Katı Örneklerinin From İlköğretim Yumurtalık Kanseri Hücreleri alma için yöntem
4 Şubat 2014
Bu çalışma, bir katı klinik örneklerden birincil yumurtalık kanser hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu için ayrıntılı bir yöntemi tarif etmektedir. Yumurtalık kanseri klinik örnekler alt uygulamalar için son derece uygun olan uygun bir, fibroblast içermeyen epitelyal yumurtalık kanseri (EOC) hücreleri elde etmek için enzimatik sindirme tabi tutulur.
Bu prosedürün genel amacı, primer yumurtalık kanseri hücrelerini katı klinik örneklerden izole etmek ve karakterize etmektir. Bu, önce yumurtalık tümörü örneğinin toplanması ve bir Petri kabına yerleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, numuneyi parçalara ayırmak ve parçaları, inkübasyon için sindirim reaktifleri içeren konik bir tüpe aktarmaktır.
Daha sonra, hücre bulamacı sadece hücrelerin toplandığı bir filtreden geçirilir Santrifüjleme için son adım, süpernatantın atılması ve hücrelerin gece boyunca inkübasyon için ortamda yeniden süspanse edilmesidir. Sonuç olarak, epitelyal yumurtalık kanseri hücreleri haftalarca kültürde büyüyecek ve bu da aşağı akış uygulamalarına izin verecektir. Bu yöntem, her bir hasta için en iyi tedavi seçeneğinin ne olduğu gibi yumurtalık kanseri alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir.
Bu tekniğin etkileri, yumurtalık kanserinin tedavisine doğru uzanır, çünkü genetik manipülasyona oldukça duyarlı olan ve ilaç tarama testleri için daha yararlı olan daha gerçekçi hücre kültürlerini kullanmamıza izin verir. Başlamak için, 500 mililitre delcos, modifiye eagles, medium veya DMEM'i %10 fetal sığır serumu veya FBS ve %1 penisilin, streptomisin veya ps ile takviye edin. Ortamı dört santigrat derecede saklayın.
Numuneyi ameliyathaneden alın ve buz üzerinde, hala taşınan kabın içinde bulunan laboratuvara taşıyın. Numuneyi biyolojik bir güvenlik başlığına yerleştirin. Numuneyi 50 mililitrelik konik bir tüpten 10 mililitre taze buz gibi soğuk PBS içeren 60 milimetreye 60 milimetrelik bir Petri kabına aktarın.
Daha sonra, steril bir tıraş bıçağı kullanarak numuneyi iki milimetre veya daha küçük parçalar halinde kesin. Daha sonra DMEM'i 15 litrelik konik bir tüpte disk macun tüpü ile tedavi edin. Kıyılmış dokuları DMEM dispa iki karışım tüpüne aktarın.
Daha sonra numuneyi 30 dakika boyunca %5 karbondioksit ve 37 santigrat derecede inkübe edin. Optimum sindirimi sağlamak için hücre bulamacını her beş dakikada bir manuel olarak çalkalayın. İnkübasyondan sonra, hücre bulamacını 50 mililitrelik bir konik tüpün üzerine yerleştirilmiş 70 mikrometre gözenekli bir hücre süzgecinden geçirin.
Bir şırınga pistonu kullanarak ağa karşı nazikçe basınç uygulayın, ağın üstünde kalan ilişkisiz dokuları atın ve elde edilen hücre süspansiyonunu 50 mililitrelik steril konik tüpte toplayın. Sonra, santrifüj. Konik tüp, dört santigrat derecede yedi dakika boyunca 320 kez G'de.
Süpernatanı atın ve hücre peletini %10 FBS ve %1 ps içeren 10 mililitre DMEM'de yeniden süspanse edin. Daha sonra hücre süspansiyonunu bir Petri kabına aktarın ve süspansiyonu %5 karbondioksit ve 37 santigrat derecede inkübe edin. Hücresel kalıntıları ve kültürde bulunan eritrositlerin çoğunu çıkarmak için ilk kaplamadan 24 saat sonra ortamı değiştirin.
