2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Tamamlayıcı görüntüleme yöntemleri birleştiren farklı anjiyogenez bileşenlerinin damar yoğunluk, fonksiyonellik ve morfolojisi hakkında bilgi iktisap izin verir. ECM-mimik jel fişler üzerinde yükleme CM fişi içine işe ve damar dışına olan endotel hücreleri gibi, diğer hücre popülasyonlarının ayrılan bir tümör mikro, üretir. Paralel, performans olarak, kontrastlı ABD görüntüleme ve lifli konfokal endomikroskopi görüntüleme mikrokabarcıkları, biz kanser hücreleri kendilerini olmadan hücrelerin...

Matrigel fiş anjiyojenez tahlil, ilk önce Kibbey ve arkadaşları tarafından tarif edilmiştir. Bu peptid SIKVAV (Ser-lle-Lys-Val-Ala-Val) 1 ile anjiyojenez uyarılmasını elde etmek için kullanılmıştır 1992 yılında. Başka in vivo anjiyojenez deneylerinin aksine, fare korneal anjiyojenez veya tavuk koriallantoik zar deneylerinde olduğu gibi, bu deney 2 gerçekleştirmek için nispeten kolaydır. enjekte ECM mimik jel hücreleri, pro-anjiyojenik veya bir anti-anjiyojenik bileşikler ve / veya faktörler içerebilir. Bir anti-anjiyojenik bileşiğinin etkinliğini değerlendirerek, fiş normal vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) ve fibroblast büyüme faktörü (FGF) &#39;in bir karışımını ihtiva eder ve anti-anjiyojenik bir madde, doğrudan fiş ya da sistemik olarak 3 içine tatbik edilebilir, 4. Birkaç dakika içinde katılaşır nerede ECM-mimik jel deri altına enjekte edilir. Ortaya çıkan fiş kan damarı işe değerlendirilmesi typicall olduğunuY flöresin izotiyosiyanat enjeksiyonu (FITC), aşağıdaki flüoresan sinyal ölçümü ile, tıkacın içinde hemoglobin düzeyi ölçülerek yapılan endotel özel markörler için histoloji kısımlarının immün ya da sıralama floresan-aktive edilmiş hücre (FACS) 2,5 ile, dekstran -etiketli 6. Ancak, bu değerlendirme sadece uç nokta analizi sağlar ve kan damarlarının işlevleri ve morfolojisi hakkında bilgi yoksun. Kan içeriği damar büyüklüğü ve kan durgun su ölçüde etkilenir Ek olarak, plazma hacmi ölçümleri ya da hemoglobin düzeyleri ile ya da bir gösterge olarak dekstran-FITC ile, yanıltıcı olabilir. Işe damar gelişmiş geçirgenlik ve tutma (EPR) etkisi 7 ile karakterizedir Bu özellikle önemlidir. Biz burada iki tamamlayıcı görüntüleme yöntemleri birleştirerek işe kan damarlarının görüntülenmesi için yeni, daha hassas, yöntem öneriyoruz. Higkan damarı yoğunluğu hakkında değil, aynı zamanda kendi morfolojisi ve işlevselliği değil sadece bilgi verebilir Intravital lifli-konfokal endomikroskopi ile birlikte h-çözünürlüklü mikrokabarcıklar kontrast geliştirilmiş ultrason (US). Ayrıca, bu analiz, böylece anjiyojenez kinetik izlenmesine olanak veren çeşitli zaman noktalarında gerçekleştirilebilir. ABD vasküler bölmeye 8-11 münhasıran kalır mikrokabarcıkların intravenöz (iv) enjeksiyonu takiben kan damarları görüntüleme için yüksek uzaysal çözünürlüğü sahip bir yaygın kullanılan görüntüleme yöntemidir. Mikrokabarcıklar bir ABD darbesi ile heyecanlı ve böylece iyi bir kontrast madde olarak hizmet zaman güçlü bir ekojenik sinyal üretmek gaz dolu mikrokabarcıklar vardır. Fiş 3D görüntüler mikro kabarcıklar imha aşağıdaki ABD görüntüleme sistemi yazılımı kullanılarak elde edilir. Ortaya çıkan görüntüler mikro-kabarcıkların öncesi ve sonrası imha görüntü karelerinden oluşan ve renk video yoğunluğundaki farkı yansıtır. Bu yerleştirilmiştirGörüntüler otomatik olarak yazılım tarafından görüntülenir. Sonuç olarak, fiş içinde fonksiyonel damarların yüzde belirlenebilir. Konfokal endomikroskopi lifli Yüksek çözünürlüklü kan damarları morfoloji raporlanması ile tamamlayıcı görüntüleme yöntemi olarak hizmet vermektedir. Bu minimal invaziv yöntemde, görüntüler FITC konjuge dekstran 12 iv uygulamasını takiben elde edilir. floresan polimer kana boyayan ve böylece kan damarları morfoloji ve kan akışı için bir &#39;kontrast madde&#39; olarak hizmet vermektedir. Enjekte polimer 70 KDa bir boyutta olduğu tümör damar sistemi içinde bulunan Dahası, sadece sızan damarları geçebilir. Bu, kan damarlarının dışında FITC etiketli dekstran yüksek bir arka plan ile sonuçlanacaktır. Sonuç olarak, lifli konfokal endomikroskopi kör uçlar ile, tümör neovasculature- büyütülmüş, sızan, son derece karışık damarları EPR etkisi tipik özelliklerini görselleştirmek için kullanılabilmektedir. Bu sistem modeli descri edildiU-87 MG insan glioblastoma ve uykuda klon 13 anjiyojenik potansiyeli karşılaştırıldığında yatak. Fişler içinde damarlanması üç hafta ECM-mimik jel aşılama sonrası değerlendirildi. Bu gösterildi bundan CM içeren fişler içinde vaskülarizasyon U-87 MG uyuyan tümör üreten hücrelerden CM içeren fişler içinde damarlanma ile karşılaştırıldığında tümör üreten hücreler önemli ölçüde sayı, yoğunluk ve işlevsellik bakımından artmıştır hızlı büyüyen. Bu nedenle, yazarlar CM izole sonucuna mümkün U 87 mg hızlı büyüyen tümör hücreleri üreten atıl tümör üreten hücrelerden CM kıyasla pro-anjiyojenik faktörler arasında yüksek düzeyde ihtiva etmektedir. Bu faktörler, (son olarak endotelyal hücrelerin tüp şekilli yapıların oluşumunu, yani, proliferasyon, çimlenme, göç ve) pozitif anjiyojenik kaskadın tüm adımları etkileyerek fonksiyonel kan damarlarının oluşumunu teşvik eder.

