Name: İki-benekli örümcek kenesi Uygulama Tetranychus urticae Bitki-belâ Etkileşim Çalışmaları (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Öğrenin, Tetranychus urticae örümcek kenesi toplama, bitki enfeksiyonu ve ızgara yöntemiyle hasar değerlendirmesi için güvenilir protokolleri. Bu yöntem bitki-zararlı etkileşim çalışmalarını hızlandırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu proje, Kanada Hükümeti tarafından Genome Canada ve Ontario Genomik Enstitüsü (OGI-046) ve Ontario Araştırma Fonu–Genomik ve Yaşam Bilimlerinde Küresel Liderlik GL2-01-035 (M.G. ve V.G.'YE) aracılığıyla finanse edilmiştir. T.V.L., Flanders Bilimsel Araştırma Fonu'nun (FWO) doktora sonrası araştırmacısıdır.

Örümcek Mite Nüfus 1. Bakım NOT: Örümcek akarları (Phaseolus vulgaris) Kaliforniya kırmızı barbunya fasulye yetiştirilir. <ol><li> Önce istilası 2-3 hafta süreyle tohum fasulye bitkileri büyütün. </li><li> Istila bitkilerle Intermix bu bitkiler; Yetişkin akarlar hızla taze bitki materyali kolonize edecek. </li><li> Taze bitkiler ile bunların yerine, her 7-10 gün eski musallat fasulye bitkileri sökün. </li></ol> 2.. Yetişkin Kadın Akarlar Toplama <ol><li> Yıkama Yöntemi kullanılarak Koleksiyon mite <ol><li> Akarları toplamak için, 1-2 gün önce deney enfekte bitkiler ile temas halinde olan bir taze fasulye bitki yer. </li><li> 1,000 2,000 yetişkin dişi akarları toplamak için 20 ila 30 taze fasulye bitkileri kullanın. </li><li> Oda sıcaklığında musluk suyu ile% 0.001 Tween 20 ihtiva eden bir çözelti hazırlayın. </li><li> Her seferinde 2-3 bitkileri kullanarak, Tween 20 çözeltisi içinde istila edilmiş fasulye bitkileri yıkayın. </li><li&gt; Her bitki yapraklarından tüm akarları toplamak için 2-3x yıkanır. </li><li> Komple adım akarı ölümlerini önlemek için 10 dakika içinde 2.1.4. </li></ol></li><li> Tanımlı Mesh Boyutu Elek ile Mite Süspansiyon Filtrasyon ile Yetişkin Kadın Akarlar İzolasyonu <ol><li> Aşağıdaki örgü boyutları elekler hazırlayın: 500 mikron (enkaz kaldırmak için) ve 300 mikron (dişi yetişkin akarları toplamak için) (Şekil 1A). </li><li> 500 um elekten süspansiyon filtre. </li><li> 300 um elekten süspansiyon Refilter. Yetişkin dişi akarlar muhafaza edilecektir. </li><li> Tween 20 kaldırmak için temiz musluk suyu, yetişkin dişi akarları ile 300 mikron elek batırın. </li><li> Eleğin altındaki bir tek kat olarak akarlar yayıldı. </li><li> Eleğin ağ gözü ve taraftan fazla suyu almak için kağıt havlu kullanın. NOT: akarları kurtarmak için hızla kurumasını gerekir, çünkü bu yapılır. </li><li> Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi bir montaj hazırlayınB; Bu akarlar serbestçe hareket sağlayacak, ama onları kaçmasını önleyecektir. </li><li> Bir destek olarak kullanılan elek üstünde akarları elek yerleştirin. </li><li> Dağılmasını akarları önlemek için su ile alt elek Surround. NOT: Akarlar sonra yaklaşık 5 dakika kurtarma başlayacak. Yaklaşık 30 dakika sonra, hareketli akar sayısı toplama (Şekil 1D) başlatmak için yeterlidir. Onlar koleksiyonu ile engel olacak ipek üretmek gibi Akarlar, 1 saat içinde alınmalıdır. </li></ol></li></ol> Akarlar ile 3. Bitki istila NOT: Erişkin dişi kene iyileşti sonra, onlar bitki istilası için kullanılabilir. A) ince bir fırça (protokol bölüm 3.1) kullanılarak ve b) bir pompa veya vakum hattı (protokol bölüm 3.2) kullanılarak: Erişkin dişi kene ile deneysel bitkileri istila etmek için kullanılan 2 yöntem vardır. <ol><li> Bir fırça kullanarak Akar istila NOT: Örümcek istilasıBir fırça bitki başına 30 kadar akar uygulanması için kullanılan ile. <ol><li> Büyüklüğü 00 veya daha ince bir yumuşak saçlar yuvarlak sanat fırça kullanın. </li><li> RT musluk suyu ile fırça ıslatın. </li><li> Yavaşça fırça ucu kullanarak elekten akarları pick up ve tesisine aktaracaktır. </li></ol></li><li> Bir Pompa kullanarak Infestationu mite NOT: 30&#39;dan akarlar tatbik edildiğinde, bir pompa / vakum hattı ile toplanmıştır akarları ile bitki istilası kullanılır. Bu yöntem için, mikro-elektronik bileşenler alıcı veya bir vakum hattı için bir vakum pompası kullanılabilir. Bu hava akımı sabit ve yeterli mukavemet (2-4 psi) tutmak için önemlidir. <ol><li> Pompa / vakum tüpü ile ucu arasında bir adaptör olarak altındaki bir 1.5 ml santrifüj tüpü kesme kullanılarak pompa ya da vakum hattına bağlayan bir tüpe 1 ml pipet takın. </li><li> Pipet ve adaptörü (1.5 ml santrifüj tüpü) arasında kağıt havlu bir parça yerleştirin. Not: Bu amaçla t içine tuzak akarları içino aspirasyon işlemi sırasında pipet ucu ve aynı zamanda hava akımı (Şekil 1C) azaltmak için. </li><li> Pipet kullanarak elekten doğrudan akarları toplayın. </li><li> Seçenek olarak ise, bir Stereoskop kullanılarak Sirayet ettirilmiş yapraklardan akarları tek tek toplar. </li><li> Akarların gerekli sayıda alındıktan sonra, pipet ucu arkasında kağıt havlu parçası rahatsız olduğundan emin olun, tüpten pipet çıkarın. </li><li> Pipet dokunarak ve birlikte akarları kümeleyerek akarları toplayın. Daha sonra, yaprak üzerine koyun; saniye içinde, akarlar yaprak dağılmaya başlar. </li></ol></li></ol> 4.. Kayıt ve değerlendirilmesi Bitki Hasar <ol><li> Kayıt Bitki Hasar NOT: A için thaliana, bitki hasar akar besleme 4 gün sonra değerlendirilir. Hasar klorotik noktaların toplam yüzey alanı olarak kaydedilir. Hasar ölçümü için, tüm rozet kesilir ve taranır.Açıklanan tarama parametreleri Epson V30 tarayıcı için ancak benzer herhangi bir masaüstü tarayıcı için iyi bir başlangıç ​​noktası olarak hareket edecektir. Sağlayan tüm deneyler için sabit tarama parametrelerini tutmak