Name: Farelerde allojenik CD4 + T hücre Cevapları Eğitim için Kuyruk Cilt Nakli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Öğrenin farelerde kuyruk derisi nakli yöntemiyle T hücre aracılı rejeksiyon ve tolerans indüksiyonunu incelemeyi. Bu model, allogeneik bağışıklık yanıtlarını etik bir şekilde araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, SNF hibeleri PPOOA-_119204 ve PPOOP3_144918 tarafından SWR'ye desteklenmiştir. Fareler ve teknik uzmanlıkları için E. Palmer ve B.T.H. Hausmann'a teşekkür ederiz.

Bu videoyu yayın ve protokolde, tüm hayvan prosedürleri Kanton Kurumu, Basel-Stadt, İsviçre tarafından onaylanan hayvan protokole uygun olarak yapılmıştır. Steril koşullarda mümkün tüm işlemleri gerçekleştirmek. Cerrahi 1. Hazırlanması <ol><li> Tüm cerrahi aletler otoklav ve kullanımdan önce pamuğu. </li><li> Sıcak ped ısıtın ve tablo (Malzeme / Yöntemleri Tablo) cerrahi aletler düzenlemek. </li><li> Parmak şerit bandaj açın. (Gazlı bez tamamen kapalı olduğundan emin olun) bir pamuklu çubukla yara pad üzerinde vazelin uygulayın. </li><li> Fareler tartılır ve analjezi buprenorfin 0.05 mg / kg vücut ağırlığı yönetmek. Not: Bu hemen nakli sonrası analjezi sağlayacaktır. </li></ol> Nakli için Kuyruk-cilt 2. Hazırlanması <ol><li> CO 2 boğulma ve d başına donör fareler (örneğin, IA bm12) Euthanizeeksizyon öncesi dezenfeksiyon solüsyonu ile kuyrukları isinfect. </li><li> Temiz bir plastik gemide siyah şerit aşağı ile kuyruk yerleştirin ve orta hattı boyunca uzunlamasına kesilmiş, sadece deri tabakasını içeren yüzeysel bir kesi yapmak. </li><li> Kavrama forseps kullanarak kuyruk derisini çekin. </li><li> 10 ml HBSS ile dolu bir 10 cm hücre kültürü çanağı içinde kuyruk-cilt koyun. </li></ol> 3.. Cerrahi Prosedür <ol><li> Şeffaf bir indüksiyon kutu içinde bir% 3 izofloran çözeltisinin inhalasyonu yolu ile alıcı fareler (örneğin, C57BL / 6) anestezisi. Not: fare cerrahi uçak anestezi ulaşmak için bu 3-5 dakika sürer. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem kullanın. </li><li> Sıcak pad üzerinde fare yerleştirin ve ayak kısma her hayvan refleks bir ağız maskesi ve eşek üzerinden% 1,5 isofluorane geçerlidir. </li><li> Alıcı farelerin dorsal sitesi (örneğin, C57BL / 6) tıraş ve kuru bir gazlı bez sw kullanarak kirlenmesine tüyleriab. </li><li> Aseptik çözelti ile tıraş transplantasyon bölgesine dezenfekte. </li><li> Dorsumun sağ / orta site forseps ile cilt sıkın ve yaklaşık 1 x 0.6 cm çapında yuvarlak kesi yapmak için kavisli makas kullanın. </li><li> Kanama oluşursa, o zaman steril pamuklu çubukla yarayı temizleyin. </li><li> Kesi boyutunu değerlendirmek ve neşter kullanarak kuyruk-cilt büyüklük tahmini bir nakli kesti. </li><li> Nakli yuvarlak köşeleri Trim. </li><li> Steril pamuklu çubukla üzerinde neşter, HBSS&#39;nin kuru aşan üzerinde nakli yükleyin ve alıcı fare greft yatağına yerleştirin. </li><li> Donör ve alıcı cilt çakışmasını önlemek ve sadece kontak zonda doku yapıştırıcısı uygulayın. </li><li> Fare beline kırışıklıklar olmadan bir sıva uygulanır. </li><li> Fare sıva düzeltmek için yapışkan olmayan elastik bandaj uygulanır (3 mm değiştirdi). </li><li> Bandajın üst ventral sitesinde 3 mm ile ilgili makasla kesin. Not: Bu tr kaçınmaktırkurtarma aşamasında fare diş aritalandırma. </li><li> Anestetik-ağız maskesi çıkarın ve uyanık kadar ısıtma yastığı nakledilen fareler tutun. </li><li> Tamamen iyileşti sadece kendi kafeslerine nakledilen fareler dönün ve bandaj çok sıkı olmadığından emin olmak için onların hareketliliği değerlendirmek. </li><li> Sonraki ameliyatın geçmeden önce% 70 etanol ile tüm cerrahi aletler sterilize. </li></ol> 4. Post-operatif Bakım <ol><li> Içme suyu (4 mg / ml) için parasetamol içeren şurubu ilave edin ve 7 gün boyunca uygulanması. </li><li> Kurtarılamaz kez hayvan odasına fare dönün. </li><li> Yakından bandaj yerde (1 hafta) olduğu zamandır depresyon veya diğer davranış değişiklikleri (yeme ya da hareketsizlik), anormal görünüm (tımar eksikliği) veya postürü (pilo-ereksiyon ya da kambur duruş) dahil olmak üzere klinik belirtileri için fare monitör. </li></ol> 5.. Bandaj Temizleme (6-7 Gün Post-transplantasyon) <ol><li> Anesşeffaf bir indüksiyon kutusu (yukarıya bakın) ve% 3 İzofloran çözeltisinin inhalasyonu yolu ile thetize farenin. </li><li> Arter makasla bandaj ve alçı kesme ve dikkatlice çıkarın. Not: transplant site germe kaçının. </li><li> Klinik bulguları nakledilen farelerin (4.3 bakınız) Monitör ve deri grefti (Tablo 1) reddi için puan. Not: Graft puan sistemi, dorsal cilde göre kuyruk-cilt üzerinde farklı saç dokular yararlanır. Nakli ve reddedilme görünüm 3. sınıflarda kategorilere ayrılır. C57BL / 6 imünokompetan farelerin allojenik deri (MHC II uyumsuz, örneğin, IA bm12) greftler genellikle 12-15 gün transplantasyon sonrası (kendi veri ve 15-20) içinde reddedilir. </li></ol>