<table><tbody><tr><td>Döner Vakum Evaporatör</td> <td>-</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Büyüme faktörleri fenol içermez Matrigel</td><td>BD Bioscience</td><td>FAL356231</td><td>Gece boyunca 4 ° C'de çözülür; Buz üzerinde C</td></tr><tr><td>Tüy dökücü krem</td> <td>-</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Vevo2100 ABD görüntüleme sistemi</td><td>VisualSonics Inc.</td><td>-</td><td>Çalıştırma konusunda önceden bilgi veya yetkili bir teknisyenin yardımını gerektirir</td></tr><tr><td>55 MHz 708 probu</td><td>VisualSonics Inc.</td><td>-</td><td></td></tr> <tr><td>Vevo2100 görüntüleme yazılımı</td><td>VisualSonics Inc.</td><td>-</td><td></td></tr> <tr><td>VialMix</td><td>DEFINITY Görüntüleme</td><td>VMIX-DEFINITY</td><td></td></tr> <tr><td>mikro kabarcıklar</td><td>DEFINITY Görüntüleme</td><td>DE4</td><td>Kullanmadan önce VialMix kullanarak 45 saniye etkinleştirin</td></tr><tr><td>CellVizio (Fiberli konfokal endomikroskop)</td><td>Mauna Kea</td> <td>Technologies-Çalıştırma</td> <td>konusunda önceden bilgi veya yetkili bir teknisyenin yardımı gerektirir</td></tr><tr><td>ProFlex MiniO / 30 probu</td><td>Mauna Kea Teknolojiler</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>70 kD FITC etiketli dekstran</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46945-ImageCell</td><td></td></tr> <tr><td>yazılımı</td><td>Mauna Kea Teknolojileri</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>Kalibrasyon Kiti</td><td>Mauna Kea Teknolojileri</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>Dulbecco' s değiştirilmiş Kartal' s medium (DMEM)</td><td>Gibco Life Tecchnologies</td><td>41965-039</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>Biyolojik Endüstriler</td><td>04-007-1A</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / streptomisin / nistatin çözeltisi</td><td>Biyolojik Endüstriler</td><td>03-032-1B</td><td></td></tr></tbody></table>

hızlı büyüyen tümör üreten hücreleri tarafından salgılanan faktörler tarafından işe alınmış İzleme İşlevsellik ve vaskülatürüne morfolojisi

