Name: Boyuna İki foton görüntüleme ile takip Farelerde Akut Beyin Travma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 14 s
Description: Öğrenin farelerde akut beyin travması oluşturma ve iki foton görüntüleme ile hücre davranışlarını inceleme yöntemini. Bu teknik nörolojik hasar sonrası hücresel yanıtları gerçek zamanlı olarak gözlemlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz GAFP-EGFP ve CX3CR1-EGFP fare suşları sağlamak için Dr Frank Kirchhoff derinden müteşekkiriz. Iş Finlandiya Uluslararası Hareketlilik Merkezi, Tekes, Neuroscience Fin Enstitüsü (FGSN) ve Finlandiya Akademisi hibe tarafından desteklenmiştir.

Burada sunulan tüm prosedürleri hayvan bakımı (Hayvan Deneyleri 62/2006 tarihinde Finlandiya Yasası) için yerel rehberlik göre yapılmıştır. Hayvan lisans (ESAVI/2857/04.10.03/2012) yerel otorite (ELÄINKOELAUTAKUNTA-Ella) elde edilmiştir. 1-3 aylık yaş arasında Yetişkin fareler, ağırlığı 24-38 g, sertifikalı Üniversitesi&#39;nin hayvan tesisinde ayrı kafeslerde tutulur ve yiyecek ve su ad libitum sağlandı. 1.. Bir Kraniyal Pencere sayesinde Beyin Hasarı Görüntüleme <ol><li> Hayvanlara anestezi ve işlem alanı hazırlanması <ol><li> Filtre ile sterilize edilmiş fosfat tamponlu salin (PBS), pH 7.4 içinde çözüldü ketamin (Ketalar, 80 mg / kg) ve ksilazin (Rompun, 10 mg / kg) bir karışımı peritoneal enjeksiyonu ile farelerin anestezisi. Anestezi derinliği doğrulamak için fare refleksleri düzenli (kuyruk ve ayak tutam prob) kontrol edin. Uygun zaman, uygun anestezi korumak için, dozu artırın ama overd önlemekose. </li><li> Anestezi kurtarma sonra cerrahi işlem, görüntüleme oturumu ve ilk bir saat içinde bir ısıtma pedi kullanarak 37.0 ° C&#39;de hayvan koruyun. </li><li> Kurumasını fare gözleri korumak için, göz yağ uygulayın. </li><li> Inflamasyon ve serebral ödemi azaltmak için deri altına enjeksiyon ile deksametazon (Rapidexon veteriner, 2 mg / kg) yönetmek. </li><li> Önce ya da hemen cerrahi sonrası 30 dakika kadar (Ketoprophene periton örneğin) bir analjezik yönetmek. Hayvan gibi, hareket yemek veya içmek, kilo kaybı ya isteksizlik gibi herhangi bir ağrı belirtileri, sergiler, tükürük, piloerection veya anormal solunum ameliyattan sonra, analjezik enjeksiyonu tekrar geliyor. </li><li> Bir tıraş makinesi (Malzeme ve Ekipmanları bakınız) ile mouse &#39;başını tıraş. Bıyıklarını zarar kaçının. </li><li> Traş alanını temizlemek için% 70 etanol çözeltisi ile fare kafasına cilt davranın. </li><li> Cerrahi makas kullanma (Malzeme veEkipman) ve forseps (Malzeme ve Ekipmanları bakınız), alnına kulak arasındaki orta hattan keseceksiniz. </li><li> Yavaşça künt mikrocerrahi bıçak ile kafatasına bağlı bağ dokusu kazınması. </li><li> Yanlara cilt sınırları kaydırın ve hafifçe baş ve deri fiksasyonu için kafatasının işitsel deliklerinin içine kulak çubukları çekin. </li><li> Steril PBS ile kafatası temizleyin ve% 0.5 klorheksidin ile fare kafasına ameliyat siteyi tedavi, daha sonra steril pamuklu ve basınçlı hava bir arada kullanarak kafatası yüzeyi kurulayın. </li></ol></li><li> Hıyar yaralanma eziyeti <ol><li> Bir hayvan sahibinin küçük bir hayvan stereotaksik aleti (Malzeme ve Ekipmanları bakınız) yerleştirin. </li><li> Hayvanın kafatası yüzeyi üzerinde odaklanmak yanında stereotaksik enstrümana binoküler mikroskop konumunu ayarlayın. </li><li> Binoküler mikroskop kullanarak, kafatası üzerinde Bregma noktasını bulun. </li><li> Regio tespitstereotaksik koordinatları kullanarak ilgi n. NOT: Doğrudan yüzeyel kortikal damarları üzerinde bulunan ilgi bu alanlardan kaçının. Bu imha şiddetle travma ilerlemesini etkileyebilir. </li><li> Seçilen bölgenin üstüne 30 G iğne yerleştirin ve kafatası yüzeyi çizilmeye tarafından hedef siteyi işaretleyin. </li><li> Etkilenen kemik yüzey alanının gereksiz derinleşmesini önlemek için mümkün olan tüm önlemleri ile kafatası delin. Mikroskop altında bir yüksek hız cerrahi matkap (Malzeme ve Ekipmanları bakınız) kullanın. Sıvı delinmiş alanında görünür yoksa delme işlemini durdurun. </li><li> Iğne ile delinmiş kuyunun alt dokunun. </li><li> Hıyar uygulama sitenin koordinatlarına göre 0.5-2.0 mm derinliğe kadar, beyin (ekleme hızı 5-10 mm / dk) içine düzgün bir iğne batırın. </li><li> Hemen istenen derinliği (geri çekilme hızı 5-10 mm / dk) ulaştıktan sonra iğneyi çıkarın ve küçük bir tampon ile