Sentez ve Kromatografi için optimal sabit faz kantitatif seçimi dahil edilmesi Iodoaziridines saflaştırılması

Bu prosedürün genel amacı, bir uç iyotlu bileşiği hazırlamak ve saflaştırmaktır. Bu işlem, öncelikle düşük sıcaklıkta diiyotmetanın deprotonasyonu ile dimetillityum oluşturulması ve bir immünle reaksiyona sokulmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, diiyot ara ürününün istenen iyotüridin ürününe siklizasyonunu teşvik etmek için reaksiyon karışımının hızla ısıtılmasıdır.

Ardından, saflaştırma için en uygun olanı belirlemek amacıyla I oto Uridine ürününün kromatografide kullanılan çeşitli sabit fazlara karşı stabilitesi değerlendirilir. Son adım, I oto a iyodu saflaştırmak ve proton NMR analizi gerçekleştirmektir. Nihayetinde, kromatografi için yapılan bu sabit faz taraması, temel Illumina modifiye aktivite dördünün IDO odine saflaştırması için en uygun olduğunu göstermek için kullanılır.

Bu yöntem fikri ilk olarak, yeni IDO iyot ürünlerinin silika jel kromatografisine karşı kararsız olduğunu fark ettiğimizde ve alternatif bir saflaştırma yöntemine ihtiyaç duyduğumuzda ortaya çıktı. Buradan hareketle, kromatografi için çeşitli sabit fazlara karşı IO iyodun stabilitesini değerlendirmek amacıyla, potansiyel olarak hassas diğer bileşikler için de uygulanabilecek bir prosedür tasarladık. Bu prosedürü Tom ve Dom uygulamalı olarak gösterecekler; her ikisi de araştırma grubumda doktora öğrencileridir.

Öncelikle, içinde manyetik karıştırıcı bulunan ve septumlu olan 100 mililitrelik yuvarlak tabanlı balon jojeyi argon akışı altında alevle kurutun. Balonun oda sıcaklığına soğumasını bekledikten sonra, şırınga aracılığıyla 5,7 mililitre susuz tetrahidrofuran ve 2,7 mililitre susuz etil eter ve mikro şırınga ile 315 mikrolitre taze damıtılmış heksaetil dilan ekleyin. Balonu, tamamen batmasını sağlayacak uygun boyutta bir banyoya yerleştirin.

Karıştırma işlemi başladıktan sonra, çözeltiyi -78 °C'ye soğutmak için karıştırıcıya kuru buz ve aseton ekleyin. Ardından, reaksiyon kabının dış etkenlere maruz kalmasını en aza indirmek için karıştırıcıyı alüminyum folyo ile kapatın. Bunun ardından, 0,6 ml 2,5 M n-bütillityum (hekzan içinde) çözeltisini bir şırınga aracılığıyla iki ila üç dakika boyunca damla damla ekleyin.

Karışımın -78 °C'de 30 dakika boyunca karıştırılmasına izin verdikten sonra. Lityum heksa etil dilan çözeltisini oluşturmak için, alevle kurutulmuş 10 mL'lik yuvarlak tabanlı bir balona şırınga aracılığıyla 1 mL susuz terah hydro ferran ekleyin. Ardından bir mikro şırınga ile 135 µL di ITOM metan ekleyin ve çözeltinin iyi karıştığından emin olmak için balonu yavaşça çalkalayın.

Ardından, di ITOM metan çözeltisini, lityum heksa etil dilan çözeltisine eksi 78 °C'de iki dakika boyunca damla damla ekleyin ve çözeltinin 20 dakika boyunca karıştırılmasını sağlayın. Başka bir alevle kurutulmuş 10 mL yuvarlak tabanlı balona 135 mg amin tartın ve bunu 2 mL susuz tetra hidro furan içerisinde çözün. 20 dakikalık deprotonasyon süresinin ardından, imin çözeltisini eksi 78 °C'de beş dakika boyunca di ito metil lityum çözeltisine damla damla ekleyin.

Damla damla ekleme işlemi tamamlandıktan hemen sonra, reaksiyon kabını kuru buz banyosundan çıkarın. Balonu alüminyum folyo ile kaplayın ve sıfır derece santigrat derecedeki buzlu su banyosuna aktarın. Çözeltiyi sıfır derece santigrat derecede 15 dakika boyunca karıştırın.

Ardından, 30 mililitre doygun sodyum bikarbonat sulu çözeltisi ekleyerek reaksiyonu durdurun. Karışımı bir ayırma hunisine aktarın ve 30 mililitre diklorometan ekleyin. Karışımı çalkalayın, huninin basıncını tahliye edin ve alttaki organik fazı ayırın.

Ekstraksiyon işlemini iki kez tekrarladıktan sonra, çözeltide bulunan suyu uzaklaştırmak için birleştirilmiş organik katmanlara sodyum sülfat ekleyin. Ardından, pamuk tıkalı bir cam huni kullanarak vakum filtrasyonu ile sodyum sülfatı süzün; filtratı 250 mililitrelik bir yuvarlak tabanlı balona toplayın ve çözücüyü bir döner evaporatörde indirgenmiş basınç altında uzaklaştırın. Bu işlem, istenen ITO uridin ürününün saf olmayan bir örneğini sağlayacaktır.

Ham dine örneğine iç standart olarak 1 3 5 TRIMETH oxy benzene ekleyin ve ham dine örneğini di chloro methane içerisinde çözün. Tamamen çözündüğünden emin olun. Bu karışımdan bir alikot alın, ardından solventi indirgenmiş basınç altında uzaklaştırın.