Monitoring Functionality and Morphology of Vasculature Recruited by Factors Secreted by Fast-growing Tumor-generating Cells

farelere subkutan olarak Matrigel fiş deney pro- ve anti-anjiyojenik faktörlerin in vivo değerlendirilmesi için tercih edilen bir yöntemdir. Bu yöntemde, arzu edilen faktörler, deri altına enjeksiyon sonrası, kanser ortamını taklit eden bir ortam oluşturmak üzere katılaşmaktadır soğuk sıvı ECM mimik jel içine yerleştirilir. Bu matris, endotel hücreleri ve damar nedenle oluşumu gibi konakçı hücreler, bir şekilde nüfuz etmesini sağlamaktadır. Bu yazıda, belirli bir etken (örneğin, bFGF ve VEGF) veya ajana karşı, kanser hücreleri tarafindan salgılanan faktörlerle havuzunun anjiyojenik potansiyelini göstermektedir için kullanılabilir yeni bir modifiye edilmiş Matrigel fiş deneyi önermektir. ECM-mimik jel içeren fiş-hızlı büyüyen tümör üreten glioblastoma hücrelerinin CM salgılanan faktörlerin bir havuzlu ev sahibi (yani, fare) tanıtmak için kullanılır. Biz daha önce anjiyojenik potansiyeli geniş bir karşılaştırma tarif varU 87 mg ana hücrelerde neden olduğu anjiyojenez gösteren U 87 mg insan glioblastoma ve bu sistem modeli olan atıl türetilmiş klon. CM 48 saat kuluçkadan sonra hücre hattı ya da bir birleşik doku kültürü plakalarından toplanan ortamı filtre edilerek hazırlanır. Dolayısıyla, bu hücrelerin kendileri olmadan hücreler tarafından salgılanan tek faktörler içerir. İki görüntüleme yöntemlerinin kombinasyonu burada açıklandığı fişleri içinde yeni oluşan kan damarlarının doğru, gerçek zamanlı ölçüde, morfoloji karakterizasyonu ve işlevsellik için, kontrastlı ultrason görüntüleme ve Intravital fibered-konfokal endomikroskopi mikrokabarcıkları.

Hızla büyüyen anjiyojenik tümör üreten hücre çizgisi U-87 MG, geniş anjiojenezis&#39;de sonuçları CM ile ECM-mimik jel fişlerini implanting. Bu damar yoğun iki tamamlayıcı görüntüleme yöntemleri kullanılarak araştırılmalıdır edilebilir. Microbubbles kontrastlı ABD görüntüleme U-87 MG CM yüklü fişler, uyuyan tümör üreten hücrelerden CM içeren fişler içinde saptanamayan kan akımına karşı (Şekil 1) içinde yoğun kan akışını gösteren tarafından fiş içine fonksiyonel kan damarları...

Ultrason ve endomikroskopi olmak üzere iki tamamlayıcı görüntüleme yöntemi kullanarak kanser hücreleri tarafından salgılanan bir faktör havuzunun anjiyojenik potansiyelini göstermek için bir matrigel tıkaç testi tarif ediyoruz. Hücre dışı bir matriks (ECM) taklidi jeli olan matrigel, konağı (fare) şartlandırılmış ortama (CM) salgılanan anjiyojenik faktörlerle tanıştırmak için kullanılır.

Hızlı büyüyen Tümör üreten hücreleri tarafından salgılanan faktörler tarafından işe alınmış İzleme İşlevsellik ve vaskülatürüne morfolojisi