<ol><li>Mahillo, B., Carmona, M., Álvarez, M., White, S., Noel, L., Matesanz, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Data+in+Organ+Donation+and+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22transplantation%22%5BJournal%5D)">Global Data in Organ Donation and Transplantation.</a> transplantation. 92 (10), 1069-1074 (2011).</li>
<li>Halleck, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+perspectives+of+immunosuppression%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+proceedings%22%5BJournal%5D)">New perspectives of immunosuppression.</a> Transplantation proceedings. 45 (3), 1224-1231 (2013).</li>
<li>Wood, K. J., Bushell, A., Jones, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+unresponsiveness+to+alloantigen+in+vivo.+a+role+for+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunological+reviews%22%5BJournal%5D)">Immunologic unresponsiveness to alloantigen in vivo. a role for regulatory T cells.</a> Immunological reviews. 241 (1), 119-132 (2011).</li>
<li>Sykes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+tolerance%3A+mechanisms+and+application+in+clinical+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Immune tolerance: mechanisms and application in clinical transplantation.</a> Journal of Internal Medicine. 262 (3), 288-310 (2007).</li>
<li>McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+allograft+rejection.%5BTitle%5D)+AND+%22Current+protocols+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Skin allograft rejection.</a> Current protocols in immunology. , (2009).</li>
<li>McKenzie, I. F., Morgan, G. M., Sandrin, M. S., Michaelides, M. M., Melvold, R. W., Kohn, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B6.C-H-2bm12.+A+new+H-2+mutation+in+the+I+region+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">B6.C-H-2bm12. A new H-2 mutation in the I region in the mouse.</a> The Journal of experimental medicine. 150 (6), 1323-1338 (1979).</li>
<li>McIntyre, K. R., Seidman, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleotide+sequence+of+mutant+I-A+beta+bm12+gene+is+evidence+for+genetic+exchange+between+mouse+immune+response+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Nucleotide sequence of mutant I-A beta bm12 gene is evidence for genetic exchange between mouse immune response genes.</a> Nature. 308 (5959), 551-553 (1984).</li>
<li>Stuart, P. M., Beck-Maier, B., Melvold, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Provocation+of+skin+graft+rejection+across+murine+class+II+differences+by+non--bone-marrow-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Provocation of skin graft rejection across murine class II differences by non--bone-marrow-derived cells.</a> Transplantation. 37 (4), 393-396 (1984).</li>
<li>Hausmann, B., Palmer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+selection+through+a+motif+in+the+alphabeta+T+cell+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Positive selection through a motif in the alphabeta T cell receptor.</a> Science. 281 (5378), 835-838 (1998).</li>
<li>Bill, J., Ronchese, F., Germain, R. N., Palmer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+mutant+amino+acids+to+alloantigenicity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">The contribution of mutant amino acids to alloantigenicity.</a> The Journal of experimental medicine. 170 (3), (1989).</li>
<li>Monaco, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+and+tolerance+for+clinical+organ+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression and tolerance for clinical organ allografts.</a> Current Opinion in Immunology. 1 (6), 1174-1177 (1989).</li>
<li>Rosenberg, A. S., Singer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+basis+of+skin+allograft+rejection%3A+an+in+vivo+model+of+immune-mediated+tissue+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Cellular basis of skin allograft rejection: an in vivo model of immune-mediated tissue destruction.</a> Annual Review of Immunology. 10, 333-358 (1992).</li>
<li>Kingsley, C. I., Nadig, S. N., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+tolerance%3A+lessons+from+experimental+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+international+%3A+official+journal+of+the+European+Society+for+Organ+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Transplantation tolerance: lessons from experimental rodent models.</a> Transplant international : official journal of the European Society for Organ Transplantation. 20 (10), 828-841 (2007).</li>