Son olarak, takip eden iki hafta boyunca ortamı her üç günde bir değiştirin, ardından birincil EOC hücrelerinin kültürleri aşağı akış uygulamaları için hazır olur. Kaplamadan hemen sonra. Epitelyal yumurtalık kanseri hücreleri veya EOC hücreleri, tek hücreli süspansiyonlar halinde ve eritrositler ve hücre kalıntıları ile bol miktarda kümeler halinde görülür.
Kaplamadan üç gün sonra EOC hücre kültürü, yarı yapışık EOC hücre kümeleri ve daha az eritrosit kontaminasyonu gösterir. İlk kaplamadan bir hafta sonra, EOC hücre kültürü, doku kültürü plastiği üzerine yayılan girdap benzeri bir hücre kümesi haline gelir. Tipik epitelyal parke taşı morfolojisi, kültürde 14 gün sonra EOC hücrelerinin birleşik bir tek tabakasında görülebilir.
Bu videoyu izledikten sonra, primer yumurtalık kanseri hücrelerinin katı klinik örneklerden nasıl izole edileceğini ve karakterize edileceğini iyi anlamış olmalısınız.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu çalışma, solid klinik örneklerden primer over kanseri hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu için ayrıntılı bir yöntemi tanımlamaktadır. Prosedür, epitelyal over kanseri hücrelerinin kültürde büyütülmesine olanak tanıyarak sonraki uygulamaları kolaylaştırır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Onkoloji
- Hücre Biyolojisi
- Klinik Araştırma
Arka Plan
- Over kanseri, karmaşık tedavi seçenekleri olan önemli bir sağlık sorunudur.
- Canlı kanser hücrelerinin izolasyonu, kişiselleştirilmiş tıp için kritik öneme sahiptir.
- Mevcut yöntemler, saf epitelyal over kanseri hücreleri elde etmeyi sağlamayabilir.
- Bu çalışma, daha iyi araştırma sonuçları için izolasyon sürecini geliştirmeyi amaçlamaktadır.
Çalışmanın Amacı
- Klinik örneklerden primer over kanseri hücrelerini izole etmek.
- İzole edilen hücreleri ileri uygulamalar için karakterize etmek.
- Over kanseri hastaları için tedavi seçeneklerine dair anlayışı geliştirmek.
Kullanılan Yöntemler
- Over yumurtalık tümörü örneklerinin toplanması.
- Doku örneklerinin enzimatik sindirimi.
- Canlı hücreleri izole etmek için filtrasyon.
- Santrifüjleme ve kültür ortamında yeniden süspansiyon.
Ana Sonuçlar
- Fibroblast içermeyen epitelyal over kanseri hücrelerinin başarılı izolasyonu.
- Hücreler, kapsamlı çalışmalara olanak tanıyacak şekilde haftalarca kültüre edilebilir.
- Yöntem, araştırmalar için güvenilir bir kanser hücresi kaynağı sağlar.
- Kişiselleştirilmiş tedavi stratejilerine temel oluşturma potansiyeli.
Sonuçlar
- Tanımlanan yöntem, over kanseri hücrelerinin izole edilmesi için etkilidir.
- Over kanseri tedavileri üzerine yapılacak ileri araştırmaları desteklemektedir.
- Gelecekteki çalışmalar, hasta sonuçlarını iyileştirmek için bu yöntemi temel alabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Yönetici Sektörel Uygunluk
Solid klinik örneklerden primer over kanseri hücrelerinin oluşturulması, birikmiş genetik artefaktlar içeren pasajlanmış hücre hatlarına olan bağımlılığı azaltan ve hastaya özgü modeller kurulmasına olanak tanıyan bir yöntemdir. Bu yaklaşım, primer veya metastatik lezyonların tümör heterojenliğini ve bölgeye özgü biyolojisini koruyarak, hedef doğrulamadaki mekanistik risklerin azaltılmasını destekler. Elde edilen kültürler, sonraki tarama işlemleri için yenilenebilir bir kaynak sağlayarak preklinik karar verme süreçlerindeki öngörü güvenilirliğini artırır.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Orijinal klinik örneğin genetik ve fenotipik profilini yansıtan hücreler kullanarak terapötik hipotezlerin sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Uzun süreli pasajlanmış hücre hatlarıyla ilişkili artefaktlardan kaçınarak mekanistik belirsizliği azaltır.