bireysel deneme seferleri arasında karşılaştırma. <ol><li> Bitki materyali ile tarayıcı yüzeydeki önlemek için şeffaflık levha ile tarayıcı yatak örtün. </li><li> Yani yaprakların adaxial (üst) taraf tarayıcı ışık kaynağı ve yakalama elemanı karşı karşıya tarayıcı yatağına bütün bir rozet ve yeri kesin. Alternatif olarak, rozet tarayıcı yatağa koymadan önce tek tek yaprakların veya ince makas ile örtüşmeyen yaprakları gruba rozet teşrih, örtüşme olmadan bireysel yaprakları yakalamak için çok yoğun eğer. Çoklu prizler aynı anda taranabilir. </li><li> Bağlılık ve tarayıcı kapağının kirlenmesini önlemek için beyaz bir kağıt parçası ile rozet veya örtün. </li><li> Yakın tarayıcı kapağı ve aşağıdaki parametreler ile bir tarama gerçekleştirin: Çözünürlük: 1,200 dpi; Renk modu: Adobe RGB; Parlaklık: +25; Dosya türü: maksimum kalite JPEG. </li><li> Sonraki zarar analiz için görüntü dosyaları kaydedin. </li></ol></li><li> Bitki Hasar miktarının NOT: hasar alan elle Photoshop kullanılarak hesaplanır. Nedeniyle akarı beslenme sonucu yaprak şekli ve semptomların renk yoğunluğundaki büyük farklılıklara bağlı olarak, otomatik yöntemler güvenilmez. Bu durumda, bir ızgara yöntem bitki hasarı değerlendirmek için kullanılır: <ol><li> Photoshop ile bitkinin görüntü açın. </li><li> (- Show - Izgara, klavye kısayolu Ctrl + &#39;görüntüleme veya Display), yeni bir katman oluşturun, sonra da 0.25 mm x 0.25 mm bölünmeleri bir ızgara ile taranan görüntüyü kaplayabilirsiniz. </li><li> Kalıplı bir katmanda, bir nokta (&quot;Kalem Aracı&quot;, klavye kısayolu B kullanımı) kullanarak hasarlı yaprak alanları işaretleyin. Izgara birimi birden fazla yarısını kapsayan bir hasar var olduğu aşağıdaki ızgaranın her bir kare için bir tek bir nokta kullanın. Nokta büyüklüğü (piksel tanımlanır, yani, </em&gt; Nokta başına 52 piksel). </li><li> Katmanda piksel sayısını belirlemek için - ızgara ünitesinin en az yarısını kaplayan bitki zarar göstermek ızgara tüm kareler bir nokta ile işaretli olduğunda, histogram aracı (Histogram Penceresi) kullanabilirsiniz. Histogram aracı, piksel sayısını ölçmek için bir izin verir. Her bir nokta piksel sabit ve belli bir sayı ile temsil edildiğinden, histogram aracı, uzantısı, noktaların toplam sayısını temsil eden toplam piksel sayısını ölçmek ve işaretlenmiş olan kareler toplam sayısı. </li><li> Formül kullanılarak işaretlenen &quot;nokta&quot; sayısını hesaplayın: Nokta sayısı = nokta başına piksel piksel sayısı / toplam sayısı. </li><li> Bir nokta ızgara bir kare karşılık olarak, ızgara 1 kare alanı ile görüntü üzerinde işaretlenen noktaların sayısını çarparak hasar toplam alanı hesaplayın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Jeppson, L. R., Keifer, H. H., Baker, E. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJeppson%2C+LR+%22Mites+injurious+to+economic+plants%22">Mites injurious to economic plants</a>. , University of California Press. (1975).</li>
<li>Migeon, A., Dorkeld, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spider+Mites+Web%3A+a+comprehensive+database+for+the+Tetranychidae%5BTitle%5D)+AND+%22http%3A%2F%2Fwww.montpellier.inra.fr%2FCBGP%2Fspmweb%22%5BJournal%5D)">Spider Mites Web: a comprehensive database for the Tetranychidae.</a> http://www.montpellier.inra.fr/CBGP/spmweb. , (2013).</li>
<li>Croft, B. A., Vandebaan, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ecological+and+Genetic-Factors+Influencing+Evolution+of+Pesticide+Resistance+in+Tetranychid+and+Phytoseiid+Mites%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Appl+Acarol%22%5BJournal%5D)">Ecological and Genetic-Factors Influencing Evolution of Pesticide Resistance in Tetranychid and Phytoseiid Mites.</a> Exp Appl Acarol. 4, 277-300 (1988).</li>
<li>Van Leeuwen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+heteroplasmy+and+the+evolution+of+insecticide+resistance%3A+Non-Mendelian+inheritance+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial heteroplasmy and the evolution of insecticide resistance: Non-Mendelian inheritance in action.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 5980-5985 (2008).</li>
<li>Van Leeuwen, T., Vontas, J., Tsagkarakou, A., Dermauw, W., Tirry, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acaricide+resistance+mechanisms+in+the+two-spotted+spider+mite+Tetranychus+urticae+and+other+important+Acari%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Molec%22%5BJournal%5D)">Acaricide resistance mechanisms in the two-spotted spider mite Tetranychus urticae and other important Acari: A review.</a> Insect Biochem Molec. 40, 563-572 (2010).</li>
<li>Dermauw, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cys-loop+ligand-gated+ion+channel+gene+family+of+Tetranychus+urticae%3A+Implications+for+acaricide+toxicology+and+a+novel+mutation+associated+with+abamectin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Molec%22%5BJournal%5D)">The cys-loop ligand-gated ion channel gene family of Tetranychus urticae: Implications for acaricide toxicology and a novel mutation associated with abamectin resistance.</a> Insect Biochem Molec. 42, 455-465 (2012).</li>
<li>Van Leeuwen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population+bulk+segregant+mapping+uncovers+resistance+mutations+and+the+mode+of+action+of+a+chitin+synthesis+inhibitor+in+arthropods%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Population bulk segregant mapping uncovers resistance mutations and the mode of action of a chitin synthesis inhibitor in arthropods.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 109, 4407-4412 (2012).</li>