dikmek sonra ortaya kan silin (see Malzeme ve ekipman). </li><li> Bir mikroenjektör pompa (WPI) ve 10 ul Hamilton şırıngası cam pipet ile monte kullanarak lezyonun siteye 100 uM sülforodamin 101 mikroenjeksiyon veya ilgi duyulan bir başka bileşik yapın. Not: borosilikat cam kılcal cam pipet hazırlanması sırasında, 10-20 um&#39;lik bir çapa ucu netleştirmek. </li><li> 2-5 nl / sn &#39;lik bir oranda enjeksiyon çözeltisi 250-1,500 nl infüze. NOT: Beyin parankiminde en az 5 dakika boyunca infüzyon bitiminden sonra pipet bırakın, ardından çözüm çıkışlarını engellemek için yavaşça ve nazikçe çıkarın. </li></ol></li><li> Kronik kafatası pencere için kraniotomi <ol><li> Yaralanma sitenin etrafında bir daire pencere yapmak için yavaşça ve dikkatle kafatası matkap. 3-3.5 mm pencere çapı kullanın. </li><li> Wi kapsayacak şekilde korteks tampon bir damla (125 mM NaCl, 5 mM KCI, 10 mM glükoz, 10 mM HEPES, damıtık H 2 O 2 mM CaCl2 ve 2 mM MgSO 4) uygulayınndow. </li><li> Kranial pencerede bir yuvarlak cam lamel (# 1.5 kalınlık) yerleştirin. </li><li> Coverslip etrafında korteks tampon aşırı çıkarın. </li><li> Poliakrilik yapıştırıcı ile lamel kenarları mühür (Malzeme ve Ekipmanları bakınız). Not: tutkal lamel üst yüzeyine uygulanmaz emin olun. Cam kapak yapıştırıcı ile kirlenmiş ise, daha sonra dikkatlice bir MicroBlade ile kirlenmesine tutkal kaldırmak, cam stabil kafatasına yapıştırılmış kadar bekleyin ve cam yüzeyi üzerindeki tutkal kuruduktan. </li><li> 5 dk tutkal kadar kuruması için bekleyin. </li><li> Metal tutucu yerleştirilebilir böylece kulak çubuğu yükseklik vidalarını kullanarak, kafa konumunu ayarlayın. </li><li> Çelik tutucu halka (Malzeme ve Ekipmanları bakınız) poliakrilik tutkal küçük bir miktar uygulayın. </li><li> Geriye yönlendirilmiş metal tutucu saplı cam lamel çelik sahibinin halka Tutkal. </li><li> 5 dk tutkal kadar kuruması için bekleyin. </li><li> Mviskoz koşullarına ulaşmak için 3,5 cm Petri (ya da analog) olarak poliakrilik tutkal ile ix diş çimento (Malzeme ve ekipman bakınız). </li><li> Çimento + tutkal karışımı ile kafatası pencerenin sınırları Seal ve cilt sınırına kadar aynı karışımı ile kafatası yüzeyi maruz kapsamaktadır. </li><li> 15 dk çimento + tutkal karışımı kurumaya bırakın ve daha sonra kulak çubuklarını kaldırmak için bekleyin. </li><li> Protokol 3 de tarif edildiği gibi ilgili bölge ve bir kontrol alanı için iki foton uyarma mikroskopik (TPEM) görüntüleme yapın. </li><li> Görüntüleme sonra, hayvan bir ısıtma yastığı anestezi kurtarmak ve tam iyileşme kadar gözlem altında ayrı bir kafes içinde tutmak için izin verir. Islak gıda çiğneme ve hidrasyon kolaylaştırmak için verilebilir. </li></ol></li></ol> 2. Beyin Hasarı Görüntüleme İnceltilen Skull Through <ol><li> Anestezi yapılmasını ve işlem alanı hazırlanması <ol><li> Fare anestezisi ve travma indüksiyon için hazırlamakAdım 1.1 &#39;de tarif edildiği gibi. </li></ol></li><li> Kafatası incelmesi ve prick yaralanma eziyeti <ol><li> Hayvan sahibinin küçük bir hayvan stereotaksik aleti (Malzeme ve ekipman bakınız) yerleştirin. </li><li> Hayvan kafatası yüzeyi üzerinde odaklanmak yanında stereotaksik alet bir binoküler mikroskop konumunu ayarlayın. </li><li> Binoküler mikroskop kullanılarak kafatası Bregma noktasını bulun, stereotaktik koordinatlarına göre yansıması için beyin alanlarını belirlemek ve tırmalama ile işaretleyin. NOT: kafatası istikrar bu alanlarda tehlikeye gibi Kafatası inceltme pozisyon, kraniyal sütür üzerinde veya yakınında yer olmamalıdır. Ayrıca, büyük kortikal veya meningeal gemiler ve kafatası dikişler altında bulunan Meninksler görüntüleme eserler neden muhtemeldir. </li><li> Hayvanın kafatası ilgi alanı üzerinde yapıştırıcı ile kaplanmış metal tutucu yerleştirin, hafif baskı uygulamak ve metal tutucu sıkıca kafatasına yapıştırılmış kadar 5 dakika bekleyin. </li&gt; <li> Viskoz koşullarına ulaşmak için 3,5 cm Petri (ya da analog) olarak poliakrilik tutkal ile diş çimento (Malzeme ve ekipman bakınız) karıştırın. </li><li> Çimento + tutkal karışımı ile metal tutucunun sınırları Seal ve cilt sınırına kadar aynı karışımı ile kafatası yüzeyi maruz kapsamaktadır. </li><li> 15 dk çimento ve tutkal karışımı kuruması için bekleyin. </li><li> Nonpolymerized tutkal kalıntıları, yıkanır, böylece, inceltilmiş kafatası bölge ve PBS ile metal tutucunun parça