<li>Larsen, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+acceptance+of+skin+and+cardiac+allografts+after+blocking+CD40+and+CD28+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Long-term acceptance of skin and cardiac allografts after blocking CD40 and CD28 pathways.</a> Nature. 381 (6581), 434-438 (1996).</li>
<li>Tomura, M., Nakatani, I., Murachi, M., Tai, X. G., Toyo-oka, K., Fujiwara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+of+allograft+responses+induced+by+interleukin-6%2C+which+selectively+modulates+interferon-gamma+but+not+interleukin-2+production%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Suppression of allograft responses induced by interleukin-6, which selectively modulates interferon-gamma but not interleukin-2 production.</a> Transplantation. 64 (5), 757-763 (1997).</li>
<li>Ring, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-gamma+is+necessary+for+initiating+the+acute+rejection+of+major+histocompatibility+complex+class+II-disparate+skin+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interferon-gamma is necessary for initiating the acute rejection of major histocompatibility complex class II-disparate skin allografts.</a> Transplantation. 67 (10), 1362-1365 (1999).</li>
<li>Rosenberg, A. S., Finbloom, D. S., Maniero, T. G., Vander Meide, P. H., Singer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+prolongation+of+MHC+class+II+disparate+skin+allografts+by+in+vivo+administration+of+anti-IFN-gamma+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Specific prolongation of MHC class II disparate skin allografts by in vivo administration of anti-IFN-gamma monoclonal antibody.</a> Journal of immunology. 144 (12), 4648-4650 (1950).</li>
<li>Goes, N., Sims, T., Urmson, J., Vincent, D., Ramassar, V., Halloran, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disturbed+MHC+regulation+in+the+IFN-gamma+knockout+mouse.+Evidence+for+three+states+of+MHC+expression+with+distinct+roles+for+IFN-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Disturbed MHC regulation in the IFN-gamma knockout mouse. Evidence for three states of MHC expression with distinct roles for IFN-gamma.</a> Journal of immunology. 155 (10), 4559-4566 (1995).</li>
<li>Surquin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-4+deficiency+prevents+eosinophilic+rejection+and+uncovers+a+role+for+neutrophils+in+the+rejection+of+MHC+class+II+disparate+skin+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">IL-4 deficiency prevents eosinophilic rejection and uncovers a role for neutrophils in the rejection of MHC class II disparate skin grafts.</a> Transplantation. 80 (10), 1485-1492 (2005).</li>
<li>Gaylo, A. E., Laux, K. S., Batzel, E. J., Berg, M. E., Field, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+rejection+of+MHC+class+II-disparate+skin+allografts+in+mice+treated+with+farnesyltransferase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+immunology%22%5BJournal%5D)">Delayed rejection of MHC class II-disparate skin allografts in mice treated with farnesyltransferase inhibitors.</a> Transplant immunology. 20 (3), 163-170 (2009).</li>
<li>Bose, A., Inoue, Y., Kokko, K. E., Lakkis, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+perforin+down-regulates+CD4+and+CD8+T+cell-mediated+immune+responses+to+a+transplanted+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: perforin down-regulates CD4 and CD8 T cell-mediated immune responses to a transplanted organ.</a> Journal of immunology. 170 (4), 1611-1614 (2003).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Deri nakli reddi ve T hücrelerine bağımlı tolerans araştırılması için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Deri nakli modeli kurulduğundan beri, çeşitli uyarlamalar ve değişiklikler uygulandı. Açıklanan prosedürde, IA bm12 kuyruk deri nakli anestezi gazı (izofloran) kullanılarak gerçekleştirilir. Gaz anestezi kullanımı nakledilen fareler üzerindeki stres azalır yürütme ve fareler kurtarma, zamanını azaltır. Prosedür kulak veya dorsal cilt dokusunun daha kıvrılabilecek kuyruk-cilt, düzeltmek için doku yapış...

