Için Amelogenin-kitosan hidrojelin geliştirilmesi In Vitro Emaye büyütme

Bu prosedürün genel amacı, yüzeysel emaye rekonstrüksiyonu için bir AMLO ve kitosan hidrojel üretmek için bir protokol geliştirmektir. Bu, önce aşındırılmış diş dilimlerinin hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, taze AMLO ve kitan hidrojel hazırlanır.

Daha sonra, AMLO ve kitan hidrojel diş dilimi yüzeyine uygulanır. Son olarak, yapay tükürükte AMLO chizen hidrojel ile diş minesi yeniden büyütülür. Sonuç olarak, yeni oluşturulan tabakanın mekanik mukavemetini ve doğal emayeye bağlanmasını değerlendirmek için ultrasonik tedavi ve bir nano sözleşme kullanılabilir.

Bu tekniğin etkileri, hem yetişkinlerde hem de çocuklarda etkilenen diş minesine uygulandığından daha fazla bir teknoloji geliştirmemize kadar uzanır, erken çürük lezyonunu durdurur, çürüğe bağlı kayıp mineyi yeniden oluşturur, diş yapısını korur ve diş çürüğünün ilerlemesini önler. Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan doktora sonrası bir araştırmacı olan Dr.Chittar olacak. Restore edilmiş çürüğü olmayan bir insan üçüncü azı dişi seçerek başlayın.

Tacı uzunlamasına iki milimetre kalınlığında dilimler halinde kesmek için su soğutmalı düşük hızlı bir elmas testere kullanın ve ardından azı dişinin kök kısmını ultrasonik olarak çıkarın. Dilimleri iki dakika boyunca temizleyin ve ardından eroziv lezyonları simüle etmek için iyonize su ile üç kez durulayın. İki dilimi %30 fosforik asitle 30 saniye aşındırın.

Sonra hemen iyonize su ile durulayın. Sonra ultrasonik olarak. Kazınmış dilimleri tekrar iki dakika temizleyin ve iyonize su ile durulayın.

Üç kez daha. Kazan stok çözeltisini hazırlamak. Önce hacim başına %1 ağırlıkta, Kazan'ı hacim başına %1 hacimde asetik asit çözeltisinde çözün, ardından gece boyunca 80 santigrat derecede karıştırın.

Çözeltiyi oda sıcaklığına soğuttuktan sonra, esan'ı 0.45 mikrometrelik bir filtreden süzün ve ardından pH'ı 5.0'a ayarlamak için bir molar sodyum hidroksit ekleyin. Kalsiyum ve fosfat stok çözeltisini hazırlamak için, kalsiyum klorürü tartın ve 0.1 molar çözeltiyi karıştırın. Daha sonra, çözeltiyi berraklaşana kadar girdaplayın ve bir molar sodyum hidroksit ile pH değerini 11'e ayarlayın.

Ardından diba sodyum fosfatı tartın. 0.1 molar çözeltiyi karıştırın ve çözelti berraklaşana kadar girdap yapın. AMLO Genin kaizan hidrojelini hazırlamak için, 200 mikrogram rekombinant domuz AMLO genin içeren bir tüpe 960 mikrolitre taze hazırlanmış %1 esan solüsyonu ekleyin.

Sonra çözeltiyi berraklaşana kadar girdaplayın. Şimdi, 25 mikrolitre 0.1 molar kalsiyum klorür solüsyonu, ardından 15 mikrolitre 0.1 molar sodyum fosfat diba solüsyonunu ozan içeren AMLO çözeltisine ekleyin. Çözeltiyi beş dakika boyunca girdaplayın.

Daha sonra, AMLO ve ozan çözeltisinin pH'ını 6.5 AMLO'ya ayarlamak için dikkatlice bir molar sodyum hidroksit ekleyin ve bir hidrojel olan AMLO andaz'da mine büyümesini başlatmak için pH değeri 6.5'e ulaştığında ozan Hidrojel oluşacaktır. İlk olarak, yapay tükürük çözeltisinin pH'ını bir molar sodyum hidroksit ile 7.0'a ayarlayın ve çözeltiyi dört santigrat derecede saklayın. Daha sonra kenar diş dilimine yaklaşık 20 mikrolitre AMLO ve chizen hidrojel uygulamak için bir şırınga kullanın ve oda sıcaklığında bir kuruya koyun.