çevreleyen birkaç kez yıkayın. NOT: Bu sahibine kafatası istikrarlı eki sağlamak için çok önemlidir. Bu görüntüleme sırasında preparat kararlılığı sağlar. </li><li> Binoküler mikroskop yüksek büyütme modunu kullanarak, çapı ~ 0.5-1.5 mm inceltilmiş kafatası alanı oluşturmak için bir yüksek hızlı mikro-matkap ile kafatası kemiğinin üst katmanlarını kaldırmak. Kemik enkaz kaldırmak için sondaj sırasında basınçlı hava kullanın. Sondaj intermittentl gerçekleştirinsürtünme kaynaklı aşırı ısınmasını önlemek için, inceltme işlemi sırasında y. Oda sıcaklığı çözeltisi kullanılarak matkap ucu soğutun ve düzenli ısı emmek için inceltilmiş bölgeye tampon uygulanır. NOT: korteks zarar görmesini önlemek için, ince bir tabaka (&lt;50 mikron) kadar geniş bölgeleri (&gt; 1.5 mm) üzerinde matkap yok. NOT: kemirgen kafatası kemik yapısı süngerimsi kemiğin kalın bir tabaka ile ayrılmış kompakt kemiğin iki ince katmanlardan oluşur. Kan damarlarını içeren süngerimsi kemik formu konsantrik daireler ve kanalcıklan minik boşluklar. Dış yoğun kemik tabakası ve süngerimsi katmanın en ortadan kaldırmak için mikrotur kullanın. Süngersi kemik içinde kan damarlarının bozulması kanamaya neden olabilir. Bu kanamayı durdurmak için hemostaz kollajen sünger kullanın. </li><li> , Süngersi kemiğin çoğunluğu kaldırıldı olup olmadığını incelemek için, ikinci harmonik oluşumu (SHG) görüntüleme kullanın. Kalan kemik inci olduğundan emin olun, aşırı incelmesi önlemek için dikkatli olunBu hazırlama aşamasında 50 um daha icker. </li><li> Inceltilmiş bölgenin üstüne sıcak tampon bir damla (35-37 ° C) koyun. Ayrıca kemik katmanları kaldırmak ve ~ 20 mikron kalınlığında kemik çapı ~ 700 mikron düzgün bir alan oluşturmak için Bur Terbiye mikrocerrahi bıçak veya Micro kullanın. Bu adım sırasında, tekrarlayan SHG görüntüleme gerçekleştirmek ve düzenli kemik kalınlığını ölçmek için yararlıdır. </li><li> Ilgi bölge ve bir kontrol alanı için TPEM görüntüleme gerçekleştirin. </li><li> Bölge kesinlikle yatay konumlandırılmış inceltilmiş şekilde kulak çubuğu yükseklik vidaları kullanarak kafa konumunu ayarlayın. Inceltilmiş bölgenin üstüne iğne yerleştirin ve hedeflenen sitenin altında hiçbir büyük gemiler var olduğundan emin olun. </li><li> Inceltilmiş kafatası yüzeyinden 0.5-2.0 mm derinliğine, beyin içine iğne batırma ve pislik uygulama mevkii koordinatlarına göre bir lezyon yapın. </li><li> İğneyi çıkarın ve t sonra ortaya çıkan kanama bastırmakO hemostatik tampon (Malzeme ve ekipman bakınız) ile beyin hasarı akut. Yaralanma yerinde kan pıhtıları formu ve damar nabız durana kadar bekleyin. </li><li> Bölüm 1.2.10 de yukarıda tarif edildiği gibi, 100 uM sülforodamin 101 veya lezyon siteye ilgi bir bileşiğinin mikroenjeksiyon yapın. </li><li> Protokol 3 de tarif edildiği gibi yaralanma ilerlemesini ve kurtarma izlemek için görüntüleme TPEM yapın. </li><li> Görüntüleme sonra, hayvan bir ısıtma yastığı anestezi bilinç kazanmak için izin verir. Gözetimsiz hayvan bırakın ve sadece tam fiziksel iyileşme sonra evde kafes iade etmeyin. </li></ol></li></ol> 3. Görüntüleme <ol><li> Özel inşa çerçeveye metal tutucu takarak mikroskop altında hayvan yerleştirin. </li><li> Görüntüleme için, Mai Tai DeepSee lazer ve in vivo iki foton için optimize XLPLN 25X 1.05 NA suya daldırma hedefi ile donatılmış, örneğin FV1000MPE iki foton mikroskop kullanımıgörüntüleme. </li><li> Geniş alan floresan modunu kullanarak mikroskop altında lezyon sitesini tanımlamak. Beyin damarlarını görselleştirmek ve kan damarlarının gözlenen desenine göre kontrol alanını seçmek için uzun bir pas filtreleri kullanın. </li><li> Görüntü ikinci harmonik üretimi (SHG) sinyali, 800 nm dalga boyuna ayar femtosaniye lazer ve 380-410 nm bypass filtresi kullanılarak yayılan ışığı toplamak. Flüoresan görüntüleme için, yayılan ışığı toplamak için bant geçiş filtresi (515-560 nm) kullanarak ve aşağıdaki dalga floresan uyarmak için kullanılır: GFP-860 nm, 950 nm-YFP. </li><li> Görüntü alımı için Fluoview yazılımı kullanın. </li><li> Mağaza sonraki tekrarlayan görüntüleme için her ROI koordinatları. Görüntü zamanla aynı İB&#39;leri ve Koordinatları görüntü örtüşme maksimize etmek için her zaman ayarlayın. </li><li> Uygun yazılım (örn.. İmageJ) ile görüntüleri analiz. Burada yer yeniden düzenlemesi Imaris yazılımı kullanılarak yapıldı. </li></ol>

