Name: Morphologically- ve nörokimyasal tanımlanan hipokampal internöronlardan gelen tüm hücre Patch-kelepçe Kayıtlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 37 s
Description: Öğrenin hipokampal parvalbumin pozitif internöronlarda GABA B reseptör etkilerini karakterize etmek için tüm hücre yama kelepçe kaydı yöntemini. Bu teknik, inhibitör devreleri incelemede araştırmacılara kesin sınıflandırma sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar onu mükemmel teknik yardım için Ina Wolter teşekkür etmek istiyorum. VGAT Venüs transgenik fareler Dr ile oluşturulmuştur. Dr A. Miyawaki tarafından sağlanan pCS2-Venüs kullanarak Y. Yanagawa, M. Hirabayashi ve Milli Fizyolojik Bilimler Enstitüsü, Okazaki, Japonya Y. Kawaguchi.

Etik Açıklama: Tüm prosedürler ve hayvan bakım Kurumsal kurallarına uygun olarak yapıldı, Alman Hayvan Refahı Yasası, Avrupa Konseyi hayvanların korunmasına ilişkin Direktifi 86/609 / EEC ve yerel otoriteler (Berlin, T-0215/11 den kılavuzlar ) Akut-hipokampal Dilimleri hazırlanması 1. <ol><li> Kortikal inhibitör 13 çoğunluğunu etiketler vGAT promoteri altında, floresan Venüs / YFP proteini ifade edilmesi, (17-24 günlük) bir transgenik fare al. Sıçan başını kesmek. Hızla carbogenated, semifrozen (% 95 O 2 /% 5 CO 2) sakaroz bazlı yapay beyin omurilik sıvısı (sakaroz-ACSF, Şekil 1A) içine beyin (&lt;40 sn) teşrih. </li><li> , Lamba ve 515 emisyon filtresi LED gözlük bir çift üzerine monte nm bir 505 ile Venüs / YFP floresan için disseke sıçan beyni değerlendirin. </li><li> Korteks ve Cereb cephe üçte çıkarınEllum; sonra tüm bir neşter ile, hemisferlerdir ayırmak. Daha önce tarif edildiği gibi 14, beyin aşağı yapıştırmak için düz bir yüzey temin etmek üzere korteks dorsal yüzeyini çıkarın. </li><li> Bir vibratom üzerinde hipokampal oluşumun enine dilim (300 mikron) Kesme, hemisfer semifrozen ile çevrili olmalı, sakaroz-ACSF (Şekil 1B) 14 carbogenated. Rostral korteks, midbrain ve beyin sapı ek bölgeleri çıkarın. Carbogenated ve 35 ° C&#39;ye ısıtılır sükroz ACSF ihtiva eden bir yarı-tutma odasına her dilim aktarın. </li><li> Isındı ACSF giren son dilimin zaman 30 dakika boyunca 35 ° C&#39;de kurtarmak için dilimleri bırakın. Metabolik süreçleri etkinleştirmek ve kesilmiş nöronal süreçlerin kapanmanın kolaylaştırmak için bunu yapın. Daha sonra depolama (Şekil 1C), oda sıcaklığında transfer. </li></ol> 2. İmalat ve Kayıt Pipetler dolumu <ol><li> Pu(hücre içi etiketleme için)% 0.1 biocytin ihtiva eden hücre içi çözelti filtreden geçirilmiş ile doldurulduğu zaman 2-4 M? bir pipet direnci elde edilir, böylece cam kılcal LL yama pipetler, (0.2 mikron bir şırınga filtreden, gözenek boyutu). Bileşenlerinin bozunmasını önlemek için buz üzerinde soğutulmuş, hücre içi çözelti tutun. </li><li> Konsantrasyon (; çözelti listesine bakınız E R (Cl) = -61 mV), - fizyolojik olarak ilgili olan, düşük Cl ihtiva eden bir çözelti ile postsinaptik akımlar tespit edilmesi için yama pipetler doldurun. </li><li> Konsantrasyonunu (E R (Cl) = - eşleştirilmiş kayıtları presinaptik reseptörü kaynaklı tepkileri belirlemek için, düşük bir Ca 2 + tampon presynaptically transmiter salımına engel olmamak için kapasitesi, hem de 4-kat daha yüksek bir Cı gibi, hücre içi çözelti ile yama pipet dolgu -20 mV) sinyal-gürültü farmakolojik respin doğru değerlendirilmesini sağlayan gözlenen iPSCs 5 artırmak içinonsiveness. Konsantrasyon IPSC kinetik 15 değiştirebilecek - Cl değişen unutmayın. </li></ol> FS-ins 3. Tüm Hücre Patch-kelepçe Kayıt <ol><li> ACSF Carbogenate ve (aynı zamanda emme hattı, Şekil 2A aracılığıyla kayıt odasından ACSF kaldırır) bir peristaltik pompa vasıtasıyla, kayıt odasına perfüzyon sistemine beslenir. Kayıt için hazırlık kurulum tüm ekipmanı açın. </li><li> Kayıt odasına bir dilim aktarın ve ipek tek lifleri ile sinirli bir platin halkası ile yerinde tutun. CA1 stratum (str.) Pyramidale hem str 2 pipet ile erişim sağlayan, görüş alanında dikey olarak çalışacak şekilde dilim yerleştirin. radiatum ve str. oriens anda (Şekil 2C ve 4A). </li><li> (32-34 ° C) kayıt A kurulum içine odasına yerleştirin ve carbogenated perfüzyon başlar ve ısındı5-10 ml / dakika bir akış hızında CSF verildi. </li><li> 40X objektif büyütme IR-DIC optik altında dilim kalitesini değerlendirmek ve bir ekranda izlendi CCD kamera ile görselleştirmek. Yuvarlak, orta kontrastlı CA1 piramidal hücreleri (CA1 PC), çok sayıda str görüldüğü takdirde iyi bir dilim kaliteli varsayalım. pürüzsüz ve hafifçe kraterli yüzeyi (Şekil 2C) altına 20-30 mikron derinlikte pyramidale. Kalitesiz dilimleri pürüzlü bir dilim yüzeye sahip, yüksek kontrastlı, çökmüş ya da şişmiş hücrelerin çok sayıda içerir. </li><li> Veya str yakın büyük kutuplu somata ile Venüs / YFP (Şekil 2B), ifade gibi epifloresans aydınlatma altında farazi FS internöronlardan tanımlayın. pyramidale. Makul derin amacıyla dilim (50-100 mikron, Şekil 2C) içindeki hücreleri seçin daha iyi morfolojik bütünlüğünü korumak için. </li><li> Headstage pipet tutucu kayıt elektrodu