<li>Dearden, P. K., Donly, C., Grbic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+pair-rule+gene+homologues+in+a+chelicerate%3A+early+patterning+of+the+two-spotted+spider+mite+Tetranychus+urticae%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Expression of pair-rule gene homologues in a chelicerate: early patterning of the two-spotted spider mite Tetranychus urticae.</a> Development. 129, 5461-5472 (2002).</li>
<li>Khila, A., Grbic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+silencing+in+the+spider+mite+Tetranychus+urticae%3A+dsRNA+and+siRNA+parental+silencing+of+the+Distal-less+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development+genes+and+evolution%22%5BJournal%5D)">Gene silencing in the spider mite Tetranychus urticae: dsRNA and siRNA parental silencing of the Distal-less gene.</a> Development genes and evolution. 217, 241-251 (2007).</li>
<li>Grbic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mity+model%3A+Tetranychus+urticae%2C+a+candidate+for+chelicerate+model+organism%5BTitle%5D)+AND+%22BioEssays+%3A+news+and+reviews+in+molecular%2C+cellular+and+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Mity model: Tetranychus urticae, a candidate for chelicerate model organism.</a> BioEssays : news and reviews in molecular, cellular and developmental biology. 29, 489-496 (2007).</li>
<li>Grbic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome+of+Tetranychus+urticae+reveals+herbivorous+pest+adaptations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The genome of Tetranychus urticae reveals herbivorous pest adaptations.</a> Nature. 479, 487-492 (2011).</li>
<li>Kliebenstein, D., Pedersen, D., Barker, B., Mitchell-Olds, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+quantitative+trait+loci+controlling+glucosinolates%2C+myrosinase+and+insect+resistance+in+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of quantitative trait loci controlling glucosinolates, myrosinase and insect resistance in Arabidopsis thaliana.</a> Genetics. 161, 325-332 (2002).</li>
<li>Abe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+jasmonate+in+response+and+tolerance+of+Arabidopsis+to+thrip+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+%26+cell+physiology%22%5BJournal%5D)">Function of jasmonate in response and tolerance of Arabidopsis to thrip feeding.</a> Plant & cell physiology. 49, 68-80 (2008).</li>
<li>Whiteman, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mining+the+plant-herbivore+interface+with+a+leafmining+Drosophila+of+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+ecology%22%5BJournal%5D)">Mining the plant-herbivore interface with a leafmining Drosophila of Arabidopsis.</a> Molecular ecology. 20, 995-1014 (2011).</li>
<li>Goodspeed, D., Chehab, E. W., Min-Venditti, A., Braam, J., Covington, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arabidopsis+synchronizes+jasmonate-mediated+defense+with+insect+circadian+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Arabidopsis synchronizes jasmonate-mediated defense with insect circadian behavior.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 4674-4677 (2012).</li>
<li>Kim, J. H., Lee, B. W., Schroeder, F. C., Jander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+indole+glucosinolate+breakdown+products+with+antifeedant+effects+on+Myzus+persicae+%28green+peach+aphid%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+journal+%3A+for+cell+and+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Identification of indole glucosinolate breakdown products with antifeedant effects on Myzus persicae (green peach aphid).</a> The Plant journal : for cell and molecular biology. 54, 1015-1026 (2008).</li>
<li>Adio, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+and+defensive+function+of+Ndelta-acetylornithine%2C+a+jasmonate-induced+Arabidopsis+metabolite%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis and defensive function of Ndelta-acetylornithine, a jasmonate-induced Arabidopsis metabolite.</a> Plant Cell. 23, 3303-3318 (2011).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tomato+homolog+of+CORONATINE-INSENSITIVE1+is+required+for+the+maternal+control+of+seed+maturation%2C+jasmonate-signaled+defense+responses%2C+and+glandular+trichome+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">The tomato homolog of CORONATINE-INSENSITIVE1 is required for the maternal control of seed maturation, jasmonate-signaled defense responses, and glandular trichome development.</a> Plant Cell. 16, 126-143 (2004).</li>
<li>Kant, M. R., Ament, K., Sabelis, M. W., Haring, M. A., Schuurink, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+timing+of+spider+mite-induced+direct+and+indirect+defenses+in+tomato+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential timing of spider mite-induced direct and indirect defenses in tomato plants.</a> Plant Physiol. 135, 483-495 (2004).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9, 671-675 (2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu video izole etmek ve yetişkin dişi kene, çok sayıda bitkileri istila için kullanılan protokoller gösterir. Biz A. kullanarak bu protokolü sunulmasına rağmen thaliana, herhangi bir bitki örümcek akarı etkileşim sistemi için kullanılabilir ve halen başarılı bir şekilde, domates ve üzüm (Vitis vinifera) bitkiler üzerinde de tatbik edilmektedir. Toplanan akar (Şekil 3) benzer fizyolojik durumu olduğuna işaret protokol verimleri tekrarlanabilir sonuçlar. <p class="jove_conte...