<ol><li>Lighthall, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+cortical+impact%3A+A+new+experimental+brain+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Controlled cortical impact: A new experimental brain injury model.</a> J. Neurotrauma. 5 (1), 1-15 (1988).</li>
<li>Lindgren, S., Rinder, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+in+head+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysik%22%5BJournal%5D)">Experimental studies in head injury.</a> Biophysik. 2 (5), 320-329 (1965).</li>
<li>Shreiber, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+investigation+of+cerebral+contusion%3A+histopathological+and+immunohistochemical+evaluation+of+dynamic+cortical+deformation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Experimental investigation of cerebral contusion: histopathological and immunohistochemical evaluation of dynamic cortical deformation.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 58 (2), 153-164 (1999).</li>
<li>Feeney, D. M., Boyeson, M. G., Linn, R. T., Murray, H. M., Dail, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+to+cortical+injury%3A+I.+Methodology+and+local+effects+of+contusions+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Responses to cortical injury: I. Methodology and local effects of contusions in the rat.</a> Brain Res. 211 (1), 67-77 (1981).</li>
<li>Bardehle, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+astrocyte+responses+to+acute+injury+reveals+selective+juxtavascular+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Live imaging of astrocyte responses to acute injury reveals selective juxtavascular proliferation.</a> Nat. Neurosci. 16 (5), 580-586 (2013).</li>
<li>Sword, J., Masuda, T., Croom, D., Kirov, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+neuronal+and+astroglial+disruption+in+the+peri-contusional+cortex+of+mice+revealed+by+in+vivo+two-photon+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Evolution of neuronal and astroglial disruption in the peri-contusional cortex of mice revealed by in vivo two-photon imaging.</a> Brain. 136 (5), 1446-1461 (2013).</li>
<li>Feng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neuronal+subsets+in+transgenic+mice+expressing+multiple+spectral+variants+of+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging neuronal subsets in transgenic mice expressing multiple spectral variants of GFP.</a> Neuron. 28, 41-51 (2000).</li>
<li>Nolte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFAP+promoter-controlled+EGFP-expressing+transgenic+mice%3A+a+tool+to+visualize+astrocytes+and+astrogliosis+in+living+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">GFAP promoter-controlled EGFP-expressing transgenic mice: a tool to visualize astrocytes and astrogliosis in living brain tissue.</a> Glia. 33 (1), 72-86 (2001).</li>
<li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+fractalkine+receptor+CX%283%29CR1+function+by+targeted+deletion+and+green+fluorescent+protein+reporter+gene+insertion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of fractalkine receptor CX(3)CR1 function by targeted deletion and green fluorescent protein reporter gene insertion.</a> Mol. Cell. Biol. 20 (11), 4106-4114 (2000).</li>
<li>Nimmerjahn, A., Kirchhoff, F., Kerr, J. N. D., Helmchen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sulforhodamine+101+as+a+specific+marker+of+astroglia+in+the+neocortex+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Sulforhodamine 101 as a specific marker of astroglia in the neocortex in vivo.</a> Nat. Methods. 1 (1), 31-37 (2004).</li>
<li>Carré, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+aspects+of+an+impact+acceleration+traumatic+brain+injury+rat+model+with+potential+suitability+for+both+microdialysis+and+PtiO2+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Technical aspects of an impact acceleration traumatic brain injury rat model with potential suitability for both microdialysis and PtiO2 monitoring.</a> J. Neurosci. Methods. 140, 23-28 (2004).</li>
<li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat. Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li>
<li>Yang, G., Pan, F., Parkhurst, C. N., Grutzendler, J., Gan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thinned-skull+cranial+window+technique+for+long-term+imaging+of+the+cortex+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Thinned-skull cranial window technique for long-term imaging of the cortex in live mice.</a> Nat. Protoc. 5, 201-208 (2010).</li>
<li>Cianchetti, F. A., Kim, D. H., Dimiduk, S., Nishimura, N., Schaffer, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulus-evoked+calcium+transients+in+somatosensory+cortex+are+temporarily+inhibited+by+a+nearby+microhemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Stimulus-evoked calcium transients in somatosensory cortex are temporarily inhibited by a nearby microhemorrhage.</a> PloS one. 8 (5), (2013).</li>
<li>Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+polished+and+reinforced+thinned-skull+window+for+long-term+imaging+of+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain.</a> J. Vis. Exp. 61, (2012).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Beyin travması ani, öngörülemeyen bir olay. Burada, örneğin nörodejenerasyon, dendrit eliminasyonu, beyin ödemi, glial yara izi, fokal subaraknoid kanama ile birleştiğinde serebral korteks kanamalar ve artan geçirgenliği gibi beyin hasarı sonrası insan hastalarda gözlenen patolojik değişikliklerin bir spektrumunu üretir hayvan modeli tanımlamak Kan-beyin bariyeri. Birincil ve ikincil patogenezi yanı sıra, travma sonrası iyileşme incelemek için, bu yaralanma modeli iyi nöronal ve glial yapıların vivo görselleştirme</...

