4.5: Temel Civciv Bakımı ve Bakımı

Tavuk embriyoları, kısmen bakımı kolay ve ucuz oldukları için erken omurgalı gelişimini incelemek için harika bir modeldir. Laboratuvarda yetiştirilen çoğu model organizmanın aksine, döllenmiş tavuk yumurtaları harici bir tedarikçiden satın alınır. Ek olarak, yumurtaların bakımı ve ile çalışmak çok az özel ekipman gerektirir. Bu video, civciv yumurtalarının edinilmesi ve bakımı, gelişmekte olan embriyolarla çalışmak için gerekli teknikler ve bu yöntemlerin bazı pratik uygulamaları hakkında genel bir arka plan sağlayacaktır.

Laboratuvarda civcivlerle çalışmayı tartışmadan önce, tavukların evde yumurtalarına nasıl baktıklarını gözden geçirelim. Yumurtalar bırakıldıklarında zaten döllenmiş olsalar da, yumurtalar daha soğuk dış sıcaklıklara maruz kaldığında civciv gelişimi durur. Yaklaşık 12 yumurta bıraktıktan sonra, tavuk embriyo gelişimine devam etmek için yuvaya oturur. Kuluçka döneminde, tavuk yumurtaları eşit şekilde ısıtmak ve embriyonun kabuğa yapışmasını önlemek için döndürecektir. Her şey yolunda giderse, 21 gün sonra annenin kendine bir civciv yavrusu olur.

Peki bilim adamları deneyleri için yeterli yumurtayı nasıl toplarlar? Hımm? Bu biraz zaman alabilir. Tavuklar yaygın olarak evcilleştirildiğinden, döllenmiş yumurtalar bir kuluçkahaneden veya yetiştirme çiftliğinden kolayca elde edilebilir. Yumurtalar belirli gelişim aşamalarında bile sipariş edilebilir.

Yumurtalar laboratuvara geldikten sonra 13 - 16 ° C'de saklanabilirler. 5 güne kadar C. Gelişmelerine hazır olduğunuzda, yumurtaların oda sıcaklığına ısınmasına izin verin, ardından 37 °C'de sallanan bir kuluçka makinesine aktarın. İstenilen aşamaya ulaşana kadar% 60 nem ile C.

Civcivler üzerinde yapılan deneylerin çoğu, aldığınız yumurtaların ilk etapta döllenip döllenmediğini kontrol etmek gibi birkaç hazırlık adımı gerektirir. Kolay bir yaklaşım, yumurtayı aydınlatmak için parlak bir ışık kaynağı veya mum kutusu kullanmaktır. Candling olarak bilinen bu tekniği kullanarak, bir embriyonun mevcut olduğunu doğrulamak için kan damarları gibi iç yapılar görselleştirilebilir.

Yumurtayı sağlam bırakmak civcivin hayatta kalmasını artırır, ancak kabuk embriyoya erişimi engeller. Bu sorunu çözmek için araştırmacılar pencereleme adı verilen bir teknik kullanıyorlar.

Yumurtaları yan yatırarak ve embriyonun yükseleceği tarafı belirlemek için üst kısmı işaretleyerek başlayın. Bir pencereyi keserken yumurta sarısının zarar görmesini önlemek için, embriyoyu kabuktan uzaklaştırmak için az miktarda albümin veya yumurta akı çıkarılır. Bunu yapmak için önce kabuğu %70 etanol ile silerek sterilize edin. Kabuk kuruduktan sonra, yumurtanın kör ucunun üzerine bir parça bant sürün. Ardından, bandı ve kabuğu delmek için steril bir iğne kullanın. Sarısı zarar vermemek için iğneyi aşağı doğru sokun ve 5 ml albümini çıkarın. Son olarak, albümin sızıntısını önlemek için deliği başka bir bant parçasıyla kapatın.

Kabuğu kesmek için, pencereyi planladığınız alanın üzerine bir parça bant yerleştirin. Bir makas kullanarak, kabukta küçük bir delik açın ve dairesel bir açıklık kesmeye başlayın. Bu işlem sırasında bant, kabuk parçalarının embriyo üzerine düşmesini önleyecektir.

Pencerelemeden sonra bile, erken evre embriyoların küçük boyutları ve şeffaflıkları nedeniyle görselleştirilmesi zor olabilir. Embriyo ve yumurta sarısı arasındaki kontrastı iyileştirmek için seyreltilmiş, toksik olmayan Hindistan mürekkebi kullanılabilir. Mürekkep, embriyonun altındaki yumurta sarısına enjekte edilir ve yayılmasına izin verilir. Embriyo artık koyu arka plana karşı daha yüksek kontrastta görülebilir. Deneysel manipülasyonları takiben, pencere bantla yeniden kapatılmalı ve yumurta kuluçka makinesine geri yerleştirilmelidir.

Artık yumurtalarla çalışmak için temel tekniklere aşina olduğunuza göre, bu yöntemlerin tavuk embriyoları üzerinde deneyler yapmak için nasıl kullanıldığını görelim.

Başlangıç olarak, bozulmamış yumurtalardaki embriyonik yapıların yerini belirlemek için şekerleme kullanılabilir. Örneğin, tavuk embriyosunun ekstraembriyonik zarları, virüslerin yayılması için yaygın olarak kullanılır. Membranı enfekte etmek için, embriyoya zarar vermeden virüsü doğrudan allantoik boşluğa enjekte etmek için allantoik boşluk ile hava kesesi arasındaki arayüzü bulmak için kandırma yapılır. Birkaç günlük inkübasyondan sonra, allantoik sıvıdan çok sayıda viral partikül toplanabilir.

Yumurta pencereleme, deney için embriyoya erişime izin verdiği için son derece yararlı bir uygulamadır. Birçok deney, DNA'nın mikroenjeksiyon yoluyla belirli dokulara verilmesiyle başlar. Elektrotlar daha sonra ilgilenilen dokunun etrafına yerleştirilir ve hücre zarına geçici olarak nüfuz etmek ve nükleik asitleri hücreye sürmek için bir elektrik alanı uygulanır.

Erken embriyolar üzerinde deneyler yaparken, Hindistan mürekkep enjeksiyonu özellikle şeffaf dokuları görselleştirmek için kullanışlıdır. Burada, geliştirilmiş kontrast, araştırmacıların rafine doku alanlarına bir DNA çözeltisi mikroenjekte etmelerine izin verir. Sonuç olarak, bu teknik, hücre bölünmelerini izlemek için zaman içinde izlenebilen, ayrı ayrı etiketlenmiş hücreler üretebilir.

Az önce JoVE'nin civciv bakımı ile ilgili videosunu izlediniz. Bu sunum, tavuk yumurtalarının temel kullanımı ve bakımı, civcivlerle çalışmak için yaygın teknikler ve bu yöntemlerin biyolojik araştırmalarda nasıl uygulandığına dair bazı örnekleri kapsamaktadır. İzlediğiniz için teşekkürler!