Gastropod Molluskların Yumurta döflenmesi erkek Aksesuar Bezi Ürünlerinin Etkisi

Bu protokolün genel amacı, seminal sıvı proteinlerinin eşzamanlı bir hermafrodit türünün yumurtlama davranışı üzerindeki etkilerini karakterize etmektir. Bu, önce bireylerin standart bir laboratuvar kültüründen izole edilmesi, ardından hedef organların diseksiyonu ile gerçekleştirilir. İkinci olarak spermler toplanır ve bir tedavi solüsyonu yapılır.

Bundan sonra salyangozlar yapay olarak tohumlanır. Sonra bir biyografi denemesine konurlar. Standart koşullar altında, yumurta kütleleri toplanır, taranır ve yumurtadan çıkmak için ayrı ayrı BS'ye konur.

Birkaç hafta sonra, yavrular sayılır ve taranır, ardından tüm resimler özgür yazılım kullanılarak analiz edilebilir. Bu protokol, seminal sıvı proteinlerinin aracılık ettiği cinsel seçilim süreçleri hakkındaki soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Burada eşzamanlı hermafroditlere baktığımız için, bu süreçlerin ayrı cinsiyet türlerinde olduğu gibi benzer veya farklı şekillerde çalışıp çalışmadığını da ele alabiliriz.

Bu protokol için, Amsterdam'daki VU Üniversitesi'nde sürdürdüğümüz büyük IL in les'i kullandık. Bu türü, cinsel seçilim ve üreme ile ilgili soruları incelemek için kullanıyoruz. Hermafroditlerde, nispeten büyük vücut boyutu nedeniyle, deneysel olarak çok erişilebilirdir.

Ek olarak, birçok farklı biyolojik disiplinde model bir tür olarak kullanıldığı için, bu hayvanların temel biyolojisi hakkında çok şey biliyoruz. Benim adım Yumi. Ekolojik Bilimler Bölümü'nde doktora yapıyorum.

Tam üniversitede, aşağıdaki protokolleri göstereceğim. Başlayalım. Güvenilir bir biyoza gerçekleştirmek için, gizlenen değişkenleri dışlamak için en yaygın olarak bir laboratuvar kültürü kullanılır.

Düşük bakır su 20 santigrat derecede tutulur ve açık karanlık döngü 12 x 12 saattir. VU Üniversitesi'nde laboratuvar kültürü, sürekli su değişimi olan yetiştirme tesisi tanklarında muhafaza edilmektedir. Standart koşullar altında, yetişkin salyangozlar libidoda marulla beslenir ve yaş sınıflarına göre ayrılır.

Salyangozlar üreme tesisinden çıkarıldıktan sonra kullanımda kabul edilir ve üreme tanklarına iade edilemezler. Prosedüre başlamadan önce, bir stereo mikroskokoba, pimli bir diseksiyon plakasına, küçük cerrahi makaslara, forsepslere, magnezyum klorür çözeltisiyle doldurulmuş bir şırıngaya ve salyangozu ötenazi yapmak, enjeksiyon iğnesi ile ayağa 45 derecelik bir açıyla nüfuz etmek ve salyangoz gevşeyene ve uzamış kalana kadar sürekli olarak hafifçe basınç uygulayın. Enjeksiyon iğnesini çıkarın ve salyangozun ötenazi yapıldığından emin olun.

Sonra, forsepsleri alın ve kabuğu dikkatlice çıkarın. Eğriliğin yarıya kadar ardından, ular kasını kabuktan nazikçe kazıyın. Ardından, kabuğun sarma yönünü takip ederek salyangozu yavaşça kabuğundan çıkarın.

Artık salyangoz kabuğundan çıkarıldı ve kabuk atılabilir. Daha sonra, salyangozu diseksiyon plakasına yerleştirin ve ayağın arka ucundan bir pim yerleştirin. Ardından kafaya bir iğne yerleştirin.

Salyangozun üzerine biraz gerginlik koyun ve pimi plakaya yerleştirin. Şimdi salyangoz diseksiyon için hazır. Stereo mikroskobun ışığını açın ve mikroskobu ayarlayın.

İlk kesiyi yapmadan önce, kadın porunu lokalize etmek önemlidir. Bu daha sonra bir referans noktası olacaktır. Mantonun kenarının hemen altında ilk kesiyi yapın ve Kadın poruna doğru kesin.