Akut beyin hasarı, motorlu araç kazalarında yaralanma insidansı yüksek olan önemli bir halk sağlığı sorunudur düşer ya da saldırılar ve müteakip kronik sakatlık yüksek yaygınlık. Beyin hasarının tedavisine terapötik yaklaşımlar, böylece, hastane öncesi cerrahi ve yoğun bakım etkililiğini sınırlayan, tamamen semptomatik kalır. Bu beyin hasarı, sosyal ve ekonomik etkisi özellikle şiddetli hale getirir. Çeşitli nedenlerle için, klinik çalışmaların en yeni tedavi yaklaşımları kullanarak beyin hasarı sonrası iyileşme iyileşme göstermek için başarısız oldu. Hayvan modelleri ilaç etkinliği beyin hasarı olan hastalarda tahmin edilebilir bir aşamaya yönelik yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için çok önemlidir. Şu anda, kafa travması birkaç iyi kurulmuş hayvan modelleri kontrollü kortikal etkisi 1, sıvı perküsyon yaralanma 2, dinamik kortikal deformasyon 3, ağırlık düşmesi gibi, mevcut4, ve fotoğraf yaralanma 5. Deneysel modellerin bir dizi kafa travması ile ilişkili patoloji bazı morfolojik, moleküler ve davranışsal yönlerini incelemek için kullanılır olmuştur. Ancak, tek bir hayvan modeli, yeni tedavi stratejileri doğrulayarak tamamen başarılıdır. Beyin hasarı, güvenilir, tekrar üretilebilir ve kontrollü hayvan modellerinin geliştirilmesi karmaşık patolojik durumun değerlendirilmesi için gereklidir. Son mikroskopik görüntüleme teknolojileri ve genetik olarak kodlanmış floresan gazetecilere yeni kombinasyonu birincil yaralanma, ikincil yaralanma ve rejenerasyon yayılması, birincil travması beyin hasarı tüm aşamalarını, araştırmak için benzersiz bir fırsat sunuyor. Özel olarak, in vivo iki foton mikroskopi kemirgen beyin derin katmanlarında kortikal hücre ve hatta hücre içi yapıların gerçek zamanlı görselleştirme sağlayan eşsiz bir doğrusal olmayan optik bir teknolojidir. Hücre ve organizasyonu çeşitli türleriNelles farklı floresan belirteçleri birleştirerek aynı anda görüntülü olabilir. Bu güçlü aracını kullanarak, posttravmatik koşullar altında beyin yaşayan dinamik morfolojik ve fonksiyonel değişiklikler oluşturulabiliyor. Beyin hasarı okuyan in vivo iki foton mikroskopi avantajları son zamanlarda Kirov ve meslektaşları 6 tarafından gösterildi. Hafif fokal kortikal kontüzyon modeli kullanılarak, bu yazarlar pericontusional kortekste akut dendritik yaralanma lokal kan akışında düşüş kapılı olduğunu gösterdi. Ayrıca, çürük site çevresinde metabolik tehlikeye korteks daha da yayılmasını depolarizasyon hasar olduğunu gösterdi. Bu ikincil hasar travmatik beyin hasarının sonuçları daha şiddetli hale sinaptik devreyi etkiler. Burada, lokal beyin için gelişmiş bir model olarak eş zamanlı, topikal ilaç uygulamasıyla kombine edilebilir bir şırınga iğnesi ile stereotaksik dikmek bir yöntem önerilmektediryaralanması ve in vivo memeli beyninde akut travma patofizyolojik sonuçlarını incelemek için bir araç olarak.

