BRET Ötesinde Bir Adım: Sınırsız Uyarma tarafından Flüoresan Lüminesans dan (YAKIT)

Aşağıdaki deneyin genel amacı, yakıtın basitliğini göstermek ve radyatif uyarılma emisyon olayları nedeniyle kırmızı fotonların oluşumunu gözlemlemektir. Bu, yakıt üretimi için biyolüminesans bakterilerin ve lüminesans nanopartiküllerin birleştirilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, yakıt sonuçlarından kaynaklanan kırmızı fotonları gözlemlemek için bir biyolüminesans plaka okuyucu kullanılır; elde edilen sonuçlar, biyolüminesans bakteriler ve kuantum noktaları aynı çözelti içinde tutulduğunda önemli miktarda kırmızı foton üretilebileceğini göstermektedir.

Gözlemlenen kırmızı foton akısı artışına dayanarak, bu tekniğin çıkarımları, literatürde bireysel kolonilerden başlandığı sıklıkla rapor edilen NCE konut giriş transferi veya Brett paradigmasının sorgulanmasına yöneliktir. Standart kültür plakalarında lüminesans bakterilerin gece boyu sürecek kültürlerini başlatın.

Burada, deney gününde Vibrio Fisher Eye kullanılmıştır. Taze alt kültürleri başlatın ve 600 nanometrede bir ila 1,5 optik yoğunluğa (OD) ulaşana kadar büyümelerine izin verin. Karşılaştırılabilir sonuçlar elde etmek için, bakterileri yoğun sinyaller ürettikleri benzer büyüme aşamalarında kullanın.

Her birinden alınan 100 µL'lik alikotları beş µL floresan prob QD 7 0 5 veya fizyolojik salin ile birleştirin. Ardından karışımı 895 µL fizyolojik salin ile birlikte standart spektroskobik küvetlere ekleyin. Doldurulan küvetleri tüm hayvan biyolüminesans görüntüleme cihazına yerleştirin ve uygun filtre setleri altında ölçümleri gerçekleştirin.

Burada, farklı mesafeler üzerinden yakıt testi gerçekleştirmek için 710 ila 730 nanometre emisyon filtresi kullanılmıştır. İki adet düşük hacimli plastik fotometrik küveti, toplam bir mililitre fizyolojik salin içerisinde ya 50 mikrolitre QD 7 0 5 veya 97,2 mikrolitre floresan özelliği olmayan 48 nanometre polistiren mikroküreler ile doldurun. Bu işlem, iki varlık arasında toplam hacim başına benzer katı yüzey alanı sağlanmasını sağlar.

Bir üçüncü qve'yi standart siyah bantla veya ışığı engelleyebilecek başka bir opak materyalle kaplayarak bir ışık kaynağı qve hazırlayın. Vete'nin karşıt yanlarında iki adet özdeş optik pencereyi dikkatlice hazırlayın. Taze bir alt kültürden 1 mL Vibrio fii veya başka bir kültür alikotunu ışık kaynağı vete'ye ekleyin ve herhangi bir ışık kontaminasyonunu azaltmak için siyah kağıt gibi opak bir materyalle kapatın.

Ardından, önceden doldurulmuş küvetleri görüntüleyici içindeki ışık kaynağının her iki yanına yerleştirin. Üç küveti, sırasıyla 10, 30 ve 30 saniyelik pozlama süreleri kullanarak toplam ışık ve 710 ila 730 nanometre emisyon filtreleri gibi uygun emisyon filtreleri altında görüntüleyin. QD 705 konumunu doğrulamak için 450 ila 480 nanometre eksitasyon ve 710 ila 730 nanometre emisyon değerlerinde bir floresan görüntü alın.

Her iki harici Q vet'i, Merkezi Q Vet'ten eşit mesafelerde daha uzağa yeniden konumlandırın. Ardından, yüz yüze nihai üç santimetre mesafe elde edilene kadar bu işlemi tekrarlamadan önce bir floresan görüntü oluşturun ve görüntü alın. İki adet düşük hacimli küvetten birini fluoro four veya ilgilenilen bir floresan nanoparçacık içeren bir mililitrelik çözeltiyle, diğerini ise negatif kontrol olarak floresan olmayan nanoparçacıklar içeren fizyolojik tuzlu su ile doldurun.

Siyahla kapatılmış, karşılıklı taraflarında fiziksel olarak eşit iki optik pencere bulunan üçüncü vete'ye bir mililitre taze Vibrio FII veya diğer lüminesans bakterilerden oluşan bir alikot ekleyin; vete'yi siyah kâğıt parçası gibi opak bir maddeyle kısa ancak eşit bir mesafede örtün. İki düşük hacimli küveti, siyahla kapatılmış Q vete'nin her iki yanına yerleştirin ve uygun filtreler altında görüntüleyin; burada 0,7 santimetre mesafe kullanılmıştır. İşlemi, QD 705'in diğer floroforları ile bakteriler için tekrarlayın.

Yalnızca bakterilerin olduğu duruma kıyasla kırmızı foton sayısında önemli bir artış gözlemlenir. Kontrol yakıtı, herhangi bir absorbe edici yokken uzun mesafeler boyunca gerçekleşebilir. Bu mesafe bağımlılığı, ters kare yasası ile karakterize edilebilir.

Noktasal kaynaklar için. Flora fours'un bakteriyel membrana hedeflenmesinin, üretilen toplam yakıt sinyali miktarı üzerinde çok az etkisi olduğu veya hiç etkisi olmadığı görülmektedir. Bu bağlamda, hedefli yakıta birkaç yıkama adımından sonra bile korunmaktadır.

Bu videoyu izledikten sonra, radyatif eksitasyon emisyon olaylarından kırmızı fotonlar üretmenin bir yolu olarak, yakıtın birden fazla modalite altında nasıl yeniden konstitüe edileceği konusunda iyi bir fikre sahip olmalısınız.