Bitki-böcek etkileşimi büyük bilimsel ve ekonomik öneme sahip bir konudur. Bu tarihsel (örneğin domates gibi) hem de bitki ve bitki modeli, A. kullanılarak incelendi thaliana. Her iki durumda da, otobur için bitki duyarlılık otobur saldırı sonrasında ya da dolaylı zararlı performans değerlendirmesi yoluyla doğrudan bitki fenotip değerlendirilmesi yoluyla ölçülebilir. Bitki duyarlılık doğrudan ölçümleri çeşitli yöntemler kullanılarak böcek pest türlerin bir dizi için daha önce kullanılmıştır. Örneğin, lepidopteran larvaların herbivory bir ızgara 12 yardımıyla, çıplak göz ile Plutella xylostella (diamondback moth) veya Trichoplusia ni (Lahana kurdu) tarafından tüketilen ya da bitki dokusunun bir bölümünün bir tahmin olarak ölçülür. Ayrıca, daha sonra kantitatif görüntü analizi ile yaprak hasarı dijital görüntüleme kullanan yöntem vardır. Bu yöntemler kullanılmıştırA. çalışmaları Frankliniella occidentalis (batı çiçek bitleri) 13, Scaptomyza flava (yaprak-madencilik Drosophila) 14 ve T. ile thaliana&#39;nın etkileşim ni 15. Bitki duyarlılık dolaylı ölçümleri yaygın bitki-böcek etkileşimi çalışmalarında kullanılmaktadır. A. Örnek olarak, duyarlılık herbivory persicae yaprak biti Myzus şeftali thaliana&#39;nın genellikle haşere doğurgan ve etkileşim 16,17 sonra bitkinin brüt morfolojisi açıklaması analizi ile değerlendirilir. A. başka tipik dolaylı gösterge Bir haşereye thalianadan duyarlılık otçulun kuru veya ıslak ağırlık değerlendirmedir. Bu parametre genellikle böyle Pieris rapae (küçük beyaz), P. gibi lepidoterans arasında herbivory, karakterize etmek için kullanılır xylostella, veya T. onların larva veya pupa da ni 15,17 aşamaları. Örümcek akarları hücre içeriğini fe vardıreders. Mite kaynaklı hasar soluk yeşil rengi beyazdan aralığı klorotik noktalar topluluğu olarak kabul edilmektedir. Örümcek akarı herbivory bir bitki konakçının duyarlılığı önceden örümcek akarı performans günlerin analizi yoluyla dolaylı olarak değerlendirildi sonrası istila 18,19, ya da doğrudan bitkiler hafta sonrası istilası 18 brüt morfolojisini kullanarak veya maruz kalan yaprakların bir dijital görüntüleme kullanarak sonraki otomatik görüntü analizi 19 gün boyunca akarları için. Bu yöntemler geliştirilmiş ve domates bitki ve T. arasındaki etkileşimleri çalışmaları için kullanılmaya başlandı urticae, ve tipik olarak karma akar popülasyonundan toplandı ve yumuşak bir fırça ile yaprak yüzeyine yerleştirildi örümcek akarlarının az sayıda (tedavi başına 5-15) kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu yöntemler, akarların daha fazla sayıda uygulanması gereken çalışmalar için uygun değildir. Buna ek olarak, yaprak ise görüntülerin doğrudan işleme resim analiz yazılımıAdobe Photoshop (San Jose, CA) veya ImageJ 20 domates hasar analizi için kullanılabilen gibi, bu protokol yüzeyinin daha büyük bir yansıtma yapabilirliği vardır veya açık renkli ve yüksek görünür trikomlar, var (yapraklara uygulanması için değişiklik ihtiyacı bitki hasar işaretlemek klorotik noktalar otomatik seçim ile müdahale, örneğin, A. thaliana). Bundan başka, hali hazırda önceki yöntemlerle kullanılabilir örümcek akarlarının gelişim aşamasında, en yaygın ve kolayca tanımlanabilir yetişkin kadın sınırlı değildir ve diğer gelişim aşamaları kullanımını önleyen edilir. Bitki örümcek akarı etkileşimi yüksek verimlilik analizi doğru ilk kritik adım örümcek akarları ile bitkiler meydan ve güvenilir bir etkileşim sonuçlarını değerlendirmek için tekrarlanabilir, basit ve sağlam protokoller kurmaktır. Bu video, büyük bir num hızlı ve kolay toplanması için etkin bir yöntem olarakber yetişkin dişi akarlar, bir deney tesisi ana ve bağlı örümcek akarı beslenmeye bitki zarar değerlendirilmesine ilişkin uygulama açıklanmıştır. Sunulan protokol takip eden deney uygulama için kullanılabilecek herhangi bir gelişim aşamasında (yumurta, larva, kurtçuklar, yetişkin erkek ve kadın) bireyler yüzlerce hızlı ve etkin bir toplama sağlar. Buna ek olarak, bu protokoller bir akarı ana bitkiye uygulanabilir, ama özellikle A. durumunda gösterilmektedir thaliana.