İşlem tamamlandığında, örneği proton NMR spektroskopisi ile analiz edin. NMR analizinin ardından, kaydedilen proton NMR spektrumunu Mnova gibi standart bir NMR işleme yazılımı kullanarak açın. Spektrumun üzerine sağ tıklayın ve entegrasyon seçeneğini belirleyin.

Ardından, entegrasyon aracını sağlamak için manuel seçeneğini belirleyin. İç standart sinyalini ve sırasıyla aine CHI sinyalini entegre etmek için 6.08 PP m ve 4.87 PP M'deki piklerin genişliğini kapsayacak şekilde tıklayıp sürükleyin. 6.08 PP m'deki pikin integrali üzerine sağ tıklayıp integrali düzenle seçeneğini seçin ve normalize edilmiş değeri 3.0 olarak değiştirin.

Ardından, I OTO iyot verimini belirlemek için iyot CHI sinyalinin güncellenmiş integral değerini kullanın. NMR analizi tamamlandığında, içinde manyetik karıştırıcı bulunan altı ayrı 250 mililitrelik erlenmayerde, aşağıdaki sabit fazların 25 gramını 50 mililitre %5 etil asetat heksan ile karıştırın. Kontrol olarak kullanılmak üzere 50 mililitrelik bir %5 etil asetat heksan çözeltisi hazırlayın.

Ardından, süspansiyonları manyetik karıştırıcı üzerinde karıştırın. Oda sıcaklığında bekletilen her bir erlenmayerin içine iki mililitrelik I OTO Azarin iç standart çözeltisi alikotları ekleyin. Daha sonra, süspansiyon karışımlarını 30 dakika boyunca karıştırın.

30 dakika sonra, her bir bulamaç karışımını merkezlenmiş bir huni kullanarak vakum altında süzün ve her bir süzüntüyü 250 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir balona toplayın. Merkezlenmiş huni içindeki kalıntıyı 30 mililitre diklorometan ile iki kez yıkayın. Elde edilen örneklerdeki solventi döner evaporatör kullanarak uzaklaştırın.

Bunu takiben, her bir durumda geri kazanılan iyot miktarını hesaplamak için örnekleri proton NMR spektroskopisi ile analiz edin. Daha önce açıklandığı gibi, verimleri laboratuvar defterine kaydedin. En yüksek verimi veren örneği belirlemek için, test edilen her bir sabit fazdan elde edilen iyot verimlerini daha önce elde edilenlerle karşılaştırın.

Ardından, temel Illumina aktivitesi oluşturmak için daha önce açıklanan sentezi tekrarlayarak ham IO iyot karışımını hazırlayın. Dördüncü olarak, 500 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir erlene 100 gram temel Illumina aktivitesi ekleyin ve ardından erlene 10 mililitre su ilave edin. Erlenle bir cam tapa taktıktan sonra, suyun Illumina içinde eşit şekilde dağıldığını gösteren topaklanmalar kaybolana kadar şiddetle çalkalayın.

Illumina oda sıcaklığına soğuduğunda, ham IO iyodu temel Illumina aktivite dört kullanılarak kolon kromatografisi ile saflaştırın. Sabit faz olarak, %5 YL asetat taksan seviyesine kadar gradyan heksan ile elüe edin. Ürünü içeren fraksiyonları bir balon jojeye birleştirin ve saf I oto iyodu elde etmek için çözücüyü döner evaporatör kullanarak uzaklaştırın.

Saflaştırma öncesinde, proton NMR ile %59 veriminde I oto a iyot hesaplanmıştır. Ancak, bu I oto a iyodun saflaştırılması zor olmuş ve bazik Illumina üzerindeki silika saflaştırması sırasında önemli ölçüde bozunmaya uğramıştır. Etkinlik dört, ürünü %48 verimle sağlamıştır.

Proton NMR analizi, sabit fazlar için dahili standartla karşılaştırıldığında bir dizi verim sağlamıştır; basic Illumina activity four, NMR verimine en yakın olan %53 ile en yüksek verimi vermiştir. Bu nedenle, son aşama için basic Illumina activity four seçilmiştir. Toal iota IR yöntemine göre saflaştırılmıştır.

Geniş bir ITO amin seçkisine yüksek verimle erişilebilir. Sterik olarak hacimli tersiyer ve orto konumlar dahil olmak üzere, hem alifatik hem de aromatik ve total aminler reaksiyonla uyumludur. Örneklere bakıldığında, reaksiyonun önce deprotonasyon ve ardından nükleofilik katılım ile gerçekleştiği öngörülmektedir.

Amino gem di iyodür ara ürününe uygulanan ardından gelen ısıtma işlemi, cis iyodu destekleyen yüksek düzeyde DIA stereoselektif bir siklizasyonu tetikler. Reaksiyon optimizasyonu sırasında siklizasyon geçiş durumundaki ince sterik etkileşimler nedeniyle, sıcaklık kontrolü ve zamanlama reaksiyon sonucu için temel önem taşımıştır. Reaksiyonun ısıtılmadan durdurulması, terminal IO iyodu ve amge di iyodürü vermiştir.

Ancak, ürünler reaksiyon koşulları altında bozunmaya uğramaktadır; bu durum, reaksiyonun ısıtılması ve reaksiyon sürelerinin kısaltılmasıyla önlenebilir. Bu videoyu izledikten sonra, IO iridyum ürününün nasıl sentezleneceği ve kromatografi ile saflaştırma için geniş bir sabit faz yelpazesine karşı stabilitesinin nasıl değerlendirileceği konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız. n-bütil lityum ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve azot atmosferi altında çalışmak ve fazla miktarı güvenli bir şekilde söndürmek gibi önlemlerin gerektiğini unutmayın.

Bu prosedür gerçekleştirilirken her zaman reaktif alınmalıdır.