Bonno gözeneğinin etrafında başa doğru bir dönüş yapın. Sadece cildi kestiğinizden ve herhangi bir organa çarpmadığınızdan ve düz bir çizgide kestiğinizden emin olun. Bu çalışma için prostat bezini inceleyeceğiz ve sırasıyla seminal sıvı ve sperm için seminal veziküller.

Tam sperm ve seminal sıvı depoları için salyangozların bir hafta boyunca ad libido ile beslenerek izole edilmesi gerektiğini lütfen unutmayın. Diseksiyon daha önce açıklananla aynıdır. Seminal veziküller hayvanın arka tarafında bulunur.

Daha sonra, prostat bezi tuzlu su içinde süspanse edilecek ve buza konacaktır. Daha sonra. Bunlar tedavi solüsyonları ile karıştırılacaktır.

İntravajinal enjeksiyondan önce, toplanan sperm seminal sıvıya veya tek tek proteinlere uygun bir dozda eklenecektir. Bu suni tohumlama tekniği için, bir mililitrelik şırıngaya ihtiyacınız olacak Test solüsyonunu içeren şırıngalara bir enjeksiyon iğnesi takın, enjeksiyon için şırıngalara sıkışmış kabarcık olmadığından emin olun, silikon tüpü dikkatlice kullanın. Silikon tüpü enjeksiyon iğnesinin üzerine kaydırın.

Tüpün delindiğinden emin olun ve tüpteki havayı boşaltın. Enjeksiyondan önce salyangozun sakinleştirilmesi gerekir. Bu, ikinci bölümdeki ile aynı protokolü izleyecektir.

Salyangoza iki ila üç mililitre 50 mikro azı dişi magnezyum klorür dozu verilecektir. Salyangoz uygun şekilde sakinleştirildiğinde ve gevşediğinde, sabit bir pozisyonda tutmak için kalıba yatırın. Daha sonra, silikon tüpün ucunu bir çift ince forseps ile tutun ve yavaşça dişi pora itin.

Ardından Şırıngaya nazikçe basınç uygulayın ve test çözeltisinin öngörülen hacmini dikkatlice enjekte edin. Tüpteki basıncın kadın organına yayılması için yarım dakika bekleyin. Bundan sonra, tüpü dikkatlice çıkarın ve salyangozu kendi özel kabına koyun.

Sonuçta, salyangozlar yapay olarak tohumlanmıştır. Deney tanklarına taşınabilirler ve bios biyo-tahlili başlayabilir. Salyangozlar birkaç saat sonra sedasyondan kurtulacaktır. Biyolojik tahliller.

Cinsel seçilim için, biyosa başlamadan önce deneyler normalde iki hafta sürer. Tüm bireyleri kendi kaplarına koymak ve etiketlemek önemlidir. Ardından, her salyangozun kabuğunun uzunluğunu ölçün.

Bu, cinsel davranış üzerinde etkisi olabilecek Boyutlarının iyi bir göstergesidir. Bundan sonra, salyangozlar bir Deney tankına konur. Bu tank, yetiştirme tesisi ile aynı standart koşullara sahiptir.

Birinci bölümde tartışıldığı gibi, açıklıkların tanktaki su akışını takip etmesi için kapları doğru yönde yerleştirmek önemlidir. Biyoanalizler sırasında salyangozların düzenli olarak beslenmesi gerekir. Standart miktarda marul marul diskleri metal bir delgeç ile kesilir.

Yeterli bir dozaj, her gün iki disktir. Model türü olan lumia stauss ile salyangozlar gün aşırı yumurta kütleleri açısından kontrol edilmelidir. Bu Yumurta kütleleri ölçümler için toplanacaktır.

Yumurtaların taranması için ihtiyacınız olacak Tarayıcı sürücüsünü içeren bir dizüstü bilgisayar, düz yataklı bir tarayıcı, standart bir milimetre ölçeği, bir yumurta kütlesi kaşık aktarma plakaları ve yumurta kütlelerinin üzerine koymak için cam plakalar. İlk önce kaşığı alın ve yumurta kütlelerini kap duvarlarından kazıyın. Opak olan yumurta kütleleri yeni bırakılmıştır ve kullanılamaz.

Bu ölçüm olayında, yumurta kütlelerini aktarma plakalarına yerleştirin ve plakalar dolana kadar bu adımları tekrarlayın. Bundan sonra, yumurta kütlelerini cam karoların üzerine aktarma plakaları ile aynı sırayla koyun. Yumurta kütleleri cam karoya yapışacak, ters çevirecek ve terazinin hemen altındaki düz yataklı tarayıcıya dikkatlice yerleştirecektir.