<table><tbody><tr><td>Bitki materyali:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Kaliforniya kırmızı barbunya fasulyesi</td><td>Stokes, Thorold, ON, Kanada</td><td></td><td>2 haftalık, kullanımdan 2 veya 3 gün önce örümcek akarları tarafından iyi istila edilmiş. Phaseolus vulgaris diğer çeşitleri kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Kimyasallar:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416</td><td>Musluk suyunun</td></tr><tr><td></td> kesilmesini basitleştirmek için %1 stok çözümü hazırlanmıştır Oda sıcaklığında, sıcak ve soğuk şok akarların hayatta kalma oranını ve performansını etkiler Diğer malzeme ve ekipmanlar:<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>Plastik tepsi <tr><td></td><td></td>Makas seti <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 L beherler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kağıt havlular</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elek setleri</td><td>Evde</td><td></td> üretilmiştir <td>Ayrıntılı talimatlar mevcuttur</td></tr><tr><td>İnce fırça</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları</td><td></td><td></td><td>0,2 ve 1 ml</td></tr><tr><td>1,5 ml santrifüj tüpleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hava pompası</td><td></td><td></td><td>Ters hava akışlı akvaryum tipi pompa. Vakum hattı kullanılabilir. Gerekli basınç düşüşü yaklaşık 2-4 psi'dir</td></tr><tr><td>Stereoskop</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tarayıcı</td><td>Epson</td><td>V30</td><td>Tarama kalitesi üzerinde gerekli derecede kontrol sağlayan herhangi bir düz yataklı tarayıcı. Deneylerimiz için Epson V30 kullanıyoruz.</td></tr><tr><td>Bilgisayar</td><td></td><td></td><td>, Windows veya OS X PC, tarayıcı donanımı ve Adobe Photoshop yazılımı ile uyumludur.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop yazılımı</td><td>Adobe Systems Inc., San Jose, CA, ABD</td><td>çeşitli</td><td>Histogram aracına sahip herhangi bir sürüm dahildir.</td></tr></tbody></table>