The subcutaneous matrigel plug assay in mice is a method of choice for the in vivo evaluation of pro- and anti-angiogenic factors. In this method, desired ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, kanser hücreleri tarafından salgılanan bir faktör havuzunun anjiyojenik potansiyelini göstermek için ultrason ve endo mikroskopi kullanmaktır. Bu, öncelikle tümör hücrelerinin yokluğunda farede tümör benzeri bir ortam oluşturmak için bir tıkaç implante edilerek gerçekleştirilir. Ardından, tıkaç içindeki kan damarı yoğunluğu ve fonksiyonel kan damarlarının yüzdesi değerlendirilir.Son adımda, kan damarlarının morfolojisi görselleştirilir. Nihayetinde, hücreler tarafından salgılanan pro ve anti-anjiyojenik faktörler arasındaki denge ve bunların anjiyogenez üzerindeki etkileri, iki tamamlayıcı görüntüleme modalitesi ile canlı olarak ve çeşitli zaman noktalarında değerlendirilebilir. Bu tekniğin, geleneksel matrigel plug deneyi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, tamamlayıcı intravital görüntüleme modalitelerini kullanırken hücreler tarafından salgılanan faktör havuzunun analizine olanak tanımasıdır.Bu prosedürü uygulamak için laboratuvarımdan PhD öğrencisi F Andra görev alacaktır. Ekstraselüler matris veya ECM benzeri jel tıkaç vaskülarizasyonunu değerlendirmek için ultrason kullanmaya, içinde 80 µL taze hazırlanmış kondisyonlu medya bulunan bir adet 1,5 mL Eppendorf tüpünü buza yerleştirerek başlayın. Prosedürün en zor kısmı, buz gibi soğuk uçlar kullanarak jeli hava kabarcığı oluşmadan enjekte etmektir. Nazikçe karıştırmak ve yavaş enjeksiyon yapmak, optimal bir jel uygulaması sağlayacaktır.Ardından, buz gibi soğuk 1000 µL uçlar kullanarak, 4 °C'de gece boyu çözünmüş 600 µL ECM taklit jelini, kabarcık oluşmamasına dikkat ederek medyumla karıştırın. Ayak ucundan sıkıştırma yöntemiyle sedasyonun gerçekleştiğini doğruladıktan sonra, her farenin karın bölgesini tıraş edin ve 27 gauge iğne takılmış buz gibi soğuk 1 mL'lik bir şırınga kullanarak yavaşça deri altına uygulayın.Hayvan başına bir EEND DPH tüpünün içeriğini enjekte edin. Tüm hacim uygulandıktan sonra, katılaşma gerçekleşene kadar iğneyi birkaç dakika boyunca yerinde tutun. Üç hafta sonra, farelerin karın bölgesini tekrar tıraş edin, kalan tüyleri depilatuar krem ile temizleyin ve ardından fareleri mikro manipülatör tablası üzerinde sırtüstü pozisyonda sabitleyin.Ardından, 30 gauge iğne takılmış bir mililitrelik bir şırıngayı salin ile doldurun. Daha sonra iğneyi kuyruk veninin içine yerleştirin. İğneyi sıkıca sabitleyin ve şırıngayı gevşetin.Şimdi transduseri istenen tarama alanının ortasına yerleştirin ve 3D motor tablasını başlatmak için 3D'ye tıklayın. 3D'ye tıklayın. Tekrar tarama mesafesini ve adım boyutunu girin ve tarama (scan) düğmesine basın.Görüntülenen 3D görüntü verilerinde tıpanın tamamının tarandığını doğrulayın. Eğer taranmadıysa, tıpanın tamamı görünür olacak şekilde transdüseri ayarlayın ve az önce gösterildiği gibi alanı yeniden tarayın. Ardından kontrastı seçin ve görüntüyü koyulaştırmak için zaman kazanç telafisi veya tgc kontrollerini ayarlayın, mikrobaloncukları aktive etmek için bir vial karıştırıcıyı 45 saniye boyunca kullanın.Ardından, 1 mililitrelik bir şırınga içerisinde 50 µL mikrobalonu 50 µL salin ile karıştırın. Salin içeren gevşek şırıngayı, aktive edilmiş mikrobalonları içeren şırınga ile değiştirin ve seyreltilmiş mikrobalonları her bir farenin kuyruk venine enjekte edin. Balonların kararlı duruma ulaşması için birkaç saniye bekleyin ve ardından 3D'ye tıklayıp 3D görüntüleme yapmak için taramayı seçin.Kontrastla güçlendirilmiş görüntüler. Görüntü verilerini kaydetmek için kaydedilenleri görüntüle'ye tıklayın, ardından 3D ve 3D imha seçeneklerini belirleyin. Mikro kabarcıkları imha etmek için tekrar 3D'ye tıklayın ve imha sonrası bir cine döngüsü elde etmek için taramayı seçin.Ardından tekrar mağazayı görüntüle'ye tıklayın. Sonraki adımda referans ayarlarında, referans oluştur'a tıklayın ve ardından çalışma yönetimini seçin. Ön yıkama döngüsünü açmak için.Şimdi, yeşil bir kontrast katmanı oluşturmak için process cena seçeneğine tıklayın. Ardından, ultrason görüntüleme yazılımında load into 3D seçeneğini belirleyin. Sonra, mode settings kısmına tıklayın, volume seçeneğine tıklayın ve parallel seçeneğini belirleyin.Ardından, hedef dokunun 3B hacmini oluşturmak için bir dizi konturu segmente edin ve segmentasyonu tamamlamak için bitir'e tıklayın. ECM taklit jel tıpanın damarlanma morfolojisini değerlendirmek için fiberli konfokal endomikroskopi kullanmak amacıyla, her bir deneysel hayvanın kuyruk venine 200 µL 10 mg/mL FITC işaretli dekstran enjekte edin. Ardından, tıpanın yaklaşık bir santimetre uzağına küçük bir insizyon uygulayın ve tıpanın bütünlüğünü koruyarak endomikroskopi probunu nazikçe tıpanın üzerine yerleştirin.Prob yerleştirildikten sonra, lazeri başlatmak için ayak pedalını kullanın. Ekranda floresans göründüğünde, 32'ye kadar kısa ve uzun videolar elde etmek için ayak pedalıyla seçme düğmesine basın; videolar arasında prob ucunu su içeren bir tüpte yıkayın. Çekim tamamlandığında, ortalama damar çapını analiz etmek için ucu bir pamuklu çubukla temizleyin.Ardından, damar tespit modülü penceresini açmak için detect micro vessels seçeneğine tıklayın ve preferences kısmına girin. Statistic of interest penceresindeki mean vessel diameter ve display mode kısmındaki display histogram bars seçeneklerinin işaretli olduğundan emin olun.Seçili ölçümleri görüntülemek için detect seçeneğine tıklayın. Kan damarlarına komşu bölgelerdeki floresan sinyal yoğunluğunu analiz etmek için create circle ROI seçeneğini belirleyin ve ilgi alanında bir daire oluşturun. Son olarak, daire içine alınan bölgeyle ilgili değerleri hesaplamak için compute histogram within ROI seçeneğini belirleyin.Burada, U 87 mg kondisyonlu ortam yüklü tıkaçlar içerisindeki fonksiyonel kan damarlarının yaygın oluşumu, mikrokabarcık kontrastlı ultrason görüntüleme ile ortaya konmuştur. Buna karşın, uyuyan tümör oluşturucu hücrelerden elde edilen kondisyonlu ortam içeren tıkaçlar içerisinde kan akışı neredeyse saptanamaz durumdadır. Yeni oluşmuş bu kan damarlarının morfolojisi, fit c dekstran uygulamasının ardından damarların fiber konfokal endo mikroskopisi ile bu temsili görüntülerde gösterildiği üzere daha belirgin hale getirilmiştir; U 87 mg kondisyonlu ortam yüklü tıkaçlar içerisindeki kan damarlarının, tipik sızıntılı, küt uçlu ve genişlemiş damar morfolojisi sergilediğine dikkat ediniz.Genişlemiş ve oldukça karmaşıklaşmış kan damarları ayrıca süreksiz ve yavaş bir akış sergilemektedir; kan damarlarının dışında görülen yüksek floresan sinyaliyle kanıtlandığı üzere, çevre bölgede kan sızıntısı gözlemlenmektedir. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, anjiyogenez kinetiğini optimize etmek için birkaç farklı zaman noktasında, birkaç saat içinde uygulama yapılabilir.