<table><tbody><tr><td>2A-sa Aptal Cımbız, 115 mm</td><td>XYtronic</td><td>XY-2A-SA</td><td></td></tr><tr><td>30 G &frac12; iğne içinde</td><td>BD</td><td>REF 304000</td><td></td></tr><tr><td>Hayvan düzeltici, tıraş makinesi</td><td>Aesculap</td><td>Isis GT420</td><td></td></tr><tr><td>Binoküler Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000</td><td></td></tr><tr><td>paslanmaz çelik ısıtma yastığı ile Biyolojik Sıcaklık Kontrol Cihazı</td><td>Supertech</td><td>TMP-5b</td><td></td></tr><tr><td>Künt mikrocerrahi bıçak</td><td>BD</td><td>REF 374769</td><td></td></tr><tr><td>Filamentli borosilikat tüp</td><td>Sutter Instruments</td><td>BF120-69-10</td><td>Cam pipet üretimi için</td></tr><tr><td>Carprofene</td><td>Pfizer</td><td>Rimadyl vet</td><td></td></tr><tr><td>Klorheksidin diglukonat</td><td>Sigma</td><td>C9394</td><td></td></tr><tr><td>Diş çimentosu</td><td>DrguDent, Dentsply</td><td>REF 640 200 271</td><td></td></tr><tr><td>Deksametazon</td><td>FaunaPharma</td><td>Rapidexon veteriner</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık matkaplar</td><td>Meisinger</td><td>HP 310 104 001 001 008</td><td></td></tr><tr><td>Dulbeco' s PBS 10x</td><td>Sigma</td><td>D1408</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forseps, 110 mm</td><td>FST</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Ealing mikroelektrot çektirmesi</td><td>Ealing</td><td>50-2013</td><td>Cam pipet üretimi için dikey çektirme</td></tr><tr><td>Göz merhemi</td><td>Novartis</td><td>Viscotears</td><td></td></tr><tr><td>Foredom matkap kontrolü</td><td>Foredom</td><td>FM3545</td><td></td></tr><tr><td>Foredom mikromotor el aleti</td><td>Foredom</td><td>MH-145</td><td></td></tr><tr><td>Fareler için gaz anestezi platformu</td><td>Stoelting</td><td>50264</td><td>Stereotaksik alet üzerine monte edilmiştir</td></tr><tr><td>Hemostaz Kollajen Sünger</td><td>Aviten, Ultrafoam BARD</td><td>Ref 1050050</td><td></td></tr><tr><td>Imaris</td><td>Bitplane</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Intervet</td><td>Ketaminol vet</td><td></td></tr><tr><td>Mai Tai DeepSee lazer</td><td>Spectra-Physics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metal tutucu</td><td>Neurotar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikro pansuman forseps, 105 mm</td><td>Aesculap</td><td>BD302R</td><td></td></tr><tr><td>Microfil</td><td>WPI</td><td>MF34G-5</td><td>Mikro şırınga doldurma kılcal damarları</td></tr><tr><td>Mineral yağ</td><td>Sigma</td><td>M8410</td><td></td></tr><tr><td>Multifoton Lazer Tarama Mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>FV1000MPE</td><td></td></tr><tr><td>NanoFil Şırınga 10 &mu; l</td><td></td><td>WPI NANOFIL</td><td>Hamilton şırınga</td></tr><tr><td>Nonwoven çubuklar 5 x 5</td><td>Molnlycke Sağlık</td><td></td><td>Mesoft Cerrahi tamponlar</td></tr><tr><td>Poliakrilik yapıştırıcı</td><td>Henkel</td><td>Loctite 401</td><td></td></tr><tr><td>Yuvarlak cam lamel ve nbsp;</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5 kalınlık&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Küçük hayvan stereotaksik aleti</td><td>David Kopf Instruments</td><td>900</td><td></td></tr><tr><td>Stoelting fare ve yenidoğan sıçan adaptörü</td><td>Stoelting</td><td>51625</td><td>Stereotaksik alet üzerine monte edilmiştir.</td></tr><tr><td>Öğrenci iris makası, düz 11,5 cm</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>Sulforhodamine 101</td><td>Moleküler Problar</td><td>S-359</td><td></td></tr><tr><td>UMP3 mikroşırınga pompası ve Mikro 4 mikroşırınga pompası kontrolörü</td><td>WPI</td><td>UMP3-1</td><td>Mikroenjektör ve kontrolör</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer Health Care</td><td>Rompun veteriner</td><td></td></tr></tbody></table>