- Öngörücü Değer: Hastalıkla ilişkili bir sistemde biyolojik olarak riski azaltılmış hedef doğrulaması yoluyla portföy önceliklendirmesini destekler.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: Tümörjenik özelliklerini koruyan ve ilaç taraması için uygun epitelyal over kanseri hücreleri üretir.
- Operasyonel Değer: Enzimatik sindirim ve filtrasyon sonrası standartlaştırılmış, tekrarlanabilir hücre süspansiyonları sağlar.
- Ölçeklenebilirlik: Paralel analiz testleri için farklı örneklerden birden fazla primer kültür hazırlanmasına olanak tanır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Translasyonel Süreklilik: Doğrudan hasta örneklerinden türetilen hücreleri kullanarak, keşif ve preklinik çalışmalar arasında köprü kurar.
- Biyobelirteç Uyumu: Hedeflerin ve biyobelirteçlerin, hastanın tümörünü yansıtan bir bağlamda değerlendirilmesini destekler.
- Riskten Arındırılmış İlerleme: Klinik sonuçları daha iyi öngören primer hücrelerdeki yanıtlara dayanarak, devam/durdur kararlarına bilgi sağlar.
İşleme Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Yöntem, erken biyolojiden öncü bileşik tanımlamaya kadar uzanan keşif sürekliliğine uyum sağlayarak, sonraki tarama ve doğrulama çalışmalarının ilgisini artıran primer hücreler sunmaktadır.
- Keşif Biyolojisi: Tümörle ilişkili özellikleri korunmuş hücreler kullanarak hipotez testlerini ve yolak aydınlatmalarını destekler.
- Tarama: Bileşik değerlendirmeleri için büyümesi ve morfolojisi ölçülebilir, analize hazır primer epitelyal yumurtalık kanseri hücreleri sağlar.
- Analitikler: Genetik olarak stabil, düşük pasajlı bir sistemde ilaç yanıtının, proliferasyonun ve fenotipik değişikliklerin ölçülmesine olanak tanır.
- Translasyonel Araştırma: Örneklerden doğrudan türetilme yoluyla klinik uygunluğu korur; biyobelirteç ve hedef doğrulamayı destekler.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Çeşitli örneklerden primer kültürler oluşturmak için yeniden kullanılabilir bir platform kurarak, sınırlı hücre hatlarına olan bağımlılığı azaltır.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Orijinal tümörün heterojenliğini ve biyolojisini yansıtan hücreler kullanarak öngörüsel güvenilirliği artırır.
- Operasyonel Değer: Standartlaştırılmış enzimatik sindirim, filtrasyon ve kültür başlatma adımları aracılığıyla tekrarlanabilirliği sağlar.
- Stratejik Değer: Daha iyi preklinik hedef doğrulaması yoluyla geç evre başarısızlık riskini azaltarak sermaye verimliliğini geliştirir.
- Portföy Etkisi: Hasta kaynaklı primer hücrelerdeki aktiviteye dayalı olarak adayların riskten arındırılmış önceliklendirmesine olanak tanır.
Uygulama Hususları
- Steril doku işlemleri, enzimatik sindirim ve primer hücre kültürü teknikleri konusunda uzmanlık gerektirir.
- Steril koşullar altında toplanmış taze veya uygun şekilde korunmuş over tümörü örneklerine erişime bağlıdır.
- Santrifüj, filtrasyon ve biyogüvenlik kabinleri ile CO2 inkübatörlerini içeren kültür ekipmanları gerektirir.
- Fibroblast kontaminasyonunu minimize ederken epitel verimini maksimize etmek için sindirim süresinin ve mekanik disosiasyonun optimizasyonunu içerir.
- Cerrahi zamanlama ve taşıma koşullarına bağlı olarak değişkenlik gösterebilen örnek uygunluğu ve canlılığı ile sınırlıdır.