Bu tür deri, kalp ve böbrekler gibi katı organ nakli artık dünya çapında tıbbi uygulamada 1 standart bir işlemdir. Başarıyla nakledilen organlar vericinin MHC antijenleri tanıyan alıcı bağışıklık sisteminin aktivasyonu ile reddedilebilir. Bu nedenle nakledilen hasta immünosüpresif ilaçlar 2 ile tedavi gerekir. Farelerde allojenik deri transplantasyonu 1955 yılında Medawar ve arkadaşları tarafından kurulan ve daha sonra MHC kompleksi (MHC) sınıf I ve II olarak tanımlanan hedeflenen moleküllerinin belirlenmesi için yararlı oldu. O zamandan beri, deri nakli modelinin sürekli değiştirilmiş ve T hücre alt rolü ve greft reddini 2-4 bastırmada kimyasal ve biyolojik müdahale ilişkisini incelemek için adapte edilmiştir. Kulak ve gövde cilt hazırlamak için daha zordur ve kuyruk-cilt 5 daha hipoksi ve nekroz daha yatkındır; Bununla birlikte,Transplantasyon prosedürü; benzer. Buna ek olarak kuyruk deri nakillerinin izlenmesi nedeniyle cildin karakteristik saç dokusu kolaydır. Bu makalede, CD4 + T hücre aracılı allograft reddi ve farelerde tolerans farklı yönlerini çalışmaya olanak MHC sınıf II uyumsuzluk tail-deri nakli için ayrıntılı bir işlem sağlar. (IA bm12 olarak da adlandırılır), MHC sınıf II molekülü IA b doğal üç nokta mutasyonu 6-9 C57BL / 6 fare deri 8 allograftlara neden olmak için yeterlidir. IA bm12 molekülü çeşitli αβ-T hücresi reseptörü Vα2Vβ8 TcR-spesifik T hücreleri, bir TcR transgenik fare 10 oluşturmak için tespit edilmiştir, bunlar arasında C57BL / 6 fareden (TcR) zincirleri ile CD4 + T hücreleri aktive eder. Vα2Vβ8-TCR-özgü T hücrelerinin adoptif transfer C57B bağışıklık yetersizliği olan bir ret model kurmak için kullanılmıştırL / 6 RAG2 - / - IA bm12 deri ile nakledilen fareler. Alıcı ve verici arasındaki genetik farklılıklar nakli kabul ve reddedilme sonucu etkileyebilir. Nakillerinin farklı türleri vardır: otogreftleri alıcı bireyin kendisinden nakli olan; syngrafts ve allogreftler sırasıyla genetik olarak özdeş ve akrabalık ilişkisi olmayan kişilerden nakilleri vardır. Farklı alojenik organ nakillerinin kabul hasta ve fare modellerinde 11,3,4 kimyasal ve biyolojik müdahale ile gösterilmiştir. Temel bir yaklaşım olarak, anti-CD3 antikoru ile tedavi edilen C57BL / 6 fareleri IA bm12 tail-derinin (yayınlanmamış veriler) uzun süre hayatta kalması gösterdi. Hücreleri alıcı farelerde transplantasyon öncesi CD4 + ve CD8 + T tükenmesi MHC sınıf I ve II uyumsuz greft (12 in rev.) kabul sonuçlandı. İlginç bir şekilde, deri graftları reddi CD4 + varlığına bağlıdır </sup&gt; T-hücreleri (12 Rev.) Bu modelde, düzenleyici T hücreleri ile antikor veya bastırılması ile birlikte uyaran molekülleri bloke farklı bağışıklık hücreleri arasındaki etkileşimleri hedef toleransı (yayınlanmamış veriler) neden olabilir. Gerçekten de, CD40 ve CD28, blokaj uzun süreli deri allograft toleransı 13,14 yol açtı. Kuyruk deri nakli, diğer organların nakli ile karşılaştırıldığında gerçekleştirmek kolay ve izlenmesi kolaydır. Buna ek olarak, kuyruk deri nakli hazırlanması kolaydır ve diğer deri dokularının çok iskemiye daha az duyarlıdır. Enjekte anestezik aksine, transplantasyon sırasında anestezik gaz (izofluoran) kullanımı prosedürü ve alıcı iyileşme süresini kısaltır hem de. Eksik yara iyileşmesi ve aşı reddi yol açabilir kuyruk deri nakli, kıvrılmaları, doku yapıştırıcı uygulanması ile önlenir. Ayrıca, IA bm12 kuyruk deri nakli modeli sadece CD4 aktive <sup&gt; + (Aynı genetik arka plan), imünokompetan ve bağışıklık yetersizliği olan farelerde hem de T hücrelerinin sonuçlarının yorumlanmasını kolaylaştırmak. Bu protokol, kimyasal ve biyolojik müdahale için izin veren güvenilir, tekrar üretilebilir ve kolay bir şekilde kontrol fare modeli tarif edilmektedir. Bu model, kuyruk deri nakillerinin reddedilmesi ve tolerans indüksiyonu araştırılması için tasarlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>Betadine standart çözüm</td><td>Mundipharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pamuklu çubuk</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>31025060</td><td></td></tr><tr><td>Dafalgan , UPSA</td><td>Bristol Myers Squibb UPSA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hansaplast parmak şeritleri</td><td>Beierdorf AG</td><td>REF.76861</td><td></td></tr><tr><td>Histoakril doku yapıştırıcısı</td><td>Braun</td><td>REF.1050052</td><td></td></tr><tr><td>Leukotape classic, 2 cm x 10 m</td><td>BSN Medical SAS</td><td>REF.02204-00</td><td></td></tr><tr><td>PBS, Fosfat Tamponlu Salin, pH 7.4</td><td>Invitrogen</td><td>10010015</td><td>GIBCO</td></tr><tr><td>Steril gazlı bez, 5 x 5 cm, 8 kat</td><td>MaiMed GmbH</td><td>21010</td><td></td></tr><tr><td>Dar model forseps</td><td>FST</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>İnce iris makas kavisli</td><td>FST</td><td>14095-11</td><td></td></tr><tr><td>İnce iris makas</td><td>FST</td><td>14094-11</td><td></td></tr><tr><td>Mayonez makas</td><td>FST</td><td>14010-15</td><td></td></tr><tr><td>Arter makası bilyalı ucu 11,5 cm</td><td>FST</td><td>14080-11</td><td></td></tr><tr><td>Doku forsepsleri</td><td>FST</td><td>11021-14</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi bıçak No. 20</td><td>Swann-Morton LTD</td><td>3006</td><td>Karbon çeliği</td></tr><tr><td>Cerrahi bıçak sapları</td><td>Swann-Morton LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Şırınga, 1 ml</td><td>ARTSANA</td><td></td><td>Tek Kullanımlık</td></tr><tr><td>Temjezik, buprenorfin</td><td>ESSEX Chemie AG</td><td></td><td>0,3 mg/ml</td></tr><tr><td>Doku Kültürü kapları 10 cm, 60,1 cm2</td><td>TPP</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vaseline</td><td>Vifor SA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıcak ped</td><td>Solis</td><td></td><td>Type 223</td></tr></tbody></table>

farelerde allojenik cd4 + t hücre cevapları eğitim için kuyruk cilt nakli

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Allo-antijen tanıma sırasındaki T hücresi yanıtları ve sonuçlarının incelenmesi, donör ve konakçı T hücreleri arasında ayrım yapmayı, grefti kolayca izlemeyi ve farklı immünolojik soruları yanıtlamak için sistemi uyarlamayı sağlayan bir model gerektirir. Medawar ve meslektaşları 1955'te farelerde allojenik kuyruk derisi nakli kurdular. O zamandan beri, deri nakli modeli, belirli soruları yanıtlamak için sürekli olarak değiştirildi ve uyarlandı. Kuyruk derisinin kullanılması, bu modelin greft reddi için puanlanmasını kolaylaştırır, ne kapsamlı hazırlık ne de derin anestezi gerektirir, tüm genetik geçmişe sahip hayvanlara uygulanabilir, iskemik nekrozu caydırır ve kimyasal ve biyolojik müdahaleye izin verir. 
Genel olarak, hem CD4+ hem de CD8+ allojenik T hücreleri, farklı fare suşlarından eşleşmemiş majör histouyumluluk antijenlerini tanıdıkları için allogreftlerin reddedilmesinden sorumludur. Deri nakli yapılan farelerde allojenik T hücrelerini aktive etmek için çeşitli modeller tanımlanmıştır. C57BL / 6 fareleri de dahil olmak üzere farklı fare suşlarında majör histouyumluluk kompleksi (MHC) sınıf I ve II moleküllerinin tanımlanması, T hücresi aracılı alloyanıtları anlamak ve incelemek için önemli bir adımdı. Burada tarif edilen kuyruk derisi nakli modelinde, MHC sınıf II (I-A b) molekülünün antijen sunan oluğundaki üç noktalı bir mutasyon (I-A bm12), C57BL / 6 farelerinde güçlü allojenik CD4 + T hücresi aktivasyonunu indüklemek için yeterlidir. C57BL/6 fareler üzerindeki I-Abm12 farelerinden alınan deri greftleri 12-15 gün içinde reddedilirken, sinjeneik greftler 100 güne kadar kabul edilir. T hücrelerinin (CD3-/- ve Rag2-/- fareler) yokluğu, 100 güne kadar deri grefti kabulüne izin verir, bu da 2 x 104 vahşi tip veya transgenik T hücrelerinin aktarılmasıyla üstesinden gelinebilir. Evlat edinerek transfer edilen T hücreleri, I-Abm12 nakledilen Rag2-/- farelerde çoğalır ve IFN-γ üretir.

Bir birinci yaklaşımda, C57BL / 6 fareleri IA bm12 allogreft ve IA b syngrafts ile transplante edildi. Bandaj çıkarılmasından sonra C57BL / 6 fareler (Şekil 1A) &#39;de temas bölgesinin kapanmaması yara iyileşmesinin belirgin belirtileri greft. Bandaj çıkarılmasından sonra CD4 + T hücresi aracılı iltihaplanma, nekrotik alanlarında görünümü (kırmızı lekeler) ve transplantasyon (Şekil 1B-C, dolu semboller) sonra 13 gün içinde C57BL / 6 farelerinde IA ...

Kuyruk-deri transplantasyonu, farelerde allojenik immün yanıtlar sırasında T hücresine bağlı reddi ve tolerans indüksiyonunu incelemek için güçlü bir modeldir. Bu protokolün avantajları, minör invaziv cerrahi ve alıcı fareyi feda etmeye gerek kalmadan izleme kolaylığıdır.

Farelerde allojenik CD4 + T hücre Cevapları Eğitim için Kuyruk Cilt Nakli

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Aşağıdaki prosedürün genel amacı, kuyruk derisi transplantasyonu gerçekleştirmektir. Bir fare modelinde T-hücresi aracılı reddi veya tolerans indüksiyonunu incelemek için, öncelikle donör fareden kuyruk derisi hasat edilir. İkinci adımda ise, alıcı hayvanda transplantasyon bölgesi hazırlanır.Sonraki aşamada, greft transplantasyonu gerçekleştirilir ve son adımda doku yapıştırıcısı ile bandaj kullanılarak sabitlenir. Bandaj, transplantasyon sonrası yedinci günde çıkarılır ve greft skorlanır. Nihayetinde, T-hücresi aracılı alloimmün yanıt incelenebilir.Bu kuyruk derisi transplantasyon tekniği, farelerde allojenik immün yanıtlar sırasında T hücresi bağımlı reddi ve tolerans indüksiyonunu incelemek için güçlü bir model sunar. İşleme başlamadan önce, parmak şerit bandajları açın ve bir pamuklu çubuk yardımıyla yara pedlerine vazelin sürerek gazlı bezin tamamen kaplandığından emin olun. Ardından, ötanize edilmiş donör farenin kuyruğunu dezenfeksiyon solüsyonu ile dezenfekte edin.Ardından kuyruğu temiz bir plastik tahtaya yerleştirin. Üstteki siyah şeridi aşağıya gelecek şekilde döndürün ve kuyruğun orta hattı boyunca cilt üzerinden boylamsal, yüzeysel bir insizyon yapın. Cildi soymak için kavrayıcı pensler kullanın ve ardından dokuyu 10 mL HBSS ile doldurulmuş 10 santimetrelik bir hücre kültürü kabına yerleştirin.Anestezi altındaki alıcı farenin sırt bölgesini tıraş edin ve kirletici kılları temizlemek için kuru bir gazlı bez kullanın. Tıraş edilen transplantasyon bölgesini aseptik solüsyonla dezenfekte ettikten sonra, sırtın orta sağ tarafındaki deriyi pensle sıkıştırın ve yaklaşık 1 x 0,6 santimetre çapında yuvarlak bir insizyon yapmak için kavisli makas kullanın. Ardından, eksize edilmiş donör kuyruk derisinden bir greft kesmek için skalpel kullanın, dokuyu yuvarlatmak için köşeleri budayın, grefti skalpele yerleştirin ve fazla HBSS'yi steril bir pamuklu çubukla kurulayın.Ardından, kurutulmuş dokuyu alıcı farenin greft yatağına yerleştirin. Donör ve konakçı ciltlerin üst üste binmemesine dikkat ederek, doku yapıştırıcısını yalnızca temas bölgesine uygulayın. Daha sonra, farenin beline kırışıklık oluşturmayacak şekilde bir plaster sarın ve farenin bandaja dişlerini geçirmesini önlemek için plasteri fareye sabitlemek üzere elastik olmayan yapışkan bir bandaj uygulayın.İyileşme sürecinde, materyalin üst ventral kısmında üç milimetrelik bir insizyon yapın. Isıtılmış bir ısıtıcı ped üzerinde tam iyileşme sağlandıktan sonra, transplant edilen hayvanı kafesine geri koyun ve hareketliliğini değerlendirin. Bandajın çok sıkı olmadığından emin olmak için, yedi gün boyunca hayvanın suyuna parasetamol şurubu ekleyerek fareyi tedavi edin.Altı ila yedi gün sonra, steril arter makası kullanarak bandajları kesin ve transplant bölgesini germemeye dikkat ederek dikkatlice çıkarın. Son olarak, transplant edilen fareleri klinik belirtiler açısından izleyin ve deri greftlerinin reddini puanlandırın. Bu deneyde, C 57 BL six farelerine IABM 12 allogreftleri ve IAB sin greftleri transplant edilmiştir.Bandajlar çıkarıldıktan sonra, C 57 BL six farelerde greft, temas bölgesinin kapanması gerçekleşmeden yara iyileşmesi belirtileri göstermiştir. Bir ila iki hafta sonra, CD four pozitif T-hücre aracılı inflamasyon, greft içerisinde nekrotik alanların oluşmasına yol açmıştır. I A BM 12 allogreftlerinin reddi, C 57 BL six farelerde transplantasyonun 13 gün içerisinde gözlemlenmiştir.Sino greftler 100 güne kadar tolere edilirken, MHC Sınıf iki uyumsuz kuyruk derisinin reddi, allojenik CD dört pozitif T hücrelerinin varlığına bağlıdır. Örneğin, T-hücresi eksik olan CD üç E nakavt fareler ve T ile B-hücresi eksik olan RAG iki nakavt fareler, tam yara iyileşmesi sergiler ve I a BM 12 greftlerini 100 güne kadar tolere ederler.IABM 12 uyumsuz kuyruk derisinin kabulü, şiddetli hastalık patolojileri olmaksızın bir fare modelinde allojenik CD four pozitif T hücrelerinin ve bunların efektör fonksiyonlarının incelenmesine olanak tanır. Bu kuyruk derisi transplantasyon modelinin avantajı, antijen spesifik CD four pozitif T hücrelerinin adoptif transferi yoluyla CD four pozitif T hücrelerinin fonksiyonel analizinin kolayca gerçekleştirilebilmesidir. Bu temsilci deneyde, iki x 10⁴ antijen spesifik transgenik A BM hücresinin transferi, rag iki nakavt farelerde IABM 12 greftlerinin 13 gün içinde reddini indüklemek için yeterli olmuştur. V alpha two V beta eight TCR zinciri eksprese eden A BM hücrelerinin, EFL six 70 dilüsyon analizi ile yaygın şekilde prolifere olduğu ve PMA stimülasyonu sonrası IFN Gamma ürettiği gözlemlenmiştir.Bu veriler, tek bir A BM 12 deri greftini reddetmek için yalnızca birkaç allojenik CD4 pozitif T hücresinin yeterli olduğunu göstermekte ve bu durumu, ciddi patolojilerin yokluğunda allojenik T hücrelerinin analizi için ideal bir model haline getirmektedir. Bu videoyu izledikten sonra, kuyruk derisi transplantasyonunun nasıl gerçekleştirileceği ve greft reddinin nasıl başarıyla izleneceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

transplantation-tail-skin-to-study-allogeneic-cd4-t-cell-responses

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Allojenik deri nakli ana T hücre yanıtları donör antijenleri MHC-birbirinden farklı tahlil için bir standart model. Bu video-makale BALB/c--&gt; C57BL / 6 deri nakli yapmak dahil her adım görsel bir öğretici sağlar.

Murin Deri nakli

Mürin kemik iliği nakli insanlarda graft-versus-host hastalığı yöneten immünolojik mekanizmalarla çalışmak için yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. T hücre trafiğini modellerini izlemek için...

Graft-versus-host hastalığı indüksiyonu ve<em&gt; In Vivo</emBir MHC-eşlemeli murin Model Kullanma&gt; T Hücre İzleme

Bu video, allojenik hematopoietik kök hücreler ve GvHD'yi indükleyen splenik alloreaktif T lenfositleri kullanılarak letoral ışınlanmış bir alıcı farede bağırsak greftine karşı konak hastalığının (GvHD) indüksiyonunu göstermektedir. Bu protokol, hastalığın mekanizmasını anlamak ve yenilikçi terapötik seçenekler geliştirmek için ciddi bir akut intestinal GvHD modeli oluşturmaya yardımcı olur.