monitoring-functionality-morphology-vasculature-recruited-factors

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bir tüp oluşum denemesi tümör hücrelerinin damar etkinliğini değerlendirmek için kullanılır.

Tümör Hücrelerinin vaskülojenik Faaliyet değerlendirin bir Matrigel Tabanlı Tüp Oluşumu Testi

Bu anti-kanser tedavisi için, görüntüleme yanıt için bir yöntem...

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

Bu yazıda, dinamik kontrastlı floresan videomikroskopi kullanarak in vivo tümör mikrodamarlar analiz etmek için bir yöntem mevcut. İki sayısal parametreler elde edilmiştir: işlevsel tümörün damarlanma yansıtan kılcal yoğunluk ve endotel duvarın bir sızıntının yansıtma indeksi sızıntı.

Flüoresans Konfokal videomikroskopi kullanılarak tümör Angiogenesis İn vivo

Yeni Bir Yüksek çözünürlüklü<em&gt; In vivo</emTümör Büyüme ve Tedavi için İntrakranial Yapıların Dinamik Tepki Eğitim&gt; Görüntüleme Tekniği

Transgenik raportör fareler ve enjekte edilebilir floresan etiketler kullanarak, uzun süreli intravital eğirme diski konfokal mikroskobu, ApcMin/+ kolorektal kanser modelinde miyeloid hücre davranışının bağırsak adenomuna doğrudan görselleştirilmesini sağlar.