monte; Daha sonra uygulamaly tüp hattı üzerinden düşük, pozitif basınç (20-30 mBar). Dilim yüzeyine indirin pipet hafifçe seçilen nöronun merkezine kaydırın. </li><li> Daha önce 14,16 anlatıldığı ve aynı zamanda 2D ve 2E Rakamlar bkz olarak tam hücreli kayıt yapılandırmasını edinin: <ol><li> Bir hücreyi hedef: 70-80 mBar&#39;a basıncını arttırın ve hızla sadece seçili hücreye (Şekil 2B, üstte) soma yukarıda dilim aracılığıyla pipet indirin. </li><li> Hücreyi Yaklaşım: (üst, Şekil 2B) bunun üzerine bir &quot;gamze&quot; üretmek için hücre zarı karşı pipet basın. Komşu hücrelerin biocytin etiketleme önlemek için, hızlı bir şekilde bu adımı gerçekleştirin. </li><li> Giga-ohm mühür oluşturun: pipet 20 mV gerilim komutu uygulamak eşzamanlı basıncı bırakın ve. Bir giga-ohm mühür (1-50 GΩ Şekil 2B, alt ve Şekil 2E orta) typicmüttefiki hızla gelişir. Bir kez gerilim komut olarak potansiyel beklenen dinlenme membran (tipik olarak -70 ve -60 mV) uygulanacaktır, mühürlü. </li><li> Yama kırmaya: mühürlü sonra, negatif basınç kısa bir darbe ile membran rüptürü yama; böylece bütün hücre konfigürasyonu (Şekil 2E ve alt) etkisi. </li></ol></li><li> Bütün hücre kapasitans ve seri direnç (R S) dengeleyin. R s 120 dakikaya kadar normalde 5-20 M? Ve kararlı. Break-through membran potansiyeli (V M) -50 mV daha depolarize ise hücreleri terk; R S 30 M? Daha başlangıçta büyüktür; Kaydın boyunca% 20&#39;den fazla ya da R ve S değişir. </li><li> (+250 PA, Şekil 2F, top -250) akım darbeleri Depolarizan için hiper bir aile (akım kelepçe modunda) onların yanıt FS-İnş tanımlayın. FS-INs nispeten V M (genellikle -50 t depolarize varo -60 mV), kısa membran zaman sabiti (&lt;20 msn) ve frekanslarda aksiyon potansiyelleri bir tren (AP) ile akım enjeksiyon Depolarizan 500 pA yanıt&gt; 100 Hz 11 (Şekil 2F, alt), belirgin olan CA1 PC&#39;ler (Şekil 2F, orta) olanlar farklı. </li></ol> 4. Hücre dışı Elektriksel Stimülasyon GABA B R-aracılı yanıtları uyandırmak için <ol><li> Str sınırında dilim:; synaptically uyarılmış yanıtları gözlemlemek için, bir hücre dışı uyarım elektrot (0.1-0.3 M? Direnç 2 M NaCl ile dolu bir yama pipet) yerleştirin. radiatum ve str. lacunosum-moleculare. stimülasyon eserler (Şekil 3A) hücrenin doğrudan elektrik stimülasyonu önlemek ve en aza indirmek için soma elektrodu 200-300 mikron yanal yerleştirin. </li><li> Stimülasyon elektrodu bir biçimde pozisyonlandığı zaman, tüm hücre kayıt eldeseçilen hücre ve 3.9 bölüm (Şekil 3B) olarak akım kelepçe modunda fizyolojik fenotipi değerlendirmek. </li><li> Voltaj-kelepçe (V M -65 mV) kaydedilen nöron ile bir presinaptik akson elektriksel uyarımı sağlamak 50 V (~ 500 uA etkili uyarıcı), izole edilmiş bir sabit voltaj uyarıcısı kullanılarak her 20 saniye,. Tek uyaranlara kullanın (100 mikro-saniye süresi, Şekil 3C, üst) GABA B R aracılı iPSCs gözlemlemek, ve daha verici serbest üretmek için (200 Hz) birden uyaranların trenler ile birbirinden. </li><li> İzole monosinaptik IPSC (orta üst Şekil 3C) ortaya çıkarmak için:;: Banyo İyonotropik glutamat reseptör antagonistleri (d-AP5 [50 iM] NMDA reseptör DNQX [10 iM] AMPA reseptörü) uygulanır. Bundan başka, bir GABA A, R&#39;nin bloker tatbik edilmesi ile, GABAB R aracılı iPSC izole (gabazine [10 uM]; Şekil 3C, L ortaower). </li><li> GABA B sonraki uygulama CGP-55845 [5 mcM] (Şekil 3C alt, gri bindirmiştir) tarafından R-aracılı olarak bileşkesini yavaş dışa akım (genişletilmiş Şekil 3C düşük) onaylayın </li></ol> FS-IN ve CA1 PC&#39;ler birleştiğinde synaptically 5. Eşli Kayıtlar <ol><li> Aşağıda açıklandığı gibi sinaptik-birleştiğinde IN ve PC çiftleri arasında yapılan eş zamanlı kayıtları ile inhibitör sinaptik iletim GABA B R aracılı presinaptik kontrolünü değerlendirmek. </li><li> Öncelikle, (bölüm 3 gibi) bir presinaptik interneuron bütün bir hücre kayıt kurmak ve FS fenotip (Şekil 4A) onaylayın. </li><li> Sonra komşu CA1 PC (20-100 mikron mesafe, Şekil 4A) yama ve APleri ortaya çıkarmak için (akım kelepçe modunda tutulan) presinaptik IN akım darbeleri (1 msn süre, 1-5 nA genlik) Depolarizan kısa suprathreshold geçerlidir. Sinaptik bir işbirliği halindennection, voltaj-kelepçe düzenlenen CA1 PC, içinde olarak iPSCs neden olmaktadırlar AP (yaklaşık% 80 ila R S telafi) kullanılır. </li><li> Gerekirse bir bağlantı bulunana kadar, daha CA1 PC&#39;ler yeni kayıt elektrot ve kayıt doldurun. </li><li> Bir bağlantı kurulduktan sonra, üniter sinaptik tepki ve dinamik davranışı hem değerlendirmek için presinaptik FS-IN içinde AP çiftleri ortaya. 