İki-benekli örümcek kenesi uygulama<em&gt; tetranychus urticae</em&gt; bitki-belâ etkileşim Çalışmaları

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Iki benekli örümcek, Tetranychus urticae, ekonomik değeri 150&#39;den fazla olan türlerin derece geniş bir dizi, beslenen bir yerde polifag Eklembacaklıların otobur olduğunu. Bu, özellikle Solanaceae ve Cucurbitaceae mısır, pamuk gibi (örneğin, domates, patlıcan, biber, salatalık, kabak) ve sera süs bitkileri (örneğin, gül, krizantem, karanfil), yıllık tarla bitkileri (içinde, sera bitkileri önemli bir zararlı olduğunu soya, şeker pancarı), ve çok yıllık kültürler (yonca, çilek, üzüm, narenciye, ve erik) 1,2. Önemli bir tarımsal böcek, T. yapan uç polyphagy ek olarak, urticae, kontrolü 3-7 için kullanılan insektisit ve akarisit geniş bir yelpazeye karşı direnç geliştirmek için bir eğilim vardır. T. urticae o (27 ° C&#39;de 7 gün) hızlı bir yaşam döngüsüne sahip olarak, mükemmel bir deneysel organizmadırve kolay bir şekilde, laboratuarda, yüksek yoğunlukta muhafaza edilebilir. (In situ hibridizasyon ve antikor lekelemesi de dahil) gen ekspresyonunu analiz etmek için ve RNA girişimi kullanılarak örümcek kenesi, endojen genlerin ekspresyonunu etkisiz hale getirmek için yöntemler 8-10 geliştirilmiştir. Son zamanlarda, T. bütün genom sekansı, urticae zaten konukçu bitkiler (Arabidopsis thaliana ve domates Solanum lycopersicum) 11 bazı mevcut eşdeğer genomik kaynaklara sahip bir model organizma olarak bu haşere otobur geliştirmek için bir fırsat yaratma, rapor edilmiştir. Birlikte, bu model organizmalar bitki-böcek etkileşimleri moleküler üsleri içgörüler sağlayabilir. Burada, hızlı ve kolay bir yetişkin dişi kene, çok sayıda toplama, deneysel bitki ev sahibi üzerindeki uygulama ve nedeniyle örümcek akarı beslenme için bitki hasar değerlendirmesi için etkili bir yöntem tarif edilmiştir. Tr sunulan protokoldaha sonra deney uygulama için kullanılabilecek herhangi bir gelişim aşamasında (yumurta, larva, kurtçuklar, yetişkin erkek ve kadın) bireyler yüzlerce hızlı ve etkin bir toplama ables.