boyuna İki foton görüntüleme ile takip farelerde akut beyin travma

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Akut beyin travması genellikle farklı kazalarında baş hasar sonuçları ve nüfusun önemli bir kısmını etkiler de, bunun için etkin bir tedavisi henüz yoktur. Şu anda kullanılan hayvan modellerinin Sınırlamalar patoloji mekanizmasının anlaşılmasını engellemektedir. Multiphoton mikroskopi uzunlamasına fizyolojik ve patolojik koşullar altında sağlam hayvan beyin içinde hücreleri ve dokuları inceleyerek sağlar. Burada, biz posttravmatik koşullar altında beyin hücre davranışı iki foton görüntüleme ile incelenmiştir akut beyin hasarı iki model tarif. Seçilen bir beyin bölgesi beyin parankiminde kontrollü bir genişlik ve derinlikte bir travma üretmek için keskin bir iğne ile yaralandı. Önerilen yöntem, aynı anda, ilaç uygulaması ile kombine edilebilir bir şırınga iğnesi ile stereotaksik dikmek kullanır. Bu yöntem, memeli beyin, akut travma patofizyolojik hücresel mekanizmaları incelemek için bir gelişmiş araç olarak kullanılabilir öneriyoruz <em&gt; In vivo. Kafa penceresi ve kafatası inceltme: Bu videoda, biz iki hazırlıkları ile akut beyin hasarı birleştirir. Biz de travma sonrası beyin rejenerasyon çok oturumlu görüntüleme için hem de hazırlıklar avantajları ve sınırlamaları tartışmak.

Transgenik farelerin posttravmatik beyin görüntüleme için 1), kronik kafa penceresi ve 2) kafatası incelme,: Biz iki operasyon prosedürlerini optimize ettik. Deney preparatların şematik görünümü, Şekil 1 &#39;de sunulmuştur. 0.3 mm OD (30 G) çelik iğne ile delme travmatik delinmiş de (Şekil 1A) uygulanır. Kafatası inceltme yaklaşık 300 mikron (Şekil 1C) bir sınırı empoze eğilimi ise başarılı bir kafa penceresi hazırlık Thy1-YFP-3D rekonstrüksiyon gösterildiği gibi, pial...

Akut beyin travması bugüne kadar yeterli bir tedavisi olmayan ciddi bir yaralanma olduğunu. Multiphoton mikroskopi uzunlamasına akut beyin travması gelişim sürecini inceleyerek ve kemirgenlerde terapötik stratejiler sondalama sağlar. Beynin in vivo iki foton görüntüleme ile incelenmiştir akut beyin travması iki model bu protokolde gösterilmiştir.

Boyuna İki foton görüntüleme ile takip Farelerde Akut Beyin Travma

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

Merhaba, ben Helsinki Üniversitesi Nörobilim Merkezi'nde doktora sonrası araştırmacı olan Michel iv. Merhaba, ben Helsinki Üniversitesi'nde lisansüstü öğrencisi olan Hel Stein. Bu videoda, beyin hücresi davranışının ve travma sonrası koşulların fotogörüntüleme ile incelenmesi amacıyla fare beynine lokal akut travma uygulama yöntemini açıklayacağız.Akut beyin hasarı, gelişmiş ülkelerdeki nüfusun önemli bir kısmını etkileyen ağır bir patolojidir. Çok fotonlu mikroskopi, yaşayan bir kemirgen beynindeki hücrelerin fizyolojik ve patolojik koşullar altında doku bağlamında incelenmesine olanak tanır. Burada, bir şırınga iğnesi ile stereotaktik batırma şeklinde uygulanan bir akut beyin hasarı yöntemini ve ardından beyin hücresi davranışının ve travma sonrası koşulların iki fotonlu görüntülemesini açıklıyoruz.Lokal beyin hasarının stereotaktik olarak oluşturulması yöntemi, akut travmanın patofizyolojik sonuçlarını incelemek için kullanılan bir araçtır. Memeli beyninde, beyin parankiminde istenilen genişlik ve derinlikte bir travma oluşturmak amacıyla belirli bir beyin bölgesi özel olarak hedeflenebilir ve keskin bir iğne ile hasar verilebilir. Bu videoda, akut beyin hasarını, kraniyal pence

acute-brain-trauma-in-mice-followed-by-longitudinal-two-photon-imaging

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video ve tamamlayıcı malzeme, kronik bir...