50 milisaniye aralıklarla (Şekil 4B) ile 2 olan depolarize edici uyarılara tipik bir eşleştirilmiş darbe protokolünü kullanır. </li><li> Bazal koşullarda kontrol izlerini toplayın. Daha sonra, bu şekilde tam olarak reseptör aracılı etkileri engellemek için, antagonistin CGP-55845 (5 uM), ardından GABAB Rs, aktivasyon, perfüze ACSF için seçici GABAB R agonisti baklofen (10 uM) uygulanır. Her ilaç durumda (Şekil 4B ve C) Kararlı durum sırasında ~ 50 izleri toplayın. </li><li> Kayıt işlemi tamamlandıktan sonra, bir dışında Paris oluşturarak somatik membran sızdırmazE-üzerinden yama: Yavaş V-kıskacına hücre gövdesinden pipet çekilme ve R S arttıkça, mV -40 V ​​M azaltır. Dış kısım-dış yama oluşumunu kolaylaştırmak için bu fazlası; Daha sonra banyosundan pipet çıkarın. </li></ol> Elektrofizyolojik Özellikleri 6. Analizi <ol><li> NOT: farklı yazılım paketleri bir çokluk elektrofizyolojik veri edinimi için kullanılabilir. Burada, WinWCP, ücretsiz Strathclyde Elektrofizyoloji Yazılım paketinde bir Windows programı kadar 16 analog giriş kanalları kayıt ve 10 dijital sinyallerin çıkışını sağlayan, kullanılır. </li><li> Alçak geçiren filtre 20 kHz tüm 5-10 kHz veri ve örnek. </li><li> Bir off-line analiz suite ile fizyolojik verileri analiz. NOT: Stimfit, bu durumda kullanılan bir Python kabuğu içeren açık kaynak kodlu bir yazılım paketi; Ancak diğer alternatifler kolayca yerine kullanılabilir. <ol><li> Pasif membran p AnalizKaydedilen nöronların roperties, membran dinlenme potansiyeli Bulunduğum kelepçe satın aldı. </li><li> Kaydın başlangıcında kaydedilen yanıtların başlangıca göre ortalama dinlenme membran potansiyelinin ölçülmesi. </li><li> Küçük hiperpolarizan atımlannm (≤ -50 pA) için gerilim yanıtı, Ohm kanunu kullanarak, giriş direnci hesaplayın. Gürültü oranı, ortalama birden izleri sinyali artırmak için. Not: Bizim örnekler 10-50 bireysel Piyango ortalamasıdır. </li></ol></li><li> Küçük hiperpolarizan akım darbelerine yanıtların çürüme bir monoexponential eğri oturtularak sürekli görünür membran zaman tahmin. </li><li> Eşik genliği (tepe eşik) ve süreyi (yarı yükseklikte ölçülen genişlik) mevcut edilen kutuplaşma giderici darbelerin ortaya çıkardığı eşik seviyesinin belirlenmesi için aksiyon potansiyeli dalga analiz edin. </li><li> GABA B R gerilim kelepçe kayıtları aracılı iPSCs analiz edin. Filtre off-çizgi izler500 Hz (Gauss filtresi) ve (en az 10 izleri ortalamalarının) GABAB R aracılık yanıtının tepe genliği ve gecikmeyi belirlemek. </li><li> Tepe ve önceki taban arasında ölçülen GABA A R-aracılı iPSCs pik genliği bir değişiklik olarak ins inhibitör çıkışında GABA B Rs etkisini algılar. Kontrol süresi ve tüm farmakolojik dönemini kararlı devlet için ≥50 izlerinden ortalama genlik hesaplayın. </li></ol> 7. Görselleştirme ve İmmünositokimya FS-Ins <ol><li> Kayıtlarından sonra, 4 ° C &#39;de 0.1 M fosfat tamponu (PB, pH = 7.35) O / N oranı ile% 4 paraformaldehid içinde daldırma ile dilimleri sabitleyin. </li><li> Gerekli dilimleri işlemeden önce 1 ~ haftaya kadar PB transfer ve saklanabilir edin. </li><li> Liberal taze PB ve daha sonra% 0.9 NaCl ile 0.025 M PB yıkayın dilimleri (PBS, pH = 7.35). </li><li> Fo dilimleri bloke spesifik olmayan antikor azaltmak için% 10 normal keçi serumu (NGS),% 0.3 Triton-X100, PBS içinde hazırlanmış NaN3 ve% 0.05 (membranları nüfuz edilebilir kılınması için bir deterjan) ihtiva eden bir çözelti içinde, oda sıcaklığında 1 saat r. </li><li> PBS, NaN3% 5 NGS,% 0.3 Triton-X100,% 0.05 ihtiva eden bir çözelti içinde seyreltilmiş bir anti-BD monoklonal fare antikoru kullanarak, BD ekspresyon için etiketlemek için. 4 ° C&#39;de 12 gün boyunca 2-3 primer antikorlar inkübe edin. Iyice PBS dilimleri durulayın. </li><li> Floresan anti-fare sekonder antikor uygulayın (örneğin AlexaFluor-546). Biyotin bağlayıcı protein streptavidin ile birlikte bir florokrom konjüge edilmiş (örneğin, AlexaFluor-647); ve PBS içerisinde seyreltilmiş NaN3,% 3 NGS,% 0.1 Triton-X100,% 0.05 ihtiva eden bir çözelti içinde inkübe edildi ve 4 ° C sıcaklıkta O / N inkübe edin. </li><li> Liberal 2-3 PB durular ile PBS ile takip 2-3x dilimleri durulayın. Cam slaytlar dilimleri monte edin. Çökmesini dilim önlemek için 300 mikron ağar ayırıcı kullanın. Bir Fluores ile kapak kayma dilimleritırnak-cilası ile yüzde montaj orta ve mühür. </li></ol> 8. Görüntüleme ve Visualized İmar FS-Ins <ol><li> Uygun lazer çizgisinin (diyot lazer AlexaFluor-647 için 635 nm ile heyecanlı fluorochome muhabiri ile bir tarama konfokal mikroskop kullanılarak dilimleri görselleştirmek; Venus AlexaFluor-546 PV için etiketleme ve Argon 488 veya 515 nm Helyum-Neon 543 nm / YFP). </li><li> Bütün hücrenin Z-yığını elde etmek için (20X objektif kullanarak, tipik haliyle 0.5-1 um adımlar) uygun bir Z çözünürlükte al. Birden yığınları normal görüntüye dijital FIJI / İmageJ yazılım (Şekil 5A) kullanarak off-line dikişli olabilir tam hücre, gereklidir. </li><li> Bir yarı-otomatik izleme yöntemi kullanılarak dikişli görüntü yığını hücreyi yeniden yapılandırma (FİJİ / İmageJ yazılım paketi 17 Basit nörit İzleyici eklentisi, Şekil C). </li><li> Son olarak, i PV-bağışıklık tepkiselliğini tahlilyüksek sayısal açıklık objektif lens ile nterneuron (60X silikon-daldırma, NA = 1.3). PV somatik arınma çok güçlü ise soma görüntüleri, proksimal dendritler ve proksimal akson veya alternatif akson terminallerinin olun. Immün-etiketleme biocytin-etiketli yapılar (Şekil 5B) ile uyum görülürse Hücreler PV için imünoreaktif sayılır. </li></ol>

