Tavuk embriyoları, kısmen bakımlarının kolay ve düşük maliyetli olması nedeniyle erken omurgalı gelişimini incelemek için harika bir modeldir. Laboratuvarda üretilen çoğu model organizmanın aksine, döllenmiş tavuk yumurtaları harici bir tedarikçiden satın alınır. Ayrıca, yumurtaların muhafaza edilmesi ve bunlarla çalışılması çok az özel ekipman gerektirir. Bu video, civciv yumurtalarının temini ve bakımı, gelişen embriyolarla çalışmak için gerekli teknikler ve bu yöntemlerin bazı pratik uygulamaları hakkında genel bilgiler sağlayacaktır.
Laboratuvarda civcivlerle çalışmayı tartışmadan önce, tavukların yumurtalarına doğal ortamlarında nasıl baktıklarını gözden geçirelim. Yumurtalar yumurtlandığında zaten döllenmiş olsa da, daha soğuk dış sıcaklıklara maruz kaldıklarında civciv gelişimi durur. Yaklaşık 12 yumurta yumurtladıktan sonra tavuk, embriyonun gelişimini yeniden başlatmak için yuvanın üzerine çöker. Kuluçka süresince tavuk, yumurtaları eşit şekilde ısıtmak ve embriyonun kabuğa yapışmasını önlemek için yumurtaları döndürür. Her şey yolunda giderse, 21 gün sonra anne tavuğun bir civciv sürüsü olur.
Peki, bilim insanları deneyleri için yeterli yumurtayı nasıl toplarlar? Şey... bu biraz zaman alabilir. Tavuklar yaygın olarak evcilleştirildiği için, döllenmiş yumurtalar bir kuluçkahaneden veya damızlık çiftliğinden kolayca temin edilebilir. Yumurtalar belirli gelişim aşamalarında bile sipariş edilebilir.
Yumurtalar laboratuvara ulaştığında, 5 güne kadar 13 - 16 °C'de saklanabilirler. Gelişimlerinin başlaması için hazır olduğunuzda, yumurtaların oda sıcaklığına gelmesini bekleyin, ardından istedikleri aşamaya ulaşana kadar %60 nem oranına sahip, 37 °C'deki sallantılı bir inkübatöre aktarın.
Civcivler üzerinde gerçekleştirilen çoğu deney, öncelikle aldığınız yumurtaların döllenip döllenmediğini kontrol etmek gibi birkaç hazırlık adımı gerektirir. Kolay bir yaklaşım, yumurtayı aydınlatmak için parlak bir ışık kaynağı veya muayene kutusu kullanmaktır. Candling (yumurta muayenesi) olarak bilinen bu teknik kullanılarak, bir embriyonun varlığını doğrulamak için kan damarları gibi iç yapılar görselleştirilebilir.
Yumurtanın bütün bırakılması civcivin hayatta kalma oranını artırır, ancak kabuk embriyoya erişimi engeller. Bu sorunu çözmek için araştırmacılar "windowing" (pencere açma) adı verilen bir teknik kullanırlar.
İşe yumurtaları yan yatırarak ve embriyonun yükseleceği tarafı belirlemek için üst kısmını işaretleyerek başlayın. Pencere açarken sarısına zarar gelmesini önlemek için, embriyoyu kabuktan uzaklaştırmak amacıyla az miktarda albümin veya yumurta akı çıkarılır. Bunu yapmak için önce kabuğu %70 ethanol ile silerek sterilize edin. Kabuk kuruduktan sonra, yumurtanın küt ucuna bir parça bant yapıştırın. Ardından, bandı ve kabuğu delmek için steril bir iğne kullanın. Sarısına zarar vermemek için iğneyi aşağı doğru yerleştirin ve 5 ml albümin çekin. Son olarak, albümin sızıntısını önlemek için deliği başka bir bant parçasıyla kapatın.
Kabuğu kesmek için, pencere açmayı planladığınız alanın üzerine bir parça bant yerleştirin. Bir makas kullanarak kabukta küçük bir delik açın ve dairesel bir açıklık kesmeye başlayın. Bu işlem sırasında bant, kabuk parçalarının embriyonun üzerine düşmesini önleyecektir.
Pencere açma işleminden sonra bile, erken evre embriyolar küçük boyutları ve şeffaflıkları nedeniyle zor görselleştirilebilir. Embriyo ve sarısı arasındaki kontrastı artırmak için seyreltilmiş, toksik olmayan Çin mürekkebi kullanılabilir. Mürekkep, embriyonun altındaki sarıya enjekte edilir ve yayılmasına izin verilir. Embriyo artık koyu arka plan üzerinde daha yüksek kontrastla görülebilir. Deneysel manipülasyonların ardından pencere bantla tekrar kapatılmalı ve yumurta inkübatöre geri yerleştirilmelidir.
Yumurtalarla çalışma konusundaki temel tekniklere aşina olduğunuza göre, bu yöntemlerin tavuk embriyoları üzerinde deneyler yürütmek için nasıl kullanıldığını görelim.
Başlangıç olarak, sağlam yumurtalardaki embriyonik yapıların konumunu belirlemek için candling (ışıkla muayene) yöntemi kullanılabilir. Örneğin, tavuk embriyosunun ekstraembriyonik membranları yaygın olarak virüslerin çoğaltılması için kullanılır. Membranı enfekte etmek için, embriyoya zarar vermeden virüsü doğrudan allantois boşluğuna enjekte edebilmek amacıyla, allantois boşluğu ile hava kesesi arasındaki ara yüzeyi belirlemek için candling işlemi uygulanır. Birkaç günlük inkübasyonun ardından, allantois sıvısından çok sayıda viral partikül toplanabilir.
Yumurta pencereleme, deneyler için embriyoya erişim sağladığından son derece faydalı bir uygulamadır. Birçok deney, mikroenjeksiyon yoluyla spesifik dokulara DNA aktarımı ile başlar. Ardından, ilgili dokunun çevresine elektrotlar yerleştirilir ve hücre membranını geçici olarak geçirgen hale getirmek ve nükleik asitleri hücre içine itmek için bir elektrik alanı uygulanır.
Erken embriyolar üzerinde deneyler yürütülürken, Çin mürekkebi enjeksiyonu şeffaf dokuların görselleştirilmesi için özellikle yararlıdır. Burada, artırılan kontrast, araştırmacıların rafine doku bölgelerine bir DNA solüsyonu mikroenjekte etmesine olanak tanır. Sonuç olarak bu teknik, hücre bölünmelerini takip etmek için zaman içinde izlenebilen, tek tek işaretlenmiş hücreler üretilmesini sağlayabilir.
JoVE'nin civciv bakımıyla ilgili videosunu izlediniz. Bu sunumda, tavuk yumurtalarının temel tutma ve bakımı, civcivlerle çalışma konusunda yaygın teknikler ve bu yöntemlerin biyolojik araştırmalarda nasıl uygulandığına dair bazı örnekler ele alınmıştır. İzlediğiniz için teşekkürler!
Civcivler (Gallus gallus domesticus), yalnızca omurgalı gelişimi, nörobilim ve tümör biyolojisindeki önemli kavramların incelenmesi için değil, aynı z…
Bu videodaki bölümler
0:00
Genel Bakış
0:44
Yumurta İşleme ve Bakımı
2:08
Yumurtaların Deneyler İçin Hazırlanması
4:31
Uygulamalar
6:14
Özet
Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.