Miyeloid hücrelerin Dynamics Gerçek zamanlı Görüntüleme Süm Min / + Bağırsak Tümörleri Disk Eşodaklı Mikroskopi Spinning tarafından

Bu protokol, tek bir hücre çözünürlükte in vivo olarak, gerçek zamanlı olarak çok-etkileşimlerin uzatılmış zaman atlamalı görüntüleme gerçekleştirmek için multiphoton mikroskobu kullanımını tarif eder.

Tümör mikroçevresinde Gerçek zamanlı Multisellüler Dynamics Genişletilmiş Time-lapse intravital Görüntüleme

Bu iletişim kuralı transgenik fareler hücre özgü floresan işaretleri ifade intravital görüntüleme açıklar. İntravital görüntüleme implante edilebilir windows üzerinden süreçlerin mikroskobik görselleştirme mümkündür kullanarak yaşayan hayvanlarda yüksek çözünürlüklü gözlemler için non-invaziv bir yöntem sağlar. Bu yöntem boyuna işlemleri incelemek özellikle kullanışlıdır.

Tümör ilişkili damarlara kullanmanın intravital mikroskobu gelişmiş Dorsal deri kıvrım pencere Chambers transgenik floresan fareler üzerinde

Monosit arteriogenesis periferik arter hastalığı bağlamında önemli arabulucu vardır. Bu iletişim kuralı bir membran benzeri matris ve intravital mikroskobu kullanarak, monosit enjeksiyon femoral arter ligasyonu fare modeli sonra monosit izleme ve tümör ile ilgili angiogenez inceler.

Monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu

Biz metastazın tümör mikroortamı ile ilişkili geçici vasküler geçirgenliği değerlendirmek için iki yöntem tarif (tmem) kapı fonksiyonu ve kanser hücresi konvülsyon yüksek molekül ağırlığı İntravenöz enjeksiyon kullanarak (155 kDa) farelerde dekstran. Yöntemleri, canlı hayvanların intravital görüntüleme ve immünofluorescence kullanarak sabit doku analizi içerir.

Intravital görüntüleme ve sabit doku analizi kullanılarak kanserli hücre yaygınlaştırılması ile Ilişkili Metasküler kapı-aracılı vasküler geçirgenlik tümör Mikroortamının değerlendirilmesi

Kemik iliği vasküler nişinin in vitro bir modeli, mezenkimal ve endotel hücrelerinin önceden dökülmüş 3D PEG hidrojelleri üzerine tohumlanmasıyla oluşturulur. Nişlerin endotel ağları, ECM bileşenleri ve ALP aktivitesi kullanılan büyüme faktörüne bağlı olarak değişir. Platform, gelişmiş kanser modelleri için kullanılabilir.

Bir görüntüleme mikroplakasında önceden dökülmüş poli (etilen glikol) (PEG) hidrojeller kullanılarak vaskülarize osteojenik kemik iliği nişinin basit bir şekilde kurulması

Bu protokol, yükleme, bakım ve değerlendirme prosedürlerinin bir açıklamasıyla birlikte yüksek verimli temel ve translasyonel insan kanseri araştırmaları, gelişmiş ilaç taraması, hastalık modellemesi ve kişiselleştirilmiş tıp yaklaşımları gerçekleştirmek için fizyolojik olarak ilgili bir çip üzerinde tümör modeli sunar.

Kanser Araştırmaları için Fizyolojik İnsan Vaskülarize Mikro-Tümör Modelinin Oluşturulması

Öğrenin matrigel plug assay yöntemiyle kanser hücrelerinin salgıladığı faktörlerin anjiyogenik potansiyelini fare modelinde değerlendirmeyi. Ultrason ve endomikroskopi ile kan damarı yoğunluğu ve morfolojisi analiz edilir.

Hızlı büyüyen Tümör üreten hücreleri tarafından salgılanan faktörler tarafından işe alınmış İzleme İşlevsellik ve vaskülatürüne morfolojisi (Video) | JoVE Journal

Hızlı büyüyen Tümör üreten hücreleri tarafından salgılanan faktörler tarafından işe alınmış İzleme İşlevsellik ve vaskülatürüne morfolojisi

Daha fazla video keşfet