20 ile 30 musallat fasulye bitkileri kullanarak bir elekler kullanılarak yaklaşık 2.000 yetişkin dişi akarları toplayabilirsiniz. Keneden aktarmak için bir fırça kullanıyorsanız, bitki başına 20 akarları ile 10 bitkilerin istila için gerekli süre yaklaşık olarak 15 dk. Toplanması ve uygulama yöntemleri kombinasyonları, Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. Bu protokol toplanan akarları benzer fizyolojik durumuna ve bitki örümcek akarı etkileşim çalışmaları için uygundur (Şe...

Örümcek akarları, deney bitkilerin istilası ve bitki hasar değerlendirme homojen numune etkili hazırlanması için protokoller, bitki-zararlı etkileşim çalışmaları için gerekli olan geliştirilmiştir.

İki-benekli örümcek kenesi Uygulama<em&gt; Tetranychus urticae</em&gt; Bitki-belâ Etkileşim Çalışmaları

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

Bu prosedürün genel amacı, belirli bir gelişim aşamasındaki kırmızı örümcekleri hızlı ve güvenilir bir şekilde toplamaktır. Bu işlem, öncelikle fasulye bitkileri üzerinde akarlar yetiştirilerek gerçekleştirilir. Ardından, tek bir bitkiye uygulanacak akar sayısına bağlı olarak, deney bitkisi bir boya fırçası veya pompa kullanılarak dişi akarlarla enfekte edilir.Son adım, bir grafik düzenleme programında ızgara yöntemi kullanılarak bitki hasarının manuel olarak miktarının belirlenmesidir. Nihayetinde, bitki hatlarının veya ekotiplerinin örümcek akarı zararına karşı farklı duyarlılıklarını göstermek için istatistiksel analiz kullanılır. Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, çok sayıda yetişkin dişi akarın hızlı ve kolay bir şekilde toplanması, bunların deneysel bir konak bitkiye uygulanması ve akar beslenmesine bağlı bitki hasarının değerlendirilmesi için verimli bir yöntem sunmasıdır.Sunulan protokol, sonraki deneysel uygulamalar için kullanılabilecek, herhangi bir gelişim aşamasındaki yüzlerce bireyin hızlı ve verimli bir şekilde toplanmasını sağlar. Başlamak için, infestasyondan iki ila üç hafta önce tohumlardan Kaliforniya kırmızı böbrek fasulyesi bitkileri yetiştirin ve bu bitkileri infestasyonlu bitkilerle karıştırın. Erişkin akarlar taze bitki materyalini hızla kolonize edecektir.Yıkama yöntemini kullanarak akarları toplamak için, istilaya uğramış eski fasulye bitkilerini her yedi ila 10 günde bir uzaklaştırın ve yerlerine taze bitkiler yerleştirin. Deneyden bir ila iki gün önce, taze bir fasulye bitkisini istilaya uğramış bitkilerle temas ettirin. 1000 ila 2000 adet yetişkin dişi akar toplamak için 20 ila 30 adet taze fasulye bitkisi kullanın.Deney günü, akarlara maruz kalmış fasulye bitkilerini tabanından kesin; ardından, istila edilmiş fasulye bitkilerini her seferinde iki ila üç bitki olacak şekilde %0,001'lik tween 20 çözeltisi ile yıkayın. Yapraklardaki tüm akarları toplamak için her bitki iki ila üç kez yıkanır.Akar ölümlerini önlemek için işlemleri 10 dakikalık bir süre içinde tamamlayın. Ardından, kalıntıları temizlemek için 500 mikrometre bir elek ve yetişkin dişi akarları toplamak için 300 mikrometre bir elek hazırlayın. Süspansiyonu 500 mikrometre elekten süzün, ardından süspansiyonu 300 mikrometre elek üzerinden tekrar geçirin.Elekte çok fazla köpük birikmişse, yetişkin dişi akarlar orada kalabilir. Akarlar, oda sıcaklığındaki yavaş akan musluk suyu altında nazikçe yıkanabilir. Tween 20'yi uzaklaştırmak için, yetişkin dişi akarların bulunduğu 300 mikrometrelik eleği temiz musluk suyuna daldırın ve akarları eleğin tabanına tek bir tabaka halinde yayın.Akarların hızlıca kuruyup kendilerini toparlayabilmeleri için, bir kağıt havluyla eleğin gözeneklerinden ve yanlarından fazla suyu alın. Ardından, akarların bulunduğu eleği, destek olarak kullanılan diğer eleğin üzerine yerleştirin. Akarların dağılmasını önlemek için alttaki eleği suyla çevreleyin.Bu, akarların serbestçe hareket etmesine izin verirken kaçmalarını önleyecektir. Fırça ile örümcek akarı bulaştırma işlemi, bitki başına 30 akara kadar uygulama için kullanılır. Sıfır, sıfır veya daha ince boyutlu, yumuşak kıllı yuvarlak bir resim fırçası kullanın.Fırçayı oda sıcaklığındaki musluk suyuyla ıslatın. Fırça ucunu kullanarak akarları elekten nazikçe alın ve bitkiye aktarın. Pompa vakum hattı ile toplanan akarlardan 30'dan fazlası uygulandığında, bitki infestasyonu sağlanmış olur.Bu yöntem için, 1,5 mL'lik bir santrifüj tüpü kullanarak, pompaya veya vakum hattına bağlanan tüpe bir mililitrelik bir pipet ucu takın. Pompa vakum tüpü ile uç arasında bir adaptör görevi görmesi için tüpün alt kısmını kesin; pipet ucu ile adaptör arasına bir parça kağıt havlu yerleştirin. Bunun amacı, aspirasyon işlemi sırasında akarları pipet ucunun içinde hapsetmek ve aynı zamanda hava akışını azaltarak akarları doğrudan elekten pipet ucu yardımıyla toplamaktır.Alternatif olarak, stereoskop kullanarak istilaya uğramış yapraklardan akarları tek tek toplayın. Gerekli sayıda akar toplandığında, pipet ucunun arkasındaki kağıt havlu parçasının yerinden oynamadığından emin olarak pipet ucunu tüpten çıkarın.Pipet ucuna vurarak akarları toplayın ve onları bir araya getirin. Ardından akarları yaprağın üzerine yerleştirin. Birkaç saniye içinde akarlar yaprak üzerinde dağılmaya başlayacaktır.Bitki hasarını kaydetmek için, tarayıcının yüzeyinin bitki materyali ile kontamine olmasını önlemek amacıyla tarayıcı tablasını şeffaf bir örtüyle kaplayın. Tüm bir rozeti kesin ve tarayıcı tablasının üzerine yerleştirin.Yaprakların adaksiyel yüzleri tarayıcıya bakacak şekilde yerleştirilir. Işık kaynağı ve yakalama elemanı sayesinde birden fazla rozet aynı anda taranabilir. Alternatif olarak, rozetler tekil yaprakların örtüşme olmadan yakalanamayacağı kadar yoğunsa, tarayıcıya yerleştirmeden önce ince bir makasla rozeti tekil yapraklara veya örtüşmeyen yaprak gruplarına ayırın.Tarayıcı kapağına yapışmayı ve kontaminasyonu önlemek için rozetleri veya yaprakları bir parça beyaz kağıtla örtün. Tarayıcı kapağını kapatın ve çözünürlüğü 1.200 DPI, parlaklığı +25 ve dosya türü maksimum kaliteli jpeg olacak şekilde bir tarama gerçekleştirin. Görüntü dosyalarını sonraki hasar analizi için kaydedin.Bitki hasarını nicelleştirmek için, bitkinin görüntüsünü Photoshop ile açın. Yeni bir katman oluşturun. Ardından, taranmış görüntünün üzerine 25 mm x 25 mm'lik nokta ızgarasını yerleştirin.Üst katmanda 25 milimetrelik bölmeler yer almaktadır. Kurşun kalem aracını kullanarak hasarlı yaprak alanlarını bir nokta ile işaretleyin. Aşağıdaki ızgaranın, birim alanının yarısından fazlasının hasarla kaplı olduğu her karesi için tek bir nokta kullanın.Noktanın boyutu piksel cinsinden tanımlanır. Izgara biriminin en az yarısını kapsayan bitki hasarını gösteren tüm kareler bir nokta ile işaretlendiğinde, nokta sayısını temsil eden katmandaki piksel sayısını ve dolayısıyla işaretli karelerin toplam sayısını belirlemek için bir histogram aracı kullanılır.Toplam piksel sayısını, nokta başına düşen piksel sayısına bölerek işaretli nokta sayısını hesaplayın. Bir nokta ızgaradaki bir kareye karşılık geldiği için, görüntü üzerindeki işaretli nokta sayısını ızgara karesinin alanı ile çarparak toplam hasar alanını hesaplayın. Bu grafik, üç haftalık AANA bitkilerinde ölçülen hasar alanını göstermektedir.20 dişi örümcek akarı uygulamasından dört gün sonrası. Bitki hasarı sonuçları tekrarlanabilirdir; bu durum, toplanan akarların benzer fizyolojik durumda olduğunu ve bitki-örümcek akarı etkileşim çalışmaları için uygun olduğunu göstermektedir. Bu grafik, 20 dişi örümcek akarı uygulamasının dört gün sonrasında, üç haftalık AANA bitkilerinde ölçülen hasar alanını göstermektedir.Deneysel bir uygulama örneği olarak, bitki başına ıslak bir fırça yardımıyla 20 dişi örümcek akarı uygulanması ve infestasyondan dört gün sonra hasarın kaydedilmesi yoluyla üç farklı erişim üzerinden örümcek akarlarına karşı doğal varyasyon ve duyarlılık değerlendirilmiştir. Hasar verilerinin nicelleştirilmesi, bir sütun grafiği veya kutu grafiği şeklinde sunulabilir ve uygun istatistiksel yöntemle analiz edilebilir. Bu örnekte, örümcek akarlarına karşı duyarlılık oturumlar arasında anlamlı düzeyde farklılık göstermektedir.İzolasyon ve bulaştırma adımları, örnek sayısına ve iş akışı seçimine bağlı olarak 30 dakika içinde tamamlanabilir. Akarların 20 çözeltisi içinde 10 dakikadan fazla tutulmaması gerektiği unutulmamalıdır. Tohum sistemi kullanılarak yapılan izolasyon, çeşitli gelişim aşamalarındaki akar fraksiyonlarını elde etmek için kullanılabilir; bu fraksiyonlar sadece zararlı-bitki etkileşimi alanında değil, aynı zamanda gelişim fizyolojisi ve moleküler biyoloji alanındaki çeşitli deneylerde de kullanılabilir.

application-two-spotted-spider-mite-tetranychus-urticae-for-plant

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bu makale, pestisit duyarlılık anket ve eklembacaklı zararlıları temas direnci ve sistemik böcek ilaçları tespit etmek için kullanılan teknikler gösteriyor ve tartışır.