<ol><li>Freund, T. F., Buzsáki, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interneurons+of+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Interneurons of the hippocampus.</a> Hippocampus. 6 (4), 347-470 (1996).</li>
<li>Meyer, A. H., Katona, I., Blatow, M., Rozov, A., Monyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+labeling+of+parvalbumin-positive+interneurons+and+analysis+of+electrical+coupling+in+identified+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">In vivo labeling of parvalbumin-positive interneurons and analysis of electrical coupling in identified neurons.</a> Journal of Neuroscience. 22, 7055-7064 (2002).</li>
<li>Vida, I., Halasy, K., Szinyei, C., Somogyi, P., Buhl, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unitary+IPSPs+evoked+by+interneurons+at+the+stratum+radiatum-stratum+lacunosum-moleculare+border+in+the+CA1+area+of+the+rat+hippocampus+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiolology%22%5BJournal%5D)">Unitary IPSPs evoked by interneurons at the stratum radiatum-stratum lacunosum-moleculare border in the CA1 area of the rat hippocampus in vitro.</a> Journal of Physiolology. 506, 755-773 (1998).</li>
<li>Mody, I., De Koninck, Y., Otis, T. S., Soltesz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bridging+the+cleft+at+GABA+synapses+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Bridging the cleft at GABA synapses in the brain.</a> Trends Neurosci. 17 (12), 517-525 (1994).</li>
<li>Bartos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+synaptic+inhibition+promotes+synchronized+gamma+oscillations+in+hippocampal+interneuron+networks%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Fast synaptic inhibition promotes synchronized gamma oscillations in hippocampal interneuron networks.</a> PNAS. 99, 13222-13227 (2002).</li>
<li>Cobb, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+effects+of+identified+interneurons+innervating+both+interneurons+and+pyramidal+cells+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Synaptic effects of identified interneurons innervating both interneurons and pyramidal cells in the rat hippocampus.</a> Neuroscience. 79 (3), 629-648 (1997).</li>
<li>Bartos, M., Vida, I., Jonas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+mechanisms+of+synchronized+gamma+oscillations+in+inhibitory+interneuron+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic mechanisms of synchronized gamma oscillations in inhibitory interneuron networks.</a> Nature Review Neurosci. 8, 45-56 (2007).</li>
<li>Ascoli, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Petilla+terminology+nomenclature+of+features+of+GABAergic+interneurons+of+the+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Review+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Petilla terminology nomenclature of features of GABAergic interneurons of the cerebral cortex.</a> Nature Review Neurosci. 9, 557-568 (2008).</li>
<li>Klausberger, T., Somogyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+diversity+and+temporal+dynamics+the+unity+of+hippocampal+circuit+operations%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Neuronal diversity and temporal dynamics the unity of hippocampal circuit operations.</a> Science. 321, 53-57 (2008).</li>
<li>Buhl, E. H., Szilágyi, T., Halasy, K., Somogyi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+properties+of+anatomically+identified+basket+and+bistratified+cells+in+the+CA1+areas+of+the+rat+hippocampus+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Physiological properties of anatomically identified basket and bistratified cells in the CA1 areas of the rat hippocampus in vitro.</a> Hippocampus. 6, 294-305 (1996).</li>
<li>Kawaguchi, Y., Katsumara, H., Kosaka, T., Heizmann, C. W., Hama, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fast+spiking+cells+in+rat+hippocampus+%28CA1+region%29+contain+the+calcium-+binding+protein+parvalbumin%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Fast spiking cells in rat hippocampus (CA1 region) contain the calcium- binding protein parvalbumin.</a> Brain Res. 416 (2), 369-374 (1987).</li>
<li>Booker, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+GABAB-Receptor-Mediated+Effects+in+Perisomatic-+and+Dendrite-Targeting+Parvalbumin+Interneurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Differential GABAB-Receptor-Mediated Effects in Perisomatic- and Dendrite-Targeting Parvalbumin Interneurons.</a> Journal of Neuroscience. 33 (18), 7961-7974 (2013).</li>
<li>Uematsu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+chemical+composition+of+cortical+GABAergic+neurons+revealed+in+transgenic+Venus-expressing+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebral+Cortex%22%5BJournal%5D)">Quantitative chemical composition of cortical GABAergic neurons revealed in transgenic Venus-expressing rats.</a> Cerebral Cortex. 18, 315-330 (2008).</li>
<li>Bischofberger, J., Engel, D., Li, L., Geiger, J. R. P., Jonas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch-clamp+recording+from+mossy+fiber+terminals+in+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Patch-clamp recording from mossy fiber terminals in hippocampal slices.</a> Nature Protocols. 1, 2075-2081 (2006).</li>
<li>Houston, C. M., Bright, D. P., Sivilotti, L. G., Beato, M., Smart, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Chloride+Ions+Regulate+the+Time+Course+of+GABA-Mediated+Inhibitory+Synaptic+Transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Intracellular Chloride Ions Regulate the Time Course of GABA-Mediated Inhibitory Synaptic Transmission.</a> Journal of Neuroscience. 29 (33), 10416-10423 (2009).</li>
<li>Sakmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+clamp+techniques+for+studying+ionic+channels+in+excitable+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+Physiology%22%5BJournal%5D)">Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes.</a> Annual Review Physiology. 46, 455-472 (1984).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9, 676-682 (2012).</li>
<li>Geiger, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch-clamp+recording+in+brain+slices+with+improved+slicer+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archives%22%5BJournal%5D)">Patch-clamp recording in brain slices with improved slicer technology.</a> Pflugers Archives. 443, 491-501 (2002).</li>
<li>Malinow, R., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+enhancement+shown+by+whole-cell+recordings+of+long-term+potentiation+in+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Presynaptic enhancement shown by whole-cell recordings of long-term potentiation in hippocampal slices.</a> Nature. 346, 177-180 (1990).</li>
<li>Vida, I., Bartos, M., Jonas, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shunting+inhibition+improves+robustness+of+gamma+oscillations+in+hippocampal+interneuron+networks+by+homogenizing+firing+rates%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Shunting inhibition improves robustness of gamma oscillations in hippocampal interneuron networks by homogenizing firing rates.</a> Neuron. 49 (1), 107-117 (2006).</li>
<li>Neu, A., Földy, C., Soltesz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postsynaptic+origin+of+CB1-dependent+tonic+inhibition+of+GABA+release+at+cholecystokinin-positive+basket+cell+to+pyramidal+cell+synapses+in+the+CA1+region+of+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Postsynaptic origin of CB1-dependent tonic inhibition of GABA release at cholecystokinin-positive basket cell to pyramidal cell synapses in the CA1 region of the rat hippocampus.</a> Journal of Physiology. 578 (1), 233-247 (2007).</li>
<li>Baude, A., Bleasdale, C., Dalezios, Y., Somogyi, P., Klausberger, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoreactivity+for+the+GABAA+receptor+alpha1+subunit%2C+somatostatin+and+Connexin36+distinguishes+axoaxonic%2C+basket%2C+and+bistratified+interneurons+of+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebral+Cortex%22%5BJournal%5D)">Immunoreactivity for the GABAA receptor alpha1 subunit, somatostatin and Connexin36 distinguishes axoaxonic, basket, and bistratified interneurons of the rat hippocampus.</a> Cerebral Cortex. 17, 2094-2107 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Biz işlevsel in vitro morphologically- ve nörokimyasal tanımlanan nöronlar karakterize etmek elektrofizyolojik ve Nöroanatomik tekniklerini birleştiren bir yöntem tarif; Özellikle kortikal inhibitör ins çeşitli türleri. Prosedürün önemli yönleri vardır: Potansiyel ins (1) ön seçim; (2) hücre içi kayıt ve nöron görselleştirme; ve nihayet (3) Kaydedilen INS morfolojik ve immünositokimyasal analizi. Bu çalışmada özellikle PV bileşenler ele olmasına rağmen, tarif edilen protokol minimal değişiklik herhangi interneuron veya ...

Hipokampal nöronal devreler nedeniyle uzun süredir insanlar ve kemirgenler hem onların öğrenme ve hafızada önemli bir rol yanı sıra mekansal navigasyon için anatomi ve fizyoloji, hem de saygı ile, yoğun inceleme konusu olmuştur. Aynı şekilde, hipokampusun önemli, ama basit laminar organizasyon bu bölge kortikal ağların yapısal ve fonksiyonel özelliklerini ele çalışmaların bir tercih konusu yapar. Hipokampal devreleri uyarıcı asıl hücrelerin (&gt;% 80) ve daha küçük (% 10-20), ancak inhibitör 1-3 derece çeşitli kohort oluşmaktadır. Internöron hızlı iyonotropik GABA A reseptörlerinin hareket akson terminallerinden γ-amino butirik asit (GABA) (GABA A Rs) ve yavaş metabotropik GABA B reseptörleri (GABA B TL) bırakın 4. Bu inhibisyon mekanizması uyarma dengelemek ve ana hücrelerinin uyarılabilirliğini düzenleyen ve böyleceir zamanlama ve deşarj desen. Bununla birlikte, GABA internöronlar salınan ana hücreler üzerinde değil, aynı zamanda kendilerini 5,6 internöronlar üzerinde de etki eder. Ön ve postsinaptik reseptörleri interneuron çeşitli türleri arasında geribildirim düzenleme ve inhibitör karşılıklı etkileşimlere aracılık. Interneuron ağlarda Bu önleyici mekanizmalar farklı frekanslarda 7&#39;de özellikle sallantı- nesil ve nüfus aktivite desen şekillendirme, merkezi olduğuna inanılmaktadır. Tüm hücre patch-kelepçe kayıt içsel özellikleri ve nöronların sinaptik etkileşimlerinin incelenmesi için köklü bir yöntemdir. Ancak, interneuron türleri yüksek çeşitlilik nedeniyle, inhibitör incelenmesi kaydedilen hücrelerinin titiz belirlenmesini gerektirir. Hipokampal interneuron türleri farklı morfolojik özellikler ve nörokimyasal işaretleyici ifade, kombine anatomik ve immünositokimyasal e nitelendirildiğindenxamination hassas interneuron kimlik 6,8,9 belirlemek için bir araç sağlayabilir. Bu yazıda biz yavaş GABA B karakterizasyonu için izin, tek nöronların veya sinaptik-birleştiğinde çiftlerinden tüm hücre patch-kelepçe kayıtları post-hoc morfolojik ve immünositokimyasal analizi ile takip, hücre içi etiketleme ile kombine edildiği deneysel bir yaklaşım tanımlamak reseptör tespit internöronlarda inhibitör etkilere aracılık. Örnek olarak, biz onun postsinaptik hedeflerin soma ve proksimal dendritler innerve ve bir &quot;fast çivilenmesi&quot; (FS) ile karakterize edilir interneuron bir ana tip, sözde &quot;basket hücrelerinde&quot; (BC) bir alt kümesi, odaklanmak kalsiyum-bağlayıcı protein parvalbumin (PV), 10,11 desen yoğun hücre gövdesi kaplama tabakası bir akson ve ifade boşaltın. Bu internöron büyük postsinaptik inhibitör akımları, yanı sıra önde gelen pre gösterilecekGABAB R aktifleşmesinin 12 tepki olarak sinaptik çıkış sinaptik modülasyonu. Burada açıklanan tekniklerin kombinasyonu tanımlanmış diğer nöron türlerinden çeşitli intrinsik veya sinaptik mekanizmalarını incelemek için de eşit ölçüde uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>Transgenik vGAT-venus sıçanlar</td><td></td><td></td><td>Uematsu'ya bakınız, &lt;em&gt;ve ark.&lt;/em&gt;, 2008</td></tr><tr><td>Venus (515 nm) koruyucu gözlükleri</td><td>BLS Ltd., Macaristan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon araçları</td><td>&lt;em&gt;yani&lt;/em&gt; FST</td><td></td><td>Beyin çıkarma işlemi için</td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Leica</td><td>VT1200S</td><td>Veya dikey osilasyonu minimum düzeyde olan diğer üst segment vibratomlar</td></tr><tr><td>Kesit tutucu odacıklar</td><td></td><td></td><td>Laboratuvarda özel olarak üretilmiş</td></tr><tr><td>Dik IR-DIC mikroskobu</td><td>Olympus, Japonya</td><td>BX50WI</td><td>Mikromanipülatör sistemi ile; &lt;em&gt;yani&lt;/em&gt; Luigs ve Neumann, Kleindiek &lt;em&gt;vb.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>CCD kamera</td><td>Till Photonics</td><td>VX55</td><td></td></tr><tr><td>505 nm LED sistemi</td><td>Cairn Research</td><td>OptiLED sistemi</td><td>Veya cıva lambası veya diğer LED sistemi &lt;em&gt;yani&lt;/em&gt; CooLED.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Multiclamp 700B&amp;nbsp;</td><td>Axon Instruments</td><td></td><td>Alternatif olarak 2x Axopatch 200B amplifikatör&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>WinWCP veri toplama yazılımı</td><td>John Dempster, Strathclyde Üniversitesi</td><td></td><td>Herhangi bir kaliteli veri toplama yazılımı kullanılabilir, &lt;em&gt;yani&lt;/em&gt; EPHUS, pClamp, Igor vb.&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Elektrot Çekici</td><td>Sutter</td><td>P-97</td><td>Kutu-filament ile birlikte kullanılır</td></tr><tr><td>Borosilikat pipet camı</td><td>Hilgenberg, Almanya</td><td>1405020</td><td>2 mm dış çap, 1 mm iç çap, filamentsiz</td></tr><tr><td>Peristaltik pompa</td><td>Gilson</td><td>Minipuls</td><td>Bunun yerine diğer pompalar veya yerçekimi beslemesi kullanılabilir</td></tr><tr><td>Dijital Termometre</td><td></td><td></td><td>Özel yapım</td></tr><tr><td>Dijital Manometre</td><td>Supertech, Macaristan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href=&quot;http://digitimer.com/products/research/stimulators/&quot; Lütfen çevrilecek metni sağlayın.&quot;_boş&quot;&gt;İzole sabit voltaj stimülatörü&lt;/a&gt;</td><td><a href="http://www.digitimer.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Digitimer Ltd.</a></td><td>&lt;a href=&quot;http://digitimer.com/products/research/stimulators/ds2a-isolated-constant-voltage-stimulatorstimulus-isolator/&quot; Lütfen çevrilmesini istediğiniz metni sağlayın.&quot;Boş&quot;&gt;DS-2A&lt;/a&gt;</td><td></td></tr><tr><td>Biyositin</td><td>Invitrogen</td><td>B1592</td><td>Diğer adıyla &amp;epsilon;-Biotinil-L-Lizin&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>DL-AP5(V) disodyum tuzu</td><td>Abcam Biyokimyasalları</td><td>ab120271</td><td></td></tr><tr><td>DNQX disodyum tuzu</td><td>Abcam Biyokimyasalları</td><td>ab120169</td><td>Alternatif olarak NBQX veya CNQX</td></tr><tr><td>Gabazine (SR95531)</td><td>Abcam Biyokimyasalları</td><td>ab120042</td><td>Alternatif olarak bikukullin metiyodür</td></tr><tr><td>R-Baklofen</td><td>Abcam Biyokimyasalları</td><td>ab120325</td><td></td></tr><tr><td>CGP-55,845 hidroklorür</td><td>Tocris</td><td>1248</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin 647</td><td>Invitrogen</td><td>S32357</td><td></td></tr><tr><td>anti-PV fare monoklonal antikoru</td><td>Swant, İsviçre</td><td>235</td><td>Çalışma konsantrasyonu 1:5.000-1:10.000</td></tr><tr><td>anti-fare sekonder antikor&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A11030</td><td>Venus veya GFP kullanan kemirgenlerde kırmızı kanal kullanılıyorsa (&lt;em&gt;yani&lt;/em&gt; 546 nm) önerilir.</td></tr><tr><td>Normal Keçi Serumu</td><td>Vector Labs</td><td>S-1000</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopi lamları</td><td></td><td></td><td>Herhangi bir yüksek kaliteli marka</td></tr><tr><td>Cam lameller</td><td></td><td></td><td>Genellikle 22 x 22 mm</td></tr><tr><td>Agar ara parçaları</td><td></td><td></td><td>Vibratomda 300 µm kalınlığında kesilmiş agar blok &amp;mu;m</td></tr><tr><td>Lazer taramalı konfokal mikroskop</td><td>Olympus, Japonya</td><td>Fluoview FV1000</td><td>Veya benzeri başka bir sistem</td></tr><tr><td>Fiji (Fiji, ImageJ'dir)</td><td>http://fiji.sc/Fiji</td><td></td><td>Schindelin'e bakınız &lt;em&gt;ve ark.&lt;/em&gt;, 2012</td></tr></tbody></table>

morphologically- ve nörokimyasal tanımlanan hipokampal internöronlardan gelen tüm hücre patch-kelepçe kayıtlar

Whole-cell Patch-clamp Recordings from Morphologically- and Neurochemically-identified Hippocampal Interneurons

GABAerjik inhibitör beyin nöronal devrelerin içinde merkezi bir rol oynarlar. Internöron nöronal bir topluluğun canlılığını (% 10-20) küçük bir alt kümesi ihtiva eder, ancak bunların çeşitli fonksiyonları yansıtan, fizyolojik morfolojik ve nörokimyasal heterojenlik yüksek bir seviyesini gösterir. Bu nedenle, internöronlar incelenmesi önemli organizasyon ilkeleri anlayışlar ve nöronal devrelerin fonksiyonu sağlar. Ancak bu durum, tek tek interneuron türlerinin seçimi ve tanımlanması için bir fizyolojik ve Nöroanatomik bir yaklaşım gerektirmektedir. Interneuron özel markörlerin promotörler altında floresan protein ifade eden transgenik hayvanların akut beyin kesitleri, kayıt, tam hücre patch-clamp, hedef ve elektrofizyolojik spesifik interneuron türleri iç ve sinaptik özelliklerini karakterize etmek için etkili bir yöntem sağlar. Hücre içi boya etiketleme ile birlikte, bu yaklaşım post-hoc mo ile uzatılabilirrphological ve immünositokimyasal analizi, kaydedilen nöronların sistematik bir şekilde tanımlanması sağlanır. Bu yöntemler kortikal nöronların çeşitli türdeki fonksiyonel özellikleri ile ilgili bilimsel sorular geniş bir yelpazede uygun hale getirilebilir.

Sağlanan bu dilim kalite hem CA1 PC&#39;ler ve FS-INs az zorlukla elde edilebilir kayıt, kayda değer iyidir. VGAT promoter 13 altında Venüs / YFP ifade transgenik fare hattı tümden FS-INS, ya da gerçekten BCs tespit etmez. Ancak ve str etrafında INS gelen kayıtları. pyramidale, FS-ins yoğunluğu 1 genellikle yüksek olduğu, FS-ins (Şekil 2B) seçerek bir yüksek olasılık sonuçları. FS-INs CA1 PC&#39;ler ve RS-INS, her ikisi de farklı karakteristik fizyolojik özellikle...

Kortikal ağları inhibitör küçük, ama farklı kümesi tarafından kontrol edilir. Internöronlar Fonksiyonel soruşturma dolayısıyla hedeflenen kayıt ve titiz belirlenmesini gerektirir. Hücre içi etiketleme, post-hoc morfolojik ve imünositokimyasal analizler nöronu tek ya da çiftli sinaptik çiftlerinden bütün hücre kayıtları içeren bir birleşik yaklaşım aşağıda tarif edilmiştir.

Morphologically- ve nörokimyasal tanımlanan hipokampal internöronlardan gelen tüm hücre Patch-kelepçe Kayıtlar

GABAergic inhibitory interneurons play a central role within neuronal circuits of the brain. Interneurons comprise a small subset of the neuronal ...

Bu prosedürün genel amacı, tanımlanmış hipokampal parvalbumin pozitif inter nöronlarda GABA B reseptör aracılı etkileri karakterize etmektir. Bu, öncelikle yüksek kaliteli akut hipokampal dilimler üretilerek gerçekleştirilir. İkinci adım, venöz YFP ekspresyonuna ve parvalbumin pozitif nöronların bilinen özelliklerine dayanarak nöronları seçmek için bir video mikroskobu kullanmaktır.Ardından, tüm hücre yama kenetleme (whole cell patch clamp) kayıtları alınır ve GABA B reseptör aracılı etkileri incelemek için hücre dışı stimülasyon veya eşleşmiş kayıtlar kullanılır. Son adım, nöronları görselleştirmek ve kaydedilen nöronların gerçekten par albumin pozitif olduğunu ve parasomatik veya dendritik inhibitör nöronlar olduğunu doğrulamaktır. Nihayetinde bu yöntem, GABA B reseptör aracılı inhibitör etkilerin karakterize edilmesini sağlar ve kaydedilen inter nöronların kesin bir şekilde sınıflandırılmasına olanak tanır.Bu yöntem, internöron alanıyla ilgili temel sorulara yanıt verebilir. Örneğin, internöronların birbirleriyle nasıl iletişim kurduğu, eksitabilitelerinin ve sinaptik çıktılarının nöromodülatör sistemler tarafından nasıl kontrol edildiği gibi. Bu yöntem, hipokampal internöronlar

whole-cell-patch-clamp-recordings-from-morphologically

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu protokol, zebra balığı embriyolarında Mauthner nöronlarının ve diğer retikülospinal hücrelerin elektriksel özelliklerini incelemek için bir yöntem olan tam hücre yama kelepçesi elektrofizyolojisi adı verilen bir tekniği tanımlar.

Tüm Hücre Yama Kelepçesi Elektrofizyolojisi: Nöronların Elektriksel Özelliklerini İncelemek İçin Bir Yöntem

Bu video, dendritik membran yüzeyinden yama kelepçesi kaydı için bir tekniği göstermektedir. Bu, dopaminerjik nöronlardaki dendritlerin ve altta yatan voltaj kapılı iyon kanallarının elektriksel özelliklerini doğrudan incelemeye yardımcı olur.

Bir Beyin Dilimindeki Dopaminerjik Nöronun Dendritinden Yama-Kelepçe Kayıtları

Video, transfekte edilmiş bir fare hipokampal beyin dilimindeki sinaptik etkileşimleri ve nöronal tepkileri incelemek için bir protokol göstermektedir. Aksiyon potansiyellerini tetiklemek için uzun menzilli duyusal nöronların aydınlatılmasını ve elde edilen uyarıcı post-sinaptik potansiyellerin tüm hücre yama-kelepçe tekniği kullanılarak kaydedilen nöronda kaydedilmesini içerir.

Fare hipokampal dilimlerindeki nöronların fotostimülasyon ve tam hücre yama kelepçesi kayıtları

Bu video, nöron ateşleme modellerini analiz etmek için tam hücre yama-klemp tekniklerini kullanarak omurilik dilimlerinin substantia gelatinosa (SG) nöronlarında elektrofizyolojik kayıtlar gerçekleştirme prosedürünü göstermektedir. Bu yöntem, omuriliğin SG nöronlarındaki uyaranlara verilen sinirsel tepkilerin incelenmesine izin verir.

Bir omurilik diliminin substantia jelatinosa nöronunda tam hücre yama kelepçesi kaydı

Bu video, bir beyin dilimini sabitleyerek, pipetleri tüm hücre konfigürasyonlarını elde etmek için konumlandırarak ve postsinaptik yanıtları kaydetmek için presinaptik nöronları uyararak sinaptik bağlantıları haritalama prosedürünü gösterir, böylece nöronal bağlantıyı aydınlatır.

Akut Beyin Dilimlerinde Nöronal Bağlantıların Eşleştirilmiş Yama Kelepçesi Kaydı

Burada tarif edilen hücre-bağlı patch-clamp tekniği ile, bir iyon kanalının güncel kayıt uzun uzanır elde edilmesi için bir işlemdir. Bu yöntem, gerçek zamanlı olarak, gözlemlemek için izin veren, biyolojik sinyali altında yer open-close kanal konformasyonlarının desen. Bu veriler rahatsız biyolojik membranların kanal özellikleri hakkında bilgilendirmek.

Tek kanallı bir hücre-bağlı Patch-clamp kayıt

Çift kayıtlar, tek tek nöronlar arasındaki sinapsların hassas elektrofizyolojik ve farmakolojik karakterizasyonunu sağlayan, sinaptik olarak bağlı iki nörondan eşzamanlı tam hücre yama kelepçe kayıtlarıdır. Burada, elektrofizyoloji için donatılmış herhangi bir laboratuvarda organotipik hipokampal dilim kültürlerinde bu tekniği oluşturmak için ayrıntılı metodolojiyi ve gereksinimleri açıklıyoruz.

Organotipik Hipokampal Dilimleri eşleştirilmiş Tüm Hücre Kayıtlar

Akut beyin dilimlerinde sinaptik olarak eşleşmiş nöronların yama-kelepçe kayıtları ve eş zamanlı hücre içi biyosit dolumu, yapısal ve fonksiyonel özelliklerinin ilişkili bir analizine izin verir. Bu protokolün amacı, nöronal mikro devrelerden elektrofizyolojik kaydın temel teknik adımlarını ve bunların müteakip morfolojik analizlerini tanımlamaktır.

Akut Beyin Dilimleri nöronal Mikro şemalar Elektrofizyolojik ve Morfolojik Karakterizasyonu Eşleştirilmiş Patch-Kelepçe Kayıtlar Kullanma

Bu protokol tüm hücre yama-kelepçe kayıtları gerçekleştirmek için temel usul adımları açıklar. Bu teknik nöronların elektriksel davranışının çalışma sağlar ve beyin dilimleri yapıldığında, hala nispeten iyi korunmuş beyin devreleri entegre edilmiştir nöronlardan farklı nöron işlevlerinin değerlendirilmesine olanak sağlamaktadır.

Beyin Dilimleri tüm hücre Patch-kelepçe Kayıtlar

Hücre altı yama-klemp kayıtları, dendritlerin fonksiyonel özelliklerini araştırma imkanı sunar. Ancak bu ince yapılara küçük çapları nedeniyle kolayca erişilememektedir. Burada açıklanan protokol, dopamin nöronlarının dendritlerinden in vitro dilimler halinde kararlı ve güvenilir kayıtların toplanmasını kolaylaştırmayı amaçlamaktadır.

Nigral Dopamin Nöronlar somatodendritik Domain hücre içi Patch-kelepçe Kayıtlar

Mevcut protokol, yetişkin farelerden primer hipokampal mikroglianın nasıl izole edileceğini ve saflaştırılacağını, ardından bu akut olarak izole edilmiş hücreler üzerinde tam hücre yama kelepçesi kayıtlarının yürütülmesi için talimatları açıklar.

Yetişkin Farelerden Hipokampal Mikroglia'nın İzolasyonu ve Tam Hücre Yama-Kelepçe Kaydı

Öğrenin hipokampal parvalbumin pozitif internöronlarda GABA B reseptör etkilerini karakterize etmek için tüm hücre yama kelepçe kaydı yöntemini. Bu teknik, inhibitör devreleri incelemede araştırmacılara kesin sınıflandırma sağlar.

Morphologically- ve nörokimyasal tanımlanan hipokampal internöronlardan gelen tüm hücre Patch-kelepçe Kayıtlar

Daha fazla video keşfet