İki saat sonra, tükürük çözeltisine 300 PPM sodyum florür ekleyin ve ardından diş dilimini 30 mililitre çözelti içeren bir behere aktarın. Beheri alüminyum folyo ile örtün ve ardından beheri 37 santigrat derecede bir fırına koyun. Son olarak, diş dilimini üç ila yedi gün sonra çıkarın ve yedi gün boyunca AMLO ve chizen hidrojel ile tamir edildikten sonra kuruyana kadar oda sıcaklığında kuruyana kadar kurutun, kazınmış emaye yüzeyinde 15 mikrometre kalınlığında mine benzeri bir tabaka oluşur.

Yeni yetiştirilen katman, tercihen yüzeye dik deniz ekseni boyunca büyüyen, yaklaşık 50 nanometre çapında, oldukça düzenli kristal dizilerinden yapılmıştır. Bu iğne benzeri kristallerin, doğal emayenin temel birimlerine benzer demetler halinde düzenlendiğine dikkat edin. Onarılan katmanın seçilen alan elektron kırınım görüntüsü, yeni büyüyen kristallerin hiyerarşik bir hizalamasını ortaya çıkaran yay şeklinde bir desen sergiler.

0 0 2 yönlü x-ışını kırınım analizi boyunca, yeni büyüyen katmanın, taramalı elektron mikroskobu ve bu görüntüde seçilen alan elektron kırınım gözlemlerine uygun olarak kristalografik C ekseni boyunca hizalanan iştahtan oluştuğunu doğrular, yeni büyüyen katman ile doğal emaye arasındaki arayüzün mikro yapısı gösterilir. Yeni yetiştirilen kristallerin orijinal emaye kristaliti ile aynı yönde büyümediğini ve protein aracılı iştah büyümesinin, yeni yetiştirilen kristallerin doğal emaye kristallerine göre dik bir yönelimi ile sonuçlandığını unutmayın. Yeni yetiştirilen tabaka ile emaye substrat arasındaki arayüzde belirgin bir boşluk yoktur.

Nano ölçekte, emaye ve yeniden büyümüş kristaller, kesintisiz bir arayüz oluşturmak için bir araya geldi. 10 dakikalık ultrasonik işlemden sonra, AMLO Genin chito hidrojelde oluşan yeni büyüyen tabaka hala emaye yüzeyine sıkıca bağlanır ve organize yapı, molojen içermeyen tizen hidrojel ile muamele edilen numune için korunur. Bununla birlikte, emaye ile onarılan tabaka arasında, yeni yetiştirilen tabaka ile doğal emaye arasında net bir ayrım yapmak için büyük bir boşluk gözlenir.

Bu deneyde, yeni yetiştirilen tabakadaki AMLO genin, immünofloresan olarak etiketlendi, AMLO genin'in varlığı daha sonra yeni yetiştirilen tabaka içindeki yeşil floresan ile doğrulandı. Asitle aşındırma işleminden sonra grafikte gösterildiği gibi, emaye yüzeyinin sertliği ve modülü sırasıyla yaklaşık %98 ve %88 oranında azalır. AMLO genin içermeyen ozan hidrojel ile tedavi edilen kontrol grubu, hem sertlik hem de modülde sadece sınırlı bir iyileşme göstermektedir.

Buna karşılık, AMLO ve ozan hidrojelde mineralizasyondan sonra, modülünde yaklaşık dört kat, sertliğinde ise dokuz kat artış gözlenir. VI'da ve modellerde daha fazla değerlendirmede, bu protokol, erken çürük mesafesi ve aşınmış gibi enam defektini tedavi etmek için bir teknoloji tasarlamak üzere genişletilebilir. Öğr.