Fare Visual Cortex İnceltilen kafatası Hazırlık Kronik Görüntüleme

Bu video, farelerde Travmatik Beyin Hasarı (TBI) oluşumunu göstermektedir. Kafatası açığa çıkarıldıktan sonra, TBI bölgesi işaretlenir. Fare daha sonra TBI cihazının altına yerleştirilir. Darbe, metal çubuğun kaldırılması ve kafatası ile temas halinde olan çarpma tertibatının üzerine serbestçe düşmesine izin verilmesiyle sağlanır.

Travmatik Beyin Hasarının Bir Fare Beynine Verilmesi

Source: Maruoka, H., et. al. uyanık farelerde mikroglial dinamiklerin ve nöronal aktivitenin eşzamanlı görüntülenmesi. J. Vis. Exp. (2022) Bu video, görsel stimülasyon sırasında uyanık bir farede nöronal aktiviteyi ve mikroglial dinamikleri görüntülemek için iki fotonlu bir mikroskopi prosedürünü göstermektedir. kalsiyum geçişleri ve hücresel etkileşimler.

Uyanık Bir Farede Mikroglial Dinamiklerin ve Nöronal Aktivitenin Eş Zamanlı Görüntülenmesi

Sporcular, her yıl birkaç yüz hafif travmatik beyin yaralanması (mTBI) / sarsıntıyı emerler; Bununla birlikte, bunların beynin üzerindeki sonuçları tam olarak anlaşılamamıştır. Bu nedenle, klinik olarak ilgili semptomları sürekli olarak çoğaltan tek ve tekrarlayan bir mTBI'nin bir hayvan modeli mTBI ve sarsıntı çalışmalarını ilerletmenin yollarını sağlar.

Tek ve Tekrarlayan Hafif Travmatik Beyin Hasarı İçin Bir Fare Modeli

Bu yöntem, yaşayan farelerin Hippocampus optik erişim sağlayan kronik bir hazırlık açıklar. Bu hazırlık, birkaç hafta boyunca nöronal yapısal plastisite ve aktivite-uyarılmış hücresel plastisite uzunlamasına optik görüntüleme gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Canlı fareler içinde dorsal hipokampal CA1 uzunlamasına Iki foton görüntüleme

Bu protokol, nöro-glio-vasküler yapıların uzunlamasına görüntülemesi, hem sağlıklı hem de hastalıklı koşullarda fonksiyon ve fonksiyon için kullanılabilecek kronik bir kafatası pencere implantasyon tekniğini açıklamaktadır. Genellikle tercih edilirken bazı kritik sınırlamalara sahip olan transkraniyal görüntüleme yaklaşımına tamamlayıcı bir alternatif olarak hizmet vermektedir.

Farelerde Nöro-İmmün Dinamiğin Vivo Görüntülemesinde Tekrarlayan Performans için Hassas Beyin Haritalaması

Bu yazıda, fare hipokampal CA1'deki istirahat mikrogliasının kronik in vivo gözlemi için hassas kontrollü cerrahi ve iki foton mikroskobu kullanılarak bir yöntem açıklanmaktadır.

İn Vivo Fare Hipokampüsünde Mikroglia'nın Kronik İki Foton Görüntülemesi

Bu çalışma, farelere tekrarlayan bir travmatik beyin hasarının verilmesini ve iki foton mikroskobu kullanılarak nöron eksprese edilen bir EGFP'nin daha sonraki intravital görüntülemesi için bir kraniyal pencerenin eşzamanlı implantasyonunu göstermektedir.

Kapalı Kafatası Travmatik Beyin Hasarı ve Kraniyal Penceresi Olan Farelerde Floresan Protein Ekspresyonunun İki Foton Mikroskobu Kullanılarak İntravital Görüntülenmesi

Bu protokol, kapalı kafa travması (CHI) yöntemiyle indüklenen tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının (rmTBI) modifiye edilmiş bir fare modelini sunar. Yaklaşım, meninkslere maruz kalmanın yaygın olarak neden olduğu iltihabı azaltmak için inceltilmiş bir kafatası penceresi ve sıvı perküsyonunun yanı sıra kemirgenlerde rmTBI modellemesinde gelişmiş tekrarlanabilirlik ve doğruluk içerir.

İnceltilmiş kafatası penceresi ve sıvı perküsyonu içeren tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarının modifiye edilmiş fare modeli

Pseudofracture, steril kas-iskelet travma tekrarlanabilir bir fare modeli, geç dönem post-travmatik immün yanıtların değerlendirilmesi için izin verir. Bu makale, usul yürütme, deneysel model kombinasyonları için potansiyel çoklu travma çalışma izni de dahil olmak üzere model adım adım açıklanmıştır.

Pseudofracture: Akut Periferik Doku Travma Modeli

Öğrenin farelerde akut beyin travması oluşturma ve iki foton görüntüleme ile hücre davranışlarını inceleme yöntemini. Bu teknik nörolojik hasar sonrası hücresel yanıtları gerçek zamanlı olarak gözlemlemeyi sağlar.

Boyuna İki foton görüntüleme ile takip Farelerde Akut Beyin Travma

Daha fazla video keşfet