Daha sonra yumurta kütlelerini ezmek için plakalara baskı uygulayın. Bu, şimdi bile tüm yumurtaları ekleyecek, böylece eşit derecede iyi taranacaklar. Taramadan önce, ayarların yapılması önerilir En iyi sonuç için.

Tarama için, bir önizleme taraması yapmak için çözünürlüğü maksimuma ayarlamak önemlidir Daha sonra çalışma alanını kırpmak ve son olarak, son taramayı yapmadan önce parlaklığı ve kontrastı ayarlamak için. Taramadan sonra, yumurta kütleleri olgunlaşmak ve yumurtadan çıkmak için kendi etiketli Şişelerine yerleştirilecektir. Bu şişeler, oksijeni uygun bir seviyede tutmak için sularını iki günde bir tazeler.

Daha fazla salyangoz yumurtadan çıktıkça, suyu tazelemek için farklı teknikler kullanılmalıdır. En iyi sıra, önce dökmek veya taşmak ve daha sonra suyu bir pipet açık görüntü JA elektronik tablo programı ile emmektir. Verileri ve bir fotoğrafı önce görüntü J içinden kaydetmek için, yakınlaştırma aracını kullanın Milimetre ölçeğine gitmek için.

Yakınlaştırın ve pencereyi, ekranı bir Milimetre dolduracak şekilde ayarlayın. İki gösterge çizgisi arasında çizgi aracını kullanarak bir çizgi çizin. Ardından, analiz etmek için gidin ve ardından ölçeği ayarlayın.

Açılır menüde, Ölçülen uzunluk bilinen mesafeyi bire ve birimi milimetreye ayarlayın. Kutuyu işaretleyin global ve pencereyi kapatın. Artık ölçek ayarlandığına göre, ilk yumurta kütlelerine doğru yakınlaştırabiliriz %800'e kadarYumurtaların çevresini çizmek için eliptik aleti kullanın.

Çevreyi çizmek için D'ye basın. Bu, aynı yumurtanın iki kez ölçülmesini önlemeye yardımcı olacaktır. Çevreyi ölçmek için M'ye basın.

Yeterli veri toplandıktan sonra bir pencere açılacaktır. Veri penceresi bir Excel dosyası olarak kaydedilebilir. Veriler doğrudan bir çalışma sayfasına da kopyalanabilir.

Tercih edilen ölçümler açılır pencerede görünmüyorsa, bu ayarlanabilir ve analiz edilebilir. Set ölçümleri, yumurta kütleleri başına tek tek yumurtaları saymak da hücre sayacı eklentisi yardımıyla yapılabilir. Eklentilere gidin.

Ardından hücre sayacını analiz edin ve seçin. Hücre sayacı penceresi açılacaktır. Orijinali sakla kutusunu işaretleyin ve başlat'a basın.

Yeni bir sayaç penceresi belirdi. Araç çubuğundan buraya çarpı aracını seçin. Ardından, hücre sayacı menüsünde bir sayaç türü seçin.

Hücre sayacı penceresine tıklandığında yumurtalar sayılacaktır. Toplam sayı, hücre sayacı menüsündeki sayaç türünün yanında bulunabilir. Hücre sayacı ile birden fazla yumurta kütlesi sayılabilir.

İstenirse sayaç türleri eklenebilir ve kaldırılabilir, Bu numaranın bir elektronik tabloya manuel olarak kopyalanması veya sonuçlara basılması gerekir ve bir pencere açılır. Tüm sonuçlar gösteriliyor. Bu Yöntem ile seminal sıvı proteinlerinin nasıl toplanacağını, bunların anlamlı bir şekilde nasıl test edileceğini gösterdik.

Bunu tam prostat bezi ekstraktını kullanarak gösterdik, ancak elbette, tek tek seminal sıvı proteinleri de aynı şekilde test edilebilir. Ek olarak, diğer işlemlere ve yumurtlamaya bakmak mümkündür. Deneylerimizin sonuçları, yumurta şeridinde bir azalmaya aracılık eden avios statin adı verilen tek bir seminal sıvı proteini olduğunu göstermiştir.

Ek olarak, seminal sıvı transferinin boyutları veya direkleri artırdığını bulduk. Statin, eşzamanlı bir hermafroditte tam olarak karakterize edilmiş ilk seminal sıvı proteinidir. Seminal sıvının etkileri genellikle ayrı cinsiyetlere sahip türlerde bildirilmiş olsa da, sonuçlarımız seminal sıvıların Hermafroditlerde eşit derecede önemli olduğunu vurgulamaktadır.