İnsektisit Direnci İzleme için biyoanalizlere

Bu video herbivory konak bitki direnç mekanizmaları açıklar ve direnç spittlebug Antibiyoz ve hoşgörü göreceli katkıları tahmin no-seçmeli test...

Karakterize Otobur Direnç Mekanizmaları: Spittlebugs Brachiaria Spp. Bir Örnek

Bu yazıda etkili bir yapay iki benekli örümcek akarı popülasyonlarının farklı yoğunluklara ile enfekte erkenci pamuğa hasar tespit edilen bir çok bantlı bir optik sensörü açıklamaktadır.

Sera Pamuk İki benekli Örümcek akarı Hasarın Uzaktan Algılama Değerlendirilmesi

Burada, tarımdaki böcek zararlılarının kontrolü için "en uygun" entomopatojenik mantar Metarhizium anisopliae'nin izolasyonu, belirlenmesi, taranması ve seçimi de dahil olmak üzere etkin bir mikozinsektisid'in bilgi temelli gelişiminde farklı aşamaları bildiriyoruz .

Geliştirilmesi<em&gt; Metarhizium anisopliae</em&gt; Bir Mycoinsecticide Olarak: İzolasyondan Saha Performansına

Yaşam tabloları miktar kaynaklarının ve mortalite oranları böcek nüfus izin ve anlama, tahmin ve agroecosystems nüfus dinamikleri işleme katkıda bulunur. İletken ve kohort dayalı yaşam tabloları sesil olgunlaşmamış yaşam evreleri ile bir böcek için alanı analiz yöntemleri sunulmaktadır.

Metodoloji geliştirme yaşam tabloları alanını kullanarak Whitefly, Bemisia tabaci, pamuk gibi bir Model sistemi içinde sesil böcekler için için

Burada sunulan bir protokol alan deneylerinde birden fazla tarihler üzerinde bitkileri içinde Thrips ve dakika korsan böcek yırtıcı sayısını belirlemek için. Ayrıca resimli nasıl Thrips karşı yönetim taktikleri etkinliğini belirlemek ve dakika korsan böcek tarafından avlanma yararları değerlendirmek için.

Frankliniella türlerinin tahmin edilmesi Için örnekleme alan deneylerinde çiçek Thrips ve Orius türleri predatör

Mikro-BT, bitki yapılarını üç boyutlu olarak analiz edebilen tahribatsız bir araçtır. Mevcut protokol, parazitik bitki yapısını ve işlevini analiz etmek için mikro-BT'den yararlanmak için numune hazırlamayı açıklamaktadır. Belirli preparatlarla birleştirildiğinde bu yöntemin avantajlarını vurgulamak için farklı türler kullanılır.

Parazitik bitki-konakçı etkileşimlerini analiz etmek için mikro-BT taramasından yararlanma

Bu protokol, partenogenetik bir böcek olan hardal yaprak bitine (Lipaphis erysimi (Kalt.)) karşı entomopatojenik mantarların (EPF) etkinliğini değerlendirmek için optimize edilmiş bir müstakil yaprak biyo-tahlil sistemi sunar. Yöntem, Petri kabı deneyleri sırasında veri toplama sürecini özetleyerek, araştırmacıların EPF'nin hardal yaprak bitlerine ve diğer partenogenetik böceklere karşı virülansını tutarlı bir şekilde ölçmelerini sağlar.

Entomopatojenik Fungusların Partenogenetik Böcek, Hardal Yaprak Biti, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Burada, polietilen film ve amino asit çözeltisi ile oluşturulan yapay bir konakçı kullanarak Trichogramma dendrolimi'den zehir çıkarmak için bir protokol sunuyoruz.

Parazitoid Yaban Arısı Trichogramma dendrolimi'den Yapay Bir Konakçı Kullanarak Zehir Çıkarılması

Agar içeren cam kaplarda modifiye edilmiş bir müstakil yaprak yöntemi kullanılarak biber tripslerinin toplu olarak yetiştirilmesi için müstakil yapraklı bir biyotahlil protokolü oluşturulmuştur, bu da yüksek sağkalım ve senkronize gelişme sağlar. Bu sistem, entomopatojenik mantar virülansının 2. instar larvalarına karşı verimli bir şekilde taranmasını sağlar ve laboratuvar, sera ve tarla değerlendirmeleri için güvenilir bir trips kaynağı sağlar.

Entomopatojenik Mantarların Virülans Taraması için Biber Thrips (Scirtothrips dorsalis Hood) Yetiştirme Sisteminin Kurulması

Öğrenin, Tetranychus urticae örümcek kenesi toplama, bitki enfeksiyonu ve ızgara yöntemiyle hasar değerlendirmesi için güvenilir protokolleri. Bu yöntem bitki-zararlı etkileşim çalışmalarını hızlandırır.

İki-benekli örümcek kenesi Uygulama

Daha fazla video keşfet