Allojenik Kemik İliği ve Splenik Hücre Nakli ile Fare Modellerinde Graft Versus Host Hastalığının İndüksiyonu

Burada, sinjeneik CD4 + CD45RByüksek T hücrelerinin T ve B hücresi eksikliği olan alıcılara evlat edinici transferi yoluyla farelerde kolon iltihabını indüklemek için bir protokol sunuyoruz. Klinik ve histopatolojik özellikleri insan inflamatuar barsak hastalıklarını taklit eder. Bu yöntem, kolon iltihabının başlaması ve hastalığın ilerlemesinin incelenmesine izin verir.

Efektör CD4 Evlatlık transferi ile Kemirgen Bağırsak Enflamasyon indüksiyonu<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Yüksek</sup&gt; Bağışık yetmezliği olan farelere içine T Hücreleri

Süper mikrovasküler anastomoz olmayan bir dikiş manşet tekniği uygulayarak fare ortotopik arka uzuv nakli için bu yeni model, vaskülarize kompozit doku yamasında (VCA) ile ilgili in vivo mekanik immünolojik araştırmalar için güçlü bir araç sağlar.

Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli

enflamasyon bölgelerinde CD4 efektör T hücrelerinin geçiş motilite yöneten mekanizma nispeten bilinmemektedir. Biz görselleştirmek ve yerinde bu hücrelerin dinamik davranışının çalışması için izin iltihaplı kulak dermiş in vitro -astarlı CD4 T hücrelerinde işlemek için non-invaziv bir yaklaşım sunuyoruz.

Iltihaplı Dermisinde içinde görüntüleme CD4 + T hücre Geçiş Göç

Bu el yazması, transdüksiyon-transplantasyon fare modelleri oluşturmak için kullanılan metodolojinin bir tanımını sağlar. Kemik iliği nakli yapılırken kaçınılması gereken teknik hataların ayrıntılı bir açıklaması yapılır. Yüksek viral titre, transfeksiyon / transdüksiyon ve ışınlamanın önemi hakkında net bir anlayış kazanılmalıdır.

Myeloproliferatif tümörün İletimi-Transplantasyon Fare Modeli

Mürin tam kalınlıkta deri transplantasyonu alloimmun ortamda reddini incelemek için iyi kurulmuş bir modeldir. &gt; C57BL / 6 tam kalınlıkta deri nakli - Burada bir BALB / c performans katılan her adımda bir öğretici sağlar.

Mürin Tam kat Cilt Nakli

Burada, sitokin ile transdüksiyona sokulmuş bir stromal hücre hattının haftalık intraperitoneal enjeksiyonu yoluyla, hastadan türetilen ksenograft (PDX) farelerde eksojen sitokinin üretilmesi için bir yöntem tarif edilmektedir. Bu yöntem, PDX'in kullanımını genişletir ve bir çok PDX modelinde geçici veya sürekli dış kaynaklı sitokin verme seçeneği sunar.

Hastadan türeyen Xenograftlarda Exogenous Cytokine&#39;in Sitokinle Transmurgated Stromal Hücre Hattı İle Enjeksiyon Vasıtasıyla İfade Edilmesi

Burada, bir fare tümörü modelinde tümöre özgü ve periferi kaynaklı tümör kaynaklı lenfositlerin karakterizasyonu için bir tümör transplantasyon protokolü sunulmaktadır. Alıcı kaynaklı immün hücrelerin akışının akım sitometrisi ile spesifik olarak izlenmesi, antitümör immün yanıtlar sırasında bu hücrelerin fenotipik ve fonksiyonel değişikliklerinin dinamiklerini ortaya koymaktadır.

Farelerde Tümör Sızan CD8 + T Hücrelerinin Dinamiğini Değerlendirmek için Tümör Transplantasyonu

Bu protokol, spontan diyabetik NOD farelerinden saflaştırılmış splenositlerle mücadele eden obez olmayan diyabetik (NOD)-şiddetli kombine immün yetmezlikli farelerde NIT-1 hücrelerinin nakli ve görüntülenmesi için basit ve minimal invaziv bir yöntemi tanımlamaktadır.

Farelerde Otoimmün Diyabetin Evlat Edinilen Transfer Modelinde Greft Sağkalımının Biyolüminesan İzlenmesi

Öğrenin farelerde kuyruk derisi nakli yöntemiyle T hücre aracılı rejeksiyon ve tolerans indüksiyonunu incelemeyi. Bu model, allogeneik bağışıklık yanıtlarını etik bir şekilde araştırmaya olanak tanır.

Farelerde allojenik CD4 + T hücre Cevapları Eğitim için Kuyruk Cilt Nakli